麗江瑪咖和秘魯瑪咖功效和安全性對(duì)比研究

吳德松，張夢麒，趙道強(qiáng)，柴琇瑛，顏 宏，彭玲芳，崔 濤

（1. 云南省藥物研究所，云南 昆明 650111；2. 云南省中藥和民族藥新藥創(chuàng)制企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650111）

瑪咖（Lepidium meyeniiWalp.）為十字花科獨(dú)行菜屬一年或兩年生草本植物，原產(chǎn)于秘魯海拔3 500米以上的安第斯山區(qū)[1]?，斂鹘y(tǒng)上作為食物和草藥用于增強(qiáng)精力、抗疲勞、改善性功能、提高生育力和治療女性更年期綜合征等[2]?；瘜W(xué)成分研究結(jié)果顯示：瑪咖的特征性活性成分為瑪咖酰胺和瑪咖烯，除此之外還含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、微量元素、礦物質(zhì)等多種營養(yǎng)物質(zhì)，以及多糖、生物堿、揮發(fā)油等成分，它們共同構(gòu)成了瑪咖保健和藥用活性的物質(zhì)基礎(chǔ)[3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，瑪咖具有提高性能力及精子數(shù)量，抗應(yīng)激，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、增強(qiáng)免疫、抗腫瘤、預(yù)防前列腺肥大、抗骨質(zhì)疏松及增強(qiáng)營養(yǎng)等活性[4]，具有較高的研究和開發(fā)價(jià)值。

瑪咖適合生長在晝夜溫差大、陽光充足、缺氧、缺肥料、海拔3 500米左右的高海拔地區(qū)，云南麗江地區(qū)因海拔和地理環(huán)境與秘魯相似，瑪咖的引種種植已獲得成功，并形成大規(guī)模種植基地[5]。但是，由于云南麗江和秘魯?shù)耐寥赖V物質(zhì)、微生物環(huán)境、日照強(qiáng)度、晝夜溫差和大氣狀態(tài)等自然條件存在一定的差異，所栽培出的瑪咖在成分上可能會(huì)有所不同。孫曉東等[6]的研究顯示：麗江瑪咖和秘魯瑪咖在營養(yǎng)組成和含量上基本相似，但麗江瑪咖片在脂肪、鐵元素含量上明顯低于秘魯瑪咖，而在精氨酸含量和不飽和脂肪酸相對(duì)含量上高于秘魯瑪咖片。張愷驊[7]的研究表明：秘魯瑪咖的蛋白質(zhì)、氨基酸含量低于國內(nèi)引種瑪咖，瑪咖酰胺含量低于云南產(chǎn)瑪咖。物質(zhì)基礎(chǔ)的改變可能會(huì)導(dǎo)致瑪咖的有效性和安全性發(fā)生變化，為了闡明麗江瑪咖與秘魯瑪咖在藥效學(xué)和安全性上的差異，本研究根據(jù)瑪咖的傳統(tǒng)功效，從緩解體力疲勞和改善性功能方面對(duì)麗江瑪咖和秘魯瑪咖進(jìn)行活性對(duì)比研究，并初步評(píng)價(jià)其安全性，為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

麗江瑪咖和秘魯瑪咖干粉（批號(hào) 150520）：云南省藥物研究所天然藥物化學(xué)研究室。制備方法：取瑪咖塊根，切片、干燥、粉碎后過200目篩，常溫密封干燥保存。

肝/肌糖原測定試劑盒（比色法）（批號(hào)20190121），尿素氮（BUN）測試盒（二乙酰肟比色法）（批號(hào)20190114）：南京建成生物工程研究所；丙酸睪酮注射液（批號(hào)1202061）：天津金耀氨基酸有限公司；苯甲酸雌二醇注射液（批號(hào)070512），2 mg/mL：自制；黃體酮注射液（批號(hào)101010）：浙江仙琚制藥股份有限公司。

