參芎葡萄糖注射液在正常和急性心肌缺血大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)差異

張靜雅 劉利琴 李容 陸苑 潘潔 劉亭 孫佳

中圖分類(lèi)號(hào) R969.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2022）04-0433-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.04.09

摘 要 目的 比較參芎葡萄糖注射液（SGI）中鹽酸川芎嗪、丹參素、迷迭香酸在正常和急性心肌缺血（AMI）模型大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)差異。方法 將雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組和模型組，每組9只。模型組大鼠采用鹽酸異丙腎上腺素造模法復(fù)制AMI模型。每組各取3只大鼠進(jìn)行模型驗(yàn)證后，剩余6只大鼠尾靜脈注射SGI（12 mL/kg）或等體積生理鹽水，并分別于給藥后0.083、0.167、0.333、0.5、0.75、1、1.5、2、3、5 h經(jīng)眼眶靜脈叢采血0.3 mL。以木犀草苷為內(nèi)標(biāo)，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)血漿中鹽酸川芎嗪、丹參素、迷迭香酸的質(zhì)量濃度，采用WinNonlin 8.1軟件擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 鹽酸川芎嗪、丹參素、迷迭香酸檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍分別為0.06～29.96、0.01～5.15、0.006～3.09 μg/mL（r均大于0.99），方法學(xué)考察結(jié)果均符合2020年版《中國(guó)藥典》的相應(yīng)要求。與正常大鼠比較，AMI模型大鼠體內(nèi)鹽酸川芎嗪的CLz顯著升高（P<0.05）;丹參素的t1/2和Vz均顯著延長(zhǎng)或升高（P<0.05），但cmax和AUC0-5 h均顯著降低（P<0.05）;迷迭香酸的AUC0-5 h顯著降低（P<0.05）。結(jié)論 SGI中的丹參素、迷迭香酸在AMI模型大鼠體內(nèi)的暴露量均低于正常大鼠，鹽酸川芎嗪在AMI模型大鼠體內(nèi)的消除強(qiáng)于正常大鼠。

關(guān)鍵詞 參芎葡萄糖注射液;急性心肌缺血;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;藥動(dòng)學(xué);大鼠

Pharmacokinetic difference of Shenxiong glucose injection in normal and acute myocardial ischemia rats

ZHANG Jingya1，2，LIU Liqin1，2，LI Rong1，2，LU Yuan1，PAN Jie3，LIU Ting1，SUN Jia1（1. Guizhou Key Laboratory of Pharmaceutics/State Key Laboratory of Efficacy and Utilization of Medicinal Plants， Guizhou Medical University， Guiyang 550004， China; 2. School of Pharmacy， Guizhou Medical University， Guiyang 550004， China; 3. Engineering Research Center for Development and Application of Ethnic Medicine and Traditional Chinese Medicine of Ministry of Education， Guizhou Medical University，? Guiyang 550004， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE To compare the pharmacokinetics of ligustrazine hydrochloride， salvianic acid and rosemarinic acid from Shenxiong glucose injection （SGI） in normal and acute myocardial ischemia （AMI） rats. METHODS Male SD rats were randomly divided into normal group and model group， with 9 rats in each group. AMI model was established by isoproterenol hydrochloride modeling method. Three rats in each group were selected for model verification. The remaining 6 rats in each group were given SGI （1.2 mL/kg） or equal volum of normal saline via tail vein; 0.3 mL blood was collected through orbital venous bush 0.083， 0.167， 0.333， 0.5， 0.75， 1， 1.5， 2， 3， 5 h after administration. Using luteoloside as internal standard， the plasma concentrations of ligustrazine hydrochloride， salvianic acid and rosemarinic acid were determined by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Pharmacokinetic parameters were fitted by WinNonlin 8.1 software， and statistical analysis was performed by SPSS 18.0 software. RESULTS The linear ranges of ligustrazine hydrochloride， salvianic acid and rosmarinic acid were 0.06-29.96， 0.01-5.15 and 0.006-3.09 μg/mL （all r>0.99）， respectively. The results of methodological investigation were all in line with the requirements of Chinese Pharmacopoeia （2020 edition）. Compared with normal rats， CLz of ligustrazine hydrochloride in AMI model rats was significantly increased （P<0.05）;? t1/2 and Vz of salvianic acid were significantly prolonged or increased （P<0.05）; but the cmax and AUC0-5 h were significantly decreased （P<0.05）; AUC0-5 h of rosmarinic acid was significantly decreased （P<0.05）. CONCLUSIONS The exposure levels of salvianic acid and rosmarinic acid in SGI are lower in AMI model rats than in normal rats， and the elimination of ligustrazine hydrochloride in AMI model rats is stronger than that in normal rats.

