基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對接探討烏丹降脂膠囊治療非酒精性脂肪肝的作用機制※

李圣豪 戴慕巍 王 芳 馮彩霞 賈彥生 王 超 郝立園 李耀琪 閆會敏

(1.河北省石家莊市第五醫(yī)院藥劑科，河北 石家莊 050021；2.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院骨科，河北 石家莊 050011；3.河北醫(yī)科大學(xué)流行病學(xué)教研室2020級碩士研究生，河北 石家莊 050017；4.河北省石家莊市第五醫(yī)院消化內(nèi)鏡室，河北 石家莊 050021；5.河北中醫(yī)學(xué)院2019級碩士研究生，河北 石家莊 050200；6.河北醫(yī)科大學(xué)流行病學(xué)教研室2021級碩士研究生，河北 石家莊 050017；7.河北省石家莊市第五醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究所，河北 石家莊 050021)

非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除外酒精及其他的肝損傷因素導(dǎo)致肝細胞內(nèi)脂肪過度沉積為主要特征的綜合征，與胰島素抵抗和遺傳易感性密切相關(guān)的獲得性代謝應(yīng)激性肝損傷[1]，與肥胖、2型糖尿病和心血管疾病關(guān)系密切[2]。NAFLD在全球的患病率約為25%，是肝硬化和肝細胞癌的主要原因[3]。西醫(yī)方面主要采用保肝藥、抗氧化劑、脂代謝調(diào)節(jié)劑等藥物治療，尚無特效藥物[4]，由于其不良反應(yīng)多，單一藥物無法滿足，治療效果欠佳。

NAFLD在中醫(yī)上歸屬于“積證”“痰證”范疇，其疾病性質(zhì)本虛標實，本虛為陽氣不足，標實為痰濕、瘀血、氣滯等[5]。烏丹降脂膠囊為河北省石家莊市第五醫(yī)院自制的中藥制劑，由山楂、決明子、陳皮、法半夏、茯苓、澤瀉、丹參、大黃、茵陳、黃芪、北柴胡、何首烏、炙甘草13 味中藥組成(國家專利號：CN201310063372.4)，具有健脾化痰、活血化瘀功效[6]。本研究擬應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接方法，借助藥物和疾病等多個數(shù)據(jù)庫，構(gòu)建烏丹降脂膠囊成分與靶點網(wǎng)絡(luò)，并采用分子對接技術(shù)驗證烏丹降脂膠囊與核心靶點的關(guān)系，較為整體地預(yù)測烏丹降脂膠囊治療NAFLD的機制。

1 資料與方法

1.1 烏丹降脂膠囊活性成分篩選及靶點獲取 中醫(yī)藥百科全書(The Encyclopedia of Traditional Chinese Medicine，ETCM，http://www.tcmip.cn/ETCM/index.php/Home/)數(shù)據(jù)庫[7]采用多種權(quán)威算法計算藥物動力學(xué)參數(shù)、藥物相似度及預(yù)測作用靶點。本研究利用ETCM數(shù)據(jù)庫獲取烏丹降脂膠囊13味中藥的活性成分和作用靶點。

1.2 NAFLD靶點的獲取 以“nonalcoholic fatty liver disease”和“NAFLD”為疾病檢索詞，分別在The Human Gene Database(GeneCards，https://www.genecards.org/)[8]、Online Mendelian Inheritance in Man(OMIM，https://omim.org/)和Therapeutic Target Database數(shù)據(jù)庫(TTD，http://db.idrblab.net/ttd/)[9]進行搜索，收集疾病相關(guān)靶點。根據(jù)GeneCards數(shù)據(jù)庫score值≥中位數(shù)的靶點設(shè)定是NAFLD的潛在靶點。合并以上3個疾病數(shù)據(jù)庫，并且刪除重復(fù)條目，得到NAFLD的靶點。

1.3 “藥物-疾病”交集靶點獲取 將獲取的烏丹降脂膠囊靶點與NAFLD靶點通過Venn(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/)[9]取交集并繪制Venn圖。

