瓜蔞皮提取物通過調(diào)控PI3K/AKT信號(hào)通路介導(dǎo)的自噬而減輕肥胖小鼠慢性炎癥*

趙艷利， 毛 雨， 康志強(qiáng)， 何 麗， 張曉珂

（鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，河南 鄭州 450000）

肥胖是由于攝入過多能量或機(jī)體代謝異常而導(dǎo)致體內(nèi)脂肪堆積過多的狀態(tài)，是引起高脂血癥、糖尿病和動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的重要原因，其發(fā)病機(jī)制與脂肪組織的慢性炎癥密切相關(guān)［1］。細(xì)胞自噬是一種分解機(jī)制，可主動(dòng)降解細(xì)胞內(nèi)一些物質(zhì)，對細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行循環(huán)更新和維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)具有重要作用。肥胖的發(fā)生可以使脂肪組織的自噬失調(diào)，而調(diào)節(jié)脂肪組織自噬可以有效抑制肥胖及其相關(guān)疾病的發(fā)展，且自噬對肥胖所致炎癥反應(yīng)有著重要的調(diào)控作用［2-4］。因此自噬在減輕肥胖者的脂肪組織炎癥方面發(fā)揮著重要作用。

中藥瓜蔞皮為葫蘆科植物栝樓或雙邊栝樓等的果皮，富含多糖、黃酮和氨基酸等多種化學(xué)成分［5］。藥理研究表明，瓜蔞皮具有抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)脂代謝、抗動(dòng)脈粥樣硬化及提升免疫力等作用［6-7］。瓜蔞皮注射液可有效減輕冠心病心力衰竭患者的癥狀，并顯著降低不穩(wěn)定性心絞痛患者血清炎癥因子水平［8-9］。體外研究顯示，瓜蔞皮提取物（Fructus Tricho?santhispeel extract，F(xiàn)TPE）可通過激活磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/AKT）信號(hào)通路抑制缺氧/復(fù)氧損傷誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡［10］。PI3K/AKT 信號(hào)通路促進(jìn)脂質(zhì)生物合成并抑制脂肪分解，參與肥胖及其相關(guān)代謝疾病的病理生理學(xué)［11-12］。肥胖與脂肪組織中PI3K活性降低有關(guān)，激活PI3K可通過增加AKT的磷酸化來促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化［13-14］。且PI3K/AKT 通路可通過調(diào)控自噬的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）參與包括腫瘤在內(nèi)的一系列疾病的發(fā)生和進(jìn)展［15］。然而，F(xiàn)TPE 是否能通過調(diào)控PI3K/AKT 介導(dǎo)的自噬減輕肥胖所致慢性炎癥尚未見報(bào)道。因此，本研究通過高脂飼料建立肥胖小鼠模型，探討FTPE 對肥胖小鼠脂肪組織慢性炎癥的影響及作用機(jī)制。

材料和方法

1 材料

1.1 動(dòng)物SPF 級8 周齡雄性C57BL/6J 小鼠60 只，體質(zhì)量（20±2）g，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司［許可證號(hào)SCXK（湘）2019-0004］，飼養(yǎng)在35%～40% 相對濕度、20～23 ℃及12 h 的明暗循環(huán)中，可隨意獲取水和食物。該研究遵守《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的護(hù)理和使用指南》的指導(dǎo)原則，并獲得了本院動(dòng)物倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按照3R原則給予人道關(guān)懷。

1.2 試劑瓜蔞皮注射液（成分為FTPE，上海上藥第一生化藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字Z20027540，規(guī)格：每支4 mL）；LY294002（PI3K 抑制劑）購自MedChem?Express；總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high-densi?ty lipoprotein cholesterol，HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-6、單核細(xì)胞趨化蛋白1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）和IL-10 ELISA 試劑盒均購自上海酶聯(lián)生物有限公司；HE 染色試劑、RIPA 裂解液和BCA 試劑盒購自碧云天生物科技公司；兔抗小鼠PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR 和pmTOR 均購自Thermo Fisher Scientific；兔抗小鼠微管相關(guān)蛋白1 輕鏈3（microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3）-I、LC3-II、beclin-1、P62 和GAPDH抗體及山羊抗兔IgG H&L（HRP）均購自Abcam。

