• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化β-環(huán)糊精艾草精油包合物的制備及其性能

    2022-02-08 13:39:14錢曉明王立晶王舉朝
    關(guān)鍵詞:實驗

    錢曉明,王 浩,王立晶,宋 兵,李 芳,王舉朝

    (天津工業(yè)大學(xué) 紡織科學(xué)與工程學(xué)院,天津 300387)

    自2019年末新型冠狀病毒爆發(fā)以來,口罩成為了人們不可或缺的防護品。普通口罩只具備防護、阻隔作用,佩戴4 h后就會滋生大量細菌[1],市面上具有抗菌功能的口罩大多是添加了無機金屬離子,但是無機金屬離子抗菌時效較短,還會對人體造成一定傷害,因此限制了其廣泛應(yīng)用,人們逐漸將目光轉(zhuǎn)向天然抗菌劑。艾草精油(wormwood essential oil,WO)是從艾草的莖和葉中提取出來的,提取方式主要有:索氏提取、超臨界CO2提取、浸取法、直接煎煮法、乙醇提取法等[2-3]。艾草精油中含有較多的倍半萜和單萜類化學(xué)成分[4],具有廣譜抑菌作用和良好的醫(yī)療保健作用[5],但艾草精油具有濃烈香氣,容易揮發(fā),易隨水蒸氣蒸發(fā)出油狀液體,對空氣、陽光較為敏感,不耐酸堿,容易氧化變質(zhì)且水溶性差[6],所以它對保存條件要求較高,保質(zhì)期較短,這就限制了艾草精油的應(yīng)用場景,故可利用微膠囊技術(shù)對其進行包覆,以達到緩慢釋放、抗菌耐久的效果。近年來,已有將艾草精油用于紡織品抗菌處理的報道,王輝[7]通過復(fù)合凝聚法以明膠和阿拉伯樹膠為壁材、艾草精油為芯材,制備了艾草精油微膠囊,并將其應(yīng)用于棉織物的抗菌整理。呂淑揚[8]制備了耐酸堿的蘄艾精油-丙烯酸樹脂微膠囊,并將其用于濕法紡絲,制備了具有抗菌功能的粘膠纖維,使得艾草精油具有抗菌效率更高、抗菌時效持久等優(yōu)點[9]。

    環(huán)糊精(cyclodextrin,CD)是一類環(huán)狀低聚糖,由α-1,4連接的吡喃葡萄糖亞單位組成[10]。CD耐高溫,分解溫度在300℃左右,自從1998年以來一直在GRAS名單上,無毒無害[11]。最常見的CD有3種類型:α-環(huán)糊精(α-CD)、β-環(huán)糊精(β-CD)和γ-環(huán)糊精(γ-CD),它們分別由6個、7個和8個葡萄糖單元組成[12],3種CD的腔深約為0.8 nm,但腔的直徑是不同的。CD有一個親水的外表面和一個中空的疏水內(nèi)部,這個空腔可以容納另一個親脂分子(客體)[13]。CD與芯材可以形成摩爾比為1∶1的包合物,如反式肉桂醛[14]、丁醇[15]、肉桂樹皮提取物[16]和丁香芽提取物分子[17]等。用CD封裝精油的同時,納米封裝技術(shù)可以保護活性成分并通過長效緩釋控制活性組分的釋放,能有效改善其水溶性[18]。這不僅可以掩蓋精油刺鼻的味道,還可以防止芯材氧化或熱損傷[19],使得精油在各種環(huán)境條件下和較長的時間段內(nèi)保持有效的抗菌性能[20]。

    響應(yīng)面分析法即響應(yīng)曲面設(shè)計方法(response surface methodology,RSM),是利用合理的試驗設(shè)計方法并通過實驗得到一定數(shù)據(jù),采用多元二次回歸方程來擬合因素與響應(yīng)值之間的函數(shù)關(guān)系,通過對回歸方程的分析來尋求最優(yōu)工藝參數(shù),解決多變量問題的一種統(tǒng)計方法??紤]到功能性紡織品的天然抗菌應(yīng)用的有效性和長效性要求,本研究選用β-CD為壁材,通過單因素實驗和Box-Behnken響應(yīng)面法探究最佳反應(yīng)條件,探究包合物的最高包埋得率的實驗條件,以達到長期緩釋和長效抗菌性能。

    1 實驗部分

    1.1 實驗材料和儀器

    材料:艾草精油,招商局健康產(chǎn)業(yè)湖北蘄春有限公司產(chǎn)品;無水乙醇,天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司產(chǎn)品;β-環(huán)糊精,上海麥克林生化分析有限公司產(chǎn)品;磷酸二氫鉀、磷酸氫二納、氯化鈉,天津市大茂化學(xué)試劑廠產(chǎn)品;氯化鉀,天津市江天化工技術(shù)有限公司產(chǎn)品;氫氧化鈉,上海易恩化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。