1.4 “藥物-成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建和分析 將以上步驟得到的藥物有效活性成分、交集靶點進行數(shù)據(jù)整合。運用 Cytoscape 3.8.2[10]軟件繪制“藥物-成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖。利用Cytoscape 3.8.2軟件中“Network Analyzer”的功能，計算出不同節(jié)點的度(Degree)值，根據(jù)Degree值的大小排序，篩選前3位作為烏丹降脂膠囊的核心活性成分。

1.5 蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析 將藥物與疾病的交集靶點提交到STRING 11.5數(shù)據(jù)庫(https://cn.string-db.org/)[11]，限定物種為 “Homo sapiens”，且“medium confidence = 0. 4”，去除游離的靶點，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖。此外，使用Cytoscape 3.8.2中的MCODE插件分析PPI網(wǎng)絡(luò)，確定關(guān)鍵功能模塊；同時還應(yīng)用Cytoscape 3.8.2的插件CytoHubba計算出Degree值較高的前10個核心靶點。

1.6 交集靶點的基因本體(GO)富集分析和京都基因與基因組百科全書(KEGG)富集分析 將藥物與疾病交集靶點輸入到Database for Annotation, Visualization, and Integrated Discovery database(DAVID，https://david.ncifcrf.gov/)數(shù)據(jù)庫[12]，進行GO和KEGG分析。物種限定為“Homo Sapiens”，以P<0.05且靶點數(shù)(count值)≥10為篩選條件，并應(yīng)用bioinformatics(http://www.bioinformatics.com.cn/)進行可視化。GO分為三大類，分別是生物學(xué)過程(biological process，BP)、細胞組分(cellular component，CC)和分子功能(molecular function，MF)。

1.7 分子對接的驗證 為了更加進一步評價藥物活性成分與靶點的結(jié)合能力，進行了分子對接的驗證。應(yīng)用PubChem數(shù)據(jù)庫(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)[13]下載活性成分的2D結(jié)構(gòu)，導(dǎo)入Chem3D軟件調(diào)整其空間構(gòu)象，進行能量最優(yōu)化。Uniprot數(shù)據(jù)(https://www.uniprot.org/)[13]中尋找核心靶點對應(yīng)蛋白，然后通過PDB數(shù)據(jù)庫(https://www.rcsb.org/)下載靶蛋白結(jié)構(gòu)。在PyMol軟件中除去水分子和小分子配體，使用AutoDock Tools 1.5.6軟件添加氫鍵，最后對受體和配體進行分子對接，從而得到分子對接的數(shù)值。

2 結(jié)果

2.1 烏丹降脂膠囊相關(guān)活性成分和作用靶點的獲得 通過ETCM數(shù)據(jù)庫，獲得烏丹降脂膠囊中山楂活性成分為28個，決明子活性成分為24個，陳皮活性成分為12個，半夏活性成分為21個，茯苓活性成分為32個，澤瀉活性成分為21個，丹參活性成分為35個，大黃活性成分為79個，茵陳活性成分為40個，黃芪活性成分為24個，何首烏活性成分為18個，柴胡活性成分為41個，甘草活性成分為64個。將這13味中藥活性成分合并后刪除重復(fù)值，獲得393種活性成分和812個作用靶點。應(yīng)用Cytoscape 3.8.2中“Network Analyzer”對烏丹降脂膠囊活性成分和作用靶點分析，基于它們之間的Degree值、鄰域連通性(Neighborhood connectivity)和緊密中心性(Closeness centrality)，按照Degree值≥70篩選出21個烏丹降脂膠囊的主要活性成分，見表1。

表1 烏丹降脂膠囊主要活性成分(前21個)

2.2 NAFLD相關(guān)靶點獲得 應(yīng)用GeneCards 數(shù)據(jù)庫獲得1091個NAFLD相關(guān)靶點，根據(jù)score值≥中位數(shù)視為NAFLD潛在靶點，在GeneCards數(shù)據(jù)庫，NAFLD相關(guān)靶點中score最大值是19.15，最小值是0.12，中位數(shù)是0.35。然后將GeneCards、TTD和OMIM數(shù)據(jù)庫靶點合并刪除重復(fù)值，最終獲得1142個NAFLD相關(guān)的靶點。

