miRNA-27a 對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺結(jié)核大鼠免疫功能的調(diào)控作用及其機(jī)制

韓 娜, 劉凡平, 田彥卿, 鄭志清, 郎偉明, 王 倩, 劉亞濤, 朱建光

（1.河北大學(xué)附屬醫(yī)院結(jié)核科，河北 保定 071000；2.中國(guó)人民解放軍陸軍第八十二集團(tuán)軍醫(yī)院耳鼻喉科，河北 保定 071000）

肺結(jié)核是因結(jié)核分枝桿菌（結(jié)核桿菌） 感染引起的一種慢性傳染病，其傳染性強(qiáng)、傳播速度快且范圍廣，患者常出現(xiàn)咳嗽、胸痛、肢體乏力和免疫力低下等臨床癥狀，嚴(yán)重時(shí)還會(huì)累及其他器官，嚴(yán)重威脅患者的生命健康［1］。目前對(duì)肺結(jié)核的臨床治療以化學(xué)治療和藥物干預(yù)為主，但在治療過(guò)程中常出現(xiàn)化學(xué)治療方案不合理、藥物劑量不足或用藥不規(guī)律等問(wèn)題，導(dǎo)致結(jié)核桿菌獲得耐藥性，影響治療效果［2］。因此，從分子生物學(xué)角度尋找治療肺結(jié)核的有效靶點(diǎn)迫在眉睫。研究［3-5］表明： Toll 樣受體4 （Toll-like receptor 4，TLR4） /核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB） 信號(hào)通路活化后，通過(guò)介導(dǎo)炎癥因子釋放，破壞機(jī)體免疫應(yīng)答，參與肺結(jié)核的發(fā)病過(guò)程。微小RNA （microRNA，miRNA） 是一類由內(nèi)源基因編碼的長(zhǎng)度約為22 個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA 分子，其中miR-27a 可通過(guò)降低TLR4 表達(dá)，抑制脂多糖誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子的產(chǎn)生［6］。同時(shí)JU 等［7］研究發(fā)現(xiàn)：miR-27a 可通過(guò)阻斷TLR4/髓樣分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88） /NF-κB通路，減輕急性肺損傷小鼠的機(jī)體炎癥反應(yīng)，減少細(xì)胞凋亡。推測(cè)miR-27a 可能會(huì)通過(guò)調(diào)控TLR4/NF- κB 信號(hào)通路改善肺結(jié)核大鼠肺損傷，但miR-27a 對(duì)肺結(jié)核的具體作用機(jī)制目前鮮有報(bào)道。本研究通過(guò)建立肺結(jié)核大鼠模型，探討miR-27a 對(duì)肺結(jié)核大鼠免疫功能的影響及其可能機(jī)制，以期為肺結(jié)核的臨床治療提供有效的治療靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、菌株、主要試劑和儀器SPF 級(jí)雄性SD 大鼠48 只，6 周齡，體質(zhì)量200～250 g，購(gòu)自北京生命科學(xué)研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)： SCXK （京） 2019-0002。大鼠于室溫22 ℃～24 ℃和相對(duì)濕度50%～70% 環(huán)境下飼養(yǎng)，定時(shí)更換墊料，自由飲水?dāng)z食。結(jié)核桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37RV 購(gòu)自美國(guó)ATCC 公司，采用幾何稀釋法對(duì)結(jié)核桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37RV 菌液進(jìn)行稀釋，于培養(yǎng)皿內(nèi)用羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)H37RV，待菌落生長(zhǎng)良好，加入0.5% Tween 80 輕輕搖動(dòng)，與無(wú)菌生理鹽水混合后，使用菌液濃度標(biāo)準(zhǔn)比濁管比濁，配制成濃度為5 g·L－1的結(jié)核桿菌懸液。miR-27a 激動(dòng)劑（miR-27a agomir） 和激動(dòng)劑對(duì)照（agomir-NC） 購(gòu)自蘇州吉瑪基因股份有限公司，TLR4、NF-κB 抑制蛋白α （inhibitor α of NF- κB ，IκB α）、 磷酸化IκB （p-IκB，Ser32/36）、 NF- κB p65、 β -actin 及CD3、 CD4 和CD8 抗體均購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司，HE 染色試劑盒和BCA 試劑盒購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，大鼠白細(xì)胞介素1β （interleukin-1β，IL-1β）、白細(xì)胞介素6 （interleukin-1，IL-6） 和腫瘤壞死因子α （tumor necrosis factor-α，TNF-α） 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA） 試劑盒購(gòu)自武漢賽培生物科技有限公司，GenEluteTM總RNA 純化試劑盒購(gòu)自德國(guó)默克公司，RNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒和SYBR Premix Ex Taq 試劑盒購(gòu)自日本TaKaRa 公司。CytoFLEX 流式細(xì)胞儀和DTX 880/800 多功能酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司，Veriti 7500 實(shí)時(shí)熒光定量PCR （real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR） 儀購(gòu)自美國(guó)Applied Biosystems 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制備和分組按照參考文獻(xiàn)［8］ 中的方法，經(jīng)大鼠尾靜脈注射200 μL 結(jié)核桿菌懸液（5 g·L－1） 建立肺結(jié)核大鼠模型，血液檢查及結(jié)核菌素試驗(yàn)確認(rèn)造模成功后進(jìn)行分組，剔除尾部蒼白腫脹或局部壞死大鼠。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、agomir-NC 組和agomir 組，另取正常大鼠設(shè)為對(duì)照組，每組12 只。agomir-NC 組和agomir 組大鼠分別經(jīng)尾靜脈注射25 mg·kg－1的agomir-NC 或miR-27a agomir 干預(yù)，對(duì)照組和模型組大鼠注射等量溶劑，每天1 次，連續(xù)5 d，3 周后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3 各組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)計(jì)算取各組大鼠脾臟和胸腺組織，剔除脂肪，經(jīng)PBS 緩沖液漂洗后濾紙吸干表面液體，于電子天平上精密測(cè)量，計(jì)算大鼠胸腺和脾臟指數(shù)。腺胸（脾臟） 指數(shù)=胸腺（脾臟） 質(zhì)量（mg） /大鼠體質(zhì)量（g）。

