基于UPLC-MS/MS代謝組學技術分析不同栽培模式下鐵皮石斛類黃酮化合物差異性

李 帆，金傳高，任仙櫻，費 璇，趙 祺，潘曉軍，吳志剛*，姜程曦

基于UPLC-MS/MS代謝組學技術分析不同栽培模式下鐵皮石斛類黃酮化合物差異性

李 帆1, 2，金傳高3#，任仙櫻2, 4，費 璇2，趙 祺2, 4，潘曉軍2，吳志剛2*，姜程曦1, 4*

1. 溫州大學生命科學研究院，浙江 溫州 325035 2. 溫州醫(yī)科大學藥學院，浙江 溫州 325035 3. 浙江高鼻子生物科技有限公司，浙江 樂清 325615 4. 安徽省九華山佛教醫(yī)藥研究所，安徽 池州 247100

研究不同栽培模式下鐵皮石斛中類黃酮化合物積累的差異，為鐵皮石斛種植方式創(chuàng)新提供依據(jù)。運用超高效液相色譜串聯(lián)質譜（UPLC-MS/MS）廣泛靶向技術對3種栽培模式（大棚栽培、林下活樹附生和巖壁附生栽培）下的鐵皮石斛類黃酮物質進行檢測，使用主成分分析（principal component analysis，PCA）和正交偏最小二乘判別分析法（orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA）鑒定差異代謝物。共鑒定202個類黃酮化合物，主要以黃酮（76個）和黃酮醇（60個）化合物為主，其中花青素物質矢車菊素-3--葡萄糖苷-7,3′-di--(6′′--芥子酰葡萄糖苷)為首次在鐵皮石斛中被檢測到；OPLS-DA篩選43個差異化合物，其中大棚組與林下組、大棚組與巖壁組間均具有23個差異物，林下組與巖壁組則具有27個差異物，差異物質對表征不同栽培模式的樣品貢獻率明顯。林下活樹附生和巖壁附生栽培明顯提升黃酮、類黃酮化合物的生物合成水平，保障了藥材質量，研究結果為新型栽培模式的推廣提供了理論基礎。

鐵皮石斛；UPLC-MS/MS；類黃酮；代謝組學；栽培模式

鐵皮石斛Kimura et Migo.為石斛屬多年生草本植物，入選“影響世界的中國植物”，被譽為中華“九大仙草”之首，為我國名貴中藥[1-2]。鐵皮石斛地上莖可加工成鐵皮楓斗，《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品，味甘，主傷中、下氣，補五臟虛勞、羸弱，強陰、厚腸胃、輕身延年之功效[3]。藥理研究表明，鐵皮石斛在提高人體免疫能力、抗衰老、抗腫瘤、改善糖尿病癥狀和萎縮性胃炎等方面具有顯著的療效[4-6]。

浙江是我國鐵皮石斛的道地產(chǎn)區(qū)之一，鐵皮石斛已被列入“新浙八味”。自2000年以來產(chǎn)區(qū)在品種選育、組織培養(yǎng)、栽培措施等關鍵技術方面取得突破性的進展[7-9]，促進了石斛產(chǎn)業(yè)快速的發(fā)展。特別是，近年來以林下活樹附生、巖壁附生等近野生栽培技術悄然興起，成為鐵皮石斛的新型的栽培模式，從而逐步使鐵皮石斛種植由大棚向森林回歸。然后，不同的栽培方式的光、溫、濕度等環(huán)境因素千差萬別，一定程度也會對鐵皮石斛生長、有效成分積累造成影響。已有研究表明，光質和低溫顯著鐵皮石斛種苗的發(fā)育、次生代謝產(chǎn)物的調控，但研究主要集中在氨基酸、多糖、生物堿等成分[10-11]。類黃酮是鐵皮石斛一類重要的活性成分，具有抗氧化、降血糖、降低膽固醇、保護心血管系統(tǒng)等藥理活性[12]。光、溫等環(huán)境脅迫是誘導植物類黃酮化合物生長合成的重要環(huán)境因素之一[13]。因而，推測不同栽培模式下因其環(huán)境差異性可能會對類黃酮的生物合成造成一定影響，從而影響鐵皮石斛的品質，而有關這方面未見報道。

