附子品質(zhì)評價(jià)及影響因素研究進(jìn)展*

蒲婷婷，王宇飛，周忠瑜，嚴(yán)靖婷，楊 燕**，段寶忠**

（1.大理大學(xué)藥學(xué)院 大理 671000；2.云南省科學(xué)技術(shù)院 昆明 650051）

附子為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeliiDebx.的子根加工品，具有回陽救逆、補(bǔ)火助陽、散寒止痛等功效，用于亡陽虛脫，肢冷脈微，心陽不足，胸痹心痛，虛寒吐瀉，脘腹冷痛，腎陽虛衰，陽痿宮冷，陰寒水腫，陽虛外感，寒濕痹痛[1]，是參附注射液、附子理中丸等300余種中成藥的重要原料，其年需求量高達(dá)3000噸[2]。然而由于產(chǎn)地、栽培方式、采收時(shí)間和加工炮制等因素造成附子質(zhì)量參差不齊[3]，嚴(yán)重影響了臨床療效和用藥安全。近年來，有關(guān)附子的研究不斷深入，已有學(xué)者對附子的化學(xué)成分、藥理作用、質(zhì)量控制等進(jìn)行了研究[4-5]，亦有學(xué)者從附子的化學(xué)評價(jià)、生物評價(jià)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、炮制規(guī)范和檢測方法等角度，對附子的品質(zhì)評價(jià)進(jìn)行了綜述[6-7]，但尚未見從附子品質(zhì)的有效性和安全性評價(jià)，以及附子品質(zhì)影響因素的系統(tǒng)綜述，限制了對附子品質(zhì)提升和評價(jià)體系建立的認(rèn)識。鑒于此，本文首次對古代和現(xiàn)代附子品質(zhì)評價(jià)及影響因素進(jìn)行系統(tǒng)總結(jié)，以期為附子品質(zhì)提升和評價(jià)體系的建立提供科學(xué)參考。

1 古代附子品質(zhì)評價(jià)

古代附子品質(zhì)評價(jià)始載于南北朝時(shí)期《雷公炮灸論》，其認(rèn)為底平、有九角、如鐵色、一個(gè)個(gè)重一兩，即是氣全，堪用；此后宋代從角、節(jié)、花色角度評價(jià)附子品質(zhì)，認(rèn)為蹲坐正節(jié)角少，花色白為上；而明代則從肉色、皮色、角和形出發(fā)，認(rèn)為色肉微黃，黑色頂全圓正者佳；清代從附子節(jié)、角、花色、皮色、產(chǎn)地和加工等角度，對附子品質(zhì)評價(jià)方法進(jìn)行了豐富，形成了以形態(tài)頂圓正底，角少，肉微黃，皮黑，花白為最佳的認(rèn)識，詳細(xì)見表1。

表1 附子歷代品質(zhì)評價(jià)

2 現(xiàn)代附子品質(zhì)評價(jià)

2.1 附子的有效性評價(jià)

2.1.1 化學(xué)成分評價(jià)

紫外分光光度法（Ultraviolet and visible spectrophotometry，UV）主要用于附子中總生物堿含量的測定，如貝自英等[8]建立了酸性染料萃取光度法，用于附子中烏頭堿和次烏頭堿含量的測定，5-25 μg·mL-1，多位學(xué)者亦采用該法對附子及其炮制品中的總生物堿含量[9-10]和鎂含量及溶出率[11]進(jìn)行了測定，但由于該法靈敏度和準(zhǔn)確性存在較大問題[5]，2015年版中國藥典取消了該法用于總生物堿的檢測。

