太子參薄層色譜定性鑒別方法研究*

郭承軍 張寧 遲名鋒 張曉麗

(1.山東省運動康復(fù)研究中心,山東 濟南 250101；2.山東中醫(yī)藥大學(xué),山東 濟南 250355)

太子參為石竹科植物孩兒參Pseudostellariaheterophylla(Miq.) Pax ex Pax et Hoffm.的干燥塊根[1]。除1977年版《中國藥典》外，其它歷版均有收載。太子參性甘，味微苦、平,歸脾、肺經(jīng)。功能益氣健脾、生津潤肺，用于脾虛體倦、食欲不振、病后虛弱、氣陰不足、自汗口渴、肺燥干咳等癥。現(xiàn)代研究表明，太子參主要含有氨基酸、多糖、三萜皂苷、環(huán)肽等活性成分[2-5]及以糠醇為代表的揮發(fā)性成分[6]，具有抗疲勞、抗缺氧、抗應(yīng)激、抗衰老等藥理作用[7-10]。近年來隨著本品在保健品食品領(lǐng)域的應(yīng)用不斷擴大，市場需求量大增，栽培地域自山東、江蘇、安徽至福建、貴州，橫跨多個氣候帶，流通品系也日益增多。但2020年版中國藥典太子參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項下仍無含量測定項，定性鑒別是針對氨基酸類化合物的薄層色譜法，專屬性差，對于復(fù)方中太子參的定性鑒別實際意義不大。如何有效加強太子參質(zhì)量控制，制定科學(xué)的定性定量方法，已成為當(dāng)務(wù)之急。

太子參環(huán)肽類成分是具有科屬特征的一類成分，并具有較高的水溶性，太子參藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)曾于2010年版藥典中增加了太子參環(huán)肽B的含量測定，但于2015年版藥典又匆匆刪掉[11-12]。有學(xué)者[13-14]曾為識別植物環(huán)蛋白的存在，研究了環(huán)蛋白的薄層層析顯色方法。劉訓(xùn)紅等[15]報道了太子參針對環(huán)肽類成分的定性鑒別方法，但其后的研究文獻中再未見相關(guān)報道，劉知遠等[16]針對太子參的皂苷類成分進行了定性鑒別的方法研究，但專屬性較差。廖金英等[17]學(xué)者還探討了應(yīng)用HPLC建立復(fù)方中太子參的定性鑒別方法，但操作復(fù)雜，成本較高。本文在上述研究基礎(chǔ)上，以太子參環(huán)肽類成分為目標(biāo)，從供試品溶液制備、展開劑優(yōu)化、顯色方法、方法耐用性等方面進行了系統(tǒng)研究，建立了專屬性強、耐用性良好的太子參定性鑒別方法，并應(yīng)用建立的方法對不同產(chǎn)地太子參藥材及市售含太子參的常用中成藥進行了太子參定性鑒別，取得了滿意的結(jié)果?，F(xiàn)報告如下。

1儀器與試藥

1.1儀器 ZF-2型三用紫外分析儀(上海市安亭電子儀器有限公司)；JA2603B型萬分之一分析天平(上海精科天美科學(xué)儀器有限公司)；KQ-5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；HHS-2S型電子恒溫不銹鋼水浴鍋(上海虞龍儀器設(shè)備有限公司)；UPR-II-40L型超純水機(四川優(yōu)普超純科技有限公司)；GZX-9240MBE型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實業(yè)有限公司)。

1.2試藥 硅膠G板[規(guī)格：10 cm×20 cm×(0.2～0.25)mm，青島海洋化工廠；批號：20160715]；太子參對照藥材(批號：121004-201709，中國食品藥品檢定研究院)；太子參藥材購自藥材公司(樣品來源見表1)，均經(jīng)筆者鑒定為石竹科植物孩兒參Pseudostellariaheterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.的干燥塊根。復(fù)方太子參顆粒(批號：190109，福建閩東力捷迅藥業(yè)有限公司)、健胃消食片(批號：18070035，江中藥業(yè)股份有限公司)、兒寶顆粒(批號：20190505，江西博達藥業(yè)有限公司)、腎衰寧膠囊(批號：20190614，云南雷允上理想藥業(yè)有限公司)，均由市場上購得。其他所用試劑均為分析純。

表1 太子參藥材來源

2 方法與結(jié)果

2.1薄層色譜條件 點樣量：各5～10 μL；薄層板：硅膠G預(yù)制板；展開劑：三氯甲烷-甲醇(4∶1)；顯色方式：展開、取出、晾干后，懸置于預(yù)加入鹽酸3 mL耐高溫玻璃缸(容積約2 L)內(nèi)，密封，置已加熱至110 ℃的烘箱中，加熱酸解2 h，取出，放冷，揮凈鹽酸，噴以0.3%茚三酮乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰，即得。

2.2供試品溶液制備

2.2.1制備方法優(yōu)選 太子參環(huán)肽類成分在水、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯中均有一定的溶解度，應(yīng)用不同方法分別制備供試品溶液。

供試品溶液Ⅰ:取福建太子參藥材粉末5 g，加甲醇50 mL回流提取1 h，濾過，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

供試品溶液Ⅱ:取福建太子參藥材粉末5 g，加甲醇50 mL回流提取1 h，濾過，蒸干，殘渣加水20 mL使溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次15 mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

供試品溶液Ⅲ:取福建太子參藥材粉末5 g，加甲醇50 mL回流提取1 h，濾過，蒸干，殘渣加水20 mL使溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次15 mL，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的氨試液洗滌2次，每次15 mL，棄去氨洗液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