SPF級(jí)KM小鼠，體重18～22 g：遼寧長生生物技術(shù)有限公司（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（遼）2015-0001）；本研究試驗(yàn)動(dòng)物使用許可證：SYXK（滇）K2017-0004（發(fā)證單位昆明市科技局）。

1.2 儀器與設(shè)備

SQP型電子分析天平：賽多利斯（北京）科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)；JJ-2000型電子天平：江蘇常熟市雙杰測試儀器廠；W-201型恒溫水浴鍋：上海申順生物科技有限公司生產(chǎn)；X201型光學(xué)顯微鏡：南京江南光電集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)；Multiskan GO型全波長酶標(biāo)儀：Thermo公司生產(chǎn)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 麗江瑪咖和秘魯瑪咖緩解體力疲勞功能對(duì)比研究

1.3.1.1 對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響 參照文獻(xiàn)方法[8]，取SPF級(jí)KM小鼠48只，隨機(jī)分為空白組、秘魯瑪咖4.0 g/kg、麗江瑪咖2.0 g/kg和4.0 g/kg劑量組，每組 12只。麗江瑪咖和秘魯瑪咖均以20 mL/kg給藥體積灌胃給藥，空白組給予等體積純水，1次/d，連續(xù) 30 d。末次給予受試樣品后30 min，將尾根部負(fù)荷5%體重鉛條的小鼠置于游泳箱中游泳（水溫(25±1) ℃，水深不低于30 cm）。記錄小鼠自游泳開始至死亡的時(shí)間（min），即小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.3.1.2 對(duì)小鼠肝糖原水平的影響 參照文獻(xiàn)方法[8]，取SPF級(jí)KM小鼠48只，動(dòng)物分組、給藥途徑、給藥劑量和給藥頻次均同前所述。末次給予受試樣品30 min處死小鼠，取肝臟經(jīng)生理鹽水漂洗后用濾紙吸干，精確稱取肝臟（75.0±1.0） mg，參照肝/肌糖原檢測試劑盒說明書測定肝糖原的含量，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.3.1.3 對(duì)小鼠血清尿素氮水平的影響 參照文獻(xiàn)方法[8]，取SPF級(jí)KM小鼠48只，動(dòng)物分組、給藥途徑、給藥劑量和給藥頻次均同前所述。末次給予受試樣品30 min后，小鼠置于30 ℃水中不負(fù)重游泳90 min。休息60 min后摘除眼球取血。全血置于4 ℃冰箱中3 h，待血液凝固后2 000 r/min離心15 min分離血清，參照尿素氮（BUN）檢測試劑盒說明書，測定小鼠血清尿素氮水平，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.3.2 麗江瑪咖和秘魯瑪咖改善性功能作用對(duì)比研究

1.3.2.1 對(duì)小鼠交配能力的影響 取性成熟的KM 雄鼠 60只，隨機(jī)分為空白組、丙酸睪丸酮0.01 g/kg、秘魯瑪咖4.0 g/kg、麗江瑪咖2.0 g/kg和4.0 g/kg劑量組，每組12只。其中丙酸睪丸酮組以0.4 mL/kg給藥體積肌肉注射給藥，1次/2 d；麗江瑪咖和秘魯瑪咖均以 20 mL/kg給藥體積灌胃給藥，空白組給予等體積純水，1次/d，連續(xù)30 d。給藥期間每10 d觀察動(dòng)物交配能力1次，于觀察前 48 h雌鼠皮下注射苯甲酸雌二醇0.04 mg/只，觀察前4 h雌鼠皮下注射黃體酮注射液0.2 mg/只，使雌鼠動(dòng)情期相同[9-10]。觀察于晚上7～11時(shí)進(jìn)行，將雄鼠單獨(dú)放入籠中適應(yīng)5 min后每籠放入1只雌鼠，計(jì)時(shí)觀察雄鼠捕捉潛伏期（自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的時(shí)間）、20 min內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠的次數(shù)、交配潛伏期（自雌鼠投入至雄鼠第1次與雌鼠交配的時(shí)間）、20 min內(nèi)交配次數(shù)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.3.2.2 對(duì)小鼠精子數(shù)量、精子活率的影響 參考文獻(xiàn)[11-12]方法，將盛有4 mL生理鹽水的小燒杯置于恒溫水浴箱內(nèi)預(yù)熱至 37 ℃。取給藥結(jié)束后小鼠頸椎脫臼處死，快速剖取小鼠雙側(cè)附睪，剔除周圍脂肪組織，將附睪放入預(yù)熱的燒杯中減碎，搖勻，37 ℃孵育 15 min，使精子充分游離。取10 μL精子混懸液，用生理鹽水 200倍稀釋后滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，顯微鏡下計(jì)數(shù)1個(gè)大方格內(nèi)精子數(shù)（n），每毫升精子數(shù)為n×稀釋倍數(shù)×104，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另取1份精子涂片，顯微鏡下計(jì)數(shù)有活動(dòng)力及無活動(dòng)力的精子數(shù)（至少計(jì)數(shù)200個(gè)精子），按下列公式計(jì)算精子活率（%）。

