P16、Ki-67免疫組化染色對ClN分級診斷的影響及其與宮頸HPV感染的相關(guān)性分析

王青飛,徐琴琴（江西省樂平市中醫(yī)醫(yī)院,江西 樂平 333300）

宮頸癌是常見婦科惡性腫瘤，隨著病情發(fā)展會導(dǎo)致女性輸尿管梗阻、尿毒癥、惡病質(zhì)等，累及患者全身器官，具有較高的死亡率[1]。目前，臨床治療該病主要根據(jù)病情分級制定針對性治療方案，因此，診斷宮頸癌級別成為其中最關(guān)鍵步驟之一。宮頸癌主要是由于宮頸感染HPV病毒所致，但該病毒發(fā)展時間緩慢，從感染到致癌需要≥10年時間，因此及早診斷是治療及預(yù)防宮頸癌的關(guān)鍵[2]。目前，臨床診斷宮頸癌以宮頸管活組織檢查為主，但相關(guān)研究表明，P16、Ki-67免疫組化染色能客觀給出細(xì)胞增殖提示，并與宮頸HPV感染存在聯(lián)系，對診斷宮頸癌具有重要意義?；诖耍狙芯恐饕治鯬16、Ki-67免疫組化染色對CIN分級診斷的影響及其與宮頸HPV感染的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 從2017年3月-2018年3月我院婦科門診TCT診斷異常的患者中選取60例作為研究對象，患者均知情本次研究并同意參加。HE診斷結(jié)果顯示，慢性宮頸炎19例、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）Ⅰ級15例、Ⅱ級12例、Ⅲ級10例、宮頸癌4例，根據(jù)診斷結(jié)果將其分組為慢性宮頸炎組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組。

1.2 方法 ①對60例患者宮頸脫落細(xì)胞使用TCT相應(yīng)技術(shù)收集，從中提取DNA并檢測其聚合酶鏈反應(yīng)提升、核酸分子快速導(dǎo)流雜交、脫落細(xì)胞HPV分型，使用HPV分型檢測試劑盒（凱普生物化學(xué)有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字S20060011）檢測；②獲取患者宮頸病理組織，將其石蠟化，脫蠟后置入乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：20160518），將其放入微波爐中進(jìn)行熱修復(fù)，定時為12min；為其滴加過氧化氫（南昌白云藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H36021594）500ml:15g（3%），劑量100μL，并定時10min孵育；滴加劑量100μL一抗（蘭州生物制品研究所，國藥準(zhǔn)字S20023015），P16、Ki-67稀釋度分別為1∶100、1∶50，定時90min孵育；滴加劑量100μL二抗（蘭州生物制品研究所，國藥準(zhǔn)字S20023015），定時20min孵育；滴加DAB染色液，并使用顯微鏡對其顯色進(jìn)行觀察；陽性對照以磷酸鹽緩沖液（PBS）替代一抗進(jìn)行觀察，陽性對照以P16、Ki-67表達(dá)觀察為主。

1.3 觀察指標(biāo) ①診斷宮頸癌陰性、陽性。采用TBS宮頸細(xì)胞學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果顯示正?；蜓装Y表示為陰性，宮頸TCT的檢查結(jié)果無明確意義、非典型鱗狀細(xì)胞和以上級別病變則表示為陽性。②診斷HPV分型。包括低危型、中危型、高危型三大類，其中，高危型有HPV-16、HPV-18、HPV-35、HPV-39、HPV-51等13種亞型。③CIN分級診斷。對病理組織切片，醫(yī)師閱片并作出分級判斷，若胞核、胞漿中均有P16表達(dá)，且胞核有Ki-67表達(dá)，則表示為陽性；采用半定量評分對P16、Ki-67表達(dá)強(qiáng)度及分布進(jìn)行級別判斷，（-）指代P16、Ki-67均不表達(dá)，有胞漿染色或局灶表達(dá)陽性、基底或基底旁表達(dá)，（+）指代染色位于基底、基底旁細(xì)胞，（++）指代染色位于基底下1/3內(nèi)細(xì)胞，（+++）指代染色位于＞基底下1/3而＜2/3內(nèi)細(xì)胞，（++++）指代染色位于＞基底下2/3的全層細(xì)胞。