紅外光譜法（Infrared absorption spectrometry，IRS）被廣泛用于附子質(zhì)量評價(jià)研究。如采用近紅外光譜（Near-Infrared spectroscopy，NIRS），結(jié)合偏最小二乘和最小二乘支持向量機(jī)法，對38批附子進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)LS-SVM模型的相對預(yù)測偏差4.0-8.8，驗(yàn)證集相關(guān)系數(shù)均在0.95以上，表明NIRS可用于附子中的單酯型和雙酯型生物堿總量檢測[12]；亦用于附子及炮制品中雙酯型生物堿含量的快速測定[13]。此外，研究發(fā)現(xiàn)附子、黑順片、白附片的近紅外光譜特征存在差異[14]，與吳志生等[15]研究結(jié)果一致。NIRS方法操作簡單，無需樣品預(yù)處理，實(shí)現(xiàn)了快速、綠色分析的目的，逐漸得到推廣應(yīng)用。

薄層色譜法（Thin layer chromatography，TLC）在中國藥典2020年版、韓國藥典-06均用于附子質(zhì)量的評價(jià)，見表2；上述標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)薄層色譜上附子提取液斑點(diǎn)的密度、顏色及位置來評價(jià)樣品質(zhì)量。曹玲麗等[16]建立了生附子中烏頭堿的薄層色譜指紋圖譜法，發(fā)現(xiàn)TLC法的7個(gè)特征斑點(diǎn)顏色深淺與HPLC含量測定結(jié)果基本相符，可用于生附子質(zhì)量初步評價(jià)。此外，多位學(xué)者采用薄層色譜法，對附子中烏頭堿分進(jìn)行分離，發(fā)現(xiàn)該法分離效果良好，斑點(diǎn)清晰[17-18]。TLC法簡單易行，準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性較理想，但靈敏度低，且無法測定成分的具體含量。

高效液相色譜法（High performance liquid chromatography，HPLC）是附子中生物堿成分檢測最主要的方法，如2020年版中國藥典、中國臺灣中藥材標(biāo)準(zhǔn)-03和中國香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)-07，均采用HPLC方法測定，并規(guī)定毒性成分含量上限和有效成分下限，詳見表2。研究發(fā)現(xiàn)“一測多評法”可用于附子藥材及同屬植物的質(zhì)量控制[19-20]，例如，Huang等[21]采用HPLCELSD法同時(shí)測定了5種醇胺型二萜生物堿。此外，指紋圖譜技術(shù)也被用于附子的質(zhì)量評價(jià)，多位學(xué)者建立了附子的HPLC指紋圖譜，用于附子藥材及其炮制品的質(zhì)量控制[22-24]；研究顯示不同采摘批次的生附子相似度0.9以上，各主要成分組成變化不大，但成分含量存在一定差異[25]。HPLC具有高速、高靈敏度、高分辨度等優(yōu)點(diǎn)，因其能同時(shí)測定多種成分、結(jié)果準(zhǔn)確而極受歡迎。

表2 各主要國家或地區(qū)對附子的質(zhì)量規(guī)定

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（Liquid chromatography-mass spectrometry，LC/MS）被廣泛用于附子中生物堿含量的測定。研究顯示液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（Liquid chromatography tandem-mass spectrometry，LC-MS/MS）可用于烏頭屬中藥的質(zhì)量評價(jià)[26-27]，共檢測出145個(gè)化合物以及77個(gè)質(zhì)量標(biāo)志物[28]；LC/MS可用于測定沒有紫外吸收的胺醇型二萜生物堿含量[29]；Zhang等[30]采用UPLC-MS技術(shù)從附子中鑒定出99個(gè)雙酯型生物堿。此外，采用HPLC與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測附子研究顯示，雙酯型生物堿為附子主要成分，而單酯型生物堿的含量和種類較少[31]。相比于HPLC，LC/MS技術(shù)測定的成分種類、數(shù)量更加豐富，還能進(jìn)一步確定生物堿結(jié)構(gòu)。