1.3.2.3 對(duì)小鼠性腺器官指數(shù)的影響 參考文獻(xiàn)[13]方法，剖取上述小鼠睪丸、包皮腺和精囊稱重，按下列公式計(jì)算性腺器官指數(shù)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.3.3 小鼠急性毒性試驗(yàn)

由于瑪咖為南美洲傳統(tǒng)食物，安全性較高，因此我們將采用最大給藥量法進(jìn)行試驗(yàn)。首先進(jìn)行最大給藥濃度摸索，分別稱取麗江瑪咖和秘魯瑪咖樣品，加適量純水充分研磨均勻，配制成剛好能通過小鼠灌胃針的混懸液最大濃度為0.437 g/mL；為了充分暴露樣品的毒性，灌胃體積設(shè)定為40 mL/kg，由此折算小鼠的給藥劑量為17.48 g/kg。

參考文獻(xiàn)[14-15]方法，取KM小鼠60只，隨機(jī)分為空白組、麗江瑪咖17.48 g/kg劑量組和秘魯瑪咖17.48 g/kg劑量組，每組20只，雌雄各半。禁食不禁水6 h后，各組均以40 mL/kg灌胃給予相應(yīng)樣品。給藥當(dāng)天連續(xù)4 h觀察并記錄動(dòng)物出現(xiàn)的各種毒性反應(yīng)、癥狀和死亡情況；以后每天觀察1次，連續(xù)觀察14 d。主要觀察動(dòng)物飲食、外觀、行為活動(dòng)、分泌物、排泄物等是否異常、死亡情況、中毒反應(yīng)癥狀及其起始時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間、是否可逆及恢復(fù)時(shí)間等。分別于給藥前、給藥后第3、7和14 d對(duì)存活動(dòng)物稱重，觀察動(dòng)物體重變化情況，并對(duì)體重結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。觀察期14 d結(jié)束后處死動(dòng)物，大體解剖觀察各組動(dòng)物臟器、器官的體積、顏色、質(zhì)地等有無明顯異常。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用 SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以±SD表示，數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)滿足正態(tài)分布和方差齊同后作單因素方差分析，組間差異用LSD法比較，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 麗江瑪咖和秘魯瑪咖緩解體力疲勞作用對(duì)比研究

麗江瑪咖和秘魯瑪咖對(duì)小鼠游泳時(shí)間、肝糖原和血清尿素氮水平的影響結(jié)果見表1。結(jié)果顯示：與空白組比較，麗江瑪咖和秘魯瑪咖均可明顯提升小鼠負(fù)重游泳時(shí)間（P＜0.05或P＜0.01），提升肝組織糖原水平（P＜0.05），降低小鼠血清尿素氮水平（P＜0.05或P＜0.01）；與秘魯瑪咖比較，麗江瑪咖的活性無明顯差異（P＞0.05）。

表1 麗江瑪咖和秘魯瑪咖緩解體力疲勞對(duì)比表（±SD，n=12）Table 1 Effects of Lijiang maca and Peru maca on swimming time, liver glycogen and Serum urea nitrogen in mice (±SD, n=12)