    儀器:DF-101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器,鞏義市英峪儀器廠產(chǎn)品;DHG-9070A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱,天津訊赫科技有限公司產(chǎn)品;WE-1水浴恒溫振蕩器,天津歐諾儀器有限公司產(chǎn)品;FA2204B型分析天平,上海精科天美科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品;KQ2200B超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品;TG18GK凱特離心機,鹽城市凱特實驗儀器有限公司產(chǎn)品;UV-2700紫外可見分光光度計,島津儀器(蘇州)有限公司產(chǎn)品;SU1000掃描電子顯微鏡,日本株式會社日立高新技術(shù)那珂事業(yè)所產(chǎn)品;Nicolet iS50傅里葉紅外光譜儀,賽默飛世爾科技(中國)有限公司產(chǎn)品;STA449F3熱重分析儀(TG),德國耐馳公司產(chǎn)品。

    1.2 制備方法

    圖1為β-CD結(jié)構(gòu)與反應(yīng)機理。

    以β-CD為壁材,其分子結(jié)構(gòu)如圖1(a)所示,艾草精油(WO)為芯材,采用共沉淀法制備WO-β-CD包合物。按照β-CD在25℃100 mL水中的溶解度[21]稱取1.9 gβ-CD,加入100 mL蒸餾水,將其密閉放進恒溫加熱磁力攪拌器,攪拌速率為400 r/min,加熱攪拌1 h,使β-CD充分溶解,制得β-CD水溶液。按照不同壁芯比將定量的艾草精油勻速逐滴加入制得的β-CD水溶液中,繼續(xù)密閉放入恒溫加熱磁力攪拌器中,在特定溫度下攪拌一段時間,在水溶液中使β-CD和艾草精油充分包埋,然后取出,靜置沉淀12 h,抽濾,抽濾所得產(chǎn)物放入烘箱中60℃干燥5 h,即得到艾草精油微膠囊。

    圖1 β-環(huán)糊精結(jié)構(gòu)與反應(yīng)機理Fig.1 Structure and reaction mechanism ofβ-Cyclodextrin

    β-CD具有“內(nèi)疏水、外親水”特點,在水溶液中依靠范德華力和氫鍵的驅(qū)動力[22]將艾草精油分子包覆在空腔內(nèi),如圖1(b)所示。

    1.3 單因素實驗

    (1)不同壁芯比對微膠囊包埋率的影響。在包埋溫度40℃、包埋時間4 h的條件下,研究不同壁芯比(1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、7∶1)對微膠囊包埋得率的影響。

    (2)不同包埋溫度對微膠囊包埋率的影響。在包埋時間4 h、壁芯比為3∶1的條件下,研究不同包埋溫度(30℃、40℃、50℃、60℃、70℃)對微膠囊包埋得率的影響。

    (3)不同包埋時間對微膠囊包埋率的影響。在包埋溫度40℃、壁芯比為3∶1的條件下,研究不同包埋時間(1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h)對微膠囊包埋得率的影響。

    1.4 響應(yīng)面正交試驗設(shè)計

    在單因素實驗的基礎(chǔ)上,選取壁芯比(A)、包埋溫度(B)、包埋時間(C)作為自變量,分別對以上因素進行編碼,并以艾草精油微膠囊包埋得率(Y)為響應(yīng)值,設(shè)計17個實驗點的響應(yīng)面正交試驗。

    艾草精油微膠囊包埋得率根據(jù)下列公式測定:

    式中:m1為干燥后的艾草精油微膠囊質(zhì)量;m2為加入的β-CD質(zhì)量;m3為加入的艾草精油質(zhì)量。

    1.5 紫外可見分光光度法表征

    繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:先配置1 g/L艾草溶液,再稀釋至100、200、300、400、500 mg/L,根據(jù)艾草精油溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,稀釋公式為:

    式中:Cq為稀釋前濃度;Ch為稀釋后濃度。

    載油率測定:精確稱量40 mg的包合物,溶于4 mL的無水乙醇中,室溫下用超聲波清洗器超聲2 h,吸取2 mL的溶液用1 mol/L的PBS緩沖液稀釋5倍,室溫下用超聲波清洗器超聲15 min使其充分混合,混合后使用離心機在轉(zhuǎn)速為8 000 r/min下離心15 min。離心后取上清液,用紫外可見分光光度計測其吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將其吸光度換算成相應(yīng)濃度,從而求出樣品中含有的WO的質(zhì)量,可根據(jù)公式(3)求出載油率R:

    式中:M為實驗初始加入艾草精油的質(zhì)量;m為樣品中含有艾草精油的質(zhì)量。

    1.6 電鏡掃描分析(SEM)

