氫溴酸檳榔堿抗胃黏膜損傷的作用及機(jī)制

賀佳佳，易 睿，趙 迪，陸 康，吳詩(shī)宇，劉冠蘭

(長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410219)

檳榔原產(chǎn)于馬來(lái)西亞，我國(guó)主產(chǎn)于海南島、臺(tái)灣地區(qū)、云南河口及西雙版納熱帶雨林間，廣西、廣東和福建也有少量分布[1]。檳榔堿是檳榔眾多化學(xué)成分中含量最多的生物堿，其含量達(dá)到0.30%～0.63%[2]。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)者對(duì)檳榔堿在藥理、生理等方面進(jìn)行了深入研究，闡述了其對(duì)人體及動(dòng)物的致口腔黏膜下纖維性病變、生殖系統(tǒng)毒性、神經(jīng)系統(tǒng)毒性及促進(jìn)胃腸道消化作用、驅(qū)蟲滅螺作用、抑菌作用等[3]。檳榔堿作為可食用檳榔的主要化學(xué)成分，其在口腔黏膜損傷方面有非常多的研究，而對(duì)于胃黏膜損傷方面研究較為少見。本文主要?dú)滗逅釞壚茐A在胃黏膜損傷的防治與修復(fù)過(guò)程中的作用效果，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。

1 資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組：SPF級(jí)SD大鼠50只(由本校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，雌雄各半，體重230～250 g，常規(guī)飼養(yǎng)。隨機(jī)分為五組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、生理鹽水對(duì)照組、氫溴酸檳榔堿低劑量組、氫溴酸檳榔堿中劑量組及氫溴酸檳榔堿高劑量組(分別給予11 mg/kg、22 mg/kg、44 mg/kg氫溴酸檳榔堿)[4]。本次研究符合本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的所有規(guī)定。

1.2主要試劑：溴酸檳榔堿(純度98%)，規(guī)格：1 g/瓶，CAS號(hào)：300-08-3(成都埃法生物技術(shù)有限公司)；胃蛋白酶測(cè)試試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20190506)；100%乙酸(長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院科研中心)；0.9%NaCl注射液(250 ml/袋，山東齊都藥業(yè)有限公司)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1檢測(cè)對(duì)大鼠胃潰瘍模型的影響

1.3.1.1造模與給藥：參照文獻(xiàn)復(fù)制實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍模型[5]。各組大鼠禁食不禁水24 h后，對(duì)生理鹽水對(duì)照組及氫溴酸檳榔堿低、中、高劑量組進(jìn)行造模。用50 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，將大鼠仰臥位固定在手術(shù)臺(tái)上，腹部備皮消毒，鋪無(wú)菌洞巾，于劍突下切開腹壁約2 cm，輕取出胃，在胃前壁胃竇部漿膜下近肌層處用1 ml注射器注入100%乙酸30 μl，待注射部位出現(xiàn)直徑約3 mm的半透明白斑即判定為胃潰瘍模型復(fù)制成功。將胃還納入腹腔歸位，縫合傷口，無(wú)菌消毒。常規(guī)喂養(yǎng)3 d，于第4天開始，各組按照上述方法和劑量每天在同一時(shí)間灌胃，空白對(duì)照組正常給水，生理鹽水對(duì)照組給0.9%生理鹽水，其他三組給不同濃度氫溴酸檳榔堿治療，連續(xù)治療7 d。