1.4 HE 染色觀察各組大鼠肺組織病理形態(tài)表現(xiàn)取各組大鼠肺組織，于4% 中性甲醛中固定24 h，酒精濃度由低至高對(duì)組織進(jìn)行脫水，二甲苯透明，隨后進(jìn)行石蠟包埋，并于切片機(jī)上作厚度為5 μm 的連續(xù)切片，脫蠟后蘇木精染色6 min，流水沖洗至返藍(lán)，隨后伊紅染色4 min，中性樹(shù)膠封片，于光學(xué)顯微鏡下觀察各組大鼠肺組織病理形態(tài)表現(xiàn)。

1.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組大鼠外周血中T 淋巴細(xì)胞亞群百分率取2 mL 全血于肝素鈉溶液中抗凝，分別加入CD3、CD4 和CD8 抗體混勻后室溫孵育20 min，然后加入溶血素繼續(xù)孵育20 min，于流式細(xì)胞儀下檢測(cè)大鼠外周血中T 淋巴細(xì)胞亞群中CD4+T 淋巴細(xì)胞（CD3+CD4+ 雙陽(yáng)性細(xì)胞亞群） 和CD8+T 淋巴細(xì)胞（CD3+CD8+雙陽(yáng)性細(xì)胞亞群） 絕對(duì)數(shù)，計(jì)算CD4+T 細(xì)胞和CD8+T 細(xì)胞百分率。

1.6 ELISA 法檢測(cè)各組大鼠肺組織中IL-1β 、IL-6 和TNF-α 水平取各組大鼠肺組織，加入適量生理鹽水勻漿，4 ℃、4 500 r·min－1離心10 min，取上清液，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求操作后，采用酶標(biāo)儀于波長(zhǎng)405 nm 處測(cè)定吸光度（A） 值，并計(jì)算大鼠肺組織中IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平。

1.7 RT-qPCR 法檢測(cè)各組大鼠肺組織中miR-27a表達(dá)水平取各組大鼠肺組織，采用RNA 提取試劑盒提取總RNA，并測(cè)定純度及濃度，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作，將RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用SYBR Premix Ex Taq 試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增體系包括cDNA 1 μL、 上下游引物各0.5 μL 和SYBR 10 μL，再用無(wú)RNA 酶水補(bǔ)足至20 μL。引物序列：miR-27a，上游引物5′-TTCACAGTGGCTAAGTTCCGC-3′，下游引物5′-GCGGAACTTAGCCACTGTGA-3′，21 bp； U6，上游引物5′-CTC GCTTCGGCAGCACA-3′，下游引物5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′，92 bp。反應(yīng)條件： 95 ℃預(yù)變性30 s，60 ℃退火30 s，60 ℃延伸30 s，40 個(gè)循環(huán)。以U6 為內(nèi)參，采用2－ΔΔCT法計(jì)算各組大鼠肺組織中miR-27a 表達(dá)水平。

