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    水產(chǎn)功能性發(fā)酵豆粕的工藝條件研究

    2022-02-26 07:36:12袁澤琿楊紅玲張姣錦孫云章
    飼料工業(yè) 2022年3期
    關(guān)鍵詞:酵母菌

    ■袁澤琿 楊紅玲 張姣錦 孫云章

    (集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,廈門市飼料檢測(cè)與安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建 廈門 361021)

    魚粉由于蛋白含量高、氨基酸組成平衡及抗?fàn)I養(yǎng)因子較少等眾多優(yōu)點(diǎn)一直是水產(chǎn)飼料重要的蛋白來源,在肉食性魚類飼料中約占30%~50%[1]。根據(jù)FAO統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,由于全球魚粉的供求關(guān)系不平衡,致使魚粉價(jià)格居高不下[2]。利用大豆蛋白替代魚粉是近十幾年來水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[3]。但是,大豆蛋白中抗原蛋白占比為65%~80%,難以通過熱處理或飼料加工去除,顯著影響魚類腸道的微生態(tài)結(jié)構(gòu)、破壞腸道黏膜結(jié)構(gòu)完整性、影響機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收、降低飼料蛋白質(zhì)利用率等[4]。

    近年來,生物發(fā)酵技術(shù)被廣泛用于飼料原料的改造,豆粕經(jīng)微生物發(fā)酵后,其抗?fàn)I養(yǎng)因子含量顯著下降,而且,微生物菌活動(dòng)過程中能夠?qū)⒁恍╇y以吸收的有機(jī)物分解轉(zhuǎn)換為蛋白質(zhì)飼料,增加了飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。另外,生物發(fā)酵飼料中所含的益生菌能夠調(diào)節(jié)水產(chǎn)動(dòng)物免疫功能,頡頏病原菌,提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能[5]。當(dāng)前,用于制作水產(chǎn)用發(fā)酵豆粕的菌株多分離于環(huán)境和恒溫動(dòng)物中,很多菌株雖然具有降解抗?fàn)I養(yǎng)因子等作用,但是難以發(fā)揮調(diào)控宿主免疫機(jī)能的作用,難以在動(dòng)物消化道內(nèi)定植或者是存活時(shí)間短、穩(wěn)定性差、對(duì)腸道菌群調(diào)控能力弱[4]。因此,一些學(xué)者認(rèn)為理想的發(fā)酵菌株應(yīng)來自水產(chǎn)動(dòng)物自身消化道[6-7]。目前對(duì)于水產(chǎn)動(dòng)物而言,土著菌株資源的開發(fā)仍然嚴(yán)重不足[8]。另外,大量研究顯示,與單菌發(fā)酵相比,復(fù)合菌發(fā)酵更有利于發(fā)揮微生物之間的互利共生作用,提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率[9]。

    本研究利用實(shí)驗(yàn)室前期篩選出3 株優(yōu)良功能菌株(短小芽孢桿菌SE5、釀酒酵母菌Sa 以及乳酸乳球菌17)協(xié)同發(fā)酵豆粕,以抗原蛋白降解效果為評(píng)價(jià)指標(biāo),優(yōu)化菌株比例、接種順序、料液比、接種量、發(fā)酵溫度和發(fā)酵時(shí)間等參數(shù),再應(yīng)用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)對(duì)上述參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,明確復(fù)合菌最佳發(fā)酵條件,建立一種生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)水產(chǎn)功能性發(fā)酵豆粕的工藝。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 試驗(yàn)菌株

    短小芽孢桿菌SE5(Bacillus pumilusSE5)分離自斜帶石斑魚腸道,菌落為乳白色、半透明、隆起、邊緣整齊、菌落較小(直徑0.5 mm)、革蘭氏陽(yáng)性菌、好氧。菌株以25%甘油為保護(hù)劑保存于-80 ℃冰箱。

    乳酸乳球菌17(Lactococcus lactis17)分離自小丑魚腸道,菌落為白色、濕潤(rùn)、極小、革蘭氏陽(yáng)性菌、兼性厭氧。菌株以25%甘油為保護(hù)劑保存于-80 ℃冰箱。