1.3 儀器iMark680 多功能酶標(biāo)儀和ChemiDoc XRS+凝膠成像儀（Bio-Rad）；HT7700 透射電子顯微鏡（HITACHI）。

2 方法

2.1 肥胖模型的建立與分組適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d 后，隨機(jī)選取10 只小鼠為對照（control）組，給予普通飼料喂養(yǎng)，其余小鼠采用高脂飼料（含60% 的脂肪）連續(xù)喂養(yǎng)12周，建立肥胖模型［16］。實(shí)驗(yàn)期間，每4周稱量一次小鼠體質(zhì)量。12 周末，給予高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠體質(zhì)量比普通飼料喂養(yǎng)的對照組小鼠體質(zhì)量高20%，即肥胖度大于20%，視為肥胖模型構(gòu)建成功［肥胖度（%）=（實(shí)驗(yàn)組實(shí)際體質(zhì)量?對照組平均體質(zhì)量）/對照組平均體質(zhì)量×100%］。

取造模成功的50 只小鼠，分為模型（model）組、PI3K 抑制劑（LY294002，7.5 mg/kg［17］）組、低劑量（2 mL/kg）FTPE（low-dose FTPE，F(xiàn)TPE-L）組、高劑量（4 mL/kg）FTPE（high-dose FTPE，F(xiàn)TPE-H）組［18］和FTPE+PI3K 抑制劑（4 mL/kg FTPE+7.5 mg/kg LY294002）組，每組10只。PI3K抑制劑組尾靜脈注射PI3K抑制劑LY294002（溶于二甲基亞砜中），F(xiàn)TPE 各劑量組腹腔注射相應(yīng)劑量的FTPE，F(xiàn)TPE+PI3K 抑制劑組在腹腔注射FTPE 的同時(shí)尾靜脈注射LY294002，對照組和模型組給予等體積生理鹽水注射，每天1 次，連續(xù)給藥8周。

2.2 小鼠一般體征給藥結(jié)束后，測定各組小鼠體質(zhì)量和體長（鼻尖到肛門的長度），計(jì)算Lee 指數(shù)（衡量成年小鼠肥胖的有效指標(biāo)），取小鼠腹股溝皮下脂肪組織并稱重，計(jì)算腹股溝皮下脂肪質(zhì)量百分比。Lee 指數(shù)=×1 000/體長（cm）。腹股溝皮下脂肪質(zhì)量百分比（%）=腹股溝皮下脂肪組織濕重/體質(zhì)量×100%。

2.3 小鼠血脂水平給藥結(jié)束后，小鼠摘眼球取血，靜置后以1 610×g離心15 min，分離血清，使用生化試劑盒檢測血清TG、TC、LDL-C和HDL-C水平。

2.4 小鼠脂肪組織炎癥因子水平取各組小鼠的部分脂肪組織，加預(yù)冷的生理鹽水研磨，制備10% 的組織勻漿，離心取上清液。按照ELISA 試劑盒說明書檢測勻漿中TNF-α、IL-6、MCP-1和IL-10水平。

2.5 HE 染色觀察小鼠脂肪組織病理學(xué)變化取各組小鼠的部分脂肪組織，以4% 多聚甲醛固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋并切成4 μm 厚的切片，常規(guī)HE 染色，顯微鏡下觀察各組小鼠脂肪組織病理學(xué)改變。

2.6 透射電子顯微鏡觀察脂肪細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與自噬狀態(tài) 取各組小鼠的部分脂肪組織，剪碎成約1 mm×1 mm×1 mm 的小塊，戊二醛溶液固定，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次后，在4 ℃下用1% 鋨酸固定2 h。梯度丙酮脫水，浸透包埋，行超薄切片（約80～100 nm厚），乙酸鈾酰和檸檬酸鉛染色，電鏡下觀察脂肪細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與自噬狀態(tài)變化并拍照。