高效毛細(xì)管電泳法（High performance capillary electrophoresis，HPCE）亦被用于附子質(zhì)量評價(jià)。韓樂等[32]建立了檢測附子中新烏頭堿、次烏頭堿等6種生物堿含量的HPCE法，r2〉0.9997，加樣回收率95.25%-103.91%，用于附子類藥材內(nèi)在質(zhì)量的評價(jià)和控制；付昆等[33]建立了分析附子多糖中單糖組分的高效毛細(xì)管電泳法，結(jié)果顯示該法靈敏度高，分離效果好。此外，Zhao等[34]發(fā)現(xiàn)較之傳統(tǒng)方法，HPCE法的分離度好且顯著提高分析效率，總分離時(shí)間只需13 min，但由于通常HPCE所采用的內(nèi)徑為75 μm的毛細(xì)管色譜柱光程較短，其靈敏度受到影響。為增加化學(xué)成分信號響應(yīng)強(qiáng)度，采用場放大進(jìn)樣-高效毛細(xì)管電泳（Field amplified sample stacking-high performance capillary electrophoresis，F(xiàn)ASS-HPCE）法[35]，對10批附子飲片的指紋圖譜進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示采用FASS富集后，其檢測靈敏度明顯提高并在18 min內(nèi)完成測定工作，可用于附子的質(zhì)量評價(jià)。與HPLC法相比，HPCE法分析時(shí)間短、雜質(zhì)干擾少、使用有機(jī)溶劑少、操作方便，是一種很有應(yīng)用前景的分析方法。

此外，采用酶聯(lián)免疫吸附劑測定法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA法），對川烏和附子中雙酯型生物堿的含量進(jìn)行了測定，發(fā)現(xiàn)與現(xiàn)行藥典收載的HPLC法相比，兩者檢測結(jié)果基本一致，但ELISA法測定靈敏度提高了約200倍，該法適用于川烏、附子藥材及其飲片中微量甚至痕量雙酯型生物堿的檢測[36]。

2.1.2 生物效應(yīng)評價(jià)

附子常見的生物效應(yīng)包括強(qiáng)心、抗炎、鎮(zhèn)痛和抗氧化等。采用大鼠室性早搏最小量測定法，對8種附子炮制品的生物毒性評價(jià)顯示，生附片醇提液最小中毒劑量遠(yuǎn)低于其余附片，其次為黑順片、白附片、刨附片、炮附子及蒸附片；炒附片與炮天雄未檢測出心毒性，安全性好[37]，且8種附片均具有明確的強(qiáng)心效果；黑順片、白附片等5種附片具有中等強(qiáng)度強(qiáng)心活性，而炮附子與炮天雄強(qiáng)心活性最弱；強(qiáng)心活性驗(yàn)證結(jié)果顯示去甲烏藥堿與去甲豬毛菜堿是強(qiáng)心活性物質(zhì)[38]。

李立紀(jì)等[39]發(fā)現(xiàn)新法加工附子總生物堿高于附片13倍，但兩者抗炎、鎮(zhèn)痛的效果無明顯差異。附子水煎液可以增強(qiáng)老年大鼠血清中的總抗氧化能力（TAA）以及紅細(xì)胞超氧化物歧化酶（SOD）的活性，降低腦組織脂褐素（LPF）和肝組織丙二醛（MDA）的含量，改善肝細(xì)胞膜脂流動性（LFU）[40]；同樣Xu等[41]也發(fā)現(xiàn)附子水煎液可降低心衰標(biāo)志ANP，NT-proBNP等表達(dá)，改善慢性心力衰竭情況。上述研究為附子臨床早期心臟毒性評價(jià)、抗炎鎮(zhèn)痛、強(qiáng)心、抗氧化活性與質(zhì)量控制提供了整體、綜合的方法，可作為化學(xué)評價(jià)方法的有益補(bǔ)充。

2.2 附子的安全性評價(jià)

2.2.1 內(nèi)源性有害物質(zhì)