    釀酒酵母菌Sa(Saccharomyces cereusSa)分離自酒曲。菌落為乳白色、濕潤(rùn)、隆起、菌落整體黏稠、表面較光滑、容易挑起、質(zhì)地較均勻、直徑在0.5~0.6 cm,兼性厭氧。菌株以25%甘油為保護(hù)劑保存于-80 ℃冰箱。

    1.1.2 培養(yǎng)基

    MRS 肉湯培養(yǎng)基:用作乳酸菌培養(yǎng),購(gòu)于青島海博生物技術(shù)有限公司。

    YPD 液體培養(yǎng)基:用作酵母菌培養(yǎng),購(gòu)于青島海博生物技術(shù)有限公司。

    2216E 液體培養(yǎng)基:用作短小芽孢桿菌培養(yǎng),購(gòu)于青島海博生物技術(shù)有限公司。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 發(fā)酵種子液的制備

    短小芽孢桿菌SE5發(fā)酵種子液制備:取保藏的菌液200 μL 接至50 mL 2216E 液體培養(yǎng)基中,30 ℃,150 r/min,活化24 h?;罨笠?%的接種量進(jìn)行傳代2 次,根據(jù)菌株的生長(zhǎng)曲線,取第二次傳代的最佳生長(zhǎng)期菌液[10]作為發(fā)酵種子液,待接種豆粕。

    乳酸乳球菌17 發(fā)酵種子液的制備:取保藏的乳酸菌菌液200 μL 接至50 mL MRS 液體培養(yǎng)基中,30 ℃,150 r/min,活化24 h。活化后以5%的接種量進(jìn)行傳代兩次,根據(jù)菌株的生長(zhǎng)曲線,取第二次傳代的最佳生長(zhǎng)期菌液作為發(fā)酵種子液。

    釀酒酵母菌Sa 發(fā)酵種子液的制備:酵母菌菌液200 μL 接至50 mL YPD 液體培養(yǎng)基中,30 ℃,150 r/min,活化24 h?;罨笠?%的接種量進(jìn)行傳代兩次,根據(jù)菌株的生長(zhǎng)曲線,取第二次傳代的最佳生長(zhǎng)期菌液作為發(fā)酵種子液。

    1.2.2 復(fù)合菌株配伍

    復(fù)合菌株的比例是影響豆粕發(fā)酵效果的重要因素。試驗(yàn)設(shè)定的控制因素是料液比1∶1、總接種量10%、發(fā)酵溫度30 ℃、發(fā)酵時(shí)間48 h,變量是菌株比例,考察菌株比例對(duì)發(fā)酵豆粕抗原蛋白降解程度的影響。菌株比例的試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

    表1 菌株比例試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    1.2.3 復(fù)合菌株接種順序

    考慮到試驗(yàn)中復(fù)合菌各菌株的生長(zhǎng)特性,芽孢桿菌是好氧型菌,酵母菌是兼性厭氧型菌,乳酸菌是厭氧型菌。為了使各菌株有更好的生長(zhǎng)繁殖條件,試驗(yàn)在得到最佳菌株比例的基礎(chǔ)上,設(shè)定的控制因素是料液比1∶1,總接種量10%,發(fā)酵溫度30 ℃,發(fā)酵時(shí)間48 h,變量是菌株接入順序,考察復(fù)合菌株接種順序?qū)Πl(fā)酵豆粕抗原蛋白降解程度的影響。菌株接種順序的試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表2。

    表2 菌株接種順序試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    1.2.4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    為提高豆粕的利用效率,在得到復(fù)合菌最佳配伍比例、最佳接種順序以及單因素優(yōu)化的水平基礎(chǔ)上,研究復(fù)合菌發(fā)酵豆粕的工藝最大程度化降解大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白,采用Minitab軟件設(shè)計(jì)的L9(34)正交表,通過正交試驗(yàn)來尋找降解大豆抗原蛋白的最佳工藝條件。因素水平設(shè)計(jì)見表3,正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表4。

    表3 因素水平表

    表4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    1.2.5 大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的測(cè)定

