免疫組化P16和ki67雙表達(dá)在宮頸癌前病變及宮頸癌的臨床分析

陳鐲，耿晨，侍孝遠(yuǎn)

宿遷市第一人民醫(yī)院婦科，江蘇宿遷 223800

宮頸癌屬于一種婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤疾病，具有較高的發(fā)病率，且發(fā)病群體正呈年輕化趨勢(shì)發(fā)展[1]。一旦患病，會(huì)使患者生命健康受到嚴(yán)重威脅。由于宮頸癌的發(fā)展速度比較緩慢，且發(fā)病較為隱匿，因此，在患病初期往往不會(huì)有較多顯著的臨床癥狀，這也對(duì)臨床治療工作帶來(lái)較大影響[2]。針對(duì)這一現(xiàn)狀，更應(yīng)當(dāng)對(duì)適齡女性實(shí)施及時(shí)地篩查及防治，使之生命安全能夠得到良好保障[3]。相關(guān)報(bào)道顯示，在開(kāi)展宮頸癌早期診斷時(shí)，通過(guò)監(jiān)測(cè)特異性生物標(biāo)志物的方式可以具有較好的臨床使用價(jià)值[4]。其中應(yīng)用最多的生物標(biāo)志物為P16，P16是在人染色體9p21中發(fā)現(xiàn)的第1個(gè)直接參與細(xì)胞周期調(diào)控的抑癌基因，無(wú)論是在宮頸癌前病變中還是在宮頸癌中都會(huì)具有高表達(dá)[5]。ki67能反映腫瘤細(xì)胞增值指數(shù)，其結(jié)果越高，即可表明腫瘤細(xì)胞增值速度更快[6]。為深入探討二者雙表達(dá)在臨床中的應(yīng)用價(jià)值，本文選取2016年1月—2021年12月宿遷市第一人民醫(yī)院收治的70例宮頸癌前病變患者和50例宮頸癌患者進(jìn)行研究。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院收治的70例宮頸癌前病變患者作為對(duì)照組，另選擇同期收治的50例宮頸癌患者作為觀察組。對(duì)照組年齡 21～64歲，平均（53.41±2.46）歲；病程3～15個(gè)月，平均（8.44±1.65）個(gè)月；根據(jù)宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）分級(jí)，包括34例Ⅰ級(jí)、22例Ⅱ級(jí)、14例Ⅲ級(jí)。觀察組年齡31～71歲，平均（53.38±2.52）歲；病程3～16個(gè)月，平均（8.57±1.58）個(gè)月；根據(jù)病理類型劃分，包括42例鱗癌、8例子宮頸腺癌。兩組一般資料對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究已經(jīng)過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者未接受過(guò)任何臨床治療（如化療、放療、手術(shù)、藥物等）；患者經(jīng)臨床病理學(xué)診斷確診；患者一般資料記錄完整；患者知情該次研究，并簽訂知情告知書(shū)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：患者合并嚴(yán)重感染性疾?。换颊吆喜?yán)重肝腎疾病或心腦血管系統(tǒng)疾?。换颊吆喜⑵渌麗盒阅[瘤疾病。

1.3 方法

獲取所有患者的活檢病理標(biāo)本后，均以相同的方式對(duì)其實(shí)施石蠟切片處理，并在脫蠟1 d后實(shí)施免疫組織化學(xué)染色診斷。將標(biāo)本完成水化處理后，將其浸泡在過(guò)氧化氫（濃度3%）中，以常溫環(huán)境浸泡10 min，沖洗3 min，將純血清進(jìn)行封閉處理，時(shí)間為12 h。一抗處理樣本包括P16多克隆抗體和兔抗人ki67，在恒溫1℃的環(huán)境下孵育過(guò)夜。在第2天利用磷酸鹽緩沖液進(jìn)行充分沖洗，然后將P16多克隆抗體和兔抗人ki67滴加其中，在恒溫37℃的環(huán)境下孵育1 h。再次通過(guò)磷酸鹽緩沖液充分沖洗后，加入DAB顯色劑，然后放置在顯微鏡下加以觀察。將一抗利用磷酸鹽緩沖液代替，并作為陰性對(duì)照。所有操作均按照標(biāo)準(zhǔn)流程以及說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格執(zhí)行。

1.4 觀察指標(biāo)

以手術(shù)病理診斷為標(biāo)準(zhǔn)針對(duì)兩組P16及ki67表達(dá)量展開(kāi)對(duì)比分析，其中P16的判定標(biāo)準(zhǔn)如下：以無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞判定為（-），計(jì)0分；以陽(yáng)性細(xì)胞分布＜1/4判定為（+），計(jì)1分；以陽(yáng)性細(xì)胞分布≥1/4且＜1/2判定為（++），計(jì)2分；以陽(yáng)性細(xì)胞分布≥1/2且＜3/4判定為（+++），計(jì)3分；以陽(yáng)性細(xì)胞分布≥3/4判定為（++++），計(jì)4分。ki67的判定標(biāo)準(zhǔn)主要包括陰性（即無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)0分）、低表達(dá)（即陽(yáng)性細(xì)胞分布＜1/3，計(jì)1分）、中表達(dá)（即陽(yáng)性細(xì)胞分布≥1/3且≤2/3，計(jì)2分）、高表達(dá)（即陽(yáng)性細(xì)胞分布＞2/3，計(jì)3分）。另外針對(duì)P16及ki67單一檢測(cè)、聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果以及診斷效能展開(kāi)分析與研究。其中診斷效能包括敏感度[真陽(yáng)性例數(shù)/（真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100.00%]、特異度[真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù)）×100.00%]、準(zhǔn)確性[（真陽(yáng)性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/總例數(shù)×100.00%]。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（）表示，組間差異比較進(jìn)行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，組間差異比較進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組P16及ki67陽(yáng)性表達(dá)比較