    將干燥處理后的樣品,放在樣品臺的導(dǎo)電膠上,均勻涂抹后,放進表面處理機中鍍金,取出后放進電子顯微鏡中掃描,調(diào)整合適的放大倍數(shù)至清晰圖像,觀察環(huán)糊精包埋前后的樣貌變化。

    1.7 熱重分析

    分別稱取少量的β-CD、WO和包合物樣品,使用STA449F3型熱重分析儀,在升溫速率為10℃/min、升溫范圍為0~600℃、氮氣氣體氛圍的條件下,進行耐熱性測試,得到艾草精油微膠囊的熱重分析圖。

    1.8 緩釋性能分析

    取50 mL pH=7.4的PBS緩沖液,倒入100 mL的錐形瓶中,稱取0.200 g的艾草精油微膠囊樣品,將其浸泡于錐形瓶中,放入溫度為37℃、振蕩頻率為80 r/min的恒溫搖床中振蕩。利用pH=7.4的PBS緩沖液模擬人體液,37℃模擬人體溫度,在特定的時間每次取3 mL利用紫外分光光度計測其艾草精油含量。再取3 mL的PBS溶液作為空白液,加入錐形瓶中,放回恒溫搖床。用紫外可見分光光度計測其吸光度,將吸光度換算成相應(yīng)的濃度,求出樣品中含有的芯材的量,求出保留率。

    1.9 包合物的抗菌性能分析

    包合物制備完成后,分別測試其在標(biāo)準(zhǔn)大氣下緩釋0 d、7 d、30 d的抗菌性能。樣品的抗菌性能參考國標(biāo)GB/T 20944.3—2008《紡織品抗菌性能的評價第3部分:振蕩法》以及革蘭氏陰性菌大腸桿菌進行抑菌測試。

    1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

    實驗采用Design-Expert 8.0.6軟件進行響應(yīng)面實驗設(shè)計,采用Origin2018軟件進行作圖分析。實驗數(shù)據(jù)均為3次平行實驗的平均值,結(jié)果以±s表示。P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義的顯著差異。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 單因素實驗

    2.1.1 不同壁芯比對微膠囊包埋得率的影響

    圖2為不同壁芯比對微膠囊包埋得率的影響。

    圖2 不同壁芯比對微膠囊包埋得率的影響Fig.2 Effect of different wall core ratios on embedding yield of microcapsule

    由圖2可知,壁芯比對艾草精油微膠囊的包埋得率的影響較大。隨著β-CD含量的上升,包合物包埋得率先上升,而后逐漸呈下降趨勢,在壁芯比為3∶1到達頂峰。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因可能是,倘若芯材過多,β-CD的空洞結(jié)構(gòu)已經(jīng)完全被艾草精油填滿,無法再包埋過多的精油,從而造成包埋得率的下降和芯材的浪費。因此,在后續(xù)設(shè)計正交試驗,優(yōu)化工藝的時候,選擇壁芯比的水平范圍應(yīng)在2∶1~4∶1較為合適。

    2.1.2 不同包埋溫度對微膠囊包埋得率的影響

    包埋溫度對微膠囊包埋得率也有著至關(guān)重要的影響。圖3為不同包埋溫度對包埋得率的影響。

    由圖3可知,隨著溫度的增加,艾草精油微膠囊的包埋得率先上升,超過40℃以后,呈現(xiàn)緩慢下降趨勢。這可能由于隨著溫度上升,分子運動劇烈,加速艾草精油進入β-CD的空腔結(jié)構(gòu),使其充分包合;由于精油是易揮發(fā)的熱敏性物質(zhì),隨著溫度繼續(xù)上升,加速精油的分解揮發(fā),造成微膠囊包埋得率的下降。溫度為40℃是艾草精油微膠囊的最佳包埋溫度,艾草精油微膠囊包埋溫度較為適宜的范圍是30~50℃。2.1.3不同包埋時間對微膠囊包埋得率的影響

    圖3 不同包埋溫度對包埋得率的影響Fig.3 Effect of different temperatures on embedding yield of inclusion complex

    圖4為不同包埋時間對艾草精油包埋得率的影響。

    圖4 不同包埋時間對艾草精油包埋得率的影響Fig.4 Effect of different time on embedding yield of wormwood essential oil

    由圖4可知,隨著包埋時間的增加,艾草精油微膠囊包埋得率先上升而后呈下降趨勢。如果包埋時間太短,精油與β-CD混合的不均勻不徹底,艾草精油來不及充分包合進β-CD的空洞結(jié)構(gòu),造成包埋得率較低;如果包埋時間過長,精油可能損失從而造成包埋率下降。最佳包埋時間在2 h,隨著時間繼續(xù)增加,包埋得率反而呈現(xiàn)下降趨勢。所以艾草精油微膠囊的最佳包埋時間范圍在1~3 h。

    2.2 正交試驗結(jié)果、方差分析及回歸方程建立

    由單因素實驗選取3水平,設(shè)計正交試驗,水平和因素的取值如表1所示。

    表1 響應(yīng)面正交試驗水平設(shè)計表Tab.1 Design of level and factor of response surface methodology test