    大豆球蛋白(Glycinin)(酶聯(lián)免疫法)和β-伴大豆球蛋白含量(β-Conglycinin)(酶聯(lián)免疫法)的測(cè)定采用北京龍科方舟生物工程技術(shù)有限公司提供的試劑盒進(jìn)行,具體操作參考彭翔等[11]。

    1.2.6 統(tǒng)計(jì)方法

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2013作初步處理,用SPSS 22.0軟件分析處理各組試驗(yàn)的差異作數(shù)據(jù)描述性分析。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表用Minitab設(shè)計(jì),方差結(jié)果分析用SPSS 22.0作一般線性模型多變量方差分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同配伍比例對(duì)大豆抗原蛋白含量的影響(見圖1)

    圖1 不同配伍比例條件下發(fā)酵豆粕中大豆抗原蛋白含量

    由圖1 可知,短小芽孢桿菌SE5∶釀酒酵母菌Sa∶乳酸乳球菌17以2∶2∶1的比例接種發(fā)酵后,發(fā)酵豆粕中殘留大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白含量相對(duì)少,其次是1∶2∶1和1∶1∶2的菌株比例。

    2.2 不同接種順序?qū)Υ蠖箍乖鞍缀康挠绊懀ㄒ妶D2)

    由圖2可知,按照先接入短小芽孢桿菌SE5,12 h后接入釀酒酵母菌Sa,24 h后接入乳酸乳球菌17的接種順序,抗原蛋白的降解效果最佳,大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的含量分別是59.22 mg/g和24.83 mg/g。

    圖2 不同接種順序條件下發(fā)酵豆粕中大豆抗原蛋白含量

    2.3 正交試驗(yàn)

    2.3.1 正交試驗(yàn)極差分析

    正交試驗(yàn)的極差結(jié)果如表5所示,從每個(gè)因素對(duì)應(yīng)的極差值R的大小可以判斷各個(gè)因素對(duì)試驗(yàn)指標(biāo)影響程度,得到因素的主次影響順序。極差值R越大,該因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響程度越大,該因素越重要。比較β-伴大豆球蛋白含量指標(biāo)的極差值R的結(jié)果,可知B>D>C>A,因此因素B是主要因素,A是不重要因素。每個(gè)因素對(duì)應(yīng)的k1、k2和k3表示該因素不同水平的平均值,優(yōu)質(zhì)的發(fā)酵豆粕中β-伴大豆球蛋白含量理應(yīng)是少量的,因此試驗(yàn)結(jié)果中的k值最小,意味著該因素相應(yīng)的水平是優(yōu)水平。比較各因素的對(duì)應(yīng)的k值,可知kA1C>A>D,B是主要因素,D是不重要因素。這與β-伴大豆球蛋白含量指標(biāo)下的最優(yōu)工藝條件略有差異,考慮到A是較不重要因素,kA1和kA3值相差不大,且在生產(chǎn)中,發(fā)酵時(shí)間越長(zhǎng),生產(chǎn)成本越高,因此選用kA1作為A因素的最優(yōu)水平。結(jié)合大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白含量結(jié)果,綜合分析得到復(fù)合菌發(fā)酵降解抗原蛋白的最優(yōu)工藝條件是發(fā)酵溫度30 ℃,總接種量10%,料液比1∶1,發(fā)酵時(shí)間為48 h。但是極差值僅僅反映了各因素影響試驗(yàn)指標(biāo)的主次關(guān)系,不能反映各因素影響試驗(yàn)指標(biāo)的顯著程度,且無法準(zhǔn)確地說明極差值差異產(chǎn)生的原因。因此,需要采用方差分析作為補(bǔ)充。