鑒于類黃酮物質重要的藥用價值，本實驗采用超高效液相色譜串聯(lián)質譜（UPLC-MS/MS）結合植物廣泛靶向代謝組學技術整體表征3種栽培模式下鐵皮石斛類黃酮化合物差異性，利用主成分分析（principal component analysis，PCA）和正交偏最小二乘判別分析法（orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA）等多元統(tǒng)計手段鑒定主導這種差異性的標志性的代謝物，發(fā)掘潛在的規(guī)律，以為改進鐵皮石斛種植模式及提供高質量產(chǎn)品奠定基礎。

1 儀器與材料

超高效液相色譜（UFLC SHIMADZU CBM30，日本島津公司），4500 QTRAP型高分辨串聯(lián)質譜（美國應用生物系統(tǒng)公司）。主要試劑包括甲醇（LC-MS級，美國Merk公司）、乙腈（LC-MS級，美國Merk公司），水為超純水（Milli-Q SP Regent Water system，美國），MM 400型研磨儀（德國萊馳公司）。

本課題組于2017年4月使用同一批種苗，在雁蕩山石斛谷基地（E121.06°、N28.39°）布置了大棚、林下活樹附生和巖壁栽培實驗。實驗材料于2019年11月采集該實驗條件的樣品，由溫州醫(yī)科大學吳志剛副研究員鑒定為鐵皮石斛Kimura et Migo.鮮條。每個樣品取自5株不同植株的鮮條，液氮下研碎，均勻混合。不同栽培模式均4次生物學重復，共12個樣品。此外，3種栽培模式樣品等量混合構成質控樣本，共3個重復，用于檢測儀器的重復性和精確度。所用樣品放置?80 ℃超低溫冰箱備用。

2 方法

2.1 樣品制備

鐵皮石斛樣品經(jīng)真空冷凍干燥后，研磨儀（30 Hz，1.5 min）研磨至粉末狀；稱取100 mg的粉末，溶解于1.0 mL的70%甲醇水溶液中；溶解后的樣品4 ℃冰箱過夜，期間渦旋3次，以提高提取率；離心（轉速10 000×，10 min）后，上清液用微孔濾膜（0.22 μm）濾過后進樣。

2.2 色譜和質譜采集條件

色譜柱：ACQUITY UPLC HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），十八烷基鍵合硅膠為填充劑。流動相為0.04%乙酸超純水（A）-乙腈（含0.04%的乙酸（B），洗脫梯度：0～11.0 min，5%～95% B；11.0～12.0 min，95% B；12.1～15.0 min，5% B。體積流量0.4 mL/min，柱溫40 ℃，進樣量5 μL。

采用正負離子模式檢測模式，霧化氣體為高純度氮氣（N2），電噴霧離子源（ESI）溫度550 ℃，離子化電壓5500 V，簾氣（curtain gas，CUR）207 kPa，輔助電壓60 kPa。按參考文獻[15]方法優(yōu)化去簇電壓和碰撞能。質量掃描范圍/100～1200，掃描時間0.2 s。

2.3 數(shù)據(jù)處理

MultiaQuant軟件對色譜峰的進行積分和校正，每個色譜峰的峰面積代表對應物質的相對含量，導出數(shù)據(jù)矩陣。利用三重四級桿質譜的多反應監(jiān)測模式（MRM）將獲得的二級質譜數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫進行比對，對化合物進行定性、定量分析。使用數(shù)據(jù)庫包括邁維公司自建MWDB、MassBank（http://www. massbank.jp/）、HMDB（http://www.hmdb.ca/）和METLIN（http://metlin.scripps.edu/index.php）等數(shù)據(jù)庫。R軟件ropls包對數(shù)據(jù)矩陣進行PCA和OPLS-DA分析，鑒定差異性代謝產(chǎn)物。使用R軟件pheatmap包進行聚類分析（hierarchical cluster analysis，HCA），以表征不同樣本代謝物的積累模式。

3 結果與分析

3.1 鐵皮石斛類黃酮化合物的鑒定

UPLC-MS/MS首先以正、負離子模式對混樣質控QC樣品進行檢測，質控樣本TIC曲線重疊性高、質譜峰保留時間和強度一致，表明所建方法可靠、儀器穩(wěn)定性較好（圖1-A）。所獲得的代謝物高分辨二級質譜數(shù)據(jù)經(jīng)與公共數(shù)據(jù)庫比對，共鑒定202個類黃酮化合物，其中黃酮化合物76個、黃酮醇60個、黃酮碳糖苷21個、二氫黃酮16個、黃烷醇類10個，此外還包含少量異黃酮、二氫黃酮醇、原花青素和花青素等物質。其中，花青素物質矢車菊素-3--葡萄糖苷- 7,3′-di--(6′′--芥子酰葡萄糖苷)首次在鐵皮石斛中被報道。大棚、林下及巖壁附生栽培的樣品的UPLC-MS/MS基峰離子流圖如圖1-B～D所示，直觀顯示不同栽培模式下類黃酮化合物的存在較為明顯的差異。