表1 麗江瑪咖和秘魯瑪咖緩解體力疲勞對(duì)比表（±SD，n=12）Table 1 Effects of Lijiang maca and Peru maca on swimming time, liver glycogen and Serum urea nitrogen in mice (±SD, n=12)

與空白組比較：*P＜0.05，**P＜0.01；與秘魯瑪咖組比較：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。Compared with the control group, *P＜0.05, **P＜0.01; compared with the Peru maca group, ΔP＜0.05, ΔΔP＜0.01.

組別 劑量/（g/kg） 負(fù)重游泳時(shí)間/min 肝糖原/（mg/g肝組織） 尿素氮/（pmol/L）空白組 - 27.05±19.04 11.58±5.03 756.59±82.12秘魯瑪咖 4.0 46.96±15.98* 16.55±6.25* 659.56±59.93**2.0 35.97±14.59 17.92±7.60* 700.74±45.15麗江瑪咖 4.0 45.12±7.50** 17.64±7.06* 676.32±79.96*

2.2 麗江瑪咖和秘魯瑪咖改善性功能作用對(duì)比研究

麗江瑪咖和秘魯瑪咖對(duì)小鼠捕捉潛伏期、捕捉次數(shù)、交配潛伏期和交配次數(shù)的對(duì)比研究見表2～4。結(jié)果顯示：與空白組比較，在各檢測時(shí)間點(diǎn)秘魯瑪咖4.0 g/kg劑量對(duì)小鼠交配能力均具有明顯的提升作用（P＜0.05），麗江瑪咖4.0 g/kg劑量連續(xù)給藥 20和 30 d可明顯提升小鼠交配能力（P＜0.05或P＜0.01）。與秘魯瑪咖組比較，麗江瑪咖組小鼠捕捉潛伏期、捕捉次數(shù)、交配潛伏期和交配次數(shù)均無明顯改變（P＞0.05）。

表2 受試樣品給藥10 d對(duì)小鼠交配能力的影響（±SD，n=12）Table 2 Effect of samples administration for 10 days on the mating ability of mice (±SD, n=12)

表2 受試樣品給藥10 d對(duì)小鼠交配能力的影響（±SD，n=12）Table 2 Effect of samples administration for 10 days on the mating ability of mice (±SD, n=12)

與空白組比較：*P＜0.05，**P＜0.01；與秘魯瑪咖組比較：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。Compared with the control group, *P＜0.05，**P＜0.01; compared with the Peru maca group, ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01.

組別 劑量/（g/kg） 捕捉潛伏期/s 捕捉數(shù)/次 交配潛伏期/s 交配數(shù)/次空白組 - 381.67±162.64 6.92±3.70 895.08±358.90 2.08±1.78丙酸睪酮組 0.01 216.67±150.72* 10.42±4.08* 658.07±253.73 7.25±6.27*秘魯瑪咖 4.0 247.17±93.88* 11.75±4.79* 801.33±412.72 3.83±2.86 2.0 317.75±183.97 8.68±3.37 868.92±310.34 2.92±3.12麗江瑪咖 4.0 325.25±143.44 9.25±5.63 850.25±360.26 4.00±3.05

表3 受試樣品給藥20d對(duì)小鼠交配能力的影響（±SD，n=12）Table 3 Effect of samples administration for 20 days on the mating ability of mice (±SD, n=12)

表3 受試樣品給藥20d對(duì)小鼠交配能力的影響（±SD，n=12）Table 3 Effect of samples administration for 20 days on the mating ability of mice (±SD, n=12)

與空白組比較：*P＜0.05，**P＜0.01；與秘魯瑪咖組比較：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。Compared with the control group, *P＜0.05，**P＜0.01; compared with the Peru maca group, ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01.