    表5 正交試驗(yàn)結(jié)果

    2.3.2 正交試驗(yàn)方差分析

    正交試驗(yàn)結(jié)果的方差分析采用SPSS 22.0分析中的一般線性模型單變量分析。大豆球蛋白含量方差分析和β-伴大豆球蛋白含量方差分析結(jié)果如表6 和表7所示。R-sq能用回歸平方和解釋比例,一般認(rèn)為R-sq 超過0.8 的模型擬合度比較高。同時(shí)對(duì)比表6、表7注中R-調(diào)整和R-sq的值,二者的值越接近,表示模型越優(yōu)。本試驗(yàn)中大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的含量指標(biāo)下的R2數(shù)據(jù)均大于0.8,表明模型擬合度比較高。P值反映各因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的顯著性影響,從大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的方差結(jié)果分析中,得到各因素均對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有著顯著性的影響。方差分析中的F值是效應(yīng)項(xiàng)/誤差項(xiàng)的比值,F(xiàn)值越大,說明處理之間差異越明顯。由表6和表7可知,在大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的方差分析中,B因素(料液比)中的F值最大,表明B因素對(duì)發(fā)酵豆粕抗原蛋白降解的影響程度最大,A因素(發(fā)酵時(shí)間)影響程度最小。

    表6 大豆球蛋白含量方差分析

    表7 β-伴大豆球蛋白含量方差分析

    綜合正交試驗(yàn)極差分析和方差分析結(jié)果得到,A1B2C2D2發(fā)酵條件對(duì)大豆抗原蛋白降解程度高,且結(jié)合生產(chǎn)中經(jīng)濟(jì)效益考慮,即發(fā)酵48 h,料液比1∶1,接種量10%,發(fā)酵溫度30 ℃為復(fù)合菌最佳發(fā)酵條件。

    3 討論

    發(fā)酵豆粕因具有抗?fàn)I養(yǎng)因子少、小肽豐富及易于動(dòng)物消化吸收等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)飼料。研究表明,不同菌株對(duì)發(fā)酵豆粕產(chǎn)品品質(zhì)影響很大[12]。劉劍飛[13]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),利用枯草芽孢桿菌NCU646 制作的發(fā)酵豆粕小肽占豆粕質(zhì)量為15%,枯草芽孢桿菌NCU655發(fā)酵豆粕中小肽占比為6%,而未發(fā)酵豆粕小肽占比僅為2%。王騰浩等[14]研究發(fā)現(xiàn),利用地衣芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌制作的發(fā)酵豆粕酸溶蛋白含量分別為12.98%和13.49%,而利用假絲酵母和糞腸球菌制作的發(fā)酵豆粕酸溶蛋白含量?jī)H分別為3.57%和3.89%。此外,工藝參數(shù)對(duì)發(fā)酵豆粕產(chǎn)品的質(zhì)量有很大的影響,如菌株比例、接種順序、料液比、發(fā)酵時(shí)間、接種量和發(fā)酵溫度等[15]。因此,本研究擬利用前期篩選的3株優(yōu)秀功能微生物——短小芽孢桿菌SE5(分離自斜帶石斑魚腸道)、乳酸乳球菌17(分離自小丑魚腸道)和釀酒酵母菌Sa(分離自酒曲),優(yōu)化菌株配伍和發(fā)酵工藝,開發(fā)一種水產(chǎn)功能性發(fā)酵豆粕。

    3.1 菌株比例對(duì)發(fā)酵效果的影響

    復(fù)合菌發(fā)酵系統(tǒng)通常會(huì)優(yōu)于單菌發(fā)酵系統(tǒng),因?yàn)榫曛g多存在互惠共生關(guān)系[16]。本試驗(yàn)中當(dāng)復(fù)合菌株短小芽孢桿菌、釀酒酵母和乳酸乳球菌的比例為2∶2∶1 時(shí),發(fā)酵豆粕中大豆球蛋白含量最少,為86.30 mg/g,降解率達(dá)41.04%。Yuan 等[17]研究中,枯草芽孢桿菌、異常漢遜酵母和干酪乳桿菌的最佳比例為2∶1∶2,發(fā)酵后的大豆多肽的含量由2.16%提高到14.36%,同時(shí)胰蛋白酶抑制因子含量由35.34 mg/g降解到9.75 mg/g。程友飛[18]報(bào)道枯草芽孢桿菌、干酪乳桿菌和酵母菌混菌固態(tài)發(fā)酵豆粕過敏原蛋白被部分降解,致敏性隨之降低。劉向敏等[19]研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)酵母菌和枯草芽孢桿菌比例為7∶3時(shí),兩菌達(dá)到了良好的共生關(guān)系,中性蛋白酶產(chǎn)率和淀粉酶產(chǎn)率得到提高。發(fā)酵過程實(shí)質(zhì)上是由簡(jiǎn)單或復(fù)雜的微生物群落驅(qū)動(dòng)的,顯然,這些微生物不僅可以與底物相互作用,而且彼此間也能互相作用。微生物與微生物之間作用的機(jī)制是復(fù)雜的,復(fù)合菌接種發(fā)酵通常會(huì)產(chǎn)生優(yōu)于單菌發(fā)酵效果[20],但也可能由于不同菌株間存在制約作用,發(fā)酵效果與單菌發(fā)酵效果無異甚至不如單菌發(fā)酵效果。