    試驗以艾草精油微膠囊包埋產(chǎn)率(Y)作為指標(biāo),以心壁比(A)、包埋溫度(B)和反應(yīng)時間(C)為試驗因素,試驗設(shè)計及試驗結(jié)果如表2所示。

    表2 響應(yīng)面法正交試驗表Tab.2 Table of response surface methodology test

    以艾草精油微膠囊包埋產(chǎn)率為目標(biāo)函數(shù)值,以壁芯比(A)、反應(yīng)溫度(B)和反應(yīng)時間(C)為試驗因素的編碼值為自變量,運用Design-Expert 8.0.6軟件對試驗結(jié)果進行回歸擬合,建立包合物包埋工藝的Box-Behnken數(shù)學(xué)模型,確立艾草精油產(chǎn)率的最優(yōu)擬合二次多項式方程:Y=75.75+0.77A+0.62B+0.31C+0.035AB+0.078AC-0.12BC-5.58A2-0.25B2+0.35C2。

    為了檢驗方程的有效性,對結(jié)果進行方差分析和可信度分析,分別如表3和表4所示。

    表3 方差分析Tab.3 Analysis of variance

    表4 模型可信度分析Tab.4 Model reliability analysis

    由表3可知,對于響應(yīng)值包埋率,模型的P值小于0.05,判斷模型顯著。由表4可知,模型響應(yīng)值包埋率的決定系數(shù)R2為0.99,校正后R2為0.97,表明模型擬合度高;模型的變異系數(shù)小于10%,說明模型對響應(yīng)值的置信度良好,該模型可以較好地反映真實的實驗結(jié)果。綜上所述,該回歸模型對響應(yīng)值的擬合程度較高,方程能夠較好地反映響應(yīng)值與自變量的關(guān)系。

    為更直觀地反映各因素對響應(yīng)值的影響,對回歸模型進行響應(yīng)面分析,如圖5所示。

    圖5 實驗回歸模型Fig.5 Experimental regression model

    由圖5可見,隨著壁芯比的減小,包埋得率先降低后升高。結(jié)合表3中三因素P值可知,三因素對包埋得率的影響力由高到低為:壁芯比>反應(yīng)溫度>反應(yīng)時間。經(jīng)Design-Expert 8.0.6軟件分析得出最佳配方為:壁芯比為3∶1,反應(yīng)溫度為40℃,反應(yīng)時間3 h;相應(yīng)的模型預(yù)測包埋率得為76.4%。再選取預(yù)測所得的最佳配比進行復(fù)配,測定復(fù)配配方的包埋得率,結(jié)果為(76.18±0.46)%,實際值與預(yù)測值相近,說明該模型能夠較好地預(yù)測配方最佳配比。

    2.3 包合物的紫外分光光度計表征分析

    紫外分光光度計是最常用的測量包合物中芯材含量的方法。艾草精油的最大吸收波長是203 nm[8],利用紫外分光光度計可以測出溶液中的艾草精油含量。

    圖6為艾草精油在PBS緩沖液中的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    圖6 艾草精油在PBS(pH=7.4)溶液中的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.6 Standard curve of wormwood essential oil in PBS(pH=7.4)solution

    通過回歸分析,艾草精油濃度與紫外吸收光呈線性關(guān)系y=0.009 99x+0.031 03,R2為99.97%,擬合度高,其中橫坐標(biāo)是標(biāo)準(zhǔn)液中艾草精油的濃度,縱坐標(biāo)是不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液在203 nm處的吸光度。

    根據(jù)公式(3)計算得出,采用壁芯比為3∶1、反應(yīng)溫度為40℃、反應(yīng)時間3 h制得的包合物載油率為(56.31±0.06)%。

    2.4 掃描電鏡(SEM)分析

    掃描電子顯微鏡一種新型的電子光學(xué)儀器,可以用來分析各種材料的表面形貌特征。環(huán)糊精和包合物的電子顯微鏡掃描圖如圖7所示。

    圖7 環(huán)糊精和包合物的電鏡掃描圖Fig.7 SEMof cyclodextrin and inclusion complex

    由圖7可知,β-CD顆粒較大,呈不規(guī)則形狀的晶體,一些小顆粒附著在晶體表面,其他研究者也做了相關(guān)的報道[23-24]。而包合物顆粒較小且形狀統(tǒng)一,呈長方體,具有一定的規(guī)整度,符合淀粉包合物顆粒的微觀形貌,但團聚現(xiàn)象比較明顯,原因可能是包合物在干燥過程中失水導(dǎo)致團聚。

