復(fù)方桐葉燒傷油中桐葉麻油兩組分同時薄層色譜鑒別*

韓湘云，楊德泉，覃愛桃，徐玉輝

(1.湘西宏成制藥有限責(zé)任公司，湖南 吉首 416000；2.湘西土家族苗族自治州食品藥品檢驗所，湖南 吉首 416000)

復(fù)方桐葉燒傷油載于《國家藥品標準新藥轉(zhuǎn)正標準》第77冊[1]，是由桐葉和麻油組成的土家成藥，具有清熱解毒，消腫止痛，祛腐生肌的功效，用于面積小于29%的燒燙傷.桐葉為玄參科植物白花泡桐(Paulowniafortunei(Seem.) Hemsl.)的干燥葉.桐葉中含有熊果酸、齊墩果酸、3α-羥基-熊果酸、23-羥基-烏蘇酸、2α,3α,23-三羥基-12-烯-28-烏蘇酸、2α,3β,19,23-四羥基-12-烯-28-烏蘇酸、2α,3β,19,23-四羥基-12-烯-28-烏蘇酸、2α-羥基-齊墩果酸、棕櫚酸、落葉酸、木樨草素、洋芹素、β-谷甾醇、胡蘿卜苷、2α,3β,19β-三羥基-烏蘇酸-28-O-β-D-吡喃半乳糖苷、3β,28-二羥基-烏蘇烷等成分[2-6]，其中桐葉中熊果酸含量居白花泡桐植物其他部位之首[7].麻油為脂麻科植物脂麻(SesamumindicumL.)的成熟種子通過壓榨法得到的脂肪油，主要含有芝麻素、芝麻林素、甲氧芝麻素、羥基芝麻素、芝麻明酚、芝麻酚、不飽和脂肪酸、蛋白質(zhì)等成分[7-13].目前復(fù)方桐葉燒傷油標準的鑒別項，采用桐葉作為對照藥材進行薄層色譜鑒別，其供試品溶液的制備需采用樣品加體積分數(shù)0.5%氫氧化鈉溶液皂化，過濾，萃取的方法，而樣品經(jīng)皂化后，過濾時間一般需要6～8 h；此外，桐葉對照藥材溶液的制備，因需要經(jīng)歷回流、堿化、酸化、萃取等過程，故耗時較長.由此可以看出，當(dāng)前供試品溶液和對照藥材溶液的制備方法均存在制備時間較長等不足之處，且當(dāng)前的鑒別方法僅可以鑒別處方中的桐葉組分.為優(yōu)化和完善復(fù)方桐葉燒傷油薄層色譜鑒別方法，進一步提高檢驗工作效率，本研究擬建立同時定性鑒別復(fù)方桐葉燒傷油中桐葉和麻油兩個處方組分的薄層色譜方法，旨在為復(fù)方桐葉燒傷油的質(zhì)量控制提供一定參考.

1 儀器、試藥和樣品

1.1 儀器與試藥

AUW220D電子天平(日本島津公司).GoodSee-10型薄層色譜成像儀(上?？普苌萍加邢薰?.定量毛細管(美國Orunond Scientigic Co).薄層硅膠預(yù)制板分別購于青島海洋化工有限公司(批號：2021年8月9日，10 cm×20 cm)、青島海浪干燥劑有限公司(批號：20210701，10 cm×20 cm)和Merck公司(批號：1.05626.0001，10 cm×20 cm).環(huán)已烷、乙醚、乙酸丁酯、冰醋酸、甲醇試劑的純度均為分析純，水為純化水.

1.2 實驗樣品與對照品

1.2.1 實驗樣品及來源 復(fù)方桐葉燒傷油由湘西宏成制藥股份責(zé)任有限公司提供，批號：20191101；20201003；20210901.

1.2.2 對照品及來源 熊果酸對照品購于中國食品藥品檢定研究院(批號：110742-201823)，芝麻素對照品購于中國食品藥品檢定研究院(批號：110742-201823).桐葉對照藥材由湘西宏成制藥股份有限責(zé)任公司提供.

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液制備

取樣品2 mL，加甲醇20 mL，搖振5 min，4 000 r/min條件下離心5 min，取上清液，水浴揮干甲醇，殘渣加甲醇2 mL溶解，作為供試品溶液.

2.2 對照品溶液制備

2.2.1 對照藥材溶液 取桐葉0.5 g，甲醇20 mL，超聲處理10 min，過濾，濾液水浴蒸干，殘渣加乙醚15 mL溶解，用15 mL水萃取，分取乙醚層，揮干，殘渣用甲醇1 mL溶解，作為對照藥材溶液.

2.2.2 熊果酸對照品溶液 取熊果酸對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg熊果酸的溶液，作為對照品溶液.