A-混樣質控樣品 B-大棚種植樣品 C-林下活樹附生種植樣品 D-巖壁附生種植樣品，下同

3.2 PCA和代謝物積累模式分析

代謝組數(shù)據(jù)經(jīng)標準化處理后進行PCA分析，前2個主成分特征值＞1，模型累積解釋率R為0.64。一般認為R大于0.5，表示模型可靠，值越大越能反映樣本間的差異。PCA得分見圖2，表明各組樣本分布于不同區(qū)域，所建立方法可良好表征不同栽培模式下代謝物的差異性。變量載荷圖顯示幾種物質位于坐標邊緣（圖2-B），表明這些物質在組間樣本中差異明顯（有較大/較小的極端值等），它們對排序空間和樣本差異的貢獻較大，可能是重要的標志性代謝物。例如，矢車菊素-3--葡萄糖苷- 7,3′-di--(6′′--芥子酰葡萄糖苷)（Lmtp003544）、原花青素B1（mws0836）、金圣草黃素--葡萄糖醛酸--己糖苷（pmb0587）、金圣草黃素-C-己糖苷（pmb0689）、番石榴苷（mws4183）、多花紫藤苷（Lmdp003994）等。此外，聚類分析顯示（圖2-C），不同組間代謝物積累模式存在明顯的差異，同一組的樣本代謝物積累趨勢較為一致且高度聚合一支。

A-樣品PCA得分圖 B-代謝物質載荷圖 C-代謝物聚類模式熱圖 S-巖壁種植樣品 T-林下活樹附生種植樣品 D-大棚種植樣品，表1同

3.3 不同栽培模式下差異代謝物的鑒定

OPLS-DA為分類監(jiān)督模式識別方法，可降低樣本組內(nèi)差異，能更加準確表征樣本組間特征。為進一步挖掘不同栽培模式下鐵皮石斛差異性，鑒定潛在的差異類黃酮物質，分別對3種栽培模式組間代謝數(shù)據(jù)進行OPLS-DA分析。

根據(jù)OPLS-DA模型的變量重要性投影（variable importance in project，VIP）鑒定差異代謝物，標準為VIP＞1且單維檢驗＜0.05（差異倍數(shù)值fold change＞2），共鑒定43個差異物質（表1）。表1分析發(fā)現(xiàn)，大棚組與林下組共存在23個差異物質，其中7個物質在林下組上調高積累；大棚組與巖壁組也具23個差異物，其中21個在巖壁組上調積累；林下組與巖壁組則存在27個差異物，且均在巖壁組上調積累。值得注意是，3組間差異代謝物共同認定1個標志性物質—矢車菊素-3--葡萄糖苷- 7,3′-di--(6′′--芥子酰葡萄糖苷)，暗示該物質在表征3種栽培模式下的代謝物中的貢獻率最大，與PCA結果相互佐證。進一步以VIP＞3篩選發(fā)現(xiàn)：大棚與林下組間，蘆丁、芹菜素-6,8--二葡萄糖苷及根皮素差異變化大；大棚與巖壁組間，柚皮素、紫鉚素及6-羥基山柰酚-7,6--二葡萄糖苷差異變化大；而在林下與巖壁組中，蘆丁、異金絲桃苷及6-羥基山柰酚-7--葡萄糖苷變化最大。綜合評價，上述物質對于表征不同栽培模式下鐵皮石斛代謝物的差異性貢獻較大。

OPLS-DA模型優(yōu)化表明大棚組與林下組的2、2、2值，分別為0.665、0.955、0.802；大棚組與崖壁組2、2、2值，分別為0.644、0.979、0.902；林下組與巖壁組2、2、2，分別為0.789、0.973、0.932。OPLS-DA得分圖如圖3所示，表明所建立的模型對組間樣品具有良好的區(qū)分度，相同組內(nèi)樣品高度聚合一類。OPLS-DA排列驗證（＝200）實驗表明，3組模型的原始R和Q均大于Y置換后的相應的值，暗示3組模型未過度擬合，可用于后續(xù)代謝物的鑒定。