2.7 Western blot檢測脂肪組織PI3K/AKT 通路和自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)取200～300 mg 脂肪組織，RIPA裂解液提取組織中的總蛋白，4 ℃、12 000×g離心5 min，取上清，使用BCA法測定蛋白質(zhì)濃度，變性后在每個(gè)孔上加35 μg蛋白質(zhì)樣品，進(jìn)行SDS-PAGE，然后轉(zhuǎn)移到PVDF膜上并用5% 脫脂牛奶密封1 h；將膜與Ⅰ抗（PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、LC3-I、LC3-II、P62、beclin-1 和GAPDH，均以1∶1 000的比例稀釋）在4 ℃下孵育過夜。次日洗去Ⅰ抗，加Ⅱ抗（1∶5 000，山羊抗兔IgG）在恒溫振蕩器上于室溫下孵育2 h。然后用TBST 洗滌3 次，每次10 min，超靈敏ECL 化學(xué)發(fā)光試劑顯色，在ChemiDoc XRS+凝膠成像儀上成像，通過軟件讀取和分析成像圖像的灰度值，并通過與內(nèi)參的灰度比，計(jì)算膜上目的蛋白質(zhì)相對表達(dá)水平。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用GraphPad Prism 8.0 和Image-Pro Plus 6.0軟件對實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），組間有差異進(jìn)一步采用SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 各組小鼠一般體征變化

與對照組相比，模型組小鼠體質(zhì)量、Lee 指數(shù)和皮下脂肪質(zhì)量百分比顯著升高（P<0.05）；與模型組相比，F(xiàn)TPE-L 和FTPE-H 組小鼠體質(zhì)量、Lee 指數(shù)和皮下脂肪質(zhì)量百分比顯著降低（P<0.05），PI3K 抑制劑組小鼠上述指標(biāo)顯著升高（P<0.05）；與PI3K 抑制劑組相比，F(xiàn)TPE+PI3K 抑制劑組小鼠上述指標(biāo)顯著降低（P<0.05）；與FTPE-H 組相比，F(xiàn)TPE+PI3K 抑制劑組小鼠上述指標(biāo)顯著升高（P<0.05），見表1。

表1 各組小鼠一般體征變化Table 1.Changes in general signs of mice in each group（Mean±SD. n=10）

2 各組小鼠血脂水平的比較

與對照組相比，模型組小鼠血清中TG、TC 和LDL-C 水平顯著升高，HDL-C 水平顯著降低（P<0.05）；與模型組相比，F(xiàn)TPE-L 和FTPE-H 組小鼠血清中TG、TC 和LDL-C 水平顯著降低，HDL-C 水平顯著升高（P<0.05），PI3K 抑制劑組小鼠血清中TG、TC和LDL-C 水平顯著升高，HDL-C 水平顯著降低（P<0.05）；與PI3K 抑制劑組相比，F(xiàn)TPE+PI3K 抑制劑組小鼠血清中TG、TC 和LDL-C 水平顯著降低，HDL-C水平顯著升高（P<0.05）；與FTPE-H 組相比，F(xiàn)TPE+PI3K 抑制劑組小鼠血清中TG、TC 和LDL-C 水平顯著升高，HDL-C水平顯著降低（P<0.05），見表2。

表2 各組小鼠血脂水平Table 2.Blood lipid levels of mice in each group（mmol/L.Mean±SD. n=10）

3 各組小鼠脂肪組織炎癥因子水平的比較

與對照組相比，模型組小鼠脂肪組織中TNF-α、IL-6 和MCP-1 水平顯著升高，IL-10 水平顯著降低（P<0.05）；與模型組相比，F(xiàn)TPE-L 和FTPE-H 組小鼠脂肪組織中TNF-α、IL-6 和MCP-1 水平顯著降低，IL-10 水平顯著升高（P<0.05），PI3K 抑制劑組小鼠脂肪組織中TNF-α、IL-6和MCP-1水平顯著升高，IL-10水平顯著降低（P<0.05）；與PI3K 抑制劑組相比，F(xiàn)TPE+PI3K抑制劑組小鼠脂肪組織中TNF-α、IL-6和MCP-1 水平顯著降低，IL-10 水平顯著升高（P<0.05）；與FTPE-H 組相比，F(xiàn)TPE+PI3K 抑制劑組小鼠脂肪組織中TNF-α、IL-6 和MCP-1 水平顯著升高，IL-10水平顯著降低（P<0.05），見表3。

4 各組小鼠脂肪組織病理學(xué)變化

對照組小鼠脂肪組織中脂肪細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，大小正常；與對照組相比，模型組小鼠脂肪組織中脂肪細(xì)胞變大；與模型組相比，F(xiàn)TPE-L 和FTPE-H 組小鼠脂肪細(xì)胞較小，而PI3K 抑制劑組小鼠脂肪細(xì)胞進(jìn)一步增大；FTPE+PI3K 抑制劑組小鼠脂肪細(xì)胞較PI3K抑制劑組呈變小趨勢；與FTPE-H 組相比，F(xiàn)TPE+PI3K抑制劑組小鼠脂肪細(xì)胞變大，見圖1。