    2.5 緩釋性能分析

    艾草精油、包合物在37℃振蕩條件下的緩釋曲線如圖8所示。

    由圖8可知,在振蕩條件下,艾草精油揮發(fā)極快,經(jīng)過24 h振蕩艾草精油含量只剩下(39.36±0.05)%;包合物緩釋168 h以后,仍保有50%以上的艾草精油含量,在振蕩216 h后包合物中的艾草含量仍有(37.16±0.12)%。艾草精油分子在加熱和正當(dāng)條件下運動加快,符合Brownian運動規(guī)律,說明經(jīng)過β-CD包埋的艾草精油具備了較好的穩(wěn)定性及較長的保存期限。

    2.6 艾草精油微膠囊的熱重分析

    艾草精油、β-CD和艾草精油微膠囊的熱重分析如圖9所示。

    熱失重曲線是一種常規(guī)方法,通常用于驗證固態(tài)復(fù)合物的形成,對應(yīng)于客體分子的熱事件(熔點)的全部或部分消失通常被視為復(fù)合物形成的證明。由圖9可見,空白β-CD空殼與包合物具有相似的熱力學(xué)曲線,但在100~200℃包合物較β-CD質(zhì)量損失多5.3%,此階段正對應(yīng)WO的熱重曲線在72~200℃時開始急劇下滑,5.3%即為損失的WO質(zhì)量,這表明艾草精油被β-CD成功包合。包合物的熱重曲線直到200℃下滑增大,證明相對于艾草精油,包合物的耐熱性和熱穩(wěn)定性大幅提高,β-CD對艾草精油起到了保護作用[25]

    2.7 抗菌性能測試分析

    包合物對大腸桿菌抗菌結(jié)果如表5所示。

    表5 包合物抗菌實驗結(jié)果Tab.5 Antibacterial test results of inclusion complex

    表5分別測試了包合物在制備完成后,室溫下緩釋7 d和30 d后的抗菌效果,如圖10所示。

    圖10 不同緩釋時間包合物的抗菌效果圖Fig.10 Antibacterial effect of inclusion complex with different release time

    實驗結(jié)果表明,包合物在制備完成后抗菌率高達(99.09±0.17)%,經(jīng)過在標(biāo)準(zhǔn)大氣下緩釋30 d后抗菌依舊能保持在(95.16±0.53)%,證明包合物能夠保護艾草有效成分,能夠達到長效抑菌效果。

    3 結(jié)論

    本研究采用飽和溶液法成功將艾草精油包覆在β-CD中形成包合物。為了提高包埋得率,利用響應(yīng)面法優(yōu)化了實驗條件,并對包合物的載油率、形貌和抗菌性能做了研究,實驗發(fā)現(xiàn)優(yōu)化后的包合物提高了艾草精油的耐熱性、緩釋和長效抑菌的性能。

    (1)利用單因素實驗和Box-Behnken響應(yīng)面法實驗探究最佳包埋得率,實驗結(jié)果通過方差分析得到影響包埋得率的顯著性順序為壁芯比>反應(yīng)溫度>反應(yīng)時間,最佳包埋組合是壁芯比為3∶1、反應(yīng)溫度為40℃、反應(yīng)時間3 h,所制備的包合物包埋得率為(75.4±0.46)%,與響應(yīng)面回歸方程預(yù)測值相近。

    (2)通過掃描電鏡、熱重分析和紫外分光光度儀分析證明β-CD與艾草精油的包合物形成。通過電鏡觀察到包合物相較于環(huán)糊精形態(tài)有所改變,紫外分光光度儀分析艾草精油被包裹在環(huán)糊精內(nèi)部而不是單純的混合。

    (3)通過緩釋和抗菌測試發(fā)現(xiàn),包合物具有緩釋且長效抑菌的性能。相較于艾草精油,包合物具有緩釋性能,利用PBS緩沖液模擬人體液震蕩216 h后包合物中的艾草精油含量為開始時的(37.16±0.12)%,純艾草精油緩釋24 h后僅剩(39.36±0.05)%;包合物形成時,其抗菌率高達99.9%,經(jīng)過30 d標(biāo)準(zhǔn)大氣下的緩釋后,其抗菌率保持在(95.16±0.53)%。