3.4 差異代謝物代謝通路分析

為深入解析差異代謝物參與的代謝路徑，對43個差異代謝物進行KEGG代謝途徑注釋（圖4），發(fā)現(xiàn)大部分化合物富集到ko00944（黃酮和黃酮醇生物合成）、ko00941（類黃酮生物物合成）2個代謝途徑中，1個化合物被注釋到ko00942（花青素生物合成）途徑。進一步分析發(fā)現(xiàn)，與大棚種植模式相比，林下和巖壁組中上述代謝通路被明顯上調，次生代謝產(chǎn)物合成被顯著提升，尤其以巖壁種植為高。例如柚皮素、圣草酚、紫山葉素等黃酮類前體物質在林下組和巖壁組中含量增加明顯，分別較之大棚組提升了3.6倍和4.9倍、10.6倍和11.1倍、9.3倍和18.0倍?；ㄇ嗨卮x路徑中的矢車菊素-3--葡萄糖苷- 7,3′-di--(6′′--芥子酰葡萄糖苷)在林下組和巖壁組中的含量較之大棚組分別增加了6.8、26.6倍，暗示此物質很可能是近野生栽培過程中鐵皮石斛莖皮紫色表型形成的主要物質基礎。

表1 不同栽培模式下鐵皮石斛類黃酮差異代謝物

Table 1 Information of different flavonoes and flavonoids detected in D. officinale from different planting modes

中文名英文名D vs TD vs ST vs S log2_FCVIPLog2_FCVIPLog2_FCVIP 4,2′,4′,6′-四羥基查耳酮4,2′,4′,6′-tetrahydroxychalcone1.57 2.95 1.52 2.35 ?? 柚皮素naringenin1.85 2.59 2.30 3.08 ?? 圣草酚eriodictyol3.41 2.61 3.48 2.21 ?? 槲皮素-O-蕓香苷-己糖quercetin-O-rutinoside-hexose??2.51 1.41 4.52 1.30 槲皮素-3-O-葡萄糖苷-7-O-鼠李糖苷quercetin-3-O-glucoside-7-O-rhamnoside?2.01 1.55 ??2.77 1.89 槲皮素-O-阿魏酰戊糖苷quercetin-O-feruloyl-pentoside?2.10 1.48 ??2.78 1.64 槲皮素-3-O-鼠李糖基半乳糖苷quercetin-3-O-rhanosylgalactoside?2.03 1.57 ??2.83 1.91 槲皮素-3-O-葡萄糖苷quercetin-3-O-glucoside??2.81 1.65 2.72 1.41 槲皮素-3-O-洋槐糖苷quercetin-3-O-robinobioside?1.73 1.64 ??2.59 2.17 槲皮素-O-葡萄糖苷quercetin-O-glucoside??2.49 1.55 3.16 1.42 槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷quercetin 3-O-β-D-glucoside?2.70 2.61 ??3.41 2.91 甲基槲皮素葡萄糖-鼠李糖methylquercetin glu-rha??1.57 1.68 3.17 1.74 異金絲桃苷isohyperoside?2.28 2.93 ??2.88 3.23 金絲桃苷hyperin??2.54 2.01 3.19 1.87 橙皮苷hesperidin?1.73 2.83 ??2.70 3.73 橙皮素-5-O-葡萄糖苷hesperetin5-O-glucoside??2.85 1.82 2.78 1.56 橙皮素-O-丙二?；禾擒説esperetin O-malonylhexoside?1.44 1.22 ?2.25 1.24 ?? 繡線菊苷spiraeoside?? 2.64 1.60 2.61 1.39 異鼠李素-3-O-蕓香糖苷isorhamnetin-3-O-rutinoside ?? 1.64 2.13 2.90 2.14 芹菜素-8-C-α-L-阿拉伯糖苷apigenin 8-C-α-L-arabinopyranoside?? 3.76 1.01 ?? 芹菜素-6,8-C-二葡萄糖苷apigenin 6,8-C-diglucoside?1.18 4.24 ???? 矢車菊素-3-O-葡萄糖-7,3′-di-O-(6′′-O-芥子酰葡萄糖苷)cyanidin-3-O-glucoside-7,3′-di-O-[6′′-O-si-pylglucoside]4.74 2.79 2.76 1.24 1.98 1.98 紫杉葉素taxifolin??4.16 1.16 ?? 蘆丁rutin?1.62 4.68 ??2.42 6.08 短葉松素pinobanksin 1.96 2.61 2.31 2.97 ?? 香葉木素-7-O-半乳糖苷diosmetin-7-O-galactoside?1.39 1.15 ?1.89 1.33 ?? 根皮素phloretin3.03 3.19 2.79 2.66 ?? 金圣草黃素-6,8-二-C-葡萄糖苷chrysoeriol-6,8-di-C-glucoside?2.74 2.46 ??1.91 1.18 紫鉚素butin 1.89 2.76 2.37 3.32 ?? 木犀草素 8-C-己糖苷-O-己糖苷luteolin 8-C-hexosyl-O-hexoside?2.11 1.70 ??2.80 1.89 木犀草素-7-O-β-D-蕓香糖苷luteolin-7-O-β-D-rutinoside?1.27 2.29 ???? 木犀草素-6-C-2-葡萄糖醛酸葡萄糖苷luteolin-6-C-2-glucuronylglucoside?2.44 1.21 ???? 木犀草素-7-O-蕓香糖苷luteolin-7-O-rutinoside????4.24 1.29 6-羥基木犀草素 5-葡萄糖苷6-hydroxyluteolin 5-glucoside??2.91 1.65 ?? 牡荊素-2-O-D-吡喃葡萄糖苷vitexin-2-O-D-glucopyranoside?1.34 1.84 ???? 山柰酚-3-O-新橙皮糖苷kaempferol-3-O-neohesperidoside????4.02 2.11 山柰酚-3-O-洋槐糖苷kaempferol-3-O-robinobioside (biorobin)????4.06 1.63 山柰酚-3-O-蕓香糖苷kaempferol-3-O-rutinoside????3.87 1.60 山柰酚-3-O-β-D-(6′′-O-(E)-p-香豆酰)kaempferol-3-O-β-D-(6′′-O-(E)-p-coumaroyl) ????4.09 2.14 6-羥基山柰酚-7-O-葡萄糖苷6-hydroxykaempferol-7-O-glucoside????2.38 3.05 6-羥基山柰酚-3,6-O-二葡萄糖苷6-hydroxykaempferol-3,6-O-diglucoside??8.88 1.10 ?? 6-羥基山柰酚-7,6-O-二葡萄糖苷6-hydroxykaempferol-7,6-O-diglucoside??4.41 3.45 3.85 2.88 6-羥基山柰酚-3,7,6-O-三葡萄糖苷6-hydroxykaempferol-3,7,6-O-triglycoside??4.93 1.85 2.33 1.45