附子的內(nèi)源性有害物質(zhì)主要為其所含的毒性成分。現(xiàn)代研究表明，附子中含有大量烏頭堿成分，其中新烏頭堿、烏頭堿和次烏頭堿等雙酯型生物堿既是有效又是強(qiáng)毒性成分，苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿等單酯型生物堿為低毒性有效成分，但在大劑量、高濃度條件下也有導(dǎo)致中毒的可能[42]。中國藥典和中國臺灣中藥材標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定較為全面，使用上述6種生物堿對附子質(zhì)量進(jìn)行評價(jià)，但中國藥典并未規(guī)定其重金屬、農(nóng)殘、霉菌素等限量標(biāo)準(zhǔn)，詳見表2。日本藥典使用4個(gè)指標(biāo)對附子進(jìn)行質(zhì)控，規(guī)定烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、結(jié)烏頭堿含量分別低于0.006%、0.028%、0.014%和0.006%；中國香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)僅規(guī)定3種有效成分之和的范圍，尚未對單獨(dú)成分進(jìn)行規(guī)定。此外，韓國藥典采用TLC，利用斑點(diǎn)密度對附子進(jìn)行質(zhì)控，其要求明顯低于中國藥典。

2.2.2 外源性有害物質(zhì)

外源性有害物質(zhì)主要包括重金屬及有害元素、真菌毒素、殘留農(nóng)獸藥、亞硫酸鹽以及有機(jī)污染物等[43]。作為國際廣泛使用的藥材，附子被多個(gè)國家藥典或地方標(biāo)準(zhǔn)收錄。日本藥典-17、韓國藥典-06、中國香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)-07、中國臺灣中藥材標(biāo)準(zhǔn)-03均規(guī)定了附子中重金屬和農(nóng)藥殘留限量，詳見表2。中國藥典未對附子中重金屬等相關(guān)指標(biāo)作限制，依據(jù)《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》，多位學(xué)者對市售附子中的重金屬及有害元素進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示中國產(chǎn)區(qū)的附子絕大部分符合標(biāo)準(zhǔn)[44-47]。研究發(fā)現(xiàn)種植環(huán)境，如土壤，大氣、水源、加工等均會影響附子中重金屬及有害元素的組成，土壤中的Cd、Cu、Zn等元素容易被附子吸收，而土壤中的Cr、Pb、Ni、As、Hg相對不易吸收[48]；同時(shí)水質(zhì)也是影響附子重金屬質(zhì)量濃度的重要因素之一[45]。此外，研究發(fā)現(xiàn)市售附子的膽巴殘留量中鈣殘留較低，但Na、Mg、K殘留過大，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為88.60，1252.39，7864.12 mg·kg-1，建議制定附子相關(guān)元素質(zhì)量分?jǐn)?shù)的限量標(biāo)準(zhǔn)[47]；附子炮制前后元素變化的結(jié)果顯示，炮制后Cu、Cr和Ni營養(yǎng)元素的濃度分別增加至1.03，18.90，5.02 μg·g-1，Pb和Cd含量分別降低44和1.4倍[49]。目前國內(nèi)外針對附子農(nóng)藥殘留的研究報(bào)道較少，僅見對四川省抽檢的100批附子進(jìn)行了研究[50]，結(jié)果顯示32批附子SO2殘留超標(biāo)不合格，殘留量為210-2079 mg·kg-1；有12批次樣品檢測出喹禾靈，平均檢出量為0.03 mg·kg-1；1批次樣品鎘超標(biāo)，含量為2.99 mg·kg-1，表明附子種植中有違規(guī)使用農(nóng)藥。綜上，外源性物質(zhì)是影響附子安全性的重要因素，但目前中國藥典尚未規(guī)定有關(guān)指標(biāo)的檢測限量，應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)附子飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，并完善優(yōu)質(zhì)種植基地和中藥材溯源體系建設(shè)。