    猜你喜歡
    實驗
    我做了一項小實驗
    記住“三個字”,寫好小實驗
    我做了一項小實驗
    我做了一項小實驗
    記一次有趣的實驗
    有趣的實驗
    小主人報(2022年4期)2022-08-09 08:52:06
    微型實驗里看“燃燒”
    做個怪怪長實驗
    NO與NO2相互轉(zhuǎn)化實驗的改進
    實踐十號上的19項實驗
    太空探索(2016年5期)2016-07-12 15:17:55
    亚洲精品视频女| 内地一区二区视频在线| 国产乱来视频区| 欧美丝袜亚洲另类| 免费黄色在线免费观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 成年免费大片在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲久久久久久中文字幕| 极品少妇高潮喷水抽搐| 精品久久久久久久久久久久久| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产在视频线在精品| av在线亚洲专区| 久久精品人妻少妇| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 精品人妻熟女av久视频| 午夜视频国产福利| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 两个人视频免费观看高清| 韩国av在线不卡| av专区在线播放| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 美女内射精品一级片tv| 国产乱人偷精品视频| 搞女人的毛片| 成人综合一区亚洲| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲国产精品成人综合色| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产免费视频播放在线视频 | 特级一级黄色大片| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 国内揄拍国产精品人妻在线| 高清日韩中文字幕在线| 最新中文字幕久久久久| 美女主播在线视频| 久久热精品热| 久久国产乱子免费精品| 97超视频在线观看视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 精品久久久久久久末码| 乱系列少妇在线播放| 中文字幕亚洲精品专区| 国产免费又黄又爽又色| 99re6热这里在线精品视频| 全区人妻精品视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产一区亚洲一区在线观看| 成人午夜高清在线视频| 国产人妻一区二区三区在| 成人亚洲精品av一区二区| 91狼人影院| 国产av在哪里看| 亚洲最大成人av| 少妇熟女欧美另类| 国产成人freesex在线| 免费观看a级毛片全部| 一夜夜www| 超碰97精品在线观看| 亚洲无线观看免费| 久久99蜜桃精品久久| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 三级毛片av免费| 在线免费观看不下载黄p国产| 久久草成人影院| 成人综合一区亚洲| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 久久久久久伊人网av| av在线天堂中文字幕| 99久国产av精品国产电影| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 午夜视频国产福利| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产一区二区在线观看日韩| 国产av国产精品国产| 中文字幕免费在线视频6| 看十八女毛片水多多多| 黑人高潮一二区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 黄色欧美视频在线观看| 国产三级在线视频| 精品久久久久久久末码| 欧美97在线视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 精品久久国产蜜桃| 亚洲精品456在线播放app| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产精品国产三级专区第一集| 我要看日韩黄色一级片| 免费看日本二区| 成年版毛片免费区| 免费av毛片视频| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产高清有码在线观看视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国模一区二区三区四区视频| 99热6这里只有精品| videos熟女内射| 尾随美女入室| 欧美三级亚洲精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 激情 狠狠 欧美| 国产片特级美女逼逼视频| 国产91av在线免费观看| 欧美高清成人免费视频www| 永久免费av网站大全| 国产 亚洲一区二区三区 | 亚洲av一区综合| 水蜜桃什么品种好| 国产成人一区二区在线| 热99在线观看视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 婷婷六月久久综合丁香| 简卡轻食公司| 看免费成人av毛片| 日韩制服骚丝袜av| 51国产日韩欧美| 亚洲性久久影院| 国产一区二区在线观看日韩| 男人爽女人下面视频在线观看| 人人妻人人看人人澡| 2021天堂中文幕一二区在线观| 嫩草影院新地址| 内地一区二区视频在线| 日韩人妻高清精品专区| 欧美成人a在线观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 高清毛片免费看| 国产熟女欧美一区二区| 成人漫画全彩无遮挡| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲第一区二区三区不卡| 日本与韩国留学比较| 日韩精品青青久久久久久| 最新中文字幕久久久久| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 午夜爱爱视频在线播放| 最近最新中文字幕大全电影3| 伦理电影大哥的女人| 亚洲av日韩在线播放| www.色视频.com| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲精品第二区| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产男女超爽视频在线观看| 日韩伦理黄色片| 视频中文字幕在线观看| 国产乱来视频区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| av国产免费在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 成年女人在线观看亚洲视频 | 综合色丁香网| 午夜精品一区二区三区免费看| 免费高清在线观看视频在线观看| 日韩av在线大香蕉| 中文字幕av在线有码专区| 日韩中字成人| 水蜜桃什么品种好| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 亚洲性久久影院| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久国内精品自在自线图片| 天天一区二区日本电影三级| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 精品酒店卫生间| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲成人av在线免费| 九色成人免费人妻av| 成人鲁丝片一二三区免费| 人体艺术视频欧美日本| 国产综合精华液| 日日啪夜夜爽| 免费观看a级毛片全部| 午夜福利视频1000在线观看| 黄色一级大片看看| 有码 亚洲区| 如何舔出高潮| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 日本爱情动作片www.