2.3 “藥物-疾病”交集靶點篩選 將預(yù)測的烏丹降脂膠囊藥物的靶點(812個)與NAFLD疾病的靶點(1142個)取交集，得到烏丹降脂膠囊與NAFLD交集靶點107個，并繪制Venn圖，見圖1。

圖1 烏丹降脂膠囊和NAFLD靶點的Venn圖

2.4 “藥物-成分-靶點”的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和分析 通過對“藥物-疾病”交集靶點進行反向推導(dǎo)，得到烏丹降脂膠囊作用于NAFLD的活性成分有382個。使用 Cytoscape 3.8.2軟件將382個活性成分和107個“藥物-疾病”交集靶點進行關(guān)聯(lián)，并構(gòu)建“藥物-成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖，見圖2(紅色為藥物，藍色為成分，紫色為靶點)。圖中包括462個節(jié)點和1958條邊，一個節(jié)點Degree值越大則表示該成分發(fā)揮作用的可能性越大，或者是該靶點與疾病的相關(guān)性越大。進一步應(yīng)用 Cytoscape 3.8.2中“Network Analyzer”功能篩選，篩選出烏丹降脂膠囊治療NAFLD的核心活性成分，分別是阿里紅酸(Officinalic acid)、棕櫚酸(Cetylic acid)和辛酸(Caprylic acid)。

圖2 藥物-成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析 將107個靶點導(dǎo)入STRING11.5數(shù)據(jù)庫中，獲得PPI網(wǎng)絡(luò)，并導(dǎo)入 Cytoscape 3.8.2軟件進行可視化，見圖3A(由綠色到藍色，Degree值越來越大。顏色越深，Degree值越大)。最終該PPI網(wǎng)絡(luò)圖共包括102個節(jié)點，773條邊。靶點以節(jié)點表示，靶點間相互作用關(guān)系以每個節(jié)點之間的線條表示，靶點相互作用強度以Degree值表示，其值越大，作用越強。節(jié)點的顏色與節(jié)點的Degree值成正比，即Degree值越大，節(jié)點顏色越深。由于 PPI 網(wǎng)絡(luò)中蛋白的作用是相互的，為了能更加精確地分析烏丹降脂膠囊治療NAFLD的作用機制，在得到烏丹降脂膠囊和NAFLD交集靶點的PPI網(wǎng)絡(luò)后，進行聚類構(gòu)建功能模塊構(gòu)建。因此，運用Cytoscape 3.8.2軟件中MCODE插件，得到 5個關(guān)鍵模塊，每個模塊中的蛋白有著更為緊密的聯(lián)系，共同執(zhí)行著某個生物過程，見圖3B。此外，運用插件CytoHubba計算出得分較高的前10個核心靶點，包括過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferator activated receptor alpha，PPARA)、胰島素(insulin，INS)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator activated receptor gamma，PPARG)、白細胞介素6(interleukin 6，IL-6)、Toll樣受體4(toll like receptor 4，TLR4)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)、細胞色素P450家族2亞科E成員1(cytochrome P450 family 2 subfamily E member 1，CYP2E1)、肌動蛋白β(actin beta，ACTB)、白蛋白(albumin，ALB)和熱休克蛋白90α家族A級成員1(heat shock protein 90 alpha family class A member 1，HSP90AA1)，見圖3C(由黃色變紅色，Degree值由小變大)。

