Peyer結(jié)介導(dǎo)的小腸黏膜免疫及其物種間差異的研究進(jìn)展①

沈 陽 孫 靜③④⑤ 葛良鵬③④⑤ 張進(jìn)威③④⑤ 李周權(quán)

（西南大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院生物飼料與分子營養(yǎng)實(shí)驗室，重慶400715）

小腸是動物消化道的重要組成部分，專門負(fù)責(zé)營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收。腸腔內(nèi)含有共生微生物、食物等外源性抗原，腸道免疫系統(tǒng)在耐受外源性抗原的同時，還要保護(hù)機(jī)體免受病原菌入侵。與全身性免疫系統(tǒng)不同，腸相關(guān)淋巴組織分為誘導(dǎo)部位（Peyer結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)）和效應(yīng)部位（腸上皮細(xì)胞、上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞和固有層淋巴細(xì)胞）。Peyer結(jié)是典型的黏膜淋巴組織，包含大部分淋巴細(xì)胞，是機(jī)體IgA 的主要來源，在腸道黏膜免疫過程中扮演著不可或缺的角色。已有研究表明，腸道Peyer 結(jié)的分布和發(fā)育時間在物種間有較大差異，其功能上也有所不同。因此，充分理解Peyer 結(jié)的細(xì)胞組成并闡釋其在黏膜免疫過程中的功能十分必要。

1 小腸黏膜免疫概況

動物黏膜表面與外部環(huán)境直接接觸，是機(jī)體與環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換的主要場所，同時也是防御病原體進(jìn)入機(jī)體的第一道屏障。黏膜免疫系統(tǒng)（mucosal immune system，MIS）由各部位腔道的黏膜及其附屬的淋巴細(xì)胞或組織構(gòu)成，MIS 含有最大的免疫細(xì)胞庫，約占機(jī)體淋巴組織的50%以上。由于長期與外界病原微生物接觸，MIS 逐步進(jìn)化形成特有的淋巴組織，在消化道中最為明顯［1］。腸道黏膜淋巴組織被稱為腸道相關(guān)淋巴組織（gut-associated lymphoid tissue，GALT），根據(jù)解剖學(xué)及功能特征可將GALT分為誘導(dǎo)部位和效應(yīng)部位。誘導(dǎo)部位負(fù)責(zé)抗原的捕獲、處理和遞呈，通過不同類型免疫細(xì)胞誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，包括Peyer 結(jié)和腸系膜淋巴結(jié)；效應(yīng)部位主要由GALT 響應(yīng)各類抗原后作出免疫反應(yīng)，包括腸上皮細(xì)胞、上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞和固有層淋巴細(xì)胞。Peyer結(jié)含有大量免疫細(xì)胞，具有生發(fā)中心（germinal cen?ter，GC）結(jié)構(gòu)，是典型的黏膜淋巴組織，同時也是腸道IgA的主要來源［2］。

2 Peyer結(jié)的組織學(xué)特征

Peyer 結(jié)由瑞士解剖學(xué)家JOSEPH HANS CON?RAD PEYER 于1677 年首次發(fā)現(xiàn)，其作用與功能在160 年后才被臨床醫(yī)生LOUIS 系統(tǒng)闡述［3］。Peyer 結(jié)主要分布于腸系膜附著緣對側(cè)的腸壁及黏膜下側(cè)，是由多個淋巴濾泡聚集而成的具有高度器官化的黏膜相關(guān)淋巴組織。Peyer 結(jié)有確定的B 細(xì)胞和T細(xì)胞依賴區(qū)，是典型的次級淋巴器官［4］。Peyer 結(jié)對黏膜免疫的誘導(dǎo)和起始至關(guān)重要，根據(jù)T 細(xì)胞和B細(xì)胞的分布特點(diǎn)，可分為濾泡區(qū)（follicular region，F(xiàn)OR）、濾泡下圓頂區(qū)（subepithelial dome region，SED）和濾泡間區(qū)（interfollicular region，IFR）。濾泡相關(guān)上皮（follicular associated epithelium，F(xiàn)AE）是覆蓋在Peyer 結(jié)上皮細(xì)胞，主要包含單層柱狀上皮細(xì)胞及微皺褶細(xì)胞（microfold cell，M cell）。M 細(xì)胞表面具有很多短而不規(guī)則的微絨毛或微皺褶，基部胞膜向頂部呈穹窿狀突起，形成“口袋”樣結(jié)構(gòu)，含有B細(xì)胞、T細(xì)胞以及少量巨噬細(xì)胞（macrophage，Mφ）。