診斷準(zhǔn)確率=符合例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 使用SPSS20.0分析數(shù)據(jù)，計量資料以（±s）表示、計數(shù)資料以（n,%）表示，分別以t、χ2檢驗，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P16、Ki-67免疫組化結(jié)合半定量評分與HE染色CIN分級的診斷結(jié)果比較 使用P16、Ki-67免疫組化結(jié)合半定量評分對患者病情進(jìn)行診斷，且結(jié)果與HE染色CIN分級的診斷結(jié)果相比：慢性宮頸炎組患者兩項診斷結(jié)果相同，診斷結(jié)果完全相符，CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組診斷結(jié)果相符率為94.59%，兩組差異顯著（P＜0.05）。具體見表1、表2。

表1 P16、Ki-67免疫組化結(jié)合半定量評分

表2 P16、Ki-67免疫組化結(jié)合半定量評分與HE染色診斷結(jié)果相同情況

2.2 HPV感染與P16之間的關(guān)系 結(jié)果顯示，P16顯示陽性與HPV感染呈正比，即其顯示陽性程度越高，HPV感染幾率越高，差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；以HPV-16、HPV-18、HPV-35、HPV-39、HPV-51為例，觀察其陽性與陰性，差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。具體見表3。

表3 HPV感染與P16之間的關(guān)系

3 討論

宮頸癌是較為高發(fā)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重影響女性身體健康，危及患者生命，但若在早期確診，能有效提升預(yù)防與治療效果。目前，臨床診斷主要以疾病組織活檢為主，為宮頸癌確診提供有力證明[3-4]。宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）與宮頸癌確診密切相關(guān)；因此，通過對CIN分級能進(jìn)一步提高診斷準(zhǔn)確性，有效提升早期診斷成功率，且有利于疾病治愈，提高預(yù)防效果[5]。有研究表明，從宮頸癌患者活檢結(jié)果中可知，其宮頸脫落細(xì)胞中所包含的P16、Ki-67的表達(dá)程度與宮頸癌發(fā)展存在很大關(guān)系，因此，P16、Ki-67對判斷CIN分級及診斷宮頸癌具有重要意義[6]。

P16作為一種抑制蛋白，具有廣泛的生物應(yīng)用效果，對癌基因具有相應(yīng)抑制作用。因此，在患者宮頸脫落細(xì)胞中的P16能有效反映CIN分級，同時，檢測P16能明確HPV感染程度，對于臨床確診宮頸癌具有重要指導(dǎo)作用[7-8]。Ki-67是一種存在于全身細(xì)胞中對癌癥具有較高敏感性的表達(dá)因子，能有效提示腫瘤細(xì)胞的增殖活性[9-10]。相關(guān)研究表明，Ki-67在CIN分級的不同分級情況下表達(dá)具有較高差異性，因此，Ki-67具有反映腫瘤發(fā)展情況的功能，對于臨床診斷具有相應(yīng)指導(dǎo)意義。本研究結(jié)果表明P16、Ki-67與CIN分級成正相關(guān)，即CIN分級越高，P16、Ki-67表達(dá)越強(qiáng)烈，且通過P16、Ki-67免疫組化染色檢測宮頸癌，其結(jié)果與HE染色診斷慢性宮頸炎的結(jié)果相符，與CIN分級患者診斷符合率為94.59%，說明P16、Ki-67免疫組化染色對CIN分級診斷具有積極影響作用。HPV包括高危、中高危型、低危型3種類型，高危型HPV分型是宮頸癌的顯著因素之一[11-14]。本研究結(jié)果顯示，HPV分型越高，P16表達(dá)越強(qiáng)烈，說明宮頸癌HPV分型存在相關(guān)性。

綜上所述，CIN分級與P16、Ki-67表達(dá)成正相關(guān)，通過P16、Ki-67表達(dá)診斷宮頸癌具有顯著的臨床治療指導(dǎo)意義，且P16與患者HPV具有相關(guān)性，能判斷患者轉(zhuǎn)歸、預(yù)后效果。