KEYWORDS? ?Shenxiong glucose injection; acute myocardial ischemia; ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; pharmacokinetic; rat

根據(jù)《<中國(guó)心血管病與疾病報(bào)告2020>概述》，我國(guó)現(xiàn)有心血管疾病患者約為3.3億，病死率居各病因首位，占居民疾病死亡構(gòu)成的40%以上[1]。急性心肌缺血（acute myocardial ischemia，AMI）是指由各種原因引起的心肌相對(duì)或絕對(duì)供血不足、心肌細(xì)胞缺氧，是心血管疾病的一種常見(jiàn)類(lèi)型。參芎葡萄糖注射液（Shenxiong glucose injection，SGI）常用于臨床治療心血管疾病，對(duì)心絞痛、冠心病、急性腦梗死、無(wú)癥狀心肌缺血等具有顯著療效。SGI是由鹽酸川芎嗪和丹參配伍而成的中藥注射劑，其化學(xué)成分主要為鹽酸川芎嗪、丹參素、迷迭香酸等水溶性成分。其中，川芎嗪是從川芎中分離提取的生物堿單體，具有保護(hù)腦組織（包括抑制腦缺血再灌注損傷、抗偏頭痛、保護(hù)腦神經(jīng)）、抑制血栓形成和血小板聚集、抗心肌缺血及抑制子宮平滑肌收縮等作用[2];丹參素是丹參最重要的水溶性成分，被廣泛用于冠心病心絞痛的臨床治療，具有顯著改善微循環(huán)、抗內(nèi)皮損傷、抗氧化、抗炎、抗血小板聚集等藥理活性[3-4]，同時(shí)也可通過(guò)清除自由基和降低心肌損傷標(biāo)志物水平而起到心肌保護(hù)的作用[5];迷迭香酸也是丹參的主要活性成分之一，具有抗氧化、抗炎等作用，可減少活性氧的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化物及抗氧化酶水平，從而減輕心肌細(xì)胞損傷[6]。

現(xiàn)代研究表明，疾病會(huì)影響藥物在機(jī)體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為，比如：川芎嗪在子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠體內(nèi)的吸收較正常大鼠有增加的趨勢(shì)，消除也有所加快[7];丹參素在腦缺血再灌注模型大鼠體內(nèi)的滯留時(shí)間較正常大鼠長(zhǎng)，消除減慢[8]?；诖?，本研究通過(guò)建立測(cè)定大鼠血漿中川芎嗪、丹參素、迷迭香酸的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，分別測(cè)定上述成分在正常和AMI模型大鼠體內(nèi)的血藥濃度并進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)參數(shù)擬合，從而比較SGI在正常和AMI模型大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，為提高中藥注射劑SGI在臨床使用的有效性和安全性提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括Acquity UPLC-TQD型超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜串聯(lián)儀、Acquity UPLC Ⅰ-Class/Xevo TQ-S型超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜串聯(lián)儀（美國(guó)Waters公司，以下分別簡(jiǎn)稱(chēng)“儀器Ⅰ、Ⅱ”），MTN-2800D型氮吹濃縮裝置（天津奧特賽恩斯儀器有限公司），CQ250A-TS型超聲波清洗機(jī)（上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器械廠），ZH-2型渦旋混合器（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠），EL204/AE240型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]，WP-UP-Ⅱ-20型超純水機(jī)（四川沃特爾科技發(fā)展有限公司），Allegra 64R型低溫高速離心機(jī)（美國(guó)Beckman Coulter公司），Multiskan Ascent型多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司），CX41型顯微鏡（日本Olympus公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