FOR 是SED 穿過黏膜基層延伸到黏膜下層形成的淋巴濾泡，主要由B細(xì)胞組成，并有明顯的GC。與普通動物相比，無菌動物的Peyer 結(jié)發(fā)育遲緩，濾泡中無明顯GC［5］。Peyer 結(jié)的GC 含有不同發(fā)育階段的B 細(xì)胞（約75%）和濾泡樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC），IgV基因體細(xì)胞高頻突變、類別轉(zhuǎn)換（IgM→IgA）、高親和B 細(xì)胞受體選擇均在GC 中完成，這與一般淋巴組織的GC 有所不同［6］。IFR 主要由T細(xì)胞組成，也稱為胸腺依賴區(qū)，主要為CD4+CD8+T細(xì)胞，95%以上為αβ T 細(xì)胞，而另一部分為γδ T 細(xì)胞。IFR 還具有豐富的高內(nèi)皮微靜脈（high endothelial venule，HEV），HEV 是淋巴細(xì)胞進(jìn)出Peyer 結(jié)的通道。Peyer 結(jié)有輸出淋巴管，但沒有傳入淋巴管，這在淋巴組織中是特有的［7］。SED 位于FAE 和濾泡之間，此區(qū)域細(xì)胞成分高度異質(zhì)，包含T 細(xì)胞、B 細(xì)胞、DC 和Mφ 等，其中DC 比例最高，且通常處于未成熟狀態(tài)，與FAE上的M細(xì)胞緊密相連［8］。

3 Peyer結(jié)介導(dǎo)的小腸黏膜免疫

黏膜免疫是一個由多種細(xì)胞和活性分子共同參與的免疫過程，其作用機(jī)制非常復(fù)雜。Peyer結(jié)中含有許多免疫細(xì)胞，如M 細(xì)胞、T 細(xì)胞、B 細(xì)胞、Mφ和DC，它們分布不同解剖學(xué)區(qū)域，在黏膜免疫過程各個環(huán)節(jié)發(fā)揮重要作用。

3.1 M 細(xì)胞 M 細(xì)胞攝取抗原是啟動黏膜免疫應(yīng)答的關(guān)鍵一步。M 細(xì)胞頂膜面是由糖復(fù)合物（被稱為糖萼）構(gòu)成，易被抗原微生物識別。不同動物或同種動物不同腸段的糖復(fù)合物結(jié)構(gòu)均有所差異，頂膜面糖萼的不同，M 細(xì)胞攝取抗原的方式也不同。例如：M細(xì)胞攝取大顆粒物質(zhì)或細(xì)菌，主要依賴肌動蛋白參與的吞噬作用，形成偽足樣結(jié)構(gòu)將其吞噬；攝取病毒或其他黏附顆粒，主要通過膜網(wǎng)格蛋白小泡的胞吞作用吸收；攝取液體或非黏附物質(zhì)，主要依賴巨胞飲作用吸收［9］。近年來研究表明，Peyer 結(jié)攝取抗原有三種途徑：①M(fèi) 細(xì)胞非特異性吞噬；②M細(xì)胞特異性受體介導(dǎo)的吞噬；③DC突起跨M細(xì)胞間隙攝?。?0］。這些抗原進(jìn)入細(xì)胞后，通過內(nèi)吞囊泡被轉(zhuǎn)到胞內(nèi)腔中，再通過胞吐作用釋放到基底膜外側(cè)。M 細(xì)胞中沒有降解蛋白質(zhì)的溶酶體，只能將抗原傳遞給附近的抗原遞呈細(xì)胞，經(jīng)過加工處理后的蛋白質(zhì)抗原降解為多肽，最終和MHC Ⅱ類分子結(jié)合呈遞到輔助性T細(xì)胞（helper T cell，Th），產(chǎn)生局部免疫反應(yīng)［11］。M 細(xì)胞攝取抗原受到多種因素的調(diào)節(jié)，如SIgA、DC 和一些細(xì)菌的產(chǎn)物（金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌）。M細(xì)胞表面標(biāo)志與抗原攝取密切相關(guān)，這些表面標(biāo)志可以監(jiān)視微生物的入侵，從而啟動免疫應(yīng)答。目前已知的M 細(xì)胞表面標(biāo)志物有：Glycoprotein 2（GP2）、PrPC、Mracks11、Ulex Europaeus Agglutinin（UEA）-1、CCL9等［12-13］。