    3.2 菌株接種順序?qū)Πl(fā)酵效果的影響

    芽孢桿菌屬于好氧型菌株,但能源物質(zhì)耗損高;酵母菌屬于兼性厭氧型菌株,能適應(yīng)廣泛的氧濃度區(qū)域;乳酸菌屬于厭氧型菌株,但發(fā)酵周期長(zhǎng)。因此,應(yīng)當(dāng)充分考慮微生物自身特性,分步接入不同菌株進(jìn)行發(fā)酵。本試驗(yàn)結(jié)果表明,在發(fā)酵48 h 時(shí)間里,隔12 h分步接種短小芽孢桿菌SE5、釀酒酵母菌Sa和乳酸乳球菌17 發(fā)酵效果比同時(shí)接入3 株益生菌的發(fā)酵效果好,大豆抗原蛋白降解程度高,發(fā)酵后豆粕的大豆球蛋白含量和β-伴大豆球蛋白含量分別為59.22 mg/g,24.83 mg/g。這與其他學(xué)者的研究結(jié)果相似,石慧等[21]用好氧型枯草芽孢桿菌作為前發(fā)酵,兼性厭氧型酵母菌和厭氧型乳酸菌作為后發(fā)酵的分步發(fā)酵形式發(fā)酵生豆粕,抗原蛋白幾乎完全降解。楊文宇等[22]在研究中將豆粕發(fā)酵分為兩個(gè)階段,前期發(fā)酵是以枯草芽孢桿菌和黑曲霉好氧發(fā)酵,后期發(fā)酵是以釀酒酵母及保加利亞乳酸桿菌厭氧發(fā)酵,以肽的轉(zhuǎn)化率為指標(biāo)評(píng)價(jià)發(fā)酵效果得到兩步發(fā)酵優(yōu)于一步發(fā)酵。

    3.3 發(fā)酵工藝對(duì)發(fā)酵效果的影響

    眾多研究表明,料液比、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間和接種量是影響發(fā)酵成敗的重要因素。適宜的料液比能滿足培養(yǎng)系統(tǒng)的氣體流動(dòng),讓微生物呈現(xiàn)良好的生長(zhǎng)狀態(tài)和最大程度發(fā)揮自身降解能力,水分偏高會(huì)導(dǎo)致基質(zhì)透氣性差,不利于散熱和氧的傳遞,影響菌株的生長(zhǎng)和繁殖[23]。分離于自然界的微生物,他們的最適生長(zhǎng)溫度一般會(huì)與其原本的生長(zhǎng)環(huán)境相近[24],溫度過高或過低都不利于微生物生長(zhǎng)、繁殖和代謝[25]。在發(fā)酵生產(chǎn)上,發(fā)酵時(shí)間越長(zhǎng),發(fā)酵料被外界環(huán)境的腐敗菌污染的風(fēng)險(xiǎn)越高,導(dǎo)致發(fā)酵豆粕氨基酸損失和腐敗,散發(fā)較刺鼻氨氮味[26];但發(fā)酵時(shí)間太短,豆粕被發(fā)酵利用程度尚未達(dá)到預(yù)期的效果。合適的接種量有利于復(fù)合菌各菌株的生長(zhǎng)繁殖,各酶系之間發(fā)揮最佳的協(xié)同作用,最大程度利用發(fā)酵基質(zhì)[27]。當(dāng)接種量過低,意味著并沒有足夠的生物量充分降解豆粕中的大分子物質(zhì);接種量過高,豆粕中的營(yíng)養(yǎng)成分大部分被微生物生長(zhǎng)利用,使得豆粕中營(yíng)養(yǎng)成分減少,不利于提高經(jīng)濟(jì)效益。因此在預(yù)試驗(yàn)中,以大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白為指標(biāo),對(duì)以上4個(gè)因素進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示最佳單因素水平是發(fā)酵時(shí)間48 h,發(fā)酵溫度30 ℃,料液比1∶1,總接種量10%。朱平軍[28]研究發(fā)現(xiàn),在前48 h 用黑曲霉、枯草芽孢桿菌和酵母菌30 ℃好氧發(fā)酵,后48 h 用植物乳桿菌和瘤胃微生物37 ℃厭氧發(fā)酵,好氧發(fā)酵階段料液比為1∶0.9,厭氧仿生發(fā)酵階段料液比為1∶1.2,發(fā)酵后酸溶蛋白含量可達(dá)20.06%,粗蛋白含量可達(dá)52.03%。劉曉艷等[29]發(fā)現(xiàn)在料液比1∶1.2,接種量為25%,發(fā)酵溫度為34 ℃,發(fā)酵時(shí)間為96 h 的條件下,最終發(fā)酵物中多肽得率達(dá)54.89%,發(fā)酵產(chǎn)物中大豆多肽產(chǎn)率最高,含量為21.47%。