在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日日啪夜夜撸| 老司机影院成人| 免费看光身美女| 国产男人的电影天堂91| 日本三级黄在线观看| 在线观看av片永久免费下载| 一本久久精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 777米奇影视久久| 国产一级毛片在线| 精品人妻偷拍中文字幕| 婷婷色综合www| av在线亚洲专区| 一级毛片 在线播放| 能在线免费看毛片的网站| 直男gayav资源| 内射极品少妇av片p| 午夜福利在线在线| 乱人视频在线观看| 国产淫片久久久久久久久| 青春草视频在线免费观看| 大话2 男鬼变身卡| 欧美精品国产亚洲| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产91av在线免费观看| 白带黄色成豆腐渣| 国内揄拍国产精品人妻在线| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲经典国产精华液单| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 丝袜美腿在线中文| 午夜精品国产一区二区电影 | 可以在线观看毛片的网站| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 一边亲一边摸免费视频| 免费黄色在线免费观看| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲真实伦在线观看| 插阴视频在线观看视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 男女边吃奶边做爰视频| 91精品国产九色| 午夜福利网站1000一区二区三区| 丰满少妇做爰视频| 九草在线视频观看| 听说在线观看完整版免费高清| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产三级在线视频| 亚洲欧美清纯卡通| a级一级毛片免费在线观看| 男人舔奶头视频| 色哟哟·www| 人妻系列 视频| 国产在线男女| 国产亚洲5aaaaa淫片| 一个人免费在线观看电影| 极品教师在线视频| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲四区av| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产免费福利视频在线观看| xxx大片免费视频| 久久精品夜色国产| 国产午夜精品论理片| 国产 一区精品| 色播亚洲综合网| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲第一区二区三区不卡| 欧美另类一区| 99久国产av精品| 国产爱豆传媒在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 久久久久国产网址| 亚洲精品国产成人久久av| 国产高清三级在线| 亚洲国产精品专区欧美| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲自拍偷在线| 熟女人妻精品中文字幕| 国产成人精品久久久久久| 日日摸夜夜添夜夜爱| 欧美日本视频| 久久久精品94久久精品| 精品一区二区三卡| 一级毛片 在线播放| 亚洲av不卡在线观看| 国产黄色免费在线视频| 三级毛片av免费| 欧美日韩综合久久久久久| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久精品国产亚洲网站| 人人妻人人看人人澡| 午夜福利在线在线| 最近视频中文字幕2019在线8| 啦啦啦啦在线视频资源| 黄色一级大片看看| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品一区www在线观看| 亚洲在久久综合| 久久久久久久久大av| 男插女下体视频免费在线播放| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产高清不卡午夜福利| 国产精品福利在线免费观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲国产色片| 在线播放无遮挡| 最新中文字幕久久久久| 午夜精品在线福利| 18+在线观看网站| 亚洲自偷自拍三级| 男女那种视频在线观看| 日日撸夜夜添| videos熟女内射| 亚洲美女视频黄频| 久久精品国产亚洲av天美| 国产精品无大码| 51国产日韩欧美| 永久免费av网站大全| 国产在视频线精品| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 亚洲不卡免费看| 日本午夜av视频| 天堂俺去俺来也www色官网 | 久久久久精品性色| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲精品国产av成人精品| 黄色日韩在线| 免费观看无遮挡的男女| 女人久久www免费人成看片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 午夜视频国产福利| 亚洲欧洲日产国产| a级一级毛片免费在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| videos熟女内射| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 又爽又黄无遮挡网站| 免费高清在线观看视频在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 干丝袜人妻中文字幕| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品熟女久久久久浪| 大陆偷拍与自拍| 亚洲精品影视一区二区三区av| 天天一区二区日本电影三级| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 特级一级黄色大片| 国产高清有码在线观看视频| 色综合色国产| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 亚洲美女视频黄频| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲美女视频黄频| 日韩欧美国产在线观看| 国产精品一及| 男女那种视频在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲内射少妇av| 精品国内亚洲2022精品成人| 日韩av免费高清视频| 日韩电影二区| 亚洲欧洲日产国产| 欧美高清成人免费视频www| 综合色av麻豆| 麻豆成人av视频| 18禁在线播放成人免费| 精品少妇黑人巨大在线播放| 一区二区三区四区激情视频| 网址你懂的国产日韩在线| 久久6这里有精品| 欧美+日韩+精品| 亚洲av一区综合| 欧美人与善性xxx| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美高清成人免费视频www| 国产精品爽爽va在线观看网站| 少妇的逼水好多| 久久精品综合一区二区三区| 免费看不卡的av| 舔av片在线| 国产精品不卡视频一区二区| 日本免费a在线| 久久久欧美国产精品| 久久久久久久午夜电影| 亚洲无线观看免费| 成人午夜高清在线视频| 国产精品一区二区在线观看99 | 十八禁网站网址无遮挡 | 国产精品一区二区性色av| 亚洲四区av| 我的老师免费观看完整版| 成年人午夜在线观看视频 | 国产在视频线精品| 我的老师免费观看完整版| av女优亚洲男人天堂| 欧美xxⅹ黑人| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲av国产av综合av卡| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲欧洲国产日韩| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 欧美成人午夜免费资源| 久久久久久伊人网av| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲成色77777| 成人无遮挡网站| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲精品日本国产第一区| 两个人的视频大全免费| 国产中年淑女户外野战色| 2021天堂中文幕一二区在线观| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产精品无大码| 