3.2 DC 和Mφ DC 和Mφ 是腸道內(nèi)的專職抗原遞呈細(xì)胞（antigen-presenting cells，APC）。DC 主要位于SED，少量分布于IFR；Mφ 在整個腸道均有分布，尤其在結(jié)腸中居多。DC 和Mφ 執(zhí)行不同但互補(bǔ)的免疫功能，DC 表達(dá)的多種模式識別受體識別抗原，攝取和加工后，以抗原肽-MHC Ⅱ類分子復(fù)合物的形式遞呈給CD4+T 細(xì)胞。不同DC 的亞群有不同的表型，產(chǎn)生不同的功能（表1）。DC 產(chǎn)生的細(xì)胞因子還能進(jìn)一步誘導(dǎo)活化T 細(xì)胞增殖和分化，啟動免疫應(yīng)答［14］。未成熟DC 表達(dá)低水平MHC Ⅱ類分子，遞呈能力以及免疫應(yīng)答能力較弱，在外界刺激下（LPS、IL-1β、TNF-α），發(fā)育成為成熟的DC，成熟DC可明顯提高M(jìn)HC Ⅱ類分子表達(dá)，啟動適應(yīng)性免疫應(yīng)答［15］。Mφ 將攝入的外源性抗原加工處理成為小分子肽段，以抗原肽-MHC Ⅱ類分子復(fù)合物遞呈給CD4+T 細(xì)胞識別，增強(qiáng)適應(yīng)性免疫應(yīng)答；Mφ 還可以將攝入的外源性抗原通過交叉抗原反應(yīng)途徑，以抗原肽-MHC Ⅰ類分子復(fù)合物形式遞呈給CD8+T細(xì)胞識別，產(chǎn)生免疫應(yīng)答。一般情況下，Mφ 低水平表達(dá)MHC Ⅰ、Ⅱ類分子，在IFN-γ 等作用下，表達(dá)水平提高，增強(qiáng)清除病原菌的能力［16］。在MHC Ⅱ類分子存在的情況下，DC 和Mφ 都能攝取抗原，并遞呈給T細(xì)胞和B細(xì)胞，進(jìn)而引起局部黏膜免疫應(yīng)答。

表1 DC亞群及功能Tab.1 Subgroup and functions of DC

3.3 T 細(xì)胞 當(dāng)初始T 細(xì)胞與DC 或Mφ 表面的抗原肽-MHC 復(fù)合物特異性結(jié)合后，在輔助因子的參與下，增殖分化成效應(yīng)T細(xì)胞，對抗原產(chǎn)生免疫性應(yīng)答。T 細(xì)胞有多種形式參與調(diào)節(jié)免疫過程。根據(jù)分泌的細(xì)胞因子不同，將CD4+T 細(xì)胞分為Th1 和Th2，Th1 分泌因子主要促進(jìn)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，如IL-2 是引起T 細(xì)胞增殖和激活并進(jìn)入細(xì)胞增殖的主要因子，IFN-γ 不僅能促進(jìn)Th0 向Th1 分化，誘導(dǎo)輔助性B 細(xì)胞應(yīng)答，IFN-γ 不僅能促進(jìn)Th0 向Th1 分化，誘導(dǎo)輔助性B 細(xì)胞應(yīng)答，抑制Th2 細(xì)胞活化，調(diào)節(jié)B 細(xì)胞和T 細(xì)胞的應(yīng)答，而且是一個重要的B 細(xì)胞類型轉(zhuǎn)化因子，能夠誘導(dǎo)B 細(xì)胞分泌抗原特異性IgG2a，甚至可以增強(qiáng)MHC 表達(dá)，加強(qiáng)抗原的遞呈，提高IgA的分泌；Th2分泌因子主要促進(jìn)體液介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，參與B 細(xì)胞增殖、分化和成熟，如IL-5 和IL-6可以誘導(dǎo)IgA+B細(xì)胞分化成IgA+漿細(xì)胞，IL-6還能促進(jìn)B 細(xì)胞的類別轉(zhuǎn)換，IL-12 和IL-4 協(xié)同刺激B細(xì)胞的生長和分化，增強(qiáng)成熟B 細(xì)胞合成IgA 的能力［26-27］。Th17 在黏膜免疫過程中發(fā)揮重要作用，如IL-17 促進(jìn)B 細(xì)胞分化成IgA 分泌細(xì)胞，上調(diào)黏膜上皮細(xì)胞中多聚免疫球蛋白受體（polymeric immuno?globulin receptor，pIgR）表達(dá)，促進(jìn)SIgA 的分泌［28］。調(diào) 節(jié) 性T 細(xì) 胞（regulatory T cell，Treg）也 稱 為CD4+CD25+Foxp3+T 細(xì)胞，它通過分泌抑制性因子參與抑制獲得性免疫的激活，如IL-10能抑制自身T細(xì)胞免疫，維持免疫耐受；TGF-β 能調(diào)節(jié)IgA 的產(chǎn)生［29-30］。T 細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子在IgA+B 細(xì)胞的不同分化階段發(fā)揮著重要作用，如TGF-β 和IL-4 參與啟動IgA+B 細(xì)胞的早期分化；在B 細(xì)胞成熟后期，T 細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子可以調(diào)節(jié)抗原特異性IgM+B細(xì)胞分化為IgA+B細(xì)胞，最終分化為IgA+漿細(xì)胞。