SGI（批號(hào)07200801，規(guī)格100 mL ∶ 鹽酸川芎嗪100 mg，丹參相當(dāng)于丹參素20 mg）購(gòu)自貴州景峰注射劑有限公司;鹽酸異丙腎上腺素原料藥（批號(hào)G2028261，純度≥99%）購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司;丹參素、鹽酸川芎嗪、迷迭香酸、木犀草苷（內(nèi)標(biāo)）對(duì)照品（批號(hào)分別為H09N10S102463、X08O9C71471、Y16A9K-

67403、AF20072618，純度均不低于98%）均購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司;氯化鈉注射液（批號(hào)E121081301，規(guī)格100 mL ∶ 5 g，作生理鹽水用）購(gòu)自貴州科倫藥業(yè)有限公司;蘇木精-伊紅染液（批號(hào)P10011）購(gòu)自武漢市皮諾飛生物科技有限公司;天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）試劑盒、肌酸激酶同工酶（creatine kinase-isoenzyme MB，CK-MB）試劑盒（批號(hào)分別為20200318、20200419）均購(gòu)自南京建成生物工程研究所;乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格，水為蒸餾水。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠共18只，體質(zhì)量為（230±20） g，由貴州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（黔）2018-0001。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 對(duì)照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液的配制 精密稱(chēng)取鹽酸川芎嗪、丹參素、迷迭香酸、內(nèi)標(biāo)對(duì)照品各適量，用甲醇溶解并定容至10 mL，制成質(zhì)量濃度分別為0.999、1.030、1.029、1.052 mg/mL的貯備液，置于-20 ℃下保存，備用。臨用前，取上述貯備液適量，用50%甲醇稀釋成所需質(zhì)量濃度，即得對(duì)照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液。

2.1.2 鹽酸異丙腎上腺素溶液的配制 精密稱(chēng)取鹽酸異丙腎上腺素原料藥0.1 g，置于10 mL量瓶中，用生理鹽水溶解并定容，制成質(zhì)量濃度為10 mg/mL的鹽酸異丙腎上腺素溶液，臨用前配制。

2.2 分組、造模與給藥

將18只大鼠隨機(jī)分為正常組和模型組，每組9只。模型組大鼠皮下注射鹽酸異丙腎上腺素溶液（50 mg/kg）以復(fù)制AMI模型，正常組大鼠皮下注射等體積生理鹽水，每天1次，連續(xù)2 d[9]。于末次注射后24 h，隨機(jī)在正常組和模型組中各取3只大鼠進(jìn)行模型驗(yàn)證：于尾靜脈取血，測(cè)定血清中AST、CK-MB水平;另取心臟，用10%甲醛溶液固定后，以石蠟包埋、常規(guī)切片，經(jīng)蘇木精-伊紅染色后觀察心肌組織的病理變化（圖1）。數(shù)據(jù)以 x±s表示，采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。模型驗(yàn)證結(jié)果顯示，正常組和模型組大鼠血清中AST水平分別為（1.70±0.11）、（9.88±1.09） U/L（n=3），CK-MB水平分別為（11.08±0.56）、（13.57±0.54）ng/mL（n=3），模型組AST、CK-MB水平均顯著高于正常組（P<0.05）。由圖1可見(jiàn)，與正常組比較，模型組大鼠心肌變性壞死病灶廣泛，可見(jiàn)部分炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞增生、血栓形成，說(shuō)明AMI模型造模成功。

取正常組和模型組剩余6只大鼠，單次尾靜脈注射SGI（12 mL/kg，參照臨床SGI成人單日靜脈滴注劑量100～200 mL進(jìn)行換算，相當(dāng)于鹽酸川芎嗪9.880 mg/kg、丹參素2.772 mg/kg、迷迭香酸0.036 mg/kg）或等體積生理鹽水。分別于給藥后0.083、0.167、0.333、0.5、0.75、1、1.5、2、3、5 h經(jīng)眼眶靜脈叢取血約0.3 mL，置于涂有肝素的塑料離心管中，以6 000 r/min離心6 min，取上層血漿，于-20 ℃下保存，備用。