Figure 1.HE staining of the adipose tissues of mice in each group.A：control group，adipocytes had complete structure and normal size；B：model group，the size of adipocytes became larger；C：PI3K inhibitor group，the size of adipocytes further in?creased；D：FTPE-L group，the size of adipocytes was small；E：FTPE-H group，the size of adipocytes was small；F：FTPE+PI3K inhibitor group，the size of adipocytes was larger.The scale bar=100 μm.圖1 各組小鼠脂肪組織HE染色

5 各組小鼠脂肪細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與自噬狀態(tài)變化

對照組小鼠脂肪細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞器豐富；模型組小鼠脂肪細(xì)胞胞漿內(nèi)有空泡，線粒體嵴破壞嚴(yán)重，出現(xiàn)解離現(xiàn)象，自噬小體較對照組明顯增多；與模型組相比，F(xiàn)TPE-L 和FTPE-H 組小鼠脂肪細(xì)胞可見部分胞漿空泡，自噬小體數(shù)量減少，部分線粒體嵴破壞，而PI3K 抑制劑組小鼠脂肪細(xì)胞中自噬小體數(shù)量增多，線粒體嵴破壞加重；FTPE+PI3K 抑制劑組小鼠脂肪細(xì)胞自噬小體數(shù)量較PI3K 抑制劑組減少；與FTPE-H 組相比，F(xiàn)TPE+PI3K 抑制劑組小鼠脂肪細(xì)胞胞漿空泡數(shù)量和自噬小體數(shù)量均呈增加趨勢，見圖2、3。

6 各組小鼠脂肪組織自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)比較

與對照組相比，模型組小鼠脂肪組織中LC3-II/LC3-I比值和beclin-1表達(dá)水平顯著升高，P62表達(dá)水平顯著降低（P<0.05）；與模型組相比，F(xiàn)TPE-L 和FTPE-H 組小鼠脂肪組織中LC3-II/LC3-I 比值和be?clin-1 表達(dá)水平顯著降低，P62 表達(dá)水平顯著升高（P<0.05），PI3K 抑制劑組小鼠脂肪組織中LC3-II/LC3-I比值和beclin-1表達(dá)水平顯著升高，P62表達(dá)水平顯著降低（P<0.05）；與PI3K 抑制劑組相比，F(xiàn)TPE+PI3K 抑制劑組小鼠脂肪組織中LC3-II/LC3-I比值和beclin-1 表達(dá)水平顯著降低，P62 表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）；與FTPE-H 組相比，F(xiàn)TPE+PI3K 抑制劑組小鼠脂肪組織中LC3-II/LC3-I 比值和beclin-1表達(dá)水平顯著升高，P62 表達(dá)水平顯著降低（P<0.05），見圖4。

7 各組小鼠脂肪組織PI3K/AKT 通路相關(guān)蛋白表達(dá)的比較

與對照組相比，模型組小鼠脂肪組織中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 和p-mTOR/mTOR 比值顯著降低（P<0.05）；與模型組相比，F(xiàn)TPE-L 和FTPE-H 組小鼠脂肪組織中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 和p-mTOR/mTOR 比值顯著升高（P<0.05），PI3K 抑制劑組小鼠脂肪組織中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 和p-mTOR/mTOR 比值顯著降低（P<0.05）；與PI3K 抑制劑組相比，F(xiàn)TPE+PI3K 抑制劑組小鼠脂肪組織中p-PI3K/PI3K 和p-AKT/AKT 和p-mTOR/mTOR 比值顯 著升高（P<0.05）；與FTPE-H 組相比，F(xiàn)TPE+PI3K 抑制劑組小鼠脂肪組織中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 和pmTOR/mTOR比值顯著降低（P<0.05），見圖5。

討 論

Figure 2.Ultrastructure of the adipocytes of mice in each group.A：control group，adipocytes had complete structure and abundant organelles；B：model group，autophagosomes increased significantly compared with control group；C：PI3K inhibitor group，the number of autophagosomes increased and the destruction of mitochondrial cristae was observed；D：FTPE-L group，the number of autophagosomes decreased and some mitochondrial cristae were destroyed；E：FTPE-H group，the number of autophagosomes decreased and some mitochondrial cristae were destroyed；F：FTPE+PI3K inhibitor group，the number of autophagosomes increased.The scale bar=0.1 μm.圖2 各組小鼠脂肪細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)

