血清腸三葉因子(TFF3)在非小細(xì)胞肺癌的診斷及化療療效評(píng)估中的意義

常遠(yuǎn)敏 尤青海

肺癌作為最常見(jiàn)的惡性腫瘤，是目前癌癥相關(guān)性死亡的常見(jiàn)原因之一，占癌癥相關(guān)死亡率的25%，根據(jù)分期及地區(qū)的不同，其5年生存率波動(dòng)于4%-17%之間[1-2]。隨著對(duì)肺癌研究的深入，多種腫瘤血清標(biāo)志物已被證實(shí)與肺癌的診斷、鑒別診斷有關(guān)，或可用于治療效果及預(yù)后的評(píng)估，如目前國(guó)際上最常用的神經(jīng)元烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)[3]。血清標(biāo)記物檢測(cè)有低損害、成本低、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，但無(wú)論單獨(dú)檢測(cè)、聯(lián)合聯(lián)測(cè)均存在準(zhǔn)確性低、易漏診等不足之處，以上優(yōu)缺點(diǎn)使得腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)在臨床上備受青睞的同時(shí)，也限制了其臨床地位的進(jìn)一步提高，僅能起到輔助作用。腸三葉因子〔(Intestinal Trefoil Factor, ITF) or (Trefoil Factor 3，TFF3) 〕是一種穩(wěn)定的小分子分泌性多肽，研究證明TFF3參與黏膜保護(hù)、促進(jìn)細(xì)胞遷移等生理、病理過(guò)程，是目前血清腫瘤標(biāo)記物的研究熱點(diǎn)之一。已有的研究表明，TFF3在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、增殖、侵襲能力等方面有重要的作用[4]。

資料與方法

一、一般資料

2020年06月20日至2021年06月06日于安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸與危重癥科初次確診的84例非小細(xì)胞肺癌患者(肺腺癌46例，肺鱗癌38例)作為非小細(xì)胞肺癌組被納入研究，其基本特征為：男性65例、女性19例，年齡為35～80歲，平均年齡65.45歲，TNM分期為I-IV期。確診方法包括：痰脫落細(xì)胞學(xué)、胸腔積液細(xì)胞學(xué)、纖維支氣管鏡或肺組織活檢及病理檢查。合并其他惡性腫瘤、嚴(yán)重肝腎功能不全、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病的患者則被排除在外。同時(shí)期在本醫(yī)院接受體檢的21例健康者作為對(duì)照組，男性11例、女性10例，年齡51～88歲，平均年齡63.86歲。隨訪(fǎng)非小細(xì)胞肺癌組中僅接受化療，而無(wú)放療、靶向等其他治療方式的患者，最后以連續(xù)接受至少2個(gè)周期以上化療的患者作為化療組，化療方案為培美曲塞(肺腺癌)或紫杉醇(肺鱗癌)+鉑類(lèi)。有效隨訪(fǎng)接受化療的非小細(xì)胞肺癌患者共18例(男性16例、女性2例)，年齡53～80歲，平均年齡66.06歲。本研究中的受試者均知情同意，研究經(jīng)安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

二、方法

1 標(biāo)本收集 采集患者初次入院時(shí)、健康對(duì)照組體檢第一天空腹外周靜脈血3～5 mL，3 000 r/min離心10 min(離心半徑10 cm)分離出上清液置EP管中 -80 ℃冰箱保存待測(cè)。同時(shí)采集符合隨訪(fǎng)條件的非小細(xì)胞肺癌患者2個(gè)化療周期后空腹外周血3～5 mL,經(jīng)上述過(guò)程分離血清并保存待測(cè)。采用上海酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)血清中TFF3水平，檢測(cè)時(shí)嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2 資料收集及療效評(píng)估 采集非小細(xì)胞肺癌組患者初次確診時(shí)外周血實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)(中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù))、NSE、CEA、CYFRA21-1，分別計(jì)算中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)中位數(shù)、NSE、CEA、CYFRA21-1中位數(shù)。

3 TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)肺癌數(shù)據(jù) 從TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)下載肺腺癌、肺鱗癌組織的TFF3表達(dá)數(shù)據(jù)及病例信息，數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化處理后，TFF3在腫瘤組織中的表達(dá)水平以log2(TPM+1)形式呈現(xiàn)，篩選出僅接受化療且有完整化療療效的患者，最終納入研究的樣本包括肺腺癌74例、肺鱗癌49例?；煰熜гu(píng)價(jià)分為：臨床完全緩解(Complete Response)、部分緩解(Partial Response)、疾病穩(wěn)定(Stable Disease)、疾病進(jìn)展(Progressive Disease)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、非小細(xì)胞肺癌組與對(duì)照組一般資料及血清TFF3水平比較

將非小細(xì)胞肺癌組患者分為腺癌組、鱗癌組，年齡在腺癌組、鱗癌組與對(duì)照組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3組間性別比例的差別具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清TFF3水平在此3組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。腺癌組、鱗癌組TFF3水平均分別高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而鱗癌組及腺癌組間的差異則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表1)。

表1 非小細(xì)胞肺癌組與對(duì)照組一般資料及血清TFF3水平比較

二、不同實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)非小細(xì)胞肺癌組患者血清TFF3水平間的關(guān)系

不同中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、NSE、CEA、CYFRA21-1水平的非小細(xì)胞肺癌患者血清TFF3比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表2、3)。在血小板計(jì)數(shù)≥中位數(shù)的非小細(xì)胞肺癌患者血清中，TFF3的水平較高于血小板<中位數(shù)組的非小細(xì)胞肺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表2)。中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的中位數(shù)分別為4.355×109/L、228.5×109/L、1.48×109/L，NSE、CEA、CYFRA21-1的中位數(shù)分別為15.385 ng/mL、5.45 ng/mL、7.4 ng/mL。

表2 不同實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)非小細(xì)胞肺癌組患者血清TFF3水平比較〔M(QR)，n=42,pg/mL〕

表3 不同腫瘤標(biāo)記物非小細(xì)胞肺癌組患者血清TFF3水平的比較

三、血清TFF3水平診斷非小細(xì)胞肺癌的臨床價(jià)值

非小細(xì)胞肺癌組患者血清TFF3水平診斷非小細(xì)胞肺癌的ROC曲線(xiàn)下面積(AUC)為0.73〔95%CI(0.62，0.83)〕，約登指數(shù)為0.45; 診斷肺腺癌的AUC為0.69〔95%CI(0.56，0.82)〕，約登指數(shù)為0.37;診斷肺鱗癌的AUC為0.77〔95%CI(0.66，0.89)〕，約登指數(shù)為0.55(見(jiàn)圖1A-C)。非小細(xì)胞肺癌組患者血清TFF3水平診斷非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌及肺鱗癌的截?cái)嘀捣謩e為1109.37 pg/mL、1109.37 pg/mL、1110.61 pg/mL。

圖1 血清TFF3水平診斷非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌及肺鱗癌的ROC曲線(xiàn)

四、化療組非小細(xì)胞肺癌患者化療前后血清TFF3水平比較

化療組非小細(xì)胞肺癌患者化療前后血清TFF3水平發(fā)生改變，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。將化療組的患者分為腺癌組、鱗癌組，并分別將其化療前后血清TFF3水平進(jìn)行比較，腺癌組化療后的血清TFF3水平顯著低于化療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而鱗癌組化療前后血清TFF3水平變化則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表4)。

表4 化療組非小細(xì)胞肺癌患者化療前后TFF3水平比較

五、肺腺癌、肺鱗癌組織中TFF3表達(dá)水平與化療效果之間的關(guān)系

采用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)下載TFF3在肺腺癌、肺鱗癌組織中的表達(dá)水平，通過(guò)分析不同化療效果的肺腺癌、肺鱗癌患者組織TFF3表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)CR+PR的肺腺癌患者組織中TFF3表達(dá)水平較PD+SD高(P<0.05)，而在肺鱗癌患者中TFF3的表達(dá)水平與化療療效無(wú)明顯關(guān)系(P>0.05)(見(jiàn)表5)。

表5 化療后不同療效肺腺癌、肺鱗癌組織TFF3水平比較

討 論

腫瘤血清標(biāo)志物是腫瘤組織分泌或與腫瘤組織有關(guān)的存在于血液內(nèi)的物質(zhì)，通過(guò)進(jìn)入局部微環(huán)境、循環(huán)擴(kuò)散或與周?chē)h(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換等方式，參與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移，多數(shù)腫瘤標(biāo)志物的組織特異性低，僅少數(shù)與特定的腫瘤明顯相關(guān)(如：前列腺特異性抗原與前列腺癌、甲胎蛋白與肝癌)[1, 5-6]。目前,肺癌的發(fā)病率和死亡率均處于惡性腫瘤的前三位，其中非小細(xì)胞肺癌患者占肺癌患者總數(shù)的85%～90%，而鱗癌、腺癌則是非小細(xì)胞肺癌最常見(jiàn)的兩種病理類(lèi)型[7]。目前可用于肺癌的腫瘤血清標(biāo)記物較少，不同腫瘤血清標(biāo)記物診斷不同病理類(lèi)型的腫瘤時(shí)，呈現(xiàn)不同的敏感性和特異性[8]，如NSE主要用于小細(xì)胞肺癌，CEA用于肺腺癌,CYFRA21用于肺鱗癌[3,9]，但以上標(biāo)記物仍然會(huì)因?yàn)槠洳桓叩拿舾行院吞禺愋远侣┰\或錯(cuò)誤評(píng)估，因此研究者們?cè)谶M(jìn)一步探索具有良好的診斷及預(yù)后評(píng)估價(jià)值的新型血清腫瘤標(biāo)記物。

TFF3作為一種新型腫瘤標(biāo)志物，是目前研究的熱點(diǎn)，多種研究已證實(shí)其在胃癌、宮頸癌、食管癌等腫瘤中增高，也有少量研究探索肺癌與TFF3之間的潛在關(guān)聯(lián)[10]。本研究結(jié)果表明化療前非小細(xì)胞肺癌患者血清中TFF3的表達(dá)高于健康對(duì)照者，與Qu等[11]的研究結(jié)果保持一致。同時(shí)我們的研究追蹤了非小細(xì)胞肺癌患者化療后血清TFF3的表達(dá)，其與化療前相比表達(dá)水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可推測(cè)TFF3與化療相關(guān)。通過(guò)分析TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中TFF3的表達(dá)與化療效果之間的關(guān)系，我們發(fā)現(xiàn)，對(duì)化療完全緩解及部分緩解的肺腺癌患者組織中TFF3表達(dá)水平較疾病穩(wěn)定及疾病進(jìn)展患者高，而在肺鱗癌患者中TFF3表達(dá)水平與化療療效未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)性，故TFF3可作為一種評(píng)估肺腺癌化療療效的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。

本研究結(jié)果顯示：非小細(xì)胞肺癌患者血清中TFF3水平在血小板計(jì)數(shù)≥中位數(shù)組中的表達(dá)高于血小板<中位數(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而不同中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、CEA、NSE、CYFRA21-1水平的非小細(xì)胞肺癌患者血清TFF3比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Zhang等研究表明TFF3高表達(dá)肺腺癌細(xì)胞，較TFF3低表達(dá)細(xì)胞擁有較高的增殖、轉(zhuǎn)移、修復(fù)損傷能力[4]，另有研究認(rèn)為血小板參與多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及促進(jìn)血管的生長(zhǎng)，其促腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移作用主要是通過(guò)與腫瘤細(xì)胞相互作用激活TGF-β、NF-κB途徑[12-13]，以上表明血小板的促腫瘤作用可能與TFF3表達(dá)升高有關(guān)。因時(shí)間、臨床條件等因素的限制，本研究納入的樣本量較少，性別比例存在差異，但目前尚未有報(bào)道表明TFF3的表達(dá)與不同性別之間存在相關(guān)性。綜上，此結(jié)果為探索TFF3在非小細(xì)胞肺癌中的作用提供了新的研究方向。

綜上所述， TFF3可用于非小細(xì)胞肺癌的診斷、肺腺癌化療療效評(píng)估。雖然本研究有樣本量較少、研究較為表淺等缺點(diǎn)，但仍為研究非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展途徑提供新的思路。