多基源大黃藥材的梯度全信息薄層色譜鑒別法研究

劉 勇，安 靜，董占軍

（河北省人民醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊 050051）

中藥大黃為歷版《中國藥典》收載品種，其基源藥材有藥用大黃、掌葉大黃、唐古特大黃［1］，具有瀉下攻積、清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)、利濕退黃之功效，臨床多用于治療實熱積滯便秘、血熱吐衄、目赤咽腫、癰腫疔瘡、腸癰腹痛、瘀血經(jīng)閉等癥。中藥大黃主含蒽醌類成分，游離型蒽醌類包括大黃素、大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚等成分，結(jié)合型蒽醌類包括上述游離型成分與糖結(jié)合成的各種苷，以及蒽酮類成分和二苯乙烯苷類成分［2］等。進行定性鑒別和定量測定時，多以脂溶性大黃素、大黃酚等苷元為指標性成分，但操作煩瑣、費時［1，3-4］。目前多采用高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜及超高效液相色譜-飛行時間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF-MS）法［5-6］分析3 種基源大黃成分的差異，但費用高昂。本研究中對3 種不同基源大黃藥材進行了梯度全信息薄層色譜鑒別研究?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

KH-800KDE 型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；ZF-2型三用紫外分析儀（上海市安亭電子儀器廠）；硅膠G薄層板、硅膠GF254薄層板（青島海洋化工有限公司，規(guī)格為100 mm × 100 mm，厚度為0.20～0.25 mm）。

1.2 試藥

大黃對照藥材（批號為120984-200301）、掌葉大黃對照藥材（批號為121249-201304）、唐古特大黃對照藥材（批號為120902-200609）、土大黃苷對照品（批號為110794-201909，含量＞98%），均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸、三氯甲烷、濃氨試液、丁酮均為分析純，水為純化水。土大黃藥材（國藥樂仁堂河北匯編業(yè)有限公司，批號為17051401）。

2 方法與結(jié)果

2.1 醇提取溶液中脂溶性成分薄層色譜鑒別

取大黃、掌葉大黃、唐古特大黃對照藥材各0.2 g，精密稱定，分別加甲醇3 mL，超聲（功率250 W，頻率40 kHz，下同）處理15 min，取上清液，即得對照藥材醇提取溶液。精密吸取上述3種溶液各5～6 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸試液（12∶3∶0.1，V/V/V）為展開劑，展開，取出，用熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果3 種對照藥材醇提取溶液色譜中，在相同位置顯示相同的亮黃色熒光斑點（圖1）。

2.2 醇提取溶液中中極性成分薄層色譜鑒別

精密吸取2.1 項下3 種溶液各3～5 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（8∶2∶4∶1，V/V/V/ V）為展開劑，展開，取出，用熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果3種對照藥材醇提取溶液色譜中，在相同位置上顯相同的熒光斑點（圖2 A）。置紫外光燈（254 nm）下檢視，結(jié)果3種對照藥材醇提取溶液色譜中，在相同位置上顯示相同的棕褐色斑點（圖2 B）；噴以10%硫酸乙醇溶液，再以105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果3 種對照藥材醇提取溶液色譜中，在相同位置上顯示相同的熒光斑點（圖2 C）。

2.3 水提取溶液中中極性成分薄層色譜鑒別

取大黃、掌葉大黃、唐古特大黃對照藥材各0.5 g，精密稱定，分別加水40 mL，小火煎煮20 min，以棉花濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL 使溶解，即得對照藥材水提取溶液。吸取上述3種溶液各4～5 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（8∶5∶3∶0.5，V/V/V/ V）為展開劑，展開，取出，用熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果3種對照藥材水提取溶液色譜中，在相同位置上顯示相同的熒光斑點（圖3 A）。噴以5%香草醛硫酸溶液-乙醇溶液（1∶6，V/V），再以105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視，結(jié)果3 種對照藥材水提取溶液色譜中，在相同位置上顯示相同顏色的斑點（圖3 B）。

2.4 醇提取溶液中水溶性成分薄層色譜鑒別

精密吸取2.1 項下3 種溶液各3～5 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶7∶1∶1，V/V/V/ V）為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干。置紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果3 種對照藥材水提取溶液色譜中，在相同位置上顯示相同的熒光斑點（圖4 A）；置紫外光燈（254 nm）下檢視，3 種對照藥材水提取溶液色譜中，在相同位置上顯示相同的棕褐色斑點（圖4 B）。

2.5 醇提取溶液中水溶性成分與土大黃苷薄層色譜鑒別

取土大黃苷對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.3 mg/ mL 的土大黃苷對照品溶液；另取土大黃藥材0.1 g，加甲醇3 mL，超聲處理15 min，取上清液，即得土大黃藥材供試品溶液。精密吸取2.1 項下3 種溶液各2～3 μL、土大黃苷對照品溶液2 μL、土大黃藥材供試品溶液2～3 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（10∶3∶0.2∶0.3，V/V/V/V）為展開劑，展開，取出，用熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果3 種對照藥材醇提取溶液色譜中，在與土大黃苷對照品溶液色譜相應(yīng)位置上，土大黃藥材供試品溶液色譜顯示相同顏色的熒光斑點，3 種基源大黃藥材均無相應(yīng)熒光斑點呈現(xiàn)；同時3種基源大黃醇提取溶液在相應(yīng)位置顯示相同的熒光斑點（圖5）。

3 討論

全信息是指在脂溶性成分的檢測部分，其薄層板的最前沿已無任何信息斑點呈現(xiàn)，而在水溶性成分的檢測部分在薄層板的基線處也不再有明顯的斑點殘痕，說明所有的信息斑點都已包括在梯度薄層展開范圍內(nèi)。梯度是指將高效液相梯度洗脫的內(nèi)涵引申到中藥薄層色譜鑒別領(lǐng)域，采用相似相容的極性梯度展開劑將藥材中的脂溶性、中極性、水溶性成分展開后，將具有檢測信息的大部分有效成分按極性大小，在極少數(shù)的薄層板上及不同的檢視條件下，獲得盡可能全的斑點信息圖譜，由此組成1套從脂溶性到水溶性成分的全信息薄層色譜圖，從而進行藥材與制劑的多信息質(zhì)量評價。

大黃的薄層色譜鑒別一直采用脂溶性苷元為指標［7-9］。本研究中初次提供了中極性和水溶性成分的42 種新鑒別特征點，加上6個脂溶性信息斑點和土大黃苷鑒別中的5個信息斑點，共53個信息斑點。結(jié)果顯示，3 種基源大黃的斑點均完全一致，以其中任一基源的大黃對照藥材為對照，均不影響結(jié)果判斷。同一塊薄層板，在不同檢視條件下呈現(xiàn)的信息斑點不一樣，雖然相互重疊，但在各自檢視條件下互不干擾，做到了斑點互補，提高了檢測信息量，大幅度提升了3種基源大黃的薄層色譜鑒別指標，利于市售藥材、復(fù)方制劑的質(zhì)量檢測與評價。其中土大黃苷的檢測手段，還可識別真?zhèn)未簏S藥材。

與已有相關(guān)指紋圖譜［10-11］比較，本研究中僅需幾塊薄層板，少許提取溶劑和展開劑，即可發(fā)揮指紋圖譜的類似質(zhì)控效果，不但檢測信息量大、結(jié)果直觀，而且方法簡便、快捷、效率高。