A-林下附生種植相比大棚種植 B-巖壁附生種植相比大棚種植 C-巖壁附生種植林下附生種植

紅顏色字體物質代表鑒定的差異物質；代謝物熱圖表示在不同栽培模式中的積累模式，藍色表示低水平，黃色表示高水平

4 討論

植物代謝組學具有“高維、海量”的特點，結合多元統(tǒng)計分析方法可多維度揭示植物體在響應不同環(huán)境下的代謝產(chǎn)物變化模式，從而解釋其生命本質問題[15]。UPLC-MS/MS廣泛靶向技術結合了非靶向和靶向代謝組學的優(yōu)點，基于代謝組自建、公共數(shù)據(jù)庫和多反應監(jiān)測模型，可定性、定量且高覆蓋地檢測樣品中代謝物的含量[16]。本實驗利用廣泛靶向組學技術，對來自3種栽培模式的12個鐵皮石斛樣品共檢測到202個黃酮類物質，其中大部分以黃酮（76個）、黃酮醇（60個）為主。不同栽培措施明顯改變了鐵皮石斛體內(nèi)黃酮類物質積累模式（圖3-C），林下和巖壁附生種植較大棚種植明顯提升了黃酮或類黃酮代謝通路（ko00944、ko00941）次生代謝產(chǎn)物合成水平（圖4）。比較發(fā)現(xiàn)，柚皮素、圣草酚、紫山葉素等類黃酮合成通路中關鍵前體物質在林下和巖壁栽培組中均明顯上調積累，尤以巖壁附生栽培最高。多項研究表明，紫外線是促使植物合成黃酮類化合物的重要的脅迫環(huán)境之一[13]。例如，UV-A誘導大豆、及等基因的特異表達，且增強了大豆異黃酮、柚皮素等物質在大豆中的積累[17]。因而，分析認為林下活樹附生和巖壁附生等近野生栽培方式因無遮蔭措施，相比大棚栽培，其高UV強度很可能是造成鐵皮石斛高積累黃酮類物質重要因素。深入的原因，仍需通過關聯(lián)基因表達組數(shù)據(jù)予以驗證。