2.3 血漿樣品處理

取血漿樣品50 μL，加入甲醇25 μL、乙腈200 μL和內(nèi)標(biāo)溶液（測(cè)定鹽酸川芎嗪時(shí)，內(nèi)標(biāo)溶液的質(zhì)量濃度為10.52 μg/mL;測(cè)定丹參素、迷迭香酸時(shí)，內(nèi)標(biāo)溶液的質(zhì)量濃度為0.105 μg/mL）10 μL，渦旋混勻3 min，超聲（功率300 W，頻率40 kHz，下同）10 min，以14 000 r/min離心10 min，棄去上清液，沉淀加入1 mol/L鹽酸15 μL、乙酸乙酯500 μL，渦旋混勻3 min，超聲10 min，以14 000 r/min離心10 min，取上清液，再重復(fù)“加入1 mol/L鹽酸15 μL……離心10 min”操作2次，合并3次上清液，于30 ℃下以氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)?%乙腈150 μL復(fù)溶，取上清液進(jìn)樣分析。

2.4 色譜與質(zhì)譜條件

2.4.1 色譜條件 以Waters BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）為色譜柱，Waters Van Guard BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）為保護(hù)柱;以0.1%甲酸溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（0～1.0 min，8%B;1.0～1.5 min，8%B→30%B;1.5～2.0 min，30%B→40%B;2.0～2.5 min，40%B→90%B;2.5～3.0 min，90%B;3.0～4.0 min，90%B→8%B）;流速為0.35 mL/min;柱溫為40 ℃;進(jìn)樣量為1 μL。

2.4.2 質(zhì)譜條件 由于SGI中各化合物的含量差異較大，同一儀器不能兼顧所有成分的測(cè)定，故本研究采用儀器Ⅰ測(cè)定鹽酸川芎嗪，采用儀器Ⅱ測(cè)定丹參素、迷迭香酸。具體條件如下：離子源均為電噴霧電離源，離子源溫度均為120 ℃;毛細(xì)管電離電壓均為3 kV;去溶劑氣流速均為650 L/h，去溶劑氣溫度均為350 ℃;反吹氣均為氮?dú)?，流速均?0 L/h;碰撞氣均為氬氣，流速均為0.16 mL/min;掃描方式均為選擇離子檢測(cè);質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集及處理軟件均為Masslynx 4.1工作站。儀器Ⅰ中，用于定量分析的離子對(duì)分別為m/z 137.1→55.1（鹽酸川芎嗪）、m/z 449.1→250.9（內(nèi)標(biāo)），錐孔電壓分別為40、25 V，碰撞電壓分別為20、30 V;儀器Ⅱ中，用于定量分析的離子對(duì)分別為m/z 197.5→162.7（丹參素）、m/z 359.0→197.0（迷迭香酸）、m/z 449.1→250.9（內(nèi)標(biāo)），錐孔電壓分別為25、20、25 V，碰撞電壓分別為20、20、30 V。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 專(zhuān)屬性考察 取大鼠空白血漿，除不加內(nèi)標(biāo)外其余按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖（圖2A、圖2D）;將鹽酸川芎嗪、丹參素、迷迭香酸質(zhì)量濃度分別為1.87、0.32、0.19 μg/mL的對(duì)照品溶液加至空白血漿中，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖（圖2B、圖2E）;取模型組大鼠注射SGI后5 min采集的血漿樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖（圖2C）。由圖2可見(jiàn)，鹽酸川芎嗪、丹參素、迷迭香酸及內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別為1.04、0.75、1.84、1.55 min，各色譜峰分離良好，內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾待測(cè)成分的檢測(cè)，符合2020年版《中國(guó)藥典》的相應(yīng)要求[10]。