2.2.3 芝麻素對照品溶液 取芝麻素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg芝麻素的溶液，作為對照品溶液.

2.3 鑒別方法

參照薄層色譜法(通則0502)試驗，吸取供試品溶液2 μL，桐葉對照藥材溶液、熊果酸對照品溶液、芝麻素對照品溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷—乙醚—乙酸丁酯—冰醋酸(體積比20∶5∶4∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積分數(shù)為10%的硫酸乙醇溶液，110 ℃下烘烤至斑點清晰，于日光下檢視(圖1).

1—桐葉藥材；2—熊果酸對照品；3—芝麻素對照品；4—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20191101)；5—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20201003)；6—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20210901).圖1 Merck公司硅膠G薄層色譜板展開結(jié)果(溫度：18.8 ℃，濕度：46%)Fig. 1 Development Results of Merck Silica Gel G TCL Plate (Temperture:18.8C,Humidity:46%)

結(jié)果顯示，各斑點分離度好、斑點清晰.供試品色譜與對照藥材、對照品色譜在相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點.

2.4 耐用性考察

采用青島海洋化工有限公司和青島海浪干燥劑有限公司生產(chǎn)的薄層硅膠G板，分別在不同的溫度、濕度條件下，按2.3節(jié)的方法進行實驗，實驗結(jié)果與2.3節(jié)結(jié)果一致(圖2、圖3).

1—桐葉藥材；2—熊果酸對照品；3—芝麻素對照品；4—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20191101)；5—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20201003)；6—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20210901).圖2 青島海洋化工有限公司硅膠G薄層色譜板展開結(jié)果(溫度：24.8 ℃，濕度：52%)Fig. 2 Unfolding Results of Silica Gel G TCL Plate of Qingdao Ocean Chemical Engineering Co.,LTD.(Temperture:24.8C,Humidity:52%)

1—桐葉藥材；2—熊果酸對照品；3—芝麻素對照品；4—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20191101)；5—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20201003)；6—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20210901).圖3 青島海浪干燥劑有限公司硅膠G薄層色譜板展開結(jié)果(溫度：28.8 ℃，濕度：69%)Fig. 3 Unfolding Results of Silica Gel G TCL Plate of Qingdao Hailang Drying Agent Co.,LTD.(Temperture:28.8C,Humidity:69%)

圖2、圖3顯示，在不同品牌硅膠G薄層色譜板、不同溫度、不同濕度條件下，不同溶液的薄層色譜結(jié)果一致，表明本方法耐用性良好.

3 討論

復(fù)方桐葉燒傷油為油劑，本研究在制備其供試品溶液時，考慮熊果酸和芝麻素均溶于甲醇，故采用甲醇為提取溶劑，經(jīng)離心處理，分離油脂等成分，取甲醇溶液制備為供試品溶液.本研究在制備桐葉對照藥材溶液時，采用桐葉粉末加甲醇超聲處理，過濾，濾液蒸干，殘渣以乙醚溶解.因熊果酸和芝麻素均幾乎不溶于水，故本研究用水萃取除去其中雜質(zhì)，取乙醚層，揮干，殘渣用甲醇溶解，作為對照藥材溶液.方法簡便，實驗結(jié)果顯示色譜中主斑點明顯，雜質(zhì)斑點少.

本研究曾試用過4種展開劑：①環(huán)已烷—三氯甲烷—乙酸乙酯—冰醋酸(體積比20∶5∶8∶0.5)；②環(huán)已烷—氯仿—乙酸乙酯—石油醚(60～90 ℃)(體積比20∶5∶8∶1)；③環(huán)已烷—乙醚—乙酸乙酯(體積比20∶5∶2)；④環(huán)已烷—乙醚—乙酸丁酯(體積比20∶5∶2).結(jié)果發(fā)現(xiàn)，①，②，③供試品溶液色譜中芝麻素斑點與相鄰斑點未達到完全分離，④熊果酸Rf低于0.1.最終本研究確定采用環(huán)已烷—乙醚—乙酸丁酯—冰醋酸(體積比20∶5∶4∶0.1)為展開劑，結(jié)果顯示，采用此展開劑后，供試品溶液色譜中各斑點分離度好、斑點清晰，且熊果酸Rf為0.45，芝麻素Rf為0.23.

4 結(jié)論

本研究建立的復(fù)方桐葉燒傷油薄層色譜鑒別方法操作簡便、穩(wěn)定性良好，方法可行.供試品溶液的薄層色譜中，熊果酸、芝麻素與其他成分完全分離，能夠同時鑒別處方中桐葉和麻油兩個組方成分，為控制復(fù)方桐葉燒傷油質(zhì)量提供了可靠的方法.