川黔渝地區(qū)中小規(guī)模豬場偽狂犬病的血清學(xué)調(diào)查

趙自亮， 趙康燕， 方思穎， 朱盈名， 李照偉， 浦同燦， 王 慧， 曾 紅， 劉 霞*， 趙光偉*

(1. 西南大學(xué)榮昌校區(qū)動物疾病快速診斷中心，重慶 榮昌 402460； 2. 貴州省動物疫病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽 550008)

偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起多種家畜和野生動物的1種烈性傳染病，以發(fā)熱、奇癢(豬除外)、腦脊髓炎為主要特征[1]。豬為PRV的原始宿主，感染后多引起母豬流產(chǎn)、死胎或木乃伊胎，公豬繁殖障礙或呼吸道癥狀，新生仔豬神經(jīng)癥狀或腹瀉等，病死率可高達100%[2]。該病嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須通報的動物疫病，我國的《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃(2012—2020 年)》(國辦法〔2012〕31號)列為優(yōu)先防治的動物疫病之一。2011年以來，國內(nèi)外不斷有PRV發(fā)生變異、毒力返強的報道[3，4]，許多豬場因此出現(xiàn)流產(chǎn)和仔豬大量死亡的現(xiàn)象。2018年以來，因非洲豬瘟傳入我國造成嚴重損失，國內(nèi)大型養(yǎng)殖場對豬病的防控意識大大增強，然而一些中小型養(yǎng)殖場由于防疫意識淡薄、防疫硬件設(shè)施不足等原因，PRV感染現(xiàn)象仍時有發(fā)生，豬病的防控仍具有較大的復(fù)雜性和挑戰(zhàn)性。四川、貴州、重慶是我國西南地區(qū)生豬養(yǎng)殖的重要區(qū)域。國家統(tǒng)計局數(shù)據(jù)顯示，2020年四川省生豬出欄量為5 614.4萬頭，排名全國第1；貴州省、重慶市分別為1 661.8萬頭、1 434.5萬頭，分列全國第11、12名。因此，了解川黔渝地區(qū)豬場PRV的感染情況對系統(tǒng)性防控與凈化該病有重要意義?，F(xiàn)將2020年1月至2021年3月對3個省(市)中小規(guī)模養(yǎng)殖場(基礎(chǔ)母豬存欄量50～500頭)的PR血清學(xué)調(diào)查情況報道如下。

1 材料與方法

1.1 檢測樣品針對四川、貴州、重慶地區(qū)母豬存欄量在50～500頭的41個中小規(guī)模豬場，按照10%～20%的比例隨機采集表觀健康豬(包括保育豬、育肥、種豬)血清1 016份。

1.2 主要試劑及儀器豬偽狂犬病病毒gE(PRV-gE)抗體ELISA檢測試劑盒(北京金諾百泰生物技術(shù)有限公司)、隔水式恒溫培養(yǎng)箱(上海森信實驗儀器有限公司，型號：GRP-9050)、酶標儀(TECAN，型號：A-5082)。

1.3 PRV-gE抗體檢測檢測步驟：(1)將PRV-gE抗體試劑盒置于室溫1 h，使其復(fù)溫。(2)取出PRV-gE抗原包被板，在稀釋板中2倍稀釋血清樣品及陰性、陽性對照，吸取稀釋后的血清樣品及陰性、陽性對照各100 μL分別加入包被板中，25 ℃避光孵育1 h。(3)棄去孔中液體，每孔加入1倍洗滌液300 μL，洗滌3次，最后1次洗滌后將酶標板在吸水紙上輕輕拍干(不能干燥)。(4)每孔加入PRV-gE辣根過氧化物酶(HRP)標記抗體100 μL，25 ℃避光孵育20 min，重復(fù)第(3)步驟。(5)每孔加入3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物液100 μL，25 ℃避光孵育15 min。(6)每孔加入終止液50 μL終止反應(yīng)。(7)立即測定吸光度值(D450 nm)。判定標準：以血清樣品D450 nm與陰性對照D450 nm均值之比(P/N)為判定依據(jù)。P/N≤0.6為陽性，0.6

0.7為陰性。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析利用Microsoft Excel 2003軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，卡方檢驗差異顯著性，P<0.05為差異顯著，P>0.05為差異不顯著。