注：A 藥物-疾病交集靶點PPI網(wǎng)絡(luò)圖；B MCODE分析PPI網(wǎng)絡(luò)圖；C 前10個核心靶點

2.6 交集靶點的GO富集分析和KEGG富集分析 將藥物與疾病的107個交集靶點基因?qū)隓AVID數(shù)據(jù)庫，進行GO功能注釋。根據(jù)P值和count值進行篩選，選擇有統(tǒng)計學(xué)意義的 BP、CC、MF條目繪制柱形圖，顏色越紅，P值越小，柱形越長，count值越大。結(jié)果顯示BP包括16個條目，CC包括17個條目，MF包括10個條目。其中BP主要集中在外來物質(zhì)的代謝過程(Xenobiotic metabolic process)、細胞對脂多糖的反應(yīng)(Cellular response to lipopolysaccharide)、對外來刺激的反應(yīng)(Response to xenobiotic stimulus)、脂質(zhì)代謝過程(Lipid metabolic process)、翻譯起始(Translational initiation)、藥物反應(yīng)(Response to drug)、細胞因子介導(dǎo)的信號通路(Cytokine mediated signaling pathway)、基因表達的正向調(diào)節(jié)(Positive regulation of gene expression)、RNA聚合酶Ⅱ啟動子的轉(zhuǎn)錄正調(diào)控(Positive regulation of transcription from RNA polymerase Ⅱ promoter)、炎性反應(yīng)(Inflammatory response)、負調(diào)控凋亡過程(Negative regulation of apoptotic process)、DNA模板的轉(zhuǎn)錄正調(diào)控(Positive regulation of transcription, DNA-templated)、嗜中性粒細胞脫顆粒(Neutrophil degranulation)、DNA模板的轉(zhuǎn)錄負調(diào)控(Negative regulation of transcription, DNA-templated)、RNA聚合酶Ⅱ啟動子的轉(zhuǎn)錄負調(diào)控(Negative regulation of transcription from RNA polymerase Ⅱ promoter)和細胞分化(Cell differentiation)等，見圖4A；CC主要集中在細胞外泌體(Extracellular exosome)、粘著斑(Focal adhesion)、膜(Membrane)、胞質(zhì)(Cytosol)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(Endoplasmic reticulum)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔(Endoplasmic reticulum lumen)、細胞質(zhì)(Cytoplasm)、大分子復(fù)合物(Macromolecular complex)、胞外區(qū)(Extracellular region)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜(Endoplasmic reticulum membrane)、細胞外間隙(Extracellular space)、核(Nucleus)、核漿(Nucleoplasm)、細胞表面(Cell surface)、胞質(zhì)核周區(qū)(Perinuclear region of cytoplasm)、染色質(zhì)(Chromatin)和細胞內(nèi)細胞器(Intracellular membrane-bounded organelle)等，見圖4B；MF主要集中在RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子活性，配體激活序列特異性DNA結(jié)合(RNA polymerase Ⅱ transcription factor activity, ligand-activated sequence-specific DNA binding)、相同蛋白的結(jié)合(Identical protein binding)、RNA結(jié)合(RNA binding)、氧化還原酶活性(Oxidoreductase activity)、蛋白質(zhì)同源二聚化活性(Protein homodimerization activity)、酶結(jié)合(Enzyme binding)、蛋白結(jié)合(Protein binding)、鋅離子結(jié)合(Zinc ion binding)、轉(zhuǎn)錄因子活性、序列特異性DNA結(jié)合(Transcription factor activity, sequence-specific DNA binding)和ATP結(jié)合(ATP binding)等，見圖4C。

注：A為BP分析；B為CC分析；C為MF分析

應(yīng)用DAVID數(shù)據(jù)庫進行KEGG通路富集分析，根據(jù)P值和count值篩選有明顯統(tǒng)計學(xué)差異的通路，共有7條。7條通路分別是細胞色素P450對外來生物的代謝(Metabolism of xenobiotics by cytochrome P450)、酒精性肝病(Alcoholic liver disease)、PPAR信號通路(PPAR signaling pathway)、冠狀病毒病-COVID-19(Coronavirus disease - COVID-19)、胰島素抵抗(Insulin resistance)、脂質(zhì)和動脈粥樣硬化(Lipid and atherosclerosis)和代謝途徑(Metabolic pathways)，見圖5。結(jié)果表明這些通路可能是研究烏丹降脂膠囊治療NAFLD主要通路。

圖5 KEGG富集分析圖

2.7 分子對接驗證 為了進一步驗證烏丹降脂膠囊對NAFLD的治療作用，借助 AutoDock Vina 軟件進行分子對接，將Degree值最高的核心活性成分阿里紅酸、棕櫚酸和辛酸分別與10個核心蛋白進行分子對接。研究表明靶點蛋白與活性成分的最低結(jié)合能小于-5 kcal/mol認為二者結(jié)合穩(wěn)定[14]，且結(jié)合能數(shù)值越低，構(gòu)象越穩(wěn)定 (見表3)，其中阿里紅酸與PPARA、CYP2E1、TNF、ACTB和ALB的結(jié)合性最好，PyMol軟件進行可視化，見圖6。由圖可知，阿里紅酸與PPARA在VAL-407、HIS-411處形成氫鍵； 阿里紅酸與PPARG在GLN-451處形成氫鍵；阿里紅酸與TNF在GLN-355處形成氫鍵；阿里紅酸與ACTB在ARG-254、ARG-75、PHE-106處形成氫鍵；阿里紅酸與ALB在LYS-190處形成氫鍵。