1.8 Western blotting 法檢測(cè)大鼠肺組織中TLR4、IκB、p-IκB 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平取各組大鼠肺組織，加入RIPA 裂解液提取總蛋白，采用BCA 試劑盒進(jìn)行蛋白定量，取20 μg 總蛋白于10%聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE） 恒壓電泳，濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯（PVDF） 膜，隨后脫脂奶粉封閉1 h，加入一抗（TLR4、IκB、p-IκB、NF-κB p65 和β-actin 抗體，均以1∶1 000 稀釋） 稀釋液，4 ℃孵育過(guò)夜，加入二抗（1∶10 000 稀釋） 稀釋液，室溫孵育2 h，ECL 顯色后，采用Image J 進(jìn)行條帶分析，以β-actin 為內(nèi)參，計(jì)算大鼠肺組織中TLR4、 IκB、 p-IκB 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平。目的蛋白表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參蛋白條帶灰度值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組大鼠胸腺和脾臟指數(shù)，外周血中CD4+T 淋巴細(xì)胞和CD8+T 淋巴細(xì)胞百分率，肺組織中IL-1β、IL-6和TNF-α水平，肺組織中miR-27a表達(dá)水平和TLR4、IκB、p-IκB 及NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平，均符合正態(tài)分布，以x±s 表示。多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t法。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠胸腺和脾臟指數(shù)對(duì)照組、模型組、agomir-NC 組和agomir 組大鼠胸腺指數(shù)分別為（1.46±0.08）、（0.81±0.03）、（0.86±0.05） 和（1.50±0.02） mg·g－1，脾臟指數(shù)分別為（2.73±0.06）、（2.04±0.05）、（2.17±0.03） 和（2.76±0.05） mg·g－1，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與對(duì)照組比較，模型組大鼠胸腺和脾臟指數(shù)明顯降低（P＜0.05）； 與模型組比較，agomir 組大鼠胸腺和脾臟指數(shù)明顯升高（P＜0.05），agomir-NC 組大鼠胸腺和脾臟指數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 各組大鼠肺組織病理形態(tài)表現(xiàn)對(duì)照組大鼠肺組織中肺泡清晰可見(jiàn)，結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組和agomir-NC 組大鼠肺組織中肺泡變形，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，出現(xiàn)部分實(shí)變結(jié)節(jié)；agomir 組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)趨于正常，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和實(shí)變結(jié)節(jié)明顯改善。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠肺組織病理形態(tài)表現(xiàn)（HE，×200）Fig.1 Pathomorphology of lung tissue of rats in various groups(HE，×200)

2.3 各組大鼠肺組織中miR-27a 表達(dá)水平對(duì)照組、模型組、agomir-NC 組和agomir 組大鼠肺組織中miR-27a 表達(dá)水平分別為1.00±0.02、 0.43±0.04、 0.41±0.03 和6.98±0.24，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織中miR-27a 表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）； 與模型組比較，agomir 組大鼠肺組織中miR-27a 表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05），agomir-NC 組大鼠肺組織中miR-27a 表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.4 各組大鼠外周血中不同T 淋巴細(xì)胞亞群百分率對(duì)照組、模型組、agomir-NC 組和agomir 組大鼠外周血中CD4+T 淋巴細(xì)胞百分率分別為（35.29±5.23） %、（21.57±3.82） %、（23.01±4.29） % 和（32.92±3.66） %，CD8+T 淋巴細(xì)胞百分率分別為（22.04±3.16） % 、（45.52±6.30）%、（44.17±5.48）%和（26.09±4.15）%，各組大鼠外周血中不同T 淋巴細(xì)胞百分率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與對(duì)照組比較，模型組大鼠外周血中CD4+T 淋巴細(xì)胞百分率明顯降低（P＜0.05），CD8+T 淋巴細(xì)胞百分率明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，agomir 組大鼠外周血中CD4+T 淋巴細(xì)胞百分率明顯升高（P＜0.05），CD8+T 淋巴細(xì)胞百分率明顯降低（P＜0.05），agomir-NC 組大鼠外周血中不同T 淋巴細(xì)胞百分率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.5 各組大鼠肺組織中IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平與對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織中IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，agomir 組大鼠肺組織中IL-1β、 IL-6 和TNF-α 水平明顯降低（P＜0.05），agomir-NC 組大鼠肺組織中IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠肺組織中IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平Tab.1 Levels of IL-1β, IL-6 and TNF-α in lung tissue of rats in various groups (n=12，±s，ρB/(ng·L-1)]

表1 各組大鼠肺組織中IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平Tab.1 Levels of IL-1β, IL-6 and TNF-α in lung tissue of rats in various groups (n=12，±s，ρB/(ng·L-1)]

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with model group.