供試品溶液Ⅳ:取福建太子參藥材粉末5 g，加甲醇50 mL回流提取1 h，濾過，蒸干，殘渣加水20 mL使溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用三氯甲烷振搖提取2次，每次15 mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

取以上各供試液，按上述薄層條件點樣、展開、取出晾干后，酸解，揮干、顯色。結(jié)果以供試品溶液Ⅲ得到的薄層色譜特征斑點最多，背景干擾少，作為優(yōu)選供試品溶液制備方法。色譜圖見圖1。

1.供試品溶液Ⅱ 5 μL； 2.供試品溶液Ⅱ 8 μL;3.供試品溶液Ⅰ 5 μL； 4.供試品溶液Ⅲ 8 μL;5.供試品溶液Ⅲ 5 μL; 6.供試品溶液Ⅳ 8 μL

2.2.2各供試品溶液制備 不同產(chǎn)地太子參供試品溶液：取不同產(chǎn)地太子參藥材，按供試品溶液Ⅲ的制備方法制得各藥材供試液。

含太子參中成藥供試品溶液：取各中成藥樣品約相當(dāng)于太子參原藥材5 g的量，按供試品溶液Ⅲ的制備方法制得各中成藥供試液。

太子參對照藥材溶液：取太子參對照藥材5 g，加甲醇50 mL回流提取1 h，濾過，蒸干，殘渣加水20 mL使溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次15 mL，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的氨試液洗滌2次，每次15 mL，棄去氨洗液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

2.3薄層色譜制備 取以上太子參對照藥材溶液、太子參供試液及中成藥供試液，按上述薄層條件點樣、展開、取出晾干后，酸解，揮干、顯色。

2.4結(jié)果 不同產(chǎn)地的太子參供試品薄層色譜中，在與太子參對照藥材色譜相應(yīng)位置上均顯相同顏色的特征斑點，只是部分特征斑點的大小及顏色深淺與太子參對照藥材色譜及不同產(chǎn)地太子參的色譜之間均存在較大差異。薄層色譜，見圖2。

1.太子參對照藥材 5 μL； 2.福建產(chǎn)太子參 5 μL;3.貴州產(chǎn)太子參5 μL； 4.山東產(chǎn)太子參 5 μL5.江蘇產(chǎn)太子參 5 μL

含太子參常用中成藥供試品薄層色譜中，市售復(fù)方太子參顆粒與健胃消食片供試品色譜在與太子參對照藥材色譜相應(yīng)位置上顯同顏色的特征斑點，且與太子參對照藥材色譜主斑點一一對應(yīng)；兒寶顆粒供試品色譜中，可檢出一個相同顏色的對應(yīng)斑點；腎衰膠囊供試品色譜中，有兩個相對應(yīng)的斑點，但顏色不一致，可能因為其他成分的干擾所致。薄層色譜見圖3。

1.太子參對照藥材 5 μL；2.兒寶顆粒5 μL;3.腎衰寧膠囊5 μL；4. 復(fù)方太子參顆粒5 μL5.健胃消食片 5 μL

3 討論

本文建立了太子參薄層色譜定性鑒別一種新的方法，同時進行了系統(tǒng)的方法學(xué)研究：以復(fù)方太子參顆粒與健胃消食片為對象，制備了各樣品太子參陰性對照溶液，研究了本方法的專屬性，并對供試品溶液的制備方法、薄層條件中展開劑比例、酸解時鹽酸用量、酸解溫度、酸解時間等關(guān)鍵參數(shù)進行了優(yōu)選和耐用性試驗。結(jié)果顯示，本方法的專屬性強，耐用性良好。優(yōu)選的方法參數(shù)為：鹽酸用量1～2 mL·L-1，酸解溫度105 ℃～120 ℃，酸解時間1.5～2.5 h，茚三酮乙醇液濃度0.2%～0.3%，均可得到滿意的薄層色譜。

由不同產(chǎn)地太子參的薄層色譜可以看出，藥材色譜圖與產(chǎn)地、栽培品系具有顯著相關(guān)性，是否可以作為太子參不同產(chǎn)地、栽培品系的鑒別方法尚有待更多的實驗數(shù)據(jù)支持。部分特征斑點大小或缺失的差異，反映出不同生境下各環(huán)肽含量的累積差異[18-21]，但不同產(chǎn)地的太子參藥材色譜中，在與太子參對照藥材色譜相應(yīng)的位置上均顯相同顏色的主斑點，可作為太子參定性鑒別的依據(jù)。

本文涉及的含太子參市售中成藥現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中均收載了太子參的定性鑒別，經(jīng)驗證，本文建立的方法得到的色譜圖與原方法比較:對于復(fù)方太子參顆粒與健胃消食片，本文建立的太子參鑒別方法得到的色譜圖斑點更清晰、專屬性更強；腎衰寧膠囊供試品色譜圖較差，有干擾，能否通過改進供試品溶液的制備方法得到改善，還需要進一步的研究。

綜上所述，本文建立的太子參薄層色譜鑒別方法針對太子參環(huán)肽類特征性成分，得到的色譜圖斑點清晰、分離度高，專屬性強，更由于目標(biāo)成分具有較高的水溶性，在大部分含太子參的中成藥中含量較高，有利于目標(biāo)成分的檢出，為新版藥典中太子參藥材定性鑒別的修訂提供實驗依據(jù)，也為含太子參中成藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供參考。