Figure 3.Number of autophagosomes in the adipocytes of mice in each group.Mean±SD. n=10.*P<0.05 vs control group；#P<0.05 vs model group；△P<0.05 vs PI3K in?hibitor group；▲P<0.05 vs FTPE-H group.圖3 各組小鼠脂肪細(xì)胞自噬小體的數(shù)量

肥胖被認(rèn)為是全球公共衛(wèi)生的主要問題之一，自噬在人體許多疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。近年來研究顯示，自噬與肥胖、炎癥三者之間可以相互影響，參與肥胖及其并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展［19］。但是，目前關(guān)于肥胖狀態(tài)下脂肪細(xì)胞自噬的研究存在較大爭議。一方面有研究者認(rèn)為，脂肪細(xì)胞中自噬活性的增強(qiáng)可抑制炎性因子的分泌，發(fā)揮抗炎作用。如Jansen 等［20］的研究顯示自噬活性在肥胖個(gè)體的脂肪組織中上調(diào)，在人和小鼠脂肪組織中使用3-甲基腺嘌呤抑制自噬可導(dǎo)致IL-1β、IL-6 和IL-8 mRNA 和蛋白表達(dá)顯著增加；Yin 等［21-22］的研究也顯示自噬的抑制導(dǎo)致棕櫚酸酯誘導(dǎo)的脂肪細(xì)胞中MCP-1 和IL-6 表達(dá)進(jìn)一步增加，應(yīng)用雷帕霉素激活自噬可降低脂肪細(xì)胞炎性因子MCP-1和IL-6的表達(dá)和分泌。另一方面，有研究表明，肥胖時(shí)自噬活性與脂肪組織中炎性基因的表達(dá)呈正相關(guān)，自噬活動(dòng)的增強(qiáng)可以促進(jìn)炎因子分泌。如Kosacka 等［4］的研究顯示，在肥胖和糖尿病患者中，脂肪細(xì)胞內(nèi)積累著大量自噬小體，并且自噬增加與脂肪組織炎癥一起發(fā)生；Laiglesia 等［23］的研究顯示，Maresin 1 抑制3T3-L1 脂肪細(xì)胞中TNF-α 誘導(dǎo)的脂解和自噬而發(fā)揮抗炎作用?？梢?，自噬在肥胖中既可以發(fā)揮抗炎作用，又可以發(fā)揮促炎作用。

Figure 4.Expression of autophagy-related proteins in the adipose tissues of mice in each group.Mean±SD. n=10.*P<0.05 vs control group；#P<0.05 vs model group；△P<0.05 vs PI3K inhibitor group；▲P<0.05 vs FTPE-H group.圖4 各組小鼠脂肪組織自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)

Figure 5.Expression of PI3K/AKT signaling pathway-related proteins in the adipose tissues of mice in each group.Mean±SD. n=10.*P<0.05 vs control group；#P<0.05 vs model group；△P<0.05 vs PI3K inhibitor group；▲P<0.05 vs FTPE-H group.圖5 各組小鼠脂肪組織PI3K/AKT信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)