3 影響附子品質(zhì)的因素

3.1 種質(zhì)因素

種質(zhì)是影響附子品質(zhì)的重要因素之一。研究發(fā)現(xiàn)，不同品種附子總生物堿和雙酯型生物堿含量差異較大，多糖含量差異不顯著[51]。夏燕莉等[52]、朱彥西等[53]對附子種質(zhì)資源的生物學(xué)性狀和產(chǎn)量進(jìn)行了比較，篩選出“中附1號”、“中附2號”、“中附3號”、“中附4號”4個(gè)優(yōu)良種質(zhì)品系，結(jié)果表明4個(gè)新品種具有良好的豐產(chǎn)性能，可作為優(yōu)良株系在生產(chǎn)中應(yīng)用[52-53]；此外，繆璐琳等[54]比較了不同種質(zhì)附子的水煎液抗炎、鎮(zhèn)痛作用，發(fā)現(xiàn)四川布拖產(chǎn)大花葉、小花葉型附子和四川江油產(chǎn)小花葉附子的抗炎作用較好；布拖產(chǎn)小花葉附子的鎮(zhèn)痛作用最強(qiáng)；高繼海等[55]研究顯示小花葉與瓜葉子型附子間，其根表土壤的優(yōu)勢真菌種類、群落多樣性均存在差異。綜上，不同種質(zhì)的附子在產(chǎn)量、成分及藥效等方面存在差異，因此，篩選培育附子優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源，對保障附子品質(zhì)和產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。

3.2 產(chǎn)地因素

附子在四川、陜西、云南等地均有栽培，土壤及氣候的不同是影響附子品質(zhì)的重要因素。研究表明，不同栽培區(qū)附子的浸出物、總生物堿、雙酯型生物堿、多糖及蛋白質(zhì)存在明顯差異[56-57]；四川江油栽培附子的雙酯型二萜生物堿遠(yuǎn)高于云南和湖北[58]；對20份不同產(chǎn)地的附子生物堿含量的研究顯示[59]，新烏頭堿與附子靈在布拖和巍山產(chǎn)區(qū)中含量較高，而次烏頭堿、尼奧靈、卡米查林、宋果靈等在江油和漢中產(chǎn)區(qū)較高；研究還發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)區(qū)附子中附子靈、尼奧靈和宋果靈3種水溶性生物堿的含量差異較大，其中江油附子中尼奧靈含量明顯高于其他產(chǎn)區(qū)[60]，與蔣蕩等[61]的研究結(jié)果一致；此外，對四川江油、布拖和云南的黑順片進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)指紋圖譜相似度大于0.9，化學(xué)計(jì)量學(xué)結(jié)果顯示，35批樣品可聚為3類，四川江油產(chǎn)黑順片與四川布拖、云南產(chǎn)存在一定差異性[62]；四川江油產(chǎn)區(qū)不同商品之間的相似度均大于0.9，其它產(chǎn)區(qū)與四川江油產(chǎn)區(qū)比較，相似度小于0.9[63-64]，該研究結(jié)果與王曉雅等[62]結(jié)果有一定差異；梅超南等[65]研究發(fā)現(xiàn)，四川產(chǎn)江油附子對維拉帕米注射液誘發(fā)的大鼠緩慢型心律失常作用，較四川涼山附子、云南祿勸、陜西漢中等產(chǎn)區(qū)強(qiáng)。查閱文獻(xiàn)整理了云南、陜西、貴州、四川的18個(gè)縣市（以縣為單位，同一縣如有多個(gè)樣品取平均值）102批生附子，對其藥典指標(biāo)成分單酯型生物堿（苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿）和雙酯型生物堿（新烏頭堿、烏頭堿和次烏頭堿）的平均含量進(jìn)行分析，結(jié)果見圖1?？梢姼鳟a(chǎn)地附子所含雙酯型生物堿（圖1a）及單酯型生物堿（圖1b）的含量不盡相同，表明產(chǎn)地是影響附子品質(zhì)的重要因素。

圖1 各產(chǎn)地樣本中主要化學(xué)成分含量的總結(jié)