G r o u p C o n t r o l M o d e l A g o m i r-N C A g o m i r I L-1 β 3 7.5 2±5.0 7 1 0 9.3 3±1 4.6 5*1 0 4.5 8±1 1.4 2 5 0.9 2±9.1 7△I L-6 2 9.0 4±4.3 6 7 4.3 5±1 1.0 5*7 2.6 0±9.2 8 4 1.4 2±7.3 1△T N F-α 8 3.7 7±6.4 5 1 6 8.1 3±1 3.3 0*1 7 1.4 9±1 2.4 9 9 6.8 2±9.3 6△

2.6 各組大鼠肺組織中TLR4/NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織中TLR4、p-IκB 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05），IκB 蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，agomir 組大鼠肺組織中TLR4、p-IκB 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），IκB 蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05），agomir-NC 組大鼠肺組織中上述各蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)圖2和表2。

圖2 各組大鼠肺組織中TLR4、IκB、p-IκB 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)電泳圖Fig.2 Electrophoregram of expressions of TLR4,IκB, p-IκB and NF- κB p65 proteins in lung tissue of rats in various groups

表2 各組大鼠肺組織中TLR4/NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平Tab.2 Expression levels of TLR4/NF- κB signaling pathway related proteins in lung tissue of rats in various groups(n=12，±s）

表2 各組大鼠肺組織中TLR4/NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平Tab.2 Expression levels of TLR4/NF- κB signaling pathway related proteins in lung tissue of rats in various groups(n=12，±s）

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with model group.

G r o u p C o n t r o l M o d e l A g o m i r-N C A g o m i r T L R 4 0.1 2±0.0 3 0.7 4±0.0 8*0.7 7±0.0 6 0.4 3±0.0 4△p-I κ B 0.0 5±0.0 1 0.8 3±0.0 4*0.8 5±0.0 3 0.2 8±0.0 2△I κ B 0.5 8±0.0 2 0.1 8±0.0 2*0.1 5±0.0 1 0.6 1±0.0 3△N F-κ B p 6 5 0.1 1±0.0 6 0.6 7±0.0 2*0.7 1±0.0 2 0.3 2±0.0 3△

3 討 論

肺結(jié)核是一種免疫性疾病，機(jī)體免疫水平的高低是影響其發(fā)病率的重要因素之一，人體靠固有免疫和適應(yīng)性免疫抵抗結(jié)核桿菌的侵襲［9］。在結(jié)核桿菌刺激下，大量炎癥因子釋放，導(dǎo)致機(jī)體損傷加重，部分細(xì)胞因子通過(guò)免疫調(diào)節(jié)和抑制炎癥反應(yīng)發(fā)揮作用，改善肺結(jié)核導(dǎo)致的組織損傷［10］。miRNA因相對(duì)分子質(zhì)量較小，可通過(guò)結(jié)合靶基因的3′非翻譯區(qū)調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，部分miRNA 在代謝和免疫調(diào)節(jié)方面發(fā)揮重要作用，同時(shí)參與結(jié)核病中的結(jié)核桿菌調(diào)控［11-12］。LIU 等［13］研究發(fā)現(xiàn)：miR-27a 在結(jié)核病患者體內(nèi)高表達(dá)，同時(shí)miR-27a可通過(guò)靶向調(diào)節(jié)鈣離子（Ca2+） 相關(guān)自噬，控制結(jié)核桿菌在細(xì)胞內(nèi)的生存。然而，關(guān)于miR-27a 對(duì)肺結(jié)核的機(jī)體免疫調(diào)節(jié)能力和對(duì)組織的保護(hù)作用及其機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)miR-27a agomir 干預(yù)肺結(jié)核模型大鼠，RT-qPCR 檢測(cè)結(jié)果顯示： 經(jīng)miR-27a agomir 干預(yù)后，大鼠肺組織中miR-27a 表達(dá)水平明顯升高。