2 結(jié)果

檢測的41個豬場、1 016份樣品中，共有11個豬場檢測出PRV-gE抗體陽性，場陽性率26.8%；陽性樣品105份，個體陽性率10.3%。其中：四川省的14個豬場有5個場為陽性，場陽性率35.7%；共檢測樣品496份，陽性樣品67份，個體陽性率13.5%(見表1)。重慶市的13個豬場有3個場為陽性，場陽性率23.1%；共檢測樣品254份，陽性樣品30份，個體陽性率11.8%(見表2)。貴州省的14個豬場有3個場為陽性，場陽性率21.4%；共檢測樣品266份，陽性樣品8份，個體陽性率3.0%(見表3)?？傮w來看，四川省的豬場陽性率及個體陽性率均顯著高于重慶市和貴州省(P<0.05)。四川省豬場中，萬源和大竹2個養(yǎng)殖場顯著高于其他養(yǎng)殖場(P<0.05)。貴州省和重慶市的情況與四川省類似，個別養(yǎng)殖場的陽性率很高。

表1 四川省中小型豬場PRV-gE抗體檢測結(jié)果

表2 重慶市中小型豬場PRV-gE抗體檢測結(jié)果

表3 貴州省中小型豬場PRV-gE抗體檢測結(jié)果

3 結(jié)論

川黔渝地區(qū)的中小規(guī)模豬場均存在PRV感染，部分豬場感染較為嚴重，應(yīng)持續(xù)加強對該病的檢疫和監(jiān)測，以凈化豬群。

4 分析與討論

4.1通過對川黔渝3省(市)41個中小規(guī)模豬場的1 016份血清樣品進行PRV-gE抗體檢測，共檢出陽性樣品105份，平均個體陽性率為10.3%。低于2014年楊漢春等[5]對全國23個地區(qū)266個豬場的檢測結(jié)果(陽性率80.08%)及2015年潘文等[6]報道的我國23個集約化豬場陽性率(47.83%)。說明總體上由于近年來采取了有效的防控措施，以及養(yǎng)殖場防疫意識普遍增強，PRV的感染程度已大幅降低。

4.2在3個省(市)中，四川省的場陽性率(35.7%)、個體陽性率(13.5%)均較高，重慶市次之(分別為23.1%、11.8%)。與2019年周莉媛等[7]報道的四川省規(guī)?；i場的個體陽性率(15.63%)及2018年余遠迪等[8]報道的重慶市規(guī)模化豬場個體陽性率(11.61%)基本一致。這說明2省(市)的中小規(guī)模豬場與規(guī)?；i場PRV感染率差異并不明顯，也進一步反映出目前中小規(guī)模豬場對疫病的防控意識明顯增強。

4.3本次調(diào)查貴州省的場陽性率(21.4%)和個體陽性率(3.0%)均最低。與蒲齡等[9]報道的貴州部分地區(qū)2019年個體陽性率8.5%(其中養(yǎng)殖場陽性率11.8%，屠宰場陽性率4%)相比較低。這可能與調(diào)查的地區(qū)不同有關(guān)，其采樣點主要在貴陽、黃平、鎮(zhèn)遠、貴定、甕安和關(guān)嶺地區(qū)豬場，與本次調(diào)查的交叉點很少(僅貴陽)，因此本次調(diào)查一方面豐富了貴州省PRV感染情況的血清學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)，另一方面也說明該病在不同的地區(qū)感染情況存在差異。這種情況在本次調(diào)查的四川、重慶地區(qū)同樣存在，如四川萬源、重慶長壽2個豬場的陽性率分別高達90.2%和87.5%。經(jīng)調(diào)查了解，2個豬場陽性率高的原因與場內(nèi)種公豬感染有關(guān)，PRV通過配種在場內(nèi)迅速擴散。這也提示我們應(yīng)對種豬定期進行檢疫和監(jiān)測，及時淘汰陽性種豬，將凈化豬群作為防控PR的重要措施之一。

4.4在生豬的主要生產(chǎn)區(qū)進行重要疫病的跟蹤檢測十分必要，要進一步提高養(yǎng)殖人員的生物安全意識，加大重要疫病的檢測和監(jiān)測力度，特別是在當前非洲豬瘟疫情的重大威脅下尤為重要。此外，通過分析流行毒株的遺傳信息及變異情況，對疫病的及時有效防控同樣具有重要意義。