高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖模型被廣泛應(yīng)用在肥胖的研究中。在本研究中，我們通過高脂飼料喂養(yǎng)小鼠成功構(gòu)建肥胖模型，主要體現(xiàn)在模型小鼠的體質(zhì)量、Lee指數(shù)、腹股溝皮下脂肪質(zhì)量百分比及血脂水平均較對照組小鼠顯著升高，且脂肪組織中脂肪細(xì)胞增大。以脂肪細(xì)胞肥大為主的脂肪組織會(huì)觸發(fā)促炎因子的分泌，并導(dǎo)致肥胖引起的炎癥；脂肪細(xì)胞較大的個(gè)體通常具有升高的促炎因子，包括IL-6、IL-8 和MCP-1，以及胰島素敏感性相關(guān)脂聯(lián)素和IL-10 水平的降低［22，24］。MCP-1 是涉及脂肪組織慢性炎癥的關(guān)鍵因素。肥胖中MCP-1 水平升高與脂肪組織中M1型促炎巨噬細(xì)胞的積累有關(guān)；并且MCP-1 與肥胖中脂肪細(xì)胞過度表達(dá)的其他促炎細(xì)胞因子（如TNF-α和IL-6）協(xié)同作用，導(dǎo)致胰島素敏感性降低［25］。IL-10是一種抗炎細(xì)胞因子，IL-10 缺乏會(huì)加重高脂飲食肥胖小鼠腎臟炎癥、纖維化和功能衰竭［26］。ELISA 檢測結(jié)果進(jìn)一步顯示模型組小鼠脂肪組織中促炎因子（TNF-α、IL-6 和MCP-1）水平升高，IL-10 水平降低，與以上研究結(jié)果一致，說明肥胖小鼠脂肪組織出現(xiàn)過度的炎癥反應(yīng)。而給予FTPE 干預(yù)后，肥胖小鼠的上述體征、血脂和促炎因子水平均降低，IL-10 水平升高，提示FTPE對肥胖具有一定的抑制作用。

肥胖與脂肪組織中自噬活性的增強(qiáng)有關(guān)。自噬活動(dòng)和炎癥之間存在復(fù)雜的雙向關(guān)系。自噬途徑誘導(dǎo)或抑制炎癥反應(yīng)，而炎癥信號(hào)調(diào)節(jié)自噬通量。據(jù)報(bào)道，局部脂肪組織中的促炎細(xì)胞因子可以刺激脂肪細(xì)胞自噬，從而損害肥胖脂肪組織中TG 的儲(chǔ)存［27］。本研究通過透射電鏡觀察脂肪細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，可見肥胖小鼠脂肪細(xì)胞中自噬活性增強(qiáng)；并且脂肪組織中PI3K/AKT 通路的活化受到抑制。而PI3K/AKT 通路在自噬和炎癥中起關(guān)鍵作用：PI3K 是一類脂質(zhì)激酶，AKT 是PI3K 途徑的中心介質(zhì)，PI3K 激活后可通過AKT 的磷酸化，進(jìn)一步磷酸化下游的mTOR 及其他靶蛋白，從而介導(dǎo)炎癥、自噬和凋亡等多種生物學(xué)效應(yīng)［28］。在正常情況下，當(dāng)PI3K/AKT 被激活時(shí)可以調(diào)節(jié)身體機(jī)能，當(dāng)能量攝入過多時(shí)，PI3K/AKT 通路會(huì)被抑制；而激活PI3K/AKT 通路可減輕肥胖和胰島素抵抗［11］。本研究結(jié)果與此一致，即肥胖小鼠能量攝入過多，PI3K/AKT 通路被抑制。給予FTPE 干預(yù)后，肥胖小鼠脂肪細(xì)胞內(nèi)自噬小體的數(shù)量減少，且脂肪組織中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR 比值和P62 表達(dá)水平升高，LC3-II/LC3-I比值及beclin-1 表達(dá)水平降低；而在FTPE 干預(yù)的基礎(chǔ)上使用LY294002 抑制PI3K 信號(hào)通路后，脂肪細(xì)胞的自噬活性增強(qiáng)，促炎因子水平升高。這提示FTPE 可能通過激活PI3K/AKT/mTOR 通路，抑制脂肪細(xì)胞過度自噬，進(jìn)而減輕肥胖小鼠的炎癥反應(yīng)。

綜上所述，F(xiàn)TPE可減輕肥胖所致慢性炎癥，其作用機(jī)制可能與激活PI3K/AKT/mTOR 通路，進(jìn)而抑制脂肪細(xì)胞過度自噬有關(guān)。本研究結(jié)果支持自噬在肥胖中發(fā)揮促炎作用的觀點(diǎn)，與Jansen等［20］的研究結(jié)果不一致，推測其原因可能與自噬的雙重作用相關(guān)，即適度的自噬對機(jī)體具有保護(hù)作用，而過度的自噬會(huì)損害機(jī)體；此外，有研究顯示肥胖者內(nèi)臟脂肪細(xì)胞中的自噬活性顯著高于皮下脂肪細(xì)胞，故脂肪組織的取材部位也可能是引起實(shí)驗(yàn)結(jié)果中自噬發(fā)揮不同作用的原因之一。這些問題尚待進(jìn)一步的研究確認(rèn)。