3.4 B 細(xì)胞 B 細(xì)胞的發(fā)育分為抗原非依賴期和抗原依賴期?？乖且蕾嚻谥饕诠撬柚羞M(jìn)行，經(jīng)歷了祖B 細(xì)胞、前B 細(xì)胞、未成熟B 細(xì)胞和成熟B 細(xì)胞等階段；抗原依賴期的成熟B 細(xì)胞遷移到外周淋巴組織，在抗原刺激下分化成為漿細(xì)胞和記憶B 細(xì)胞，從而發(fā)揮免疫效應(yīng)。B 細(xì)胞根據(jù)是否表達(dá)CD5分為兩個亞群，B1 和B2。B1（CD5+）細(xì)胞參與固有免疫，表達(dá)低親和力的IgM；B2（CD5-）細(xì)胞主要參與適應(yīng)性免疫，在抗原和Th 細(xì)胞的參與下，分化成漿細(xì)胞［31］。小腸固有層的天然B細(xì)胞在接觸外來抗原刺激后，聚集到GC，完成增殖、分化和成熟。IgA 分泌細(xì)胞在胞質(zhì)內(nèi)與J 鏈合成多聚體IgA（polymericIgA，pIgA），再與上皮細(xì)胞表面分泌的分泌片（secre?tory component，SC）結(jié)合，并轉(zhuǎn)運(yùn)到上皮下細(xì)胞形成SIgA，最后釋放到腸腔［32］。SIgA 可通過免疫屏障作用、不依賴補(bǔ)體的中和作用、對抗原物質(zhì)的封閉作用、增強(qiáng)抗菌因子的抗菌作用等途徑增強(qiáng)機(jī)體的免疫能力，阻止病原菌入侵［33］。SIgA 作為黏膜免疫的效應(yīng)因子，在抵抗胃腸道感染中也發(fā)揮重要作用［33］。