以T 淋巴細(xì)胞為主、其他細(xì)胞因子為輔參與的免疫應(yīng)答，在肺結(jié)核的發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，其中CD4+T 淋巴細(xì)胞在肺結(jié)核患者體內(nèi)表達(dá)水平較非結(jié)核人群明顯降低，其通過(guò)激活巨噬細(xì)胞對(duì)抗結(jié)核桿菌的生長(zhǎng)［14］。CD8+T 淋巴細(xì)胞被稱為細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞，可識(shí)別被感染的吞噬細(xì)胞，通過(guò)生成穿孔素，使細(xì)胞內(nèi)的結(jié)核桿菌被附近的巨噬細(xì)胞吞噬［15］。CD4+T 淋巴細(xì)胞通過(guò)識(shí)別細(xì)胞外感染促進(jìn)細(xì)胞免疫，CD8+T 淋巴細(xì)胞通過(guò)識(shí)別細(xì)胞內(nèi)感染抑制結(jié)核桿菌繁殖，共同維持著機(jī)體的免疫水平穩(wěn)定。同時(shí)，胸腺和脾臟作為人體內(nèi)的重要免疫器官，其指數(shù)高低反映機(jī)體的免疫水平［16］。本研究結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組大鼠胸腺和脾臟指數(shù)及外周血中CD4+T 淋巴細(xì)胞百分率明顯降低，CD8+T 淋巴細(xì)胞百分率明顯升高，說(shuō)明肺結(jié)核大鼠免疫水平降低，結(jié)核桿菌大量繁殖導(dǎo)致CD8+T 淋巴細(xì)胞聚集；經(jīng)miR-27a agomir 干預(yù)后，大鼠胸腺和脾臟指數(shù)及外周血中CD4+T 淋巴細(xì)胞百分率明顯升高，CD8+T 淋巴細(xì)胞百分率明顯降低，說(shuō)明過(guò)表達(dá)miR-27a 可通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答，改善肺結(jié)核大鼠機(jī)體免疫水平。

Toll 樣受體（Toll-like receptor，TLR） 是連接非特異性免疫和特異性免疫的重要蛋白分子，參與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和潰瘍性結(jié)腸炎等免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展［17-18］。其中TLR4 位于NF-κB 信號(hào)通路的上游，可通過(guò)激活下游的NF-κB 促進(jìn)IL-1β、IL-6和TNF-α 等炎癥因子釋放，加重機(jī)體炎癥損傷［19］。有研究［20-21］表明： miR-27a 可通過(guò)抑制TLR4 表達(dá)，減輕腎缺血再灌注和脊髓損傷過(guò)程中的炎癥反應(yīng)。推測(cè)miR-27a 可能通過(guò)靶向沉默TLR4 基因表達(dá)，抑制TLR4/NF-κB 信號(hào)通路活化，從而減輕肺結(jié)核導(dǎo)致的肺組織炎癥損傷。NF-κB 由p50 和p65 2 個(gè)亞基組成，存在于機(jī)體內(nèi)的多種細(xì)胞中，在炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答中起關(guān)鍵作用。正常生理狀態(tài)下，NF-κB 與其抑制蛋白IκB 結(jié)合，以非活性形式存在于胞漿中，當(dāng)受到外界細(xì)胞因子刺激時(shí)IκB被磷酸化，與活化的p50/p65 異源二聚體分離，發(fā)生核移位，p50/p65 異源二聚體進(jìn)入細(xì)胞核后引起相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄，從而導(dǎo)致炎癥因子的釋放［22］。本研究結(jié)果顯示：模型組大鼠肺組織損傷嚴(yán)重，肺組織中IL-1β、 IL-6、 TNF- α 水平和TLR4、 p-IκB、NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平明顯升高，而IκB 蛋白表達(dá)水平明顯降低，標(biāo)志著TLR4/NF-κB 信號(hào)通路的激活導(dǎo)致了肺組織中炎癥因子的釋放；經(jīng)miR-27a agomir 干預(yù)后，大鼠肺組織損傷得到明顯改善，肺組織中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平和TLR4、p-IκB、NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平明顯降低，而IκB蛋白表達(dá)水平明顯升高，說(shuō)明過(guò)表達(dá)miR-27a 可通過(guò)抑制TLR4/NF-κB 信號(hào)通路活化，減少炎癥因子釋放，改善肺結(jié)核大鼠肺組織損傷。

綜上所述，過(guò)表達(dá)miR-27a 可保護(hù)肺結(jié)核大鼠肺組織，減輕肺組織損傷，其機(jī)制是通過(guò)抑制TLR4/NF-κB 信號(hào)通路，減少炎癥因子釋放，同時(shí)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的，本研究結(jié)果為肺結(jié)核臨床治療的靶向藥物研究提供了依據(jù)。