3.3 栽培因素

氣候、土壤因子及栽培管理方式與附子質(zhì)量密切相關(guān)，且肥沃的土壤有利于產(chǎn)量和質(zhì)量的提高[66]。研究顯示土壤養(yǎng)分對附子生物堿含量有較大影響，其中全氮和速效磷對附子中雙酯型生物堿含量影響作用較大[67]；在同一氣候條件下，不同地塊附子生物堿類成分含量存在差異[68]；適時(shí)打頂可以提高附子產(chǎn)量和品質(zhì)，同時(shí)可促進(jìn)總生物堿、雙酯型生物堿及單酯型生物堿的積累[69]。此外，在生產(chǎn)過程中噴施烯效唑，對附子總生物堿含量無顯著影響，但可增加莖粗、葉片數(shù)、須根數(shù)、干物質(zhì)量[70]；6-芐氨基嘌呤和對總生物堿的含量有抑制作用[71]；萘乙酸可提高附子中新烏頭堿和烏頭堿的含量，降低次烏頭堿的含量；赤霉素和細(xì)胞分裂素類對附子生物堿成分影響不大。鋅、硼、鐵、錳微量元素肥料，對附子生物堿成分含量可產(chǎn)生顯著影響[72]。綜上，不同產(chǎn)區(qū)氣候、土壤及栽培措施，可導(dǎo)致附子化學(xué)成分和產(chǎn)量等的不同，實(shí)際生產(chǎn)中，需綜合考慮相關(guān)因素。

3.4 加工方式

產(chǎn)地加工是影響附子品質(zhì)的重要因素之一，不同的加工方法會導(dǎo)致附子的品質(zhì)差異。生物堿是附子發(fā)揮藥效的主要成分，但其中的雙酯型生物堿具有劇毒，為臨床應(yīng)用所忌憚，因此附子入藥前須經(jīng)加工炮制以降低其毒性。此外，由于新鮮附子易腐爛變質(zhì)，采收后需趁鮮加工。目前有關(guān)附子加工對品質(zhì)的影響，主要集中在泡膽和不同蒸制方式領(lǐng)域。

3.4.1 泡膽

泡膽加工使用歷史悠久，其對附子化學(xué)成分含量、飲片形態(tài)和物理性質(zhì)等均會產(chǎn)生影響。研究發(fā)現(xiàn)有膽與無膽兩種炮制方法，均降低雙酯型生物堿含量，但增加單酯型生物堿含量[73]；泡膽能使雙酯型生物堿含量降低[74]，經(jīng)膽巴浸泡20天后生物堿含量損失70%左右[75]；匡青芬等[76]研究發(fā)現(xiàn)無膽炮制的4種附子飲片，生物堿指標(biāo)符合藥典規(guī)定，毒性雙酯型生物堿含量明顯低于有膽附片。此外，亦有研究發(fā)現(xiàn)泥附子洗凈后在膽巴溶液中浸泡，新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿和苯甲酰新烏頭原堿的含量逐漸降低，20天以后含量趨于穩(wěn)定[75]，并發(fā)現(xiàn)浸泡25天后，膽巴含量達(dá)到飽和[77]；附子在10%濃度的膽巴液中浸泡，質(zhì)量不穩(wěn)定，在20%及以上濃度質(zhì)量相對穩(wěn)定。在膽巴液浸泡過程中，附子的效/毒比也在發(fā)生變化，18-24天期間，呈現(xiàn)出活性成分較高，而毒性成分較少的狀態(tài)，有利于實(shí)際生產(chǎn)[78]。此外，膽巴可對附子起到固形作用，30%濃度是固形的最優(yōu)濃度[79]，300 g·L-1氯化鈉浸泡后得到的附子飲片較佳，還可避免膽巴中的重金屬在附子中殘留[80]。還有報(bào)道指出，黑順片與其他無膽及含膽少的附片相比，其對不同臟器毒性也有所不同[81]，且在黑順片的炮制過程中，不同炮制階段膽巴的殘留量也會影響黑順片的毒性[82]。