4 IgA合成的調(diào)控機(jī)制

IgA 的合成受到兩種途徑的調(diào)節(jié)作用——T 細(xì)胞依賴（T cell-dependent，TD）途徑和T 細(xì)胞非依賴（T cell-independent，TI）途徑。在TD 調(diào)節(jié)途徑中，首先依賴活化T 細(xì)胞表達(dá)的CD40 配體（CD40 ligand，CD40L）和多種細(xì)胞表達(dá)的TGF-β 調(diào)控抗原特異性IgM+B 細(xì)胞分化為IgA+B 細(xì)胞，然后利用同型特異性T細(xì)胞誘導(dǎo)的IgA+B細(xì)胞分化成漿細(xì)胞。在TI調(diào)節(jié)的過程中，初始B 細(xì)胞合成IgA 受到DC 細(xì)胞或上皮細(xì)胞衍生分子的誘導(dǎo)，如B 細(xì)胞活化因子（B cell activating factor，BAFF）、維甲酸（retinoic acid，RA）、TGF-β、一氧化氮（nitric oxide，NO）或增殖誘導(dǎo)配體（a proliferation-inducing ligand，APRIL）［34］。IgA+B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞受到多種細(xì)胞因子的調(diào)控，如CD4+Th2 細(xì)胞分泌的IL-2、IL-5 和IL-10；DC 細(xì)胞分泌的維甲酸、TGF-β和IL-6；腸上皮細(xì)胞分泌的TGF-β和IL-6［35］。DC 在IgA 的產(chǎn)生中發(fā)揮著重要作用，它可以產(chǎn)生TNF-α 和誘導(dǎo)型一氧化氮酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS），NO 增加TGF-β 受體的表達(dá)，促進(jìn)類型轉(zhuǎn)換重組（class switch recombina?tion，CSR）產(chǎn)生IgA［36-37］。Peyer結(jié)中含有不同成熟階段 的B 細(xì) 胞，包 括IgM+B220+、IgM+IgA+B220+、IgA+B220+、IgA+B220-［38］。成熟的B 細(xì)胞為IgM+IgD+B 細(xì)胞，經(jīng)過CSR 后形成IgA。CSR 過程受到多種因子調(diào)控，其中胞嘧啶核苷脫氨酶（activation-induced cytidine deaminase，AID）必不可少，AID 可通過B 細(xì)胞的CD40 和CD40L 結(jié)合后招募腫瘤壞死受體相關(guān)因子蛋白（tumor necrosis receptor-associated factor protein，TRAF），進(jìn)而激活NF-κB 通路誘導(dǎo)CSR［39］；TGF-β 在CSR 中也發(fā)揮重要作用，主要通過誘導(dǎo)核轉(zhuǎn)運(yùn)抗decapentaplegic 蛋白（nuclear translocation of mothers against decapentaplegic protein，SMAD）、Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3（runt-related transcription factor 3，RUNX3）及環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)結(jié)合蛋白（cyclic AMP response element binding protein，CREB），共同啟動Ig 重鏈中編碼抗體的Cα 的基因轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)IgA 的CSR［40］；BAFF 和APRIL 在跨膜受體激活劑、鈣調(diào)節(jié)劑、配體相互作用因子和髓樣分化因子作用下調(diào)控NF-κB 通路，激活I(lǐng)α 和Iγ 轉(zhuǎn)錄以及AID 的表達(dá)誘導(dǎo)IgA 的CSR［41］。此外，Peyer 結(jié)中的一些細(xì)胞因子如IL-2、IL-4、IL-5、IL-6 和IL-10 也 能 促 進(jìn)IgA 的CSR［42］。

5 人及主要模式動物Peyer結(jié)的研究現(xiàn)狀

在分布特征上，動物的Peyer 結(jié)有兩種分布位點(diǎn)：一種呈離散型分布于空腸和回腸前段，稱為空腸Peyer結(jié)（Jejunum Peyer's patch，JPP）；另一種連續(xù)分布在回腸末端，稱為回腸Peyer 結(jié)（Ileum Peyer's patch，IPP）。IPP 和JPP 在發(fā)育時間、數(shù)量、位置、結(jié)構(gòu)及組織學(xué)特點(diǎn)上的差異見表2［43］。

表2 IPP和JPP的區(qū)別Tab.2 Differences between IPP and JPP

5.1 人 人類小腸中Peyer 結(jié)呈橢圓形，在腸系膜對側(cè)不規(guī)則分布，回腸末端數(shù)量最多，形成一個長條狀的淋巴集結(jié)。事實(shí)上，至少46%的Peyer 結(jié)集中在回腸末端25 cm 處。研究發(fā)現(xiàn)，在懷孕第14～16周時，可以明顯看到T、B細(xì)胞聚集；在第19周時，成熟為可以識別的Peyer 結(jié)；在第24 周時，Peyer 結(jié)肉眼可見。在懷孕30周之前，小腸內(nèi)平均含有60個Peyer 結(jié)，出生時小腸約有100 個Peyer 結(jié)，之后數(shù)量會逐漸增加，到青春期可增至225～300個，以后隨年齡增長，其數(shù)目又會逐漸減少，到90 歲時其數(shù)量減少至與出生時相近［44］。VAN KRUININGEN 等［45］指出，回腸Peyer 結(jié)在30 歲時面積達(dá)到最大。這些變化規(guī)律表明，人的Peyer 結(jié)在出生前就開始發(fā)育，在出生后逐漸成熟。此外，近年來臨床研究發(fā)現(xiàn)，腸道疾病的發(fā)生與Peyer 結(jié)功能密切相關(guān)，如克羅恩?。ㄒ环N消化道炎癥疾?。┍徽J(rèn)為與腸道Peyer 結(jié)有關(guān)，并且已經(jīng)證實(shí)Peyer 結(jié)數(shù)量隨著年齡的變化曲線與克羅恩病發(fā)病率曲線平行，這些結(jié)果支持了VAN KRUININGEN 等提出的Peyer 結(jié)發(fā)育與克羅恩病之間的時間關(guān)系［46］。最近的單細(xì)胞測序研究表明，克羅恩病患者受腸道富含與有組織淋巴結(jié)構(gòu)相關(guān)細(xì)胞類型的影響，包括HEV、Treg、天然T 細(xì)胞和記憶T細(xì)胞、天然B細(xì)胞和記憶B細(xì)胞［47］。