1.3.1.2取材與檢測(cè):各組大鼠收集胃液后處死動(dòng)物，所有動(dòng)物均采取活體固定法處死。剖腹取出胃，沿胃大彎剪開胃，用蒸餾水洗去胃內(nèi)容物，平鋪于白色手術(shù)盤中，觀察并用游標(biāo)卡尺測(cè)量潰瘍大小。之后取胃竇部組織進(jìn)行后固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察胃黏膜的病理變化：潰瘍長(zhǎng)徑>1 mm，直接測(cè)量長(zhǎng)度，每1毫米計(jì)1分；若寬徑>1 mm，則計(jì)分翻倍；若長(zhǎng)寬徑都<1 mm，按照潰瘍點(diǎn)計(jì)分，每點(diǎn)計(jì)0.5分。每只動(dòng)物潰瘍累計(jì)總分計(jì)為潰瘍指數(shù)1、2、3、4、5。計(jì)算潰瘍抑制率，潰瘍抑制率=(對(duì)照組潰瘍指數(shù)-氫溴酸檳榔堿組潰瘍指數(shù))/對(duì)照組潰瘍指數(shù)×100%。

1.3.2檢測(cè)對(duì)胃酸和胃蛋白酶活性的影響:各組大鼠末次給藥前12 h禁食不禁水，給藥后2 h用50 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，將大鼠仰臥位固定與手術(shù)臺(tái)上，剖開上腹部。從幽門端切一小口，向胃內(nèi)插入一直徑2.5 mm的塑料管,并于幽門環(huán)處用絲線結(jié)扎固定，以收集胃液。用輸液器(剪去針頭)的塑料管從口腔經(jīng)食道插入胃，于食道近賁門處結(jié)扎固定；將0.9%NaCl注射液以10 ml/h的滴速進(jìn)行胃內(nèi)灌流。收集30 min洗出液，離心10 min(3 000 r/min)，用于測(cè)量游離酸、總酸、胃蛋白酶活性。胃酸測(cè)定采用酸堿中和滴定法，胃蛋白酶活性測(cè)定按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1氫溴酸檳榔堿對(duì)胃潰瘍的作用效果

2.1.1各組大鼠潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率檢測(cè)：游標(biāo)卡尺測(cè)得潰瘍面積并計(jì)算潰瘍指數(shù)和抑制率顯示：氫溴酸檳榔堿劑量越高則大鼠胃潰瘍指數(shù)越小，潰瘍抑制率越大；氫溴酸檳榔堿高劑量組大鼠胃黏膜潰瘍指數(shù)與對(duì)照組比較明顯變小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率比較(n=10)

2.1.2各組大鼠胃組織病理變化：病理切片形態(tài)學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)生理鹽水對(duì)照組黏膜損傷嚴(yán)重，黏膜上皮和固有層均出現(xiàn)變性壞死和較大的潰瘍?cè)?；氫溴酸檳榔堿低劑量組胃黏膜依然損傷嚴(yán)重，與生理鹽水對(duì)照組差別不大；氫溴酸檳榔堿中劑量組胃黏膜變性壞死有所減輕，潰瘍?cè)畈幻黠@；氫溴酸檳榔堿高劑量組胃黏膜損傷明顯改善，上皮和固有層都有修復(fù)。結(jié)果見圖1。

2.2氫溴酸檳榔堿對(duì)胃分泌物的影響：測(cè)定結(jié)果顯示，中高劑量氫溴酸檳榔堿組與對(duì)照組比較 胃游離酸量及總酸量都明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；氫溴酸檳榔堿高劑量組與生理鹽水對(duì)照組比較，胃蛋白酶的活力明顯變小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

圖1 各組大鼠胃黏膜組織病理變化比較(HE，×40)

表2 各組大鼠胃游離酸量、總酸量和胃蛋白酶活性比較

3 討論

檳榔堿是可食用檳榔的主要化學(xué)成分，國(guó)內(nèi)外對(duì)檳榔提取后的氫溴酸檳榔堿有著非常多的研究。有文獻(xiàn)表明，檳榔對(duì)代謝及腸胃運(yùn)動(dòng)[6]、肝、腎等器官和細(xì)胞都會(huì)產(chǎn)生一定的影響，如檳榔堿對(duì)大鼠腸道中分離的α-淀粉酶有明顯的抑制作用[7]，檳榔堿還可以抑制大鼠離體腎上腺體中兒茶酚胺的釋放[8]。消化性潰瘍是臨床常見病，對(duì)其發(fā)病原因和機(jī)制雖有諸多觀點(diǎn)，目前普遍認(rèn)為是多種因素共同作用的結(jié)果，其發(fā)生與致潰瘍因子(胃酸、胃蛋白酶分泌、幽門螺桿菌感染、迷走神經(jīng)亢進(jìn)等)與防御因子(黏液分泌、黏膜抵抗等)之間的平衡被打破有關(guān)。胃在消化食物的過(guò)程中，若不能分泌足夠多的黏液，則黏膜就可能會(huì)被鹽酸和胃蛋白酶消化，嚴(yán)重時(shí)將累及肌層，形成潰瘍；或者胃酸分泌增加，胃蛋白酶活性增強(qiáng)，胃黏膜也會(huì)被損傷而發(fā)生潰瘍[9]。本研究把氫溴檳榔堿與胃黏膜損傷的防治與修復(fù)聯(lián)系起來(lái)，通過(guò)人為建立胃黏膜損傷模型，采用先給藥再造模和先造模再給藥兩種方式，研究不同濃度氫溴檳榔堿在胃黏膜損傷預(yù)防與修復(fù)過(guò)程中作用效果；并測(cè)定了不同劑量氫溴酸檳榔堿對(duì)胃酸及胃蛋白酶分泌的影響，以探討其作用效果的可能機(jī)制。

從氫溴酸檳榔堿對(duì)胃潰瘍模型的影響結(jié)果看，發(fā)現(xiàn)氫溴酸檳榔堿劑量越高則大鼠胃潰瘍指數(shù)越小，潰瘍抑制率越大；氫溴酸檳榔堿高劑量組大鼠胃黏膜潰瘍指數(shù)與對(duì)照組比較明顯變??；病理切片形態(tài)學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)生理鹽水對(duì)照組黏膜損傷嚴(yán)重，黏膜上皮和固有層均出現(xiàn)變性壞死和較大的潰瘍?cè)?；氫溴酸檳榔堿低劑量組胃黏膜依然損傷嚴(yán)重，與生理鹽水對(duì)照組差別不大；氫溴酸檳榔堿中劑量組胃黏膜變性壞死有所減輕，潰瘍?cè)畈幻黠@；氫溴酸檳榔堿高劑量組胃黏膜損傷明顯改善，上皮和固有層都有修復(fù)。這說(shuō)明高劑量氫溴酸檳榔堿對(duì)大鼠胃黏膜潰瘍的修復(fù)有一定的促進(jìn)作用。

從氫溴酸檳榔堿對(duì)胃分泌物的影響結(jié)果看，中高劑量氫溴酸檳榔堿組與對(duì)照組比較胃游離酸量及總酸量都明顯減少；氫溴酸檳榔堿高劑量組對(duì)照組比較，大鼠胃蛋白酶的活力明顯下降。這說(shuō)明適當(dāng)劑量的氫溴酸檳榔堿能抑制胃酸的分泌，并降低胃蛋白酶的活性。故認(rèn)為，適當(dāng)劑量的氫溴酸檳榔堿能預(yù)防大鼠胃黏膜潰瘍的發(fā)生并促進(jìn)潰瘍的修復(fù)，此作用的可能機(jī)制是其抑制了胃酸的分泌并降低胃蛋白酶的活性。所以減輕了胃黏膜損傷的侵襲因素，對(duì)胃黏膜損傷起到了預(yù)防和保護(hù)作用，同時(shí)促進(jìn)了大鼠胃黏膜潰瘍后的修復(fù)，有利于胃黏膜損傷的愈合，可為臨床上胃黏膜損傷的防治提供新思路。但是其減少胃酸分泌、抑制胃蛋白酶活力的具體機(jī)制尚不明確，或者氫溴酸檳榔堿對(duì)胃黏膜是否還有其他影響還需進(jìn)一步研究。