    正交試驗(yàn)是利用規(guī)格化的正交表,對(duì)多因素及因素的多個(gè)水平進(jìn)行考察,因其簡(jiǎn)便高效在科學(xué)試驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用[30]。極差分析方法和方差分析方法可以對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,且能驗(yàn)證結(jié)論可靠性[31]。正交試驗(yàn)在發(fā)酵工藝優(yōu)化中被廣泛應(yīng)用。程友飛[18]使用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化了枯草芽孢桿菌、干酪乳桿菌和酵母菌混菌種固態(tài)發(fā)酵豆粕的工藝,楊柳等[32]利用單因素和正交試驗(yàn)優(yōu)化飼用納豆芽孢桿菌發(fā)酵豆粕工藝條件,吝常華等[33]以小肽含量為指標(biāo),對(duì)解淀粉芽孢桿菌單菌固態(tài)發(fā)酵豆粕以及解淀粉芽孢桿菌、植物乳桿菌和釀酒酵母菌3個(gè)菌種混菌固態(tài)發(fā)酵豆粕的工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。本試驗(yàn)以大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白含量為試驗(yàn)指標(biāo),依據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果,使用Minitab軟件設(shè)計(jì)四因素三水平的正交試驗(yàn)。結(jié)果表明:短小芽孢桿菌SE5∶釀酒酵母菌Sa∶乳酸乳球菌17 的配伍比例為2∶2∶1;發(fā)酵初始接入短小芽孢桿菌SE5,發(fā)酵12 h后接入釀酒酵母菌,發(fā)酵24 h后接入乳酸乳球菌17的分步接種順序進(jìn)行發(fā)酵,最優(yōu)的發(fā)酵條件是發(fā)酵溫度30 ℃,總接種量為10%,料液比為1∶1,發(fā)酵時(shí)間是48 h,此工藝下的發(fā)酵豆粕大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白含量分別下降到41.75 mg/g 和32.23 mg/g。接下來,我們還將對(duì)發(fā)酵豆粕的營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行分析,并通過飼養(yǎng)試驗(yàn)評(píng)價(jià)發(fā)酵豆粕在水產(chǎn)動(dòng)物上的應(yīng)用效果。

    4 結(jié)論

    短小芽孢桿菌SE5∶釀酒酵母菌Sa∶乳酸乳球菌17的配伍比例為2∶2∶1;發(fā)酵初始接入短小芽孢桿菌SE5,發(fā)酵12 h后接入釀酒酵母菌,發(fā)酵24 h后接入乳酸乳球菌17的分步接種順序進(jìn)行發(fā)酵,最佳發(fā)酵條件是:發(fā)酵溫度30 ℃,總接種量10%,料液比1∶1,發(fā)酵時(shí)間為48 h。獲得的發(fā)酵豆粕大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白含量分別為41.75 mg/g 和32.23 mg/g,降解率分別為71.48%和73.29%。

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