5.2 鼠 小鼠Peyer 結(jié)的發(fā)育源于間充質(zhì)VCAM-1+ICAM-1+細(xì)胞，在胚胎發(fā)育第15～16 天時，小鼠的第一個原始Peyer結(jié)出現(xiàn)［48］；在胚胎期的第16～17天IL-7Rα+，CD4+在VCAM-1+區(qū)域聚集，在出生前CD3+和B220+淋巴細(xì)胞成熟［49］；小鼠出生后，在抗原物質(zhì)的刺激和作用下，循環(huán)淋巴細(xì)胞被吸引到原始Peyer結(jié)內(nèi)，T細(xì)胞和B細(xì)胞分布到相應(yīng)的區(qū)域，完成Peyer結(jié)的最終發(fā)育［50］。小鼠的Peyer 結(jié)有8～10 個，隨機(jī)分布在空腸和回腸，兩者結(jié)構(gòu)、細(xì)胞亞型相似。HARA 等［51］研究表明，與無菌鼠相比，普通鼠Peyer結(jié)的B 細(xì)胞和CD4+T 細(xì)胞較多，而Peyer 結(jié)的數(shù)量以及大小差異不顯著。此外，SMINIA等［52］對大鼠Peyer結(jié)的研究顯示，與小鼠Peyer 結(jié)的發(fā)育相似，大鼠次級濾泡約在出生后18 d 形成，第一個Peyer 結(jié)的成熟約在出生后4 周形成。CHARLES 對大鼠Peyer 結(jié)基因表達(dá)結(jié)果表明，十二指腸Peyer 結(jié)基因表達(dá)明顯低于空腸、回腸，表明Peyer 結(jié)基因表達(dá)模式受腸道位置的影響，可能與Peyer 結(jié)在該腸段中的作用有關(guān)［53］。BAKER 等［54］對負(fù)鼠免疫系統(tǒng)的發(fā)育研究顯示，負(fù)鼠的腸道免疫系統(tǒng)發(fā)育較遲，在出生73 d后才能形成成熟的Peyer結(jié)。

