血清25-羥維生素D、CD4+、CD8+水平與肺炎支原體感染后喘息的相關(guān)性

趙 帥，何小剛，買(mǎi) 萍

肺炎支原體(MP)是兒童、老年人呼吸道感染的病原體之一，MP感染后易發(fā)生喘息，臨床常見(jiàn)約有42%的喘息發(fā)作與MP有關(guān)[1]。有研究報(bào)道，血清25-羥維生素D[25-(OH)D]減少時(shí)可能引起不同程度的哮喘、肺炎等疾病[2]。MP通過(guò)在氣道上皮細(xì)胞聚集、繁殖，同時(shí)釋放多種炎癥因子，參與免疫應(yīng)答，氣道上皮因此出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，引起氣道高反應(yīng)性和慢性炎癥，因此導(dǎo)致喘息出現(xiàn)。目前對(duì)感染MP后是否發(fā)生喘息，有25-(OH)D檢測(cè)以及外周血CD4+、CD3+、CD8+水平檢測(cè)可以預(yù)測(cè)[3]。但目前探究25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+水平與MP感染后是否發(fā)生喘息的相關(guān)性分析仍然較少，對(duì)MP感染后發(fā)生喘息的相關(guān)危險(xiǎn)因素也不夠豐富。因此，本研究結(jié)合了MP感染后發(fā)生喘息的相關(guān)危險(xiǎn)因素，探討了25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+水平與MP感染后發(fā)生喘息的相關(guān)性，旨在為臨床后續(xù)防治喘息提供有效參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2019年1月至2021年1月我院確診的MP感染患者120例，其中男59例，女61例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《醫(yī)院獲得性肺炎診斷和治療指南》[4]中的相關(guān)MP感染診斷標(biāo)準(zhǔn)，臨床資料及影像學(xué)資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重肝、腎、心功能障礙者；既往存在喘息發(fā)作史或哮喘史者；合并其他系統(tǒng)原發(fā)性惡性腫瘤；合并其他感染性疾病者。依據(jù)MP感染后是否存在喘息癥狀將其分為對(duì)照組78例和觀察組42例。觀察組男23例，女19例；對(duì)照組男36例，女42例。

1.2 觀察指標(biāo):收集并記錄所有患者性別、年齡、病程等一般資料，以及咳嗽、發(fā)熱、肺部啰音等一般情況?；颊呔谖以捍_診后48 h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。抽取2組患者空腹靜脈血3～5 mL，用酶聯(lián)免疫分析試劑盒[上海谷研，GOY -(elisa)-14606]測(cè)定C反應(yīng)蛋白(CRP)水平，經(jīng)酶聯(lián)免疫分析試劑盒(上海心語(yǔ)生物科技有限公司，CYP24A1)測(cè)定25-(OH)D水平，用Biomatik 酶聯(lián)免疫試劑盒(加拿大，EKC01126)測(cè)定MP免疫球蛋白(IgM)抗體滴度。采集2組患者空腹靜脈血3～5 mL，按照美國(guó)Maestro Z血細(xì)胞分析儀的操作要求，確保儀器每日質(zhì)控在控，標(biāo)本接收后1 h內(nèi)檢測(cè)完畢，檢測(cè)白細(xì)胞(WBC)、中性粒細(xì)胞(N)、嗜酸性粒細(xì)胞(E)。

利用流式細(xì)胞檢測(cè)儀檢測(cè)CD4+、CD3+、CD8+水平。用EDTA抗凝管采集患者空腹靜脈血5 mL，進(jìn)行紅細(xì)胞裂解后，離心(1 000 r/min，5 min)，棄上層清液，加入5 μl熒光標(biāo)記抗體anti-human CD3 FITC、CD4 APC、CD8 PE，保持室溫，孵育20 min并離心(1 000r/mim，5 min)，棄上清液，PBS重懸，取200 μl，利用流式細(xì)胞檢測(cè)儀(上海然哲儀器設(shè)備有限公司)分析T淋巴細(xì)胞亞群。

2 結(jié)果

2.1 2組患者發(fā)生喘息的臨床特征比較：MP感染后喘息與患者的年齡、性別、發(fā)熱、CRP濃度、WBC、N、E數(shù)量無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，與患者的病程、咳嗽、肺部啰音、IgM抗體滴度有相關(guān)性(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 2組患者臨床特征情況比較[n(%)]

2.2Logistic回歸分析影響肺炎支原體感染后喘息的獨(dú)立危險(xiǎn)因素:篩選2.1中影響MP感染后喘息的差異變量進(jìn)行二分類Logistic回歸分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。病程<7d=0，病程≥7d=1；無(wú)咳嗽=0，有咳嗽=1；無(wú)肺部啰音=0，有肺部啰音=1；IgM抗體滴度1∶80=0，IgM抗體滴度1∶160/1∶320=1。Logistic回歸分析顯示，病程≥7 d、IgM抗體滴度1∶160/1∶320為MP感染后發(fā)生喘息的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 MP感染后喘息的Logistic回歸風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型

2.3 2組患者血清25-(OH)D和外周血CD4+、CD3+、CD8+水平比較:觀察組25-(OH)D、CD4+、CD3+明顯高于對(duì)照組，CD8+明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 2組患者25-(OH)D、CD4+、CD8+水平比較

2.4 血清25-羥維生素D、CD3+、CD4+、CD8+水平及三者聯(lián)合預(yù)測(cè)MP感染后發(fā)生喘息的ROC特征:25-(OH)D、CD3+、CD4+、CD8+聯(lián)合預(yù)測(cè)MP患者感染后喘息的AUC為0.875，95%CI為0.811～0.938(P<0.05)，其預(yù)測(cè)效能明顯高于25-(OH)D、CD3+、CD4+、CD8+各項(xiàng)單獨(dú)預(yù)測(cè)，見(jiàn)表4。