表2 核心活性成分與核心靶點的分子對接結(jié)果 kcal/mol

圖6 核心活性成分阿里紅酸與核心靶點的分子對接圖

3 討論

中醫(yī)古籍中并無NAFLD記載，NAFLD在中醫(yī)上歸屬于“脅痛”“肝著”“痰濁”“癥瘕”“積聚”“痰痞”“肥氣”等范疇[15]。NAFLD主要病因是過食肥甘厚味，主要病機為肝郁脾虛，痰濁內(nèi)蘊[16]。烏丹降脂膠囊具有健脾化痰、活血化瘀功效，方中陳皮理氣燥濕，半夏燥濕化痰、散結(jié)消痞，茯苓健脾祛濕，使?jié)袢テ⑼?，三藥合用祛濕化痰，調(diào)節(jié)脾胃；山楂健脾開胃、消食化積、活血化瘀，黃芪益氣健脾，澤瀉利水滲濕，柴胡疏肝解郁，丹參活血化瘀，決明子潤腸通便，茵陳清熱利濕、退黃，大黃逐瘀攻積。諸藥相合，既能益氣健脾，行氣散結(jié)，又能活血散瘀，利濕消積。

NAFLD的病理進展一般分為3個過程，即脂肪變性、脂肪毒性和炎癥。脂肪變性、氧化應(yīng)激和腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、IL-6等炎癥介質(zhì)的存在與NAFLD中組成性活性/雄甾烷受體(constitutive active/androstane receptor，CAR)、孕烷X受體(pregnane X receptor，PXR)、PPARA等核因子的改變有關(guān)，這些因素可能導(dǎo)致藥物代謝酶或轉(zhuǎn)運體的表達和活性改變[17]。本研究中，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果表明，烏丹降脂膠囊中有382個活性成分可用于NAFLD疾病的治療，其中涉及107個靶點。前10個核心靶點分別為PPARA、PPARG、IL-6、TNF、INS、CYP2E1、ACTB、ALB、HSP90AA1和TLR4。其中，脂肪變性導(dǎo)致核因子κB(nuclear factor-kappaB，NF-κB)激活，進而激活TNF-α和IL-6等炎癥因子，從而介導(dǎo)NASH中炎癥發(fā)生[18]。TLR是一類模式識別受體家族，通過病原體相關(guān)的分子模式識別激活固有免疫系統(tǒng)[19]。TLR1-5在NAFLD中升高，促進NAFLD的發(fā)展[20]，而且TLR4通過激活X-box結(jié)合蛋白-1(X-box binding protein-1，XBP1)從而誘導(dǎo)非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)[21]。PPAR包括α、β、γ在脂肪酸分解代謝作用和戊糖磷酸能量代謝中發(fā)揮重要作用[22]。PPARA調(diào)節(jié)脂肪酸轉(zhuǎn)運、線粒體β氧化和脂肪分解，其缺失導(dǎo)致非酒精性脂肪肝炎病變更加嚴重[23]。PPARG在脂肪組織中高度表達，在脂肪形成、脂肪細胞分化和脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[24]。PPARG被激活后胰島素敏感性提高，還促進脂肪細胞分化，增加脂肪組織對游離脂肪酸的攝取，加速NAFLD發(fā)展[25]。CYP2家族是最重要的藥物代謝酶，CYP2E1是目前研究最多的與NAFLD相關(guān)的酶，研究顯示人和嚙齒類動物的NAFLD中，CYP2E1的表達和活性增強[26-27]。TNF-α是一種重要的促炎細胞因子，參與多種肝臟損傷。在嚙齒動物的NAFLD模型中，TNF-α拮抗劑減輕肝臟炎癥，甚至逆轉(zhuǎn)脂肪變性[28]。TNF-α抑制劑還能改善非酒精性脂肪性肝炎患者的組織學(xué)特征[29]。ALB是最豐富的蛋白質(zhì)，具有抗氧化、抗炎等多種功能。研究表明NAFLD患者的ALB(包括對金屬和脂肪酸)的結(jié)合能力降低，因此，ALB結(jié)合功能可作為早期肝損傷的指標[30]。烏丹降脂膠囊能作用于這些靶基因，改善核因子釋放、減少胰島素抵抗、減少炎癥因子釋放、改善藥物代謝酶等方面達到治療NAFLD的目的。