5.3 豬 豬妊娠期第50 天起，胎兒空腸出現(xiàn)具有典型濾泡分布的淋巴細(xì)胞，隨后腸道內(nèi)淋巴濾泡逐漸增大，在妊娠第90～100 天，淋巴濾泡中出現(xiàn)了明顯的淋巴細(xì)胞聚集，直到出生后才出現(xiàn)皮質(zhì)-髓質(zhì)分離的結(jié)構(gòu)［55］。妊娠期第76天，回腸沒有明顯的淋巴聚集物，在妊娠期第76～91天加速形成淋巴聚集，妊娠期第110 天，出現(xiàn)明顯的濾泡區(qū)和濾泡間區(qū)［56］。CHU 等研究豬出生后Peyer 結(jié)發(fā)育情況發(fā)現(xiàn)，剛出生時空腸和回腸前端JPP 約有15 個，一個連續(xù)的IPP 位于回腸末端，隨著年齡增加，在外界抗原的刺激下，IPP 淋巴濾泡的數(shù)量和大小逐漸增加，增速較快，而JPP 僅淋巴濾泡的大小增加，且增速較慢［57］。IPP 和JPP 在出生后6 周內(nèi)增長很快，到18 月齡時，Peyer 結(jié)增長變緩；到48 月齡時，JPP 與之前差異不顯著，而IPP 幾乎已經(jīng)退化，只剩下散在的淋巴小結(jié)［58］。IPP 在快速發(fā)育過程中，淋巴濾泡變成長囊狀，濾泡間區(qū)和圓頂區(qū)變小，這與IPP 淋巴濾泡中大量的B 細(xì)胞和少量的T 細(xì)胞結(jié)果一致［59］。此外，出生前后Peyer結(jié)的位置、數(shù)量沒有變化，無新的Peyer結(jié)生成。這些結(jié)果說明，豬Peyer 結(jié)是在胚胎時期形成的，但發(fā)育成熟是在出生后逐步完成的。腸腔內(nèi)微生物對Peyer 結(jié)的發(fā)育起到非常重要的作用，普通豬和無菌豬腸道Peyer 結(jié)存在明顯差異。出生38 d后，普通豬JPP和IPP的長度和大小較剛出生時約增加3倍，無菌豬的JPP和IPP長度只增長2倍，而大小幾乎沒有變化［60］。普通豬和無菌豬Peyer 結(jié)的細(xì)胞成分也存在差異。MAREK SINKORA 等［61］比較45 日齡的無菌豬和普通豬的IPP 發(fā)現(xiàn)，普通豬IPP中最常見的淋巴細(xì)胞群體是B 細(xì)胞，占所有淋巴細(xì)胞的90%，主要表型為CD2-CD21+，無菌豬的B 細(xì)胞僅占所有淋巴細(xì)胞的10%，主要表型為CD2+CD21+，而γδ T 細(xì)胞所占比例很高。最近的研究表明，切除新生小豬的IPP以后，不會導(dǎo)致T細(xì)胞和B細(xì)胞及其亞群水平的變化，證明IPP 對豬全身性B 細(xì)胞發(fā)育和維持不是必需的，其功能還有待進(jìn)一步研究［61］。

5.4 羊 羊是目前Peyer 結(jié)研究最多的反芻動物。JPP 在妊娠期第60 天的小腸中可以被檢測到，妊娠期第75 天出現(xiàn)淋巴濾泡，妊娠期第100～132 天淋巴細(xì)胞在濾泡區(qū)明顯增殖；而IPP在妊娠期的第110天才檢測到，并在出生后40 天內(nèi)淋巴濾泡迅速增殖［62］。兩種類型Peyer 結(jié)中淋巴濾泡主要由IgM+B細(xì)胞組成，發(fā)現(xiàn)極少CD3+T 細(xì)胞和IgG+B 細(xì)胞。妊娠期成熟濾泡由四個區(qū)域構(gòu)成，即圓頂區(qū)、生發(fā)中心、冠區(qū)和濾泡間區(qū)，淋巴小結(jié)這四個區(qū)域的形成是Peyer 結(jié)發(fā)育成熟的標(biāo)志［63］。妊娠期最后1個月，JPP和IPP在組織學(xué)上成熟，在此期間淋巴濾泡的大小增加，但數(shù)量不變，空腸和回腸近端有25～40個散在的JPP，回腸末端存在一個長約2 m 的連續(xù)IPP。出生前10 d，Peyer結(jié)組織重約20 g；在出生后3～7周，Peyer結(jié)組織重約120 g；出生6周后，Peyer結(jié)組織重約為體重的1.2%。出生后第12周開始，IPP 開始退化，到18月齡時，幾乎完全退化，剩下幾個散在的淋巴小結(jié)；而JPP 仍然存在，并不斷產(chǎn)生淋巴細(xì)胞，發(fā)揮黏膜免疫作用［64］。剛出生時JPP 和IPP 的細(xì)胞亞群相似，但不久后就會產(chǎn)生差異［65］。與JPP 相比，IPP 有更多表達(dá)MHC Ⅱ的淋巴細(xì)胞［66］。另有研究表明，在懷孕期間沒有抗原刺激的情況下，羊IPP 的淋巴小結(jié)內(nèi)會形成許多B 細(xì)胞，而產(chǎn)前切除IPP 會導(dǎo)致產(chǎn)后B細(xì)胞明顯減少［67］。這些研究表明，羊IPP具有產(chǎn)生B細(xì)胞的功能，發(fā)揮初級免疫器官作用。