欧美3d第一页| 欧美bdsm另类| 精品人妻一区二区三区麻豆| 欧美精品国产亚洲| 97超碰精品成人国产| 深爱激情五月婷婷| 少妇高潮的动态图| 能在线免费看毛片的网站| 欧美xxⅹ黑人| 少妇熟女欧美另类| 亚洲精品日韩av片在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| 免费av毛片视频| 天堂网av新在线| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 亚洲乱码一区二区免费版| 99久国产av精品| 久久这里只有精品中国| 成人美女网站在线观看视频| 国产视频首页在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产成人a∨麻豆精品| 成人亚洲欧美一区二区av| 男人和女人高潮做爰伦理| 久久热精品热| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲av.av天堂| 亚洲美女搞黄在线观看| 美女大奶头视频| 亚洲精品第二区| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产一区二区在线观看日韩| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 男人爽女人下面视频在线观看| 一个人看的www免费观看视频| 国产av不卡久久| 久久人人爽人人片av| 91久久精品电影网| 久久久久网色| 日本黄大片高清| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美人与善性xxx| 国产精品日韩av在线免费观看| 秋霞伦理黄片| 国产一区亚洲一区在线观看| 99热这里只有是精品50| 色综合色国产| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 美女被艹到高潮喷水动态| 日本wwww免费看| 成人亚洲精品av一区二区| 成人毛片a级毛片在线播放| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲,欧美,日韩| 男女国产视频网站| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产69精品久久久久777片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 毛片女人毛片| 国产老妇女一区| 亚洲精品影视一区二区三区av| 秋霞伦理黄片| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产av国产精品国产| 精品少妇黑人巨大在线播放| 最近视频中文字幕2019在线8| 日韩欧美一区视频在线观看 | 日韩av在线大香蕉| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲综合精品二区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 亚洲欧美精品专区久久| 久久久久久久久久久丰满| 一边亲一边摸免费视频| 不卡视频在线观看欧美| 免费观看无遮挡的男女| 色5月婷婷丁香| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 日韩一区二区视频免费看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频 | 亚洲精品日本国产第一区| 国产免费福利视频在线观看| 春色校园在线视频观看| 免费看不卡的av| 国产国拍精品亚洲av在线观看| av在线老鸭窝| 亚洲美女视频黄频| 亚洲人成网站在线播| 少妇丰满av| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 少妇被粗大猛烈的视频| 婷婷色av中文字幕| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产视频内射| 亚洲乱码一区二区免费版| 啦啦啦啦在线视频资源| 深夜a级毛片| 国产精品伦人一区二区| 国产亚洲5aaaaa淫片| 青春草国产在线视频| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲精品视频女| 国产麻豆成人av免费视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 精品人妻熟女av久视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久精品夜色国产| 蜜臀久久99精品久久宅男| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产单亲对白刺激| 日本色播在线视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产综合懂色| 久久人人爽人人爽人人片va| 99久久精品一区二区三区| 丰满乱子伦码专区| 免费看不卡的av| 国产综合精华液| 成年版毛片免费区| 久久国内精品自在自线图片| 男的添女的下面高潮视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久精品人妻少妇| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲美女搞黄在线观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲av成人av| 可以在线观看毛片的网站| or卡值多少钱| 天天一区二区日本电影三级| 午夜福利在线观看吧| 精品一区二区三区人妻视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 久久精品久久久久久久性| 婷婷色综合大香蕉| 日本三级黄在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久99热6这里只有精品| 国产不卡一卡二| 天堂影院成人在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 少妇的逼水好多| 激情 狠狠 欧美| 亚洲最大成人中文| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲av日韩在线播放| 三级毛片av免费| 看非洲黑人一级黄片| 一级爰片在线观看| 91久久精品国产一区二区三区| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产真实伦视频高清在线观看| 丝瓜视频免费看黄片| 精品人妻视频免费看| 色吧在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 午夜激情久久久久久久| 亚洲成人久久爱视频| 国内精品美女久久久久久| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲av国产av综合av卡| 人妻少妇偷人精品九色| 91aial.com中文字幕在线观看| 插阴视频在线观看视频| 国产永久视频网站| 国产单亲对白刺激| 日日撸夜夜添| 99久久精品一区二区三区| or卡值多少钱| 大香蕉久久网| 日本一二三区视频观看| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲不卡免费看| 国产精品日韩av在线免费观看| 九草在线视频观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 久久精品国产亚洲av天美| 国产精品三级大全| 免费看光身美女| 精品久久久久久久末码| 欧美三级亚洲精品| 性色avwww在线观看| 亚洲av中文av极速乱| 免费看日本二区| 99久久精品热视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 一级毛片久久久久久久久女| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久午夜福利片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 国产精品无大码| 直男gayav资源| 亚洲自偷自拍三级| 国产精品不卡视频一区二区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽|