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    蒲公英黃酮的提取工藝優(yōu)化

    2022-03-04 02:11:14曹曉玲
    現(xiàn)代食品 2022年1期
    關(guān)鍵詞:黃酮工藝實驗

    ◎ 范 萌,曹曉玲

    (武漢生物工程學(xué)院,湖北 武漢 430415)

    蒲公英是多年生草本植物,菊科,別名黃花丁、婆婆丁等,產(chǎn)地分布極廣。蒲公英憑借資源豐富、藥食兩用等優(yōu)勢,近年來在食品、化妝品等領(lǐng)域發(fā)展迅速[1]。蒲公英活性物質(zhì)繁多,其中黃酮類物質(zhì)是蒲公英中重要的抗氧化物質(zhì),同時也能抑制癌細(xì)胞和腫瘤血管的生長、抑制自由基和致癌因子的產(chǎn)生,具有提高機體免疫力等功能[2]。本文采用乙醇提取法,通過單因素實驗和Design-Expert軟件設(shè)計響應(yīng)面實驗優(yōu)化提取工藝參數(shù),為蒲公英深加工利用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    蒲公英:市售;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品:合肥博美生物;氫氧化鈉:國藥集團化學(xué)試劑有限公司;六水三氯化鋁:上海滬試化工有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    XMTD-400電熱恒溫水浴鍋,北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司;752PC紫外分光光度計,上海光譜儀器有限公司。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    稱取18 mg干燥蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品于50 mL容量瓶中,用50%乙醇溶解并定容至30 mL,得0.6 mg·mL-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別將蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備成不同濃度溶液,于425 nm處測吸光度[3]。

    1.3.2 蒲公英黃酮提取率的測定

    將蒲公英粉碎后,按照一定料液比用乙醇浸提,浸提液經(jīng)濾紙過濾。取2 mL濾液,依次加入3 mL 0.1 mol·L-1六水三氯化鋁溶液和 5 mL 1 mol·L-1氫氧化鈉溶液,用50%乙醇溶液定容至10 mL,靜置40 min后于425 nm處測吸光度。由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到黃酮濃度,按照下列公式計算蒲公英黃酮提取率[4-5]。

    式中:C-黃酮提取濃度,mg·mL-1;V1-定容體積,mL;V2-取樣體積,mL;M-蒲公英質(zhì)量,mg;V-浸提液體積,mL。

    1.3.3 單因素實驗

    (1)乙醇濃度。將蒲公英粉末分別與濃度為40%、50%、60%、70%和80%的乙醇溶液按液料比15∶1(mL∶g)混合,置于50 ℃水浴浸提40 min,過濾后測吸光度并計算黃酮提取率。

    (2)浸提時間。將蒲公英粉末用60%的乙醇溶液按液料比15∶1(mL∶g)混合,置于50 ℃水浴鍋中,分別浸提20 min、30 min、40 min、50 min和60 min,過濾后測其吸光度并計算黃酮提取率。

    (3)提取溫度。將蒲公英粉末用60%的乙醇溶液按液料比15(mL∶g)混合,分別置于30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃和70 ℃水浴鍋中浸提30 min,過濾后測其吸光度并計算黃酮提取率。

    (4)液料比。將蒲公英粉末用60%的乙醇溶液分別按液料比(mL∶g)12.5∶1、15.0∶1、17.5∶1、20.0∶1和22.5∶1混合,置于50 ℃的水浴浸提30 min,過濾后測其吸光度并計算黃酮提取率。

    1.3.4 響應(yīng)面實驗

    應(yīng)用Design-Expert 12.0軟件,在單因素實驗的基礎(chǔ)上,以蒲公英黃酮提取率為響應(yīng)值,利用Box-Behnken響應(yīng)面法設(shè)計4因素3水平共29組實驗[6-7],因素水平參照表1進(jìn)行實驗。

    表1 Box-Behnken實驗因素和水平表

    2 結(jié)果與分析

    2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

    按照上述方法,繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸線方程:Y=1.488X-0.017,R2=0.999 1,由此計算蒲公英黃酮的提取率。

    2.2 單因素對黃酮提取率的影響

    由圖1(a)可知,當(dāng)乙醇濃度達(dá)到60%時,測得吸光值為0.445,黃酮提取率為3.10%,增大乙醇濃度,黃酮提取率開始下降;由圖1(b)可知,當(dāng)浸提時間為30 min時,測得吸光度最高為0.556,黃酮提取率為3.85%,浸提時間過長過短,均會導(dǎo)致黃酮提取率下降;由圖1(c)可知,當(dāng)提取溫度為50 ℃時,測得的吸光值為0.598,黃酮提取率為4.13%,由于溫度的升高使分子的擴散能力增強,黃酮類化合物更容易溶出,而超過50 ℃后吸光度和提取率開始下降;由圖1(d)可知,當(dāng)液料比為20∶1(mL∶g)時,測得的吸光值為0.638,黃酮提取率為4.40%,繼續(xù)增大液料比,黃酮的吸光度和提取率不再增加。

    2.3 響應(yīng)面實驗結(jié)果分析

    2.3.1 響應(yīng)面實驗結(jié)果

    按照29組不同的提取流程進(jìn)行實驗,分別計算黃酮提取率,實驗結(jié)果見表2。

    表2 響應(yīng)面實驗設(shè)計與結(jié)果表

    2.3.2 方差分析及其顯著性檢驗

    響應(yīng)面模型P<0.000 1表明該模型良好,失擬項P=0.151 4表明不顯著,實際值與預(yù)測值基本一致,R2=0.946 8,說明實驗可操作性較好。確定系數(shù)R2Adj為0.893 7表明該模型能解釋89.37%響應(yīng)值的變化,用該模型分析蒲公英黃酮的提取率較為合適。

    采用Design-Expert 12.0軟件,以蒲公英黃酮提取率為響應(yīng)值,進(jìn)行二次響應(yīng)面回歸分析,得到如下回歸方程。黃酮提取率=-87.061 58+0.839 367A+0.419 917B+4.914 40C+0.560 017D-2.5×10-4AB+9.4×10-3AC+3.25×10-3AD+4.9×10-3BC+2.35×10-3BD-0.024 200×10-3CD-6.273×10-3A2-5.585×10-3B2-0.095 760C2-6.722×10-3D2。

    回歸模型的一次項A顯著,二次項都顯著,交互項AD、CD顯著,說明不同的提取工藝與黃酮提取率之間不是簡單的線性關(guān)系。在模型模擬范圍內(nèi),各因素影響黃酮提取率的順序為:乙醇濃度(A)>提取溫度(B)>浸提時間(D)>液料比(C)。

    2.3.3 響應(yīng)面實驗結(jié)果分析

    為確定4因素及其相互作用對黃酮提取率的影響,進(jìn)行響應(yīng)面分析。每兩個因素的互相作用響應(yīng)面圖如圖2所示。由圖2(a)~(c)可知,酒精濃度不斷增加時,提取率提高趨勢平緩,隨后急劇減少,酒精濃度對提取率影響顯著,隨著時間增加,提取率減少,酒精濃度及時間對提取率影響顯著,而改變液料比或提取溫度時,提取率變化趨勢平緩;由圖2(d)、圖2(f)可知,僅改變浸提時間,提取率變化趨勢平緩,當(dāng)同時改變液料比時,提取率有較大變化,浸提時間與液料比對提取率影響顯著。通過分析得到的工藝參數(shù),結(jié)合實驗操作的可行性,確定最佳工藝組合參數(shù)為:乙醇濃度53%,提取溫度51 ℃,液料比21∶1(mL∶g),浸提時間25 min。采用此組合參數(shù)重復(fù)試驗3次進(jìn)行驗證,黃酮平均提取率達(dá)到4.86%,與預(yù)測值接近度為98.9%,表明該工藝參數(shù)可行。

    3 結(jié)論

    本實驗以蒲公英為原料,利用乙醇浸提法進(jìn)行黃酮的提取,以黃酮的提取率作為指標(biāo),在單因素實驗的基礎(chǔ)上設(shè)計響應(yīng)面實驗優(yōu)化提取參數(shù)。實驗結(jié)果表明,最佳提取工藝組合參數(shù)為乙醇濃度53%、提取溫度51 ℃、液料比21∶1(mL∶g)、浸提時間25 min,黃酮提取率可達(dá)4.86%,相比于單因素實驗優(yōu)化所得工藝,提取率提高了10.4%,表明該工藝參數(shù)可行。

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