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      細胞遺傳學檢測方法對MLL基因異常兒童急性白血病的診斷意義

      2022-02-10 03:46:54孫恒娟杜成坎
      檢驗醫(yī)學 2022年12期
      關鍵詞:重排易位核型

      孫恒娟, 杜成坎, 李 紅, 柳 敏, 張 泓

      (1.上海市兒童醫(yī)院 上海交通大學醫(yī)學院附屬兒童醫(yī)院檢驗科,上海 200040;2.上海市兒童醫(yī)院 上海交通大學醫(yī)學院附屬兒童醫(yī)院血液科,上海 200040)

      急性白血?。╝cute leukemia,AL)是兒童常見惡性疾病,約占15歲以下兒童惡性腫瘤的25~30%。AL患兒各種基因重排較普遍,混合譜系白血?。╩ixed linage leukemia,MLL)基因重排是其中之一,MLL基因又稱KMT2A、ALL1或HRX基因,位于11號染色體長臂2區(qū)3帶(11q23),可見于15.0%~20.0%的急性髓系白血?。╝cute myeloid leukemia,AML)和2.5%~5.0%的急性淋巴細胞白血?。╝cute lymphoblastic leukemia,ALL)患兒,在嬰幼兒AL中占75%[1]。伴MLL基因重排的AL大多惡性程度高,緩解率低,對化療不敏感,患兒預后不佳,是AL的一種獨特亞型。本研究對MLL基因異常的AL患兒進行細胞遺傳學分析,比較常規(guī)細胞遺傳學(conventional cytogenetics,CC)檢測方法(染色體G顯帶)和熒光原位雜交( fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)技術診斷MLL基因異常、MLL基因重排、染色體11q23異常AL患兒的臨床價值。

      1 材料和方法

      1.1 研究對象

      選取2016年6月—2021年6月上海市兒童醫(yī)院收治的初發(fā)AL患兒404例,其中男228例、女176例,年齡2個月~15歲。根據(jù)《血液病診斷及療效標準》[2],確診ALL患兒308例、急性髓系白血?。╝cute myeloid leukemia,AML)患兒96例。

      1.2 儀器和試劑

      Chang Medium MF/BMC細胞培養(yǎng)試劑(美國Irvine Scientific公司)、Sigma-AlorichGs500染液(美國Sigma-Alorich公司)、VysisFISH探針(美國Abbot公司)、BX51和BX61顯微鏡(日本Olympus公司)、CDS5細胞生成干燥箱(美國Thermotron公司)、Thermobrite雜交儀(美國Leica公司)。

      1.3 CC法染色體核型分析

      采用24 h和48 h培養(yǎng)法制備染色體樣本,根據(jù)人類細胞基因組學國際命名體系(2016)描述染色體核型。嚴格按照試劑盒和儀器說明書要求進行檢測。

      1.4 FISH技術分析

      采用直接法獲取細胞,采用雙色分離探針變性、雜交過夜后,用6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,4',DAPI)復染細胞核。使用熒光顯微鏡在DAPI/FITC/Texas Red三色濾光鏡下觀察間期熒光雜交信號,以紅綠黃色(1R1G1F)熒光信號為MLL基因重排陽性。每例至少分析300個間期細胞,不計重疊細胞,計算陽性細胞比例。嚴格按照試劑盒和儀器說明書要求操作。

      1.5 統(tǒng)計學方法

      采用SPSS 23.0軟件進行統(tǒng)計分析,計數(shù)資料以例或率表示,比較采用χ2檢驗。以P<0.001為差異有統(tǒng)計學意義。

      2 結果

      2.1 患兒一般資料

      采用FISH技術檢出MLL基因異常(重排陽性)患兒57例(14.1%),其中男34例、女23例,年齡2個月~14歲;57例患兒中, ALL患兒40例,其中≤12個月患兒5例( 12.5%);AML患兒17例,其中≤12個月患兒4例( 23.5%);有10例患兒初發(fā)時白細胞計數(shù)≥ 50×109/L ,其中ALL患兒7例( 17.5%)、 AML患兒3例( 17.6%)。CC法檢出MLL基因異?;純?7例(6.7%)。2種方法MLL基因異常檢出率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。

      2.2 CC法染色體核型分析結果

      40例ALL患兒中,染色體核型正常16例,因培養(yǎng)細胞生長不良不能分析1例,非染色體11q23異常8例,染色體11q23異常15例。15例染色體11q23異?;純褐校瑔渭償?shù)目異常(-11)1例,add(11)(q23)1例,明確MLL基因重排伙伴基因13例[t(4;11)(q21;q23)結構和數(shù)目異常7例、t(9;11)(p22;q23)4例、t(1;11)(p32;q23)1例、t(10;11)(p12;q23)1例]。見圖1。