2.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和定量下限考察 按“2.1.1”項(xiàng)下方法配制不同質(zhì)量濃度的系列對(duì)照品溶液，分別移取各對(duì)照品溶液50 μL至1.5 mL離心管中，加入空白血漿50 μL，依次制成鹽酸川芎嗪質(zhì)量濃度分別為0.06、0.12、0.23、0.47、0.94、1.87、3.74、7.49、14.98、29.96 μg/mL，丹參素質(zhì)量濃度分別為0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.29、2.57、5.15 μg/mL，迷迭香酸質(zhì)量濃度分別為0.006、0.01、0.02、0.05、0.10、0.19、0.38、0.77、1.54、3.09 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以各成分質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)、各成分與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值（y）為縱坐標(biāo)，應(yīng)用最小二乘法（權(quán)重系數(shù)為1/x2）進(jìn)行線性回歸。結(jié)果顯示，鹽酸川芎嗪的回歸方程為y=7.790 6x+2.315 2（r=0.992 2），線性范圍為0.06～29.96 μg/mL，定量下限為0.06 μg/mL;丹參素的回歸方程為y=2.334 6x-0.067 9（r=0.998 8），線性范圍為0.01～5.15 μg/mL，定量下限為0.01 μg/mL;迷迭香酸的回歸方程為y=9.321 4x-0.400 4（r=0.995 7），線性范圍為0.006～3.09 μg/mL，定量下限為0.006 μg/mL。

2.5.3 準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn) 按“2.5.2”項(xiàng)下方法配制各成分定量下限和低、中、高質(zhì)量濃度（鹽酸川芎嗪：0.06、0.12、1.87、23.97 μg/mL，丹參素：0.01、0.02、0.32、4.12 μg/mL，迷迭香酸：0.006、0.012、0.19、2.47 μg/mL）的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，每個(gè)分析批次平行操作5份樣品，連續(xù)測(cè)定3 d，考察準(zhǔn)確度和精密度。結(jié)果顯示，本方法準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)結(jié)果均符合2020年版《中國(guó)藥典》的相應(yīng)要求[10]，見(jiàn)表1。

2.5.4 提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)試驗(yàn) 按“2.5.2”項(xiàng)下方法配制各成分低、中、高質(zhì)量濃度（鹽酸川芎嗪：0.12、1.87、23.97 μg/mL，丹參素：0.02、0.32、4.12 μg/mL，迷迭香酸：0.012、0.19、2.47 μg/mL）的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品，每個(gè)濃度平行制備5份，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積（A）。將不同來(lái)源的空白血漿按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再加入相應(yīng)質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液，使最終質(zhì)量濃度與標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品對(duì)應(yīng)，每個(gè)質(zhì)量濃度平行制備5份，按“2.4”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積（B）。分別配制與標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品中對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)相同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)質(zhì)量濃度平行制備5份，按“2.4”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積（C）。按如下公式計(jì)算提取回收率和基質(zhì)因子：提取回收率（%）=A/B×100%，基質(zhì)因子（%）=B/C×100%，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，低、中、高質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品中鹽酸川芎嗪、丹參素、迷迭香酸的提取回收率、基質(zhì)因子均符合2020年版《中國(guó)藥典》的相應(yīng)要求[10]。

2.5.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.5.2”項(xiàng)下方法配制低、中、高質(zhì)量濃度（鹽酸川芎嗪：0.12、1.87、23.97 μg/mL，丹參素：0.02、0.32、4.12 μg/mL，迷迭香酸：0.012、0.19、2.47 μg/mL）的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品，每個(gè)質(zhì)量濃度平行制備5份，考察其在室溫（25 ℃）存放12 h、凍融（-80 ℃～室溫）循環(huán)3次、4 ℃存放24 h的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，各低、中、高質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品在上述條件下峰面積的RSD均小于15%（n=5），符合2020年版《中國(guó)藥典》的相應(yīng)要求[10]。

2.6 藥動(dòng)學(xué)研究

2.6.1 藥-時(shí)曲線的繪制 取“2.2”項(xiàng)下凍存的血漿樣品，放置至室溫，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積并按隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各待測(cè)成分的質(zhì)量濃度，采用SPSS 18.0軟件繪制平均藥-時(shí)曲線，結(jié)果見(jiàn)圖3。