此外，UV、低溫等逆境脅迫也是誘導植物花青素合成重要因子[18-19]。生產(chǎn)上，林下活樹附生和巖壁附生等近野生栽培方式往往促使鐵皮石斛莖皮形成紫色表型，且莖水溶液呈淡至深紫色，而大棚栽培鐵皮石斛水溶液往往呈深綠色。矢車菊素糖苷配體化合物是花青素中的主要成員，是植物細胞內(nèi)呈現(xiàn)紫色的主要色素之一。本研究中，廣泛靶向技術檢測到唯一個花青苷物質—矢車菊素-3--葡萄糖苷-7,3′- di--(6′′--芥子酰葡萄糖苷)（Lmtp003544），該物質在表征三種栽培模式下的代謝物差異性的貢獻率最大（圖2-A，表1）。比較發(fā)現(xiàn)，相比大棚栽培的鐵皮石斛，近野生栽培方式Lmtp003544相對含量至少提升6.8倍，巖壁附生栽培甚至提升了26.6倍，暗示該物質極有可能是紫色表型形成的標志性成分。因而，未來以該指標作為不同來源鐵皮石斛的質量控制方法具有很好的可行性，將為藥材等級的劃分提供重要技術支撐。當前，近野生栽培的鐵皮石斛市場價格是大棚栽培的10～15倍。本研究首次在理論上揭示了近野生栽培能大大提升了類黃酮物質的積累。鑒于該類化合物的重要的醫(yī)藥保健價值，建議生產(chǎn)上大力推廣林下附生與巖壁附生栽培模式，以提高鐵皮石斛的品質和產(chǎn)業(yè)價值。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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UPLC-MS/MS metabonomics technology revealing difference of flavonoids inunder different planting modes

LI Fan1, 2, JIN Chuan-gao3, REN Xian-ying2, 4, FEI Xuan2, ZHAO Qi2, 4, PAN Xiao-jun2, WU Zhi-gang2, JIANG Cheng-xi1, 4

1. Institute of Life Sciences, Wenzhou University, Wenzhou 325035, China 2. School of Pharmacy, Wenzhou Medical University, Wenzhou 325035, China 3. Zhejiang Gaobizi Biological Technology Co., Ltd., Leqing 325615, China 4. Jiuhuashan Buddhist Medicine Research Institute, Chizhou 247100, China

To reveal the difference of flavonoid components inunder different planting modes, in order to provide a basis for the innovation of planting mode.The extensive target metabonomics tool via UPLC-MS/MS workflow was used to detect the flavonoids instem samples produced from three planting modes (including greenhouse, living tree epiphysis planting, and cliff epiphytic planting). Principal component analysis (PCA) and orthogonal partial least squares-discriminant analysis (OPLS-DA) were performed to identify differential metabolites.A total of 202 compounds were identified, mainly including flavonoids (76) and flavonols (60). A novel anthocyanin, cyanidin-3-- glucoside-7,3′-di--(6′′--Si-pylglucoside) was first detected instem samples. OPLS-DA identified 43 differential compounds, among which 23 flavonoids were found between greenhouse planting and living tree epiphysis planting mode, as well as greenhouse planting and cliff epiphytic planting mode. Additionally, there were 27 differential flavonoids between living tree epiphysis planting and cliff epiphytic planting modes. Overall, the difference of samples from different plant modes was well explained by these differential flavonoids.The living tree epiphysis and cliff epiphytic planting modes significantly unregulated the flavonoids biosynthetic pathway relative to greenhouse planting, thus improving the quality of medicinal materials. This result provides a scientific basis for the promotion of novel planting modes withinproduction.

Kimura et Migo.;UPLC-MS/MS; flavonoids; metabonomics; planting mode

R286.2

A

0253 - 2670(2022)04 - 1156 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.04.024

2021-09-06

溫州醫(yī)科大學人才項目（89220027）；浙江省重點實驗室項目（2021E10013）；安徽濟人藥業(yè)有限公司課題（KJHX2009）；合肥市未來藥物開發(fā)有限公司（KJHX2008）；云南大理藥業(yè)股份有限公司課題（KJHX1603）

李 帆，碩士研究生，主要從事中藥生物技術研究。E-mail: 1471750585@qq.com

姜程曦，教授，主要從事中藥生物技術研究。E-mail: jiangchengxi@126.com

吳志剛，副研究員，主要從事藥用植物次生代謝產(chǎn)物研究。E-mail: wuzhigang177@126.com

#共同第一作者：金傳高，工程師，從事鐵皮石斛技術開發(fā)研究。E-mail: 850254737@qq.com

[責任編輯 時圣明]