組別 劑量/（g/kg） 捕捉潛伏期/s/ 捕捉數(shù)/次空白組 - 283.33±141.67 6.33±4.44丙酸睪酮組 0.01 154.17±137.28* 7.67±2.27秘魯瑪咖 4.0 173.17±53.60* 6.25±3.39 2.0 198.25±81.44 6.58±2.15麗江瑪咖 4.0 207.58±94.50 7.08±4.10交配潛伏期/s 交配數(shù)/次745.08±382.48 6.42±3.94 271.08±192.79** 13.92±7.97**444.75±275.24* 11.17±5.39*547.50±287.43 8.08±3.20 454.92±254.82* 10.67±5.47*

表4 受試樣品給藥30 d對(duì)小鼠交配能力的影響（±SD，n=12）Table 4 Effect of samples administration for 30 days on the mating ability of mice (±SD, n=12)

表4 受試樣品給藥30 d對(duì)小鼠交配能力的影響（±SD，n=12）Table 4 Effect of samples administration for 30 days on the mating ability of mice (±SD, n=12)

與空白組比較：*P＜0.05，**P＜0.01；與秘魯瑪咖組比較：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。Compared with the control group, *P＜0.05, **P＜0.01; compared with the Peru maca group, ΔP＜0.05, ΔΔP＜0.01.

組別 劑量/（g/kg） 捕捉潛伏期/s 捕捉數(shù)/次 交配潛伏期/s 交配數(shù)/次空白組 - 292.50±162.43 5.25±3.65 458.42±276.10 12.25±5.59丙酸睪酮組 0.01 114.17±90.30** 5.42±2.64 163.50±76.69** 18.92±6.10*秘魯瑪咖 4.0 164.83±47.68* 5.17±2.48 239.50±92.95* 18.92±6.42*2.0 187.42±83.78 6.08±2.23 289.17±195.55 16.25±6.66麗江瑪咖 4.0 143.92±63.31** 5.25±2.60 187.50±81.39** 21.33±7.58**

麗江瑪咖和秘魯瑪咖對(duì)小鼠精子數(shù)量和活率的影響見表5。結(jié)果顯示：與空白組比較，秘魯瑪咖4.0 g/kg和麗江瑪咖4.0 g/kg劑量可顯著提升小鼠精子數(shù)量（P＜0.05），丙酸睪酮組小鼠精子數(shù)量明顯下降（P＜0.05）；秘魯瑪咖和麗江瑪咖各劑量對(duì)小鼠精子活率均無明顯影響（P＞0.05）。與秘魯瑪咖組比較，麗江瑪咖組小鼠精子數(shù)量和活率均無明顯改變（P＞0.05）。

表5 受試樣品對(duì)小鼠精子數(shù)量和活率的影響（±SD，n=12）Table 5 Effect of samples on the sperm count and viability of mice (±SD, n=12)

表5 受試樣品對(duì)小鼠精子數(shù)量和活率的影響（±SD，n=12）Table 5 Effect of samples on the sperm count and viability of mice (±SD, n=12)

與空白組比較：*P＜0.05，**P＜0.01；與秘魯瑪咖組比較：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。Compared with the control group, *P＜0.05, **P＜0.01; compared with the Peru maca group, ΔP＜0.05, ΔΔP＜0.01.

組別 劑量/（g/kg） 精子數(shù)量/（×106個(gè)/mL） 精子活率/%空白組 - 4.90±1.25 53.08±9.12丙酸睪酮組 0.01 3.96±0.86* 57.50±14.06秘魯瑪咖 4.0 5.91±1.05* 56.58±11.60 2.0 4.94±1.48 54.50±11.10麗江瑪咖 4.0 6.02±1.18* 55.92±12.03

麗江瑪咖和秘魯瑪咖對(duì)小鼠性腺器官指數(shù)的影響見表6。結(jié)果顯示：與空白組比較，秘魯瑪咖和麗江瑪咖4.0 g/kg劑量組小鼠睪丸指數(shù)明顯增加（P＜0.05），丙酸睪酮 0.01 g/kg劑量組動(dòng)物睪丸指數(shù)明顯降低（P＜0.01）。與空白組比較，各組對(duì)其他小鼠性腺器官指數(shù)均無明顯影響（P＞0.05）。