GO分析的結(jié)果顯示，烏丹降脂膠囊治療NAFLD的靶點主要分布細胞質(zhì)、細胞膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜、細胞核、染色質(zhì)等細胞組分；具有聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子活性、蛋白質(zhì)同源二聚化活性、蛋白結(jié)合、鋅離子結(jié)合、酶結(jié)合、ATP結(jié)合等分子功能；主要參與炎性反應(yīng)、藥物反應(yīng)、細胞對脂多糖的反應(yīng)、脂質(zhì)代謝過程等生物學(xué)過程。由此可見烏丹降脂膠囊治療NAFLD是通過參與多種細胞組分、多種分子功能、多種生物學(xué)過程發(fā)揮作用的。

KEGG通路富集結(jié)果表明，烏丹降脂膠囊通過細胞色素P450對外來生物的代謝、酒精性肝病、過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferators-activated receptors，PPAR)信號通路、新型冠狀病毒肺炎、胰島素抵抗、脂質(zhì)和動脈粥樣硬化以及代謝途徑等通路達到治療NAFLD的作用。已有研究表明胰島素抵抗是NAFLD進展的關(guān)鍵，NAFLD與胰島素抵抗密切相關(guān)，70%～80%的肥胖和糖尿病患者患有NAFLD[31-32]；而且炎癥因子、胰島素抵抗與NAFLD三者之間可能存在一定聯(lián)系，TNF-α和IL-1β等炎癥介質(zhì)的分泌，導(dǎo)致胰島素抵抗和NASH[33]。研究還表明，胰島素抵抗可能誘導(dǎo)NAFLD中CYP2E1的高表達和高活性[34]，細胞色素P450(cytochromeP450，CYP450)是參與多種內(nèi)源性和外源性化合物代謝的酶，主要在肝臟中表達[35]，CYP2E1介導(dǎo)活性氧(reactive oxygen species，ROS)的產(chǎn)生，促進NAFLD發(fā)展[36]。

此外，山楂是薔薇科山里紅或山楂的干燥成熟果實，氣微清香，味酸、微甜。入肝、脾、胃經(jīng)，具有消食健胃、行氣散瘀功效，含有機酸類等活性成分，具有促進脂肪消化、降脂等作用，山楂對NAFLD有良好的治療效果，在緩解氧化應(yīng)激[37]、促進脂質(zhì)代謝[38]、抑制血小板聚集[39]等多個方面產(chǎn)生治療作用。前期研究發(fā)現(xiàn)，烏丹降脂膠囊能降低胰島素、TNF-α和NF-κB表達，減輕炎性反應(yīng)，促進肝細胞功能恢復(fù)[40]。本研究發(fā)現(xiàn)，阿里紅酸與核心靶點具有較好的結(jié)合，表明烏丹降脂膠囊能通過多成分、多靶點治療NAFLD。

綜上所述，本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)，初步探索了烏丹降脂膠囊對NAFLD治療的多層次機制。該結(jié)果為進一步實驗研究及臨床應(yīng)用提供一定依據(jù)，也為烏丹降脂膠囊治療 NAFLD的研究提供一定思路。但是，本研究存在一定局限性，不同劑量可能產(chǎn)生不同的效果，數(shù)據(jù)庫的不同也可能導(dǎo)致研究結(jié)果不一致，烏丹降脂膠囊含有的主要成分對于NAFLD的靶點是抑制作用還是促進作用尚不明確。因此，今后需進一步通過實驗進行驗證。