3.4.2 蒸制或煎煮

附子毒性大小與加工密切相關(guān)，尤其是蒸制或煎煮時(shí)間不足或方法不當(dāng)，是附子中毒的公認(rèn)原因之一。多位學(xué)者對附子加工過程成分動態(tài)變化進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)附子經(jīng)煎煮炮制后，雙酯型生物堿水解轉(zhuǎn)化為單酯型生物堿及原堿，如焦新烏頭堿、焦烏頭堿、焦次烏頭堿和苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿等，毒性大大降低[83-85]。同時(shí)，附子煎煮2-10 min后，烏頭堿、中烏頭堿、次烏頭堿等雙酯型二萜類生物堿含量較高，而苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰中烏頭原堿等毒性較小的單酯型生物堿在煎煮60 min內(nèi)逐漸增加，隨后趨于穩(wěn)定[86]；附子煎煮2 h后，雙酯型生物堿無法檢出，單酯型生物堿逐漸升高，在6-8 h達(dá)到峰值，后逐漸降低[87]。綜上，適宜的泡膽、煎煮及蒸制可降低附子毒性，一定程度增加有效成分含量，具有減毒增效作用，但膽巴殘留量及蒸制時(shí)間等顯著影響附子藥材質(zhì)量，目前有關(guān)炮制標(biāo)準(zhǔn)并未對這些參數(shù)進(jìn)行規(guī)定，有待進(jìn)一步規(guī)范。

3.5 采收時(shí)間

對不同采收期附子新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿的含量研究顯示，隨著時(shí)間（7-9月）的推移，新烏頭堿的含量呈下降趨勢，次烏頭堿、烏頭堿的含量呈上升趨勢[88]。拓亞琴等[89]對陜西漢中地區(qū)不同采收期附子產(chǎn)量、總生物堿和烏頭堿含量進(jìn)行研究，認(rèn)為8月15日前后為附子的最佳采收時(shí)期，此階段附子的產(chǎn)量最高，含量也符合要求；對四川布拖不同生長期的附子產(chǎn)量和總生物堿含量研究顯示，從藥材內(nèi)在質(zhì)量和產(chǎn)量兩方面綜合考慮，8月20日-9月10日為附子的最佳采收期[90]。此外，附子中多糖的含量因采收期不同差異較大，在生長后期含量較高[91]。

3.6 貯藏

對附子自然堆放、麻袋覆蓋、沙藏、冷藏4種貯藏方式下的含水量、生物堿、粗多糖含量變化研究顯示，隨著貯藏期的延長，其含水量、生物堿成分逐漸降低。冷藏條件下，附子生物堿含量由貯藏初期的1.67%逐漸下降到1.27%，品質(zhì)優(yōu)于比其它儲藏方式[92]；上述4種貯藏條件下，附子的呼吸速率、可溶性蛋白、淀粉含量及淀粉酶活性的研究顯示，冷藏處理使附子外形始終完好，含水量維持在64%，保水效果最好，呼吸速率最低，淀粉酶活性最低，可溶性蛋白含量從1.56%上升到2.9%，優(yōu)于其他方式。生產(chǎn)上有條件的地方應(yīng)采用低溫處理的方法保藏新鮮附子，也可采用沙藏和麻袋覆蓋進(jìn)行短期保存，但水分需保持在50%以上[93]。