表6 受試樣品對(duì)小鼠性腺器官指數(shù)的影響（±SD，n=12）Table 6 Effect of samples on the gonadal organ index of mice (±SD, n=12)

表6 受試樣品對(duì)小鼠性腺器官指數(shù)的影響（±SD，n=12）Table 6 Effect of samples on the gonadal organ index of mice (±SD, n=12)

與空白組比較：*P＜0.05，**P＜0.01；與秘魯瑪咖組比較：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。Compared with the control group, *P＜0.05, **P＜0.01; compared with the Peru maca group, ΔP＜0.05, ΔΔP＜0.01.

組別 劑量/（g/kg） 睪丸指數(shù)/（mg/g） 精囊指數(shù)/（mg/g） 包皮腺指數(shù)/（mg/g）空白組 - 5.75±0.87 9.20±1.80 2.33±0.65丙酸睪酮組 0.01 4.63±0.98** 10.10±1.83 2.72±0.78秘魯瑪咖 4.0 6.92±1.38* 9.51±1.47 2.21±0.86 2.0 6.33±1.23 9.44±0.78 2.16±0.67麗江瑪咖 4.0 6.75±1.22* 9.72±1.28 2.34±1.44

2.3 麗江瑪咖和秘魯瑪咖小鼠急性毒性試驗(yàn)

小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示：空白組所有動(dòng)物給予純水后一般狀況良好，未見明顯異常反應(yīng)和死亡。麗江瑪咖和秘魯瑪咖的小鼠單次灌胃給藥的最大給藥量為17.48 g/kg，給藥后4 h內(nèi)和觀察期14 d內(nèi)小鼠未見明顯毒性反應(yīng)和死亡情況。在觀察期14 d內(nèi)，與空白組比較，麗江瑪咖和秘魯瑪咖17.48 g/kg劑量組動(dòng)物體重均無明顯變化（P＞0.05），觀察期動(dòng)物體重變化情況見表7。觀察期結(jié)束后頸椎脫臼處死小鼠，肉眼觀察各組動(dòng)物臟器的體積、顏色、質(zhì)地等，均未見明顯異常。

表7 觀察期14 d內(nèi)各組動(dòng)物體重（±SD，n=20）Table 7 Animal body weight of each group within 14 days of observation period (±SD, n=12)

表7 觀察期14 d內(nèi)各組動(dòng)物體重（±SD，n=20）Table 7 Animal body weight of each group within 14 days of observation period (±SD, n=12)

與空白組比較：*P＜0.05，**P＜0.01。Compared with the control group, *P＜0.05, **P＜0.01.

組別 劑量（g/kg） 性別 給藥前 給藥后3 d 給藥后7 d 給藥后14 d空白組 - ♂ 20.76±1.01 26.20±1.53 30.89±1.83 37.99±2.34♀ 20.39±1.11 25.86±1.72 28.56±2.22 35.89±2.69麗江瑪咖 17.48 ♂ 20.59±0.97 26.05±1.13 30.00±3.97 38.11±4.33♀ 20.44±1.25 25.08±1.48 28.57±2.40 36.01±2.22秘魯瑪咖 17.48 ♂ 20.37±1.00 26.49±1.22 29.98±3.12 38.14±3.69♀ 20.83±1.09 25.12±1.29 28.75±1.75 35.31±1.83

3 討論

目前，許多藥理學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)，瑪咖具備較好的緩解體力疲勞作用，其中瑪咖酰胺和瑪咖烯的含量與緩解體力疲勞評(píng)價(jià)的金指標(biāo)負(fù)重游泳時(shí)間呈正相關(guān)性，是潛在的藥效物質(zhì)[16-18]。張愷驊[7]對(duì)比了幾種瑪咖中瑪咖酰胺的種類和含量，發(fā)現(xiàn)云南產(chǎn)瑪咖中瑪咖酰胺的種類有8種，秘魯瑪咖僅檢出3種瑪咖酰胺；云南產(chǎn)瑪咖中瑪咖酰胺的相對(duì)含量高于秘魯瑪咖，相對(duì)含量分別為39.73和26.46。在研究開展之前，我們?cè)鶕?jù)物質(zhì)基礎(chǔ)推測麗江瑪咖的緩解體力疲勞活性可能優(yōu)于秘魯瑪咖。但是，經(jīng)試驗(yàn)研究證實(shí)，麗江瑪咖和秘魯瑪咖均可明顯提升小鼠負(fù)重游泳時(shí)間和肝組織糖原水平，并可顯著下調(diào)小鼠血清尿素氮含量，此結(jié)果提示二者均具備緩解體力疲勞功能，且從數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果來看二者的活性無顯著性差異。

小鼠交配試驗(yàn)是常用的性功能鑒定試驗(yàn)，性行為是一種復(fù)雜的行為活動(dòng)，包括動(dòng)機(jī)和行為兩個(gè)方面。雄鼠的性行為包括捕捉、乘騎、插入和射精四種，可以通過每一種的潛伏期長短及次數(shù)多少來評(píng)價(jià)雄性小鼠的性欲及性能力[19]。在本研究中秘魯瑪咖和麗江瑪咖對(duì)小鼠捕捉潛伏期、交配潛伏期、交配次數(shù)均具有顯著的提升，且效果與陽性對(duì)照藥物丙酸睪酮注射液相比無顯著性差異，這表明秘魯瑪咖和麗江瑪咖均可提升小鼠性功能；但是，從起效時(shí)間來看，秘魯瑪咖在給藥10 d后的第1次檢測即顯示出明顯活性，而麗江瑪咖則需要更長的起效時(shí)間。

臟器指數(shù)，即某臟器的濕重與體重的比值，能在一定程度上反映實(shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)體的健康狀況。睪丸是雄性動(dòng)物生殖器官，其主要作用是產(chǎn)生精子和雄性激素，對(duì)機(jī)體的生長發(fā)育和生殖器官功能的維持起重要作用。本研究結(jié)果顯示，秘魯瑪咖和麗江瑪咖均可明顯提高小鼠睪丸指數(shù)，與之相對(duì)應(yīng)的精子數(shù)量亦有顯著增加，經(jīng)對(duì)比發(fā)現(xiàn)二者在此方面的活性無明顯差異。在試驗(yàn)過程中，我們觀察到陽性對(duì)照組小鼠長期注射丙酸睪酮注射液后，精子數(shù)量和睪丸指數(shù)均出現(xiàn)明顯下降，這可能跟丙酸睪酮注射液長期應(yīng)用所產(chǎn)生的睪丸萎縮和精子減少等不良反應(yīng)有關(guān)[20]。

從安全性結(jié)果來看，麗江瑪咖和秘魯瑪咖的最大給藥量均為17.48 g/kg，觀察期內(nèi)小鼠未見明顯毒性反應(yīng)和死亡情況，觀察期14 d結(jié)束后各組織和器官亦未發(fā)生肉眼可見病理改變。上述結(jié)果初步表明，麗江瑪咖和秘魯瑪咖安全性較高，且二者無明顯差異。根據(jù)衛(wèi)生部此前發(fā)布的《關(guān)于批準(zhǔn)瑪咖粉作為新資源食品的公告》，瑪咖的成人推薦用量為≤25 g/d，即成人每日用藥劑量約為0.42 g/kg（成人體重以60 kg計(jì)），約為本研究中小鼠最大給藥量的1/42。據(jù)此也可推測麗江瑪咖和秘魯瑪咖在推薦用量下具備較高的食用安全性。但是，由于僅進(jìn)行了急性毒性研究，其長期應(yīng)用的毒性、遺傳毒性、生殖毒性有待于進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，麗江瑪咖和秘魯瑪咖均具備緩解體力疲勞、改善性功能的作用，且在本研究所涉及的藥效學(xué)活性和安全性方面無明顯差異。