觀察組P16陽(yáng)性表達(dá)、ki67陽(yáng)性表達(dá)均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組P16及ki67陽(yáng)性表達(dá)率對(duì)比[()，分]

表1 兩組P16及ki67陽(yáng)性表達(dá)率對(duì)比[()，分]

組別觀察組（n=50）對(duì)照組（n=70）t值P值P16陽(yáng)性表達(dá)3.03±0.24 0.52±0.12 75.379＜0.001 ki67陽(yáng)性表達(dá)2.11±0.32 0.44±0.10 41.008＜0.001

2.2 P16、ki67單一檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果分析

聯(lián)合檢測(cè)真陽(yáng)性檢出率為96.00%（48/50），明顯高于P16單一檢測(cè)、ki67單一檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.305、7.161，P=0.003、0.007）。見(jiàn)表2。

表2 P16及ki67單一檢測(cè)、聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果分析

2.3 P16、ki67單一檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)診斷效能比較

聯(lián)合檢測(cè)敏感度、特異度、準(zhǔn)確性統(tǒng)計(jì)結(jié)果均明顯高于P16單一檢測(cè)、ki67單一檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 P16、ki67單一檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)診斷效能對(duì)比（%）

3 討論

導(dǎo)致宮頸癌產(chǎn)生的主要原因?yàn)槿巳轭^瘤狀病毒（human papillomavirus, HPV）感染，一旦病毒入侵到患者機(jī)體后，會(huì)使其血清細(xì)胞因子產(chǎn)生改變[7]。在對(duì)宮頸癌患者實(shí)施臨床診斷時(shí)，通常會(huì)采取陰道鏡、宮頸細(xì)胞涂片、液基細(xì)胞學(xué)等方式完成[8]。由于宮頸癌病程進(jìn)展速度相對(duì)較慢，因而其在宮頸癌前病變向?qū)m頸癌發(fā)展的過(guò)程中，其腫瘤細(xì)胞往往會(huì)分泌出一些活性物質(zhì)（即腫瘤標(biāo)志物）[9]。該物質(zhì)往往會(huì)在癌變宿主、癌變組織體液中存在，若為健康人群，其表達(dá)則相對(duì)較低；而在早期影像學(xué)無(wú)法檢出腫瘤時(shí)，臨床便可將其檢出，因此對(duì)于提升臨床預(yù)防及診治效果意義重大[10]。

現(xiàn)階段P16和ki67是臨床中最為常見(jiàn)的宮頸癌診斷腫瘤標(biāo)志物[11]。前者屬于一種新型的抗癌基因，若其表達(dá)異常，則說(shuō)明患者機(jī)體細(xì)胞存在惡性增殖的情況，進(jìn)而誘發(fā)癌癥的產(chǎn)生[12]。在對(duì)該指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)后，可以有效判斷患者腫瘤易感性，因此臨床意義重大[13]。ki67屬于DNA指數(shù)增值指標(biāo)，可以明確反映細(xì)胞增值活躍性，并與宮頸癌細(xì)胞分化、轉(zhuǎn)移等關(guān)系密切[14]。無(wú)論是宮頸癌前病變還是宮頸癌，P16、ki67均呈現(xiàn)出高表達(dá)的狀態(tài)，特別是在宮頸癌患者機(jī)體中會(huì)有更為顯著的異常升高趨勢(shì)[15]。在本研究中，對(duì)照組患者P16陽(yáng)性表達(dá)、ki67陽(yáng)性表達(dá)均顯著低于觀察組患者（P＜0.05）。該結(jié)果與桂星星[15]在其報(bào)道中提出對(duì)照組ki67陽(yáng)性表達(dá)、P16陽(yáng)性表達(dá)均低于試驗(yàn)組（P＜0.05）的結(jié)果一致。由此可以看出，宮頸癌患者宮頸上皮細(xì)胞正常的細(xì)胞周期會(huì)遭到破壞，進(jìn)而導(dǎo)致P16異常表達(dá)，最終使得細(xì)胞產(chǎn)生癌變[16]。同時(shí)也進(jìn)一步說(shuō)明ki67能夠具體表現(xiàn)出宮頸癌細(xì)胞增值的活性程度，其同宮頸病變程度之間互為正相關(guān)[17]。另外，在本研究中，P16單一檢測(cè)以及ki67單一檢測(cè)的陽(yáng)性檢出率、敏感度、特異度、準(zhǔn)確性均顯著低于聯(lián)合檢測(cè)（P＜0.05），根據(jù)這一結(jié)果也可以說(shuō)明使用免疫組化P16和ki67雙表達(dá)的方式能夠反饋宮頸癌的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程，聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于促進(jìn)疾病檢出率地提升具有更多積極意義[18]。

綜上所述，在對(duì)宮頸癌前病變患者以及宮頸癌患者實(shí)施臨床診斷時(shí)，使用免疫組化P16和ki67雙表達(dá)的方式具有較高的臨床價(jià)值，即聯(lián)合使用敏感度、準(zhǔn)確性、特異性更高，適合進(jìn)一步深入探討與使用。