2.6.2 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算 采用WinNonlin 8.1軟件以非房室模型計(jì)算鹽酸川芎嗪、丹參素、迷迭香酸的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS 18.0軟件，先將cmax和AUC進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化后再進(jìn)行t檢驗(yàn);對(duì)tmax進(jìn)行秩和檢驗(yàn)，對(duì)t1/2、CLz、Vz進(jìn)行t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn)，與正常組比較，模型組大鼠體內(nèi)鹽酸川芎嗪的CLz顯著升高（P<0.05），表明AMI模型狀態(tài)會(huì)增強(qiáng)鹽酸川芎嗪在大鼠體內(nèi)的消除;與正常組比較，模型組大鼠體內(nèi)丹參素的t1/2和Vz均顯著延長(zhǎng)或升高（P<0.05），cmax和AUC0-5 h均顯著降低（P<0.05），表明AMI模型狀態(tài)會(huì)降低丹參素在大鼠體內(nèi)的暴露量，延長(zhǎng)其代謝時(shí)間;與正常組比較，模型組大鼠體內(nèi)迷迭香酸的AUC0-5 h顯著降低（P<0.05），說(shuō)明AMI模型狀態(tài)會(huì)降低迷迭香酸在大鼠體內(nèi)的暴露量。

3 討論

本課題組前期參考了鹽酸加乙酸乙酯萃取法[11]和乙腈沉淀蛋白法[12]對(duì)血漿樣品處理的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加入乙腈后再加入鹽酸和乙酸乙酯較單獨(dú)采用萃取法或沉淀蛋白法效果更好，先加入乙腈能更好地輔助提取血漿中的鹽酸川芎嗪，進(jìn)一步加入鹽酸后能更好地輔助提取血漿中的迷迭香酸。此外，本課題組前期還對(duì)萃取次數(shù)進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在酸性條件下萃取血漿2次對(duì)迷迭香酸的提取效率最高。

鹽酸異丙腎上腺素為β受體激動(dòng)藥，能加快大鼠心率，增加其心肌耗氧量，加重其心臟負(fù)荷，從而導(dǎo)致其心肌細(xì)胞壞死、心肌纖維斷裂及變性等[13]。有研究表明，由鹽酸異丙腎上腺素所致的大鼠心肌缺血損傷及心肌酶指標(biāo)的變化都與AMI患者的病變特征相似[14]。因此，本研究采用鹽酸異丙腎上腺素造模法復(fù)制AMI模型。

病理狀態(tài)會(huì)通過(guò)改變藥物代謝酶、藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體、腸道菌群等因素而影響藥物的體內(nèi)過(guò)程[15-17]，但注射給藥避開(kāi)了胃腸道吸收轉(zhuǎn)化，藥物可直接進(jìn)入血液系統(tǒng)，因此藥物代謝酶成為了影響注射劑有效成分體內(nèi)行為的主要因素。現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道顯示，心肌缺血狀態(tài)下，低密度脂蛋白的氧化能力增強(qiáng)，會(huì)導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中細(xì)胞色素P450（cytochrome P450，CYP）單加氧酶下調(diào)，使得內(nèi)皮細(xì)胞中CYP1A1、CYP2A6/7、CYP2C9、CYP2E1、CYP2J2的表達(dá)降低;同時(shí)，有文獻(xiàn)報(bào)道，丹參中咖啡因是肝中CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1同工酶的有效抑制劑[18]，CYP3A是鹽酸川芎嗪的Ⅰ相代謝酶，羥基川芎嗪是其主要代謝產(chǎn)物之一[19]。可見(jiàn)，疾病狀態(tài)和藥物成分都可能對(duì)藥物代謝酶產(chǎn)生影響，故筆者推測(cè)這是SGI中鹽酸川芎嗪、丹參素、迷迭香酸在AMI模型狀態(tài)下藥動(dòng)學(xué)參數(shù)發(fā)生改變的原因，后續(xù)將通過(guò)在體實(shí)驗(yàn)予以驗(yàn)證。

綜上所述，SGI中丹參素、迷迭香酸在AMI模型大鼠體內(nèi)的暴露量均低于正常大鼠，鹽酸川芎嗪在AMI模型大鼠體內(nèi)的消除強(qiáng)于正常大鼠。建議在AMI患者使用SGI時(shí)，可適當(dāng)提高給藥劑量或延長(zhǎng)使用周期。

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（收稿日期：2021-11-08 修回日期：2022-01-19）

（編輯：鄒麗娟）