5.5 牛 關(guān)于牛Peyer 結(jié)發(fā)育相關(guān)的研究較少。在妊娠期第5 個月可以觀察到JPP，在妊娠期第6～7 個月才能觀察到IPP，JPP 的數(shù)量在妊娠期不斷增加，到妊娠期晚期數(shù)量可達(dá)76 個［68］。CARLENS［69］研究發(fā)現(xiàn)，有24～49 個JPP 在妊娠期出現(xiàn)，并持續(xù)整個生命周期。IPP 長度在出生后顯著增加，一般從85 cm 增加到185 cm，最高可達(dá)到3 m，之后隨著年齡增加逐漸退化，并被一些結(jié)締組織所取代。一般來說，3 月齡的犢牛小腸淋巴組織的8.6%被Peyer結(jié)所覆蓋，JPP 約占1/3，IPP 約占2/3［70］。妊娠期到出生后20 d內(nèi)，JPP和IPP中淋巴細(xì)胞亞群沒有明顯差異。從出生后1 個月，CD3+T 細(xì)胞，IgG+、IgA+B 細(xì)胞在JPP濾泡中表達(dá)，在IPP中很少表達(dá)。根據(jù)組織學(xué)的結(jié)構(gòu)，將IPP 和JPP 的濾泡發(fā)育分為四個階段：①可以識別出以胎兒期的濾泡區(qū)、濾泡間區(qū)和圓頂區(qū)為特征的Peyer結(jié)，在這個階段，IPP初級B細(xì)胞庫以寡克隆方式進(jìn)行擴(kuò)增；②可以通過單克隆抗體檢測到許多含IgG+B 細(xì)胞的Peyer 結(jié)；③JPP 中發(fā)現(xiàn)較多的CD3+T 細(xì)胞，而IPP 中很少；④IPP 在性成熟后逐漸退化，JPP仍然存在［71］。

5.6 雞 雞的Peyer 結(jié)位于回腸中段的黏膜內(nèi)側(cè)面，呈粉紅色圓斑。研究表明，在孵化后的第1 天，肉眼無法在雞腸道中觀察到Peyer 結(jié)，但在顯微鏡下可觀察到Peyer 結(jié)的一些淋巴細(xì)胞。出殼10 d后，可在雞腸道內(nèi)檢出1～2個Peyer結(jié)，且Peyer結(jié)的大部分特征已經(jīng)可以識別。隨后，Peyer結(jié)的大小一直增加，12 周齡時，Peyer 結(jié)發(fā)育成熟，16 周齡時，Peyer 結(jié)的數(shù)量為6 個，達(dá)到峰值。隨著日齡增加，雞腸道Peyer 結(jié)數(shù)量會逐漸減少，52～58 周齡的老齡雞腸道內(nèi)僅在靠近回盲口處檢測到1個Peyer 結(jié)［72］。除了Peyer 結(jié)，雞的腸集合淋巴結(jié)還包括盲腸扁桃體（cecal tonsil，CT），CT 發(fā)育較遲，5 周齡發(fā)育才成熟。成熟的CT 結(jié)構(gòu)類似Peyer 結(jié)，由密集的淋巴組織和彌散性淋巴組織組成［73］。

6 展望

腸道是動物營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收、微生物定植以及黏膜免疫發(fā)揮作用的共同場所。目前關(guān)于腸道黏膜免疫已取得一些研究進(jìn)展，但對于腸道免疫的主要誘導(dǎo)位點(diǎn)Peyer 結(jié)及其參與的黏膜免疫作用機(jī)制研究還不深入。在未來的研究中，利用單細(xì)胞測序技術(shù)從V（D）J 取用頻率、CDR3 長度、體細(xì)胞高頻突變等角度揭示Peyer結(jié)抗體庫的多樣性以及Peyer結(jié)細(xì)胞類型，有助于系統(tǒng)闡釋Peyer 結(jié)參與的黏膜免疫機(jī)制；另外，Peyer 結(jié)介導(dǎo)的黏膜免疫在物種間存在差異，闡釋黏膜免疫在物種間的保守機(jī)制，有利于從進(jìn)化角度理解黏膜免疫系統(tǒng)的形成，為后續(xù)深入研究Peyer 結(jié)介導(dǎo)的黏膜免疫提供基礎(chǔ)資料，同時也為人類腸道相關(guān)疾病的防治開拓新的思路。