      17例AML患兒中,染色體核型正常3例,因培養(yǎng)細胞生長不良不能分析1例,非染色體11q23異常1例,染色體11q23異常12例。12例染色體11q23異?;純褐?,add(11)(q23)1例,明確MLL基因重排伙伴基因11例[t(9;11)(p22;q23)3例(其中1例增加了1條8號染色體)、t(11;19)(q23;p13)3例(其中1例增加了1條8號染色體)、t(1;11)(q21;q23)3例、t(11;17)(p23;q25)1例、ins(11;11)1例]。見圖1。

      圖1 異常染色體核型

      2.3 FISH技術檢測結果

      57例MLL基因重排陽性患兒均發(fā)現(xiàn)MLL基因探針信號異常。40例ALL患兒中,探針信號分離(1F1R1G)MLL基因重排17例,探針信號缺失(1F)8例,探針信號增加15例(13例3F,2例4F);17例AML患兒中,探針信號分離(1F1R1G)MLL基因重排15例,探針信號增加(3F)2例。見圖2。

      圖2 AL患兒MLL基因FISH技術檢測結果

      3 討論

      1979年,VAN DEN BERGHE等[3]首先報道了AML中存在11q23染色體異常,此后相關研究在多種血液系統(tǒng)惡腫瘤中發(fā)現(xiàn)存在11q23/MLL異常。MLL基因重排是造血系統(tǒng)惡性腫瘤常見的遺傳學改變,其易位形成的MLL融合蛋白可引起轉(zhuǎn)錄調(diào)控異常,誘導HOX、EPHA7、MEIS、PBX等下游目的基因異常表達,影響造血分化,導致白血病的發(fā)生[4]。MLL的伙伴基因有80多個,可以導致130余種不同的重排[5],是此類白血病診斷和預后判斷的重要因素。

      本研究404例AL患兒中,采用FISH技術檢出MLL基因異常57例,其中ALL患兒40例、AML患兒17例。40例ALL患兒中,MLL基因信號拷貝數(shù)異常23例,包括信號缺失8例、3拷貝13例、4拷貝2例;探針信號分離MLL基因重排17例,信號模式均為1R1G1F。17例AML患兒中,探針MLL基因信號3拷貝2例;探針信號分離MLL基因重排15例,其中典型異常信號(1R1G1F)10例,1G1F伴MLL基因3'端丟失、1G1F伴額外獲得1拷貝MLL基因3'端、2R1G1F伴額外獲得1拷貝MLL基因3'端、1R2F伴額外獲得1拷貝MLL基因、1G3F伴額外獲得1拷貝MLL基因5'端各1例,且這5例患兒探針均有MLL基因重排的現(xiàn)象,這種異常信號的復雜多樣化也可能是AML的不良預后因素之一。

      本研究結果顯示,404例AL患兒中,F(xiàn)ISH技術檢出MLL基因重排32例(7.9%)、CC法檢出24例(5.9%),與相關文獻MLL基因重排見于5%~10%的AL患兒結果一致[6]。染色體核型分析檢出的染色體11q23畸變包括易位、缺失、重復、插入,本研究明確11q23易位伙伴24例,以t(4;11)、t(9;11)、t(1;11)、t(11;19)染色體易位為主;t(4;11)、t(1;11)(p32;q23)、t(10;11) 均在ALL患兒中被檢出;t(1;11)(q21;q23)、t(11;19)、t(11;17)、ins(11;11)均在AML患兒中被檢出;t(9;11)、add(11)在ALL和AML患兒中均有檢出。非11q23克隆性染色體異常9例、正常核型19例、因培養(yǎng)細胞生長不良不能分析2例。ALL患兒共檢出染色體11q23異常15例,其中14例可以明確易位伙伴;1例數(shù)目異常,非11q23異常8例,1例因培養(yǎng)細胞生長不良不能分析,核型正常16例。AML檢出染色體11q23異常12例,均為結構異常,非11q23其他克隆性染色體異常1例,1例因培養(yǎng)細胞生長不良不能分析,染色體核型正常3例。15例ALL異常中,明確MLL基因重排和伙伴基因13例,其中t(4;11)7例、t(9;11)4例、t(10;11)1例、t(1;11)(p32;q23)1例。AML患兒共檢出染色體異常12例,明確MLL基因重排和伙伴基因11例,t(9;11)3例、t(1;11)(q21;q23)3例、t(11;19)3例,t(11;17)1例、ins(11;11)1例,在11q23/MLL基因重排患兒中有2例合并+8,與文獻報道的數(shù)目異常以三體8多見一致[7]。

      綜上所述,F(xiàn)ISH技術對MLL基因異常檢出率高于CC法,且檢測周期短、準確性高、敏感性強,但只能針對懷疑片段進行檢測,有一定的局限性;CC法是最基本的檢測方法,可以直觀地呈現(xiàn)MLL基因重排異常類型,并明確其伙伴基因,但不易發(fā)現(xiàn)MLL基因隱匿易位,有漏檢的可能。2種方法可優(yōu)勢互補,在MLL基因異常AL的診斷中均有較大的價值。

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