表4 25-(OH)D、CD4+、CD8+及聯(lián)合預(yù)測(cè)MP感染后發(fā)生喘息的ROC特征

3 討論

MP感染可損傷多器官、多系統(tǒng)，主要癥狀是出現(xiàn)陣發(fā)性咳嗽，也有表現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)受損，嚴(yán)重者可出現(xiàn)血尿及溶血性貧血等。MP感染是誘使哮喘出現(xiàn)的一大重要因素，有42%的喘息發(fā)作和哮喘與MP有關(guān)[5]。對(duì)MP感染發(fā)生喘息患者的危險(xiǎn)因素進(jìn)行分析有著重要的價(jià)值。本研究結(jié)果顯示，120例MP感染患者中，35.00 %(42/120)存在喘息癥狀，觀察組病程(≥7 d)、咳嗽、肺部啰音率以及肺炎支原體IgM抗體滴度為1∶160，占比均明顯高于對(duì)照組。本研究主要分析了患者M(jìn)P感染后發(fā)生喘息年齡、性別、病程、發(fā)熱、咳嗽、肺部啰音、CRP、WBC、N、E、IgM抗體滴度等因素，發(fā)現(xiàn)MP感染后發(fā)生喘息主要與病程、咳嗽、肺部啰音、IgM抗體滴度有關(guān)，其中，病程>7 d和IgM抗體滴度1∶160/1∶320是感染后發(fā)生喘息的重要危險(xiǎn)因素。既往研究顯示，MP感染后發(fā)生喘息與病程、病情嚴(yán)重程度等因素有關(guān)，這與本研究結(jié)論基本相符[6]。原因可能如下，病程持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，患者機(jī)體免疫功能逐漸降低，宿主的細(xì)胞膜抗體不斷變化，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)持續(xù)發(fā)生，無(wú)法消退，哮喘發(fā)作概率逐漸上升。肺部啰音是指呼吸音以外的附加音，腫脹、痙攣導(dǎo)致支氣管狹窄，呼吸時(shí)當(dāng)空氣經(jīng)過(guò)狹窄的支氣管，便出現(xiàn)肺部啰音。因此，出現(xiàn)肺部啰音患者極大提高了感染MP后出現(xiàn)喘息的概率?？人砸差A(yù)示了氣管、支氣管黏膜受炎癥刺激，咳嗽嚴(yán)重者感染MP后出現(xiàn)喘息的概率同樣大大增加。感染MP發(fā)生喘息的患者外周血CD4+、CD3+明顯升高，CD8+顯著下降后，能產(chǎn)生特異性IgM類抗體，一般在感染后1周出現(xiàn)，4周內(nèi)水平明顯提高，因此IgM抗體陽(yáng)性可作確診MP的重要指標(biāo)。且IgM抗體滴度高，說(shuō)明氣道變應(yīng)性炎癥嚴(yán)重，此時(shí)喘息容易發(fā)生。

本研究結(jié)果顯示，觀察組25-(OH)D明顯高于對(duì)照組，MP發(fā)生喘息后患者外周血CD4+、CD3+明顯升高，CD8+顯著下降。維生素D是一種活性廣泛的激素前體類物質(zhì)，包含維生素D2及維生素D3。其中25-(OH)D 在血清中含量最高，理化性質(zhì)最為穩(wěn)定，因此，25-(OH)D成為檢測(cè)維生素D水平的指標(biāo)之一[7]。目前有研究報(bào)，道維生素D減少時(shí)能夠引起不同程度的哮喘、肺炎等疾病，同時(shí)，維生素D也有調(diào)控炎癥反應(yīng)的作用[8-9]。MP感染后，血液中大量炎性介質(zhì)被釋放，影響內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定狀態(tài)，改變神經(jīng)調(diào)節(jié)功能，因此病情加重，可能出現(xiàn)喘息癥狀。T淋巴細(xì)胞表面抗原CD4+和CD8+相互誘導(dǎo)、制約，對(duì)調(diào)節(jié)免疫平衡和維持穩(wěn)定有重要作用，各個(gè)淋巴細(xì)胞亞群之間相互協(xié)調(diào)、相互制約使機(jī)體的免疫維持在平衡狀態(tài)。MP感染人體后外周血CD4+/CD8+細(xì)胞比值失衡，B細(xì)胞會(huì)大量增殖并產(chǎn)生抗體，抗原抗體反應(yīng)進(jìn)一步引起機(jī)體病理?yè)p傷，肺炎后喘息緩解，血清CD4+、CD3+水平明顯升高，CD8+的水平明顯降低，因此，可以對(duì)肺炎后是否發(fā)生喘息起到一定預(yù)測(cè)作用[10]。本研究結(jié)果與以上報(bào)道一致，說(shuō)明了喘息發(fā)生，患者有效防御反應(yīng)下降，這是MP感染后進(jìn)一步導(dǎo)致廣泛機(jī)體組織損傷的重要原因之一，也說(shuō)明25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+的水平與肺炎后發(fā)生喘息關(guān)系密切。

本研究ROC曲線分析顯示，25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+水平聯(lián)合預(yù)測(cè)MP感染后喘息的AUC明顯高于25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+。既往研究顯示，血清25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+聯(lián)合檢測(cè)，喘息發(fā)生的預(yù)測(cè)價(jià)值明顯升高[11]，提示臨床在有條件的情況下可通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)25-(OH)D、CD4+、CD3+、CD8+水平來(lái)評(píng)估MP感染后發(fā)生喘息的情況，評(píng)估患者的病情發(fā)展和預(yù)后，選擇合適的治療方案，以減少喘息發(fā)生，從而提高患者預(yù)后。