3.7 不同商品規(guī)格

附子常見的商品規(guī)格有泥附子、鹽附子、黑順片、白附片等[1]，研究顯示不同商品規(guī)格其化學(xué)成分差異明顯，如鹽附子中烏頭堿的含量明顯高于白附片和黑順片[94]；蒸附片中單酯型生物堿、原堿和總生物堿的含量明顯高于烘附片，但雙酯型生物堿含量低于烘附片[95]。此外，研究表明不同商品規(guī)格其藥理功效亦有差異，如生附子可引起心電圖異常變化和不同程度的心肌損傷，而黑順片、白附片導(dǎo)致的心電異常較生附子弱[96]；強(qiáng)心活性分析結(jié)果顯示生附片強(qiáng)心作用較強(qiáng)，明顯優(yōu)于黑順片、白附片等傳統(tǒng)飲片規(guī)格[38]；亦有研究發(fā)現(xiàn)黑順片、刨附片、蒸附片、炒附片均具有鎮(zhèn)痛、抗炎、提高免疫作用，但各商品規(guī)格的作用效果存在差異[97]；黑順片抗炎作用優(yōu)于白附片，抗免疫力作用優(yōu)于淡附片；白附片的強(qiáng)心、耐缺氧作用較強(qiáng)；炮附片的鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于黑順片[98]；隨著附子質(zhì)量的增大，雙酯型生物堿的含有量呈降低趨勢，強(qiáng)心成分呈升高趨勢，單酯類生物堿變化不明顯；各商品規(guī)格鎮(zhèn)痛效果無顯著性差異[99]。

4 結(jié)論與展望

附子作為傳統(tǒng)大宗中藥，其品質(zhì)對臨床用藥的有效性和安全性意義重大，目前中國藥典對其毒性成分上限和活性成分下限進(jìn)行了規(guī)定，但未規(guī)定雙酯型生物堿的最低含量，這導(dǎo)致附子飲片中的雙酯型生物堿含量普遍很低，且不同廠家相差很大。已有多項(xiàng)研究表明，在附子加工過程中，雙酯型烏頭堿分解為烏頭原堿，強(qiáng)心功效顯著降低[100]，且存在炮制過度的現(xiàn)象，難于保證臨床用藥的有效性[101]。另外已有藥效研究表明，去甲烏藥堿與去甲豬毛菜堿是附子的主要強(qiáng)心成分[38]，但目前尚缺乏這些成分與附子品質(zhì)的相關(guān)研究，因此對附子品質(zhì)評價(jià)指標(biāo)及其限量應(yīng)開展更深入系統(tǒng)的研究。多個(gè)國際標(biāo)準(zhǔn)均已規(guī)定了農(nóng)殘、重金屬、SO2等外源性有害物質(zhì)的限量，但目前中國藥典尚未對附子的外源性有害物質(zhì)進(jìn)行規(guī)定，應(yīng)加強(qiáng)這方面的研究，為附子進(jìn)入國際貿(mào)易市場提供依據(jù)。同時(shí)，附子的藥效和毒性等相關(guān)研究比較有限，現(xiàn)有資料還不能完全揭示其“回陽救逆”的功能本質(zhì)，且當(dāng)前附子加工缺乏統(tǒng)一炮制規(guī)范，導(dǎo)致其飲片質(zhì)量參差不齊，膽巴殘留、生物堿含量差異較大[102]，應(yīng)加強(qiáng)相關(guān)基礎(chǔ)研究，明確附子毒性和藥效相關(guān)成分。在繼承傳統(tǒng)的基礎(chǔ)上，對附子炮制工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化和確定，最大程度上保留有效成分、降低毒性，保證飲片質(zhì)量的穩(wěn)定、可控。此外，種質(zhì)、產(chǎn)地、加工、栽培及采收等因素對附子品質(zhì)的形成具有重要影響。鑒于上述分析，今后應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)附子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，健全質(zhì)量控制體系建設(shè)，如將強(qiáng)心活性成分去甲烏藥堿和去甲豬毛菜堿等，作為附子質(zhì)量控制指標(biāo)之一，并對膽巴、農(nóng)藥和重金屬殘留限量等進(jìn)行明確，以保障臨床用藥安全；其次，確定附子炮制過程中泡膽、蒸煮、晾曬等工藝的具體時(shí)間，保證飲片質(zhì)量的均一性；加強(qiáng)附子優(yōu)質(zhì)種質(zhì)的篩選培育，探究品質(zhì)與其影響因素的作用機(jī)制，保障附子產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，制定科學(xué)規(guī)范的種植和加工技術(shù)體系，確保附子優(yōu)質(zhì)原料和藥材飲片的供應(yīng)，以滿足市場對高品質(zhì)附子的需求。