大豆疫霉根腐病防治藥劑的篩選與復(fù)配研究

蔣冰心，蓋 迪，陳方新，高智謀

(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，安徽合肥 230036)

由大豆疫霉(Phytophthorasojae)引致的大豆疫霉根腐病是大豆上具有毀滅性的一種土傳病害，其嚴(yán)重制約大豆生產(chǎn)[1-3]。目前對(duì)于大豆疫霉根腐病的防治主要采用綜合治理的策略與方法，藥劑防治仍是控制大豆疫霉根腐病發(fā)生與流行的關(guān)鍵技術(shù)措施之一[4-5]。雖然生產(chǎn)上已有一些有效藥劑，但有些地區(qū)由于高頻次施用化學(xué)農(nóng)藥，導(dǎo)致田間致病菌抗藥性群體逐年上升而導(dǎo)致防治效果下降[6-8]。因此，尋求防治大豆疫霉根腐病的新型有效殺菌劑對(duì)于有效控制大豆疫霉根腐病的危害尤為迫切和重要。筆者在現(xiàn)有研究[9-12]的基礎(chǔ)上，測(cè)定了當(dāng)前生產(chǎn)上8種常用殺菌劑對(duì)大豆疫霉根腐病菌的室內(nèi)毒力，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了復(fù)配研究，旨在為防治大豆疫霉根腐病的有效藥劑及復(fù)配劑的篩選、研發(fā)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥劑97%烯酰嗎啉TC(江蘇耕耘化學(xué)有限公司)，95%氟嗎啉TC(沈陽(yáng)化工研究院)，97%甲霜靈TC(江蘇寶靈化工股份有限公司)，98%嘧菌酯TC(山東中農(nóng)聯(lián)合生物科技股份有限公司)，98%霜脲氰TC(紹興東湖生化有限公司)，99%霜霉威TC(西安近代化學(xué)研究所)，98%啶酰菌胺TC(河北蘭升生物科技有限公司)，50%苯甲·丙環(huán)唑EW(先正達(dá)(中國(guó))投資有限公司)。將上述原藥用丙酮溶解配制成5 000 μg/mL母液，置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)菌株大豆疫霉根腐病菌(Phytophthorasojae)菌株TH25系從田間發(fā)生大豆疫霉根腐病的大豆植株上分離、鑒定獲得[13]，現(xiàn)保存于安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病原真菌實(shí)驗(yàn)室。

1.3 試驗(yàn)培養(yǎng)基利馬豆培養(yǎng)基(LBA)。稱取利馬豆60 g，加水1 L，浸泡12 h后在60 ℃下水浴1 h，雙層紗布過(guò)濾取上清。上清液補(bǔ)足水至1 L，加入瓊脂粉20 g，煮沸后持續(xù)沸騰3 min，121 ℃下高壓蒸汽滅菌15～20 min。

1.4 殺菌劑毒力測(cè)定采用菌絲生長(zhǎng)速率法[14]。將保存于12 ℃冰箱的供試大豆疫霉菌株在LBA培養(yǎng)基上活化，移至LBA平板上，25 ℃黑暗培養(yǎng)6 d。將8種供試藥劑母液用無(wú)菌水稀釋成7個(gè)相適應(yīng)的濃度梯度。分別吸取2 mL配好的藥液于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，倒入18 mL熔化并冷卻至50℃左右的LBA培養(yǎng)基，充分混合均勻后靜置冷卻，得到終濃度分別為0.01、005、0.10、0.20、0.50、1.00、5.00 μg/mL的含藥LBA平板。用直徑6 mm的打孔器將活化好的供試菌株菌落制成菌碟，用接種環(huán)將菌碟置于含藥的培養(yǎng)基平板中央，菌絲面朝下。每個(gè)處理濃度5次重復(fù)，以不含藥的LBA平板為對(duì)照。接種后置于生物培養(yǎng)箱中25 ℃黑暗條件下培養(yǎng)，6 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑(mm)，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。

菌絲生長(zhǎng)抑制率=[(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對(duì)照菌落直徑-6)]×100%

將藥劑濃度轉(zhuǎn)化成對(duì)數(shù)(x)，抑制率轉(zhuǎn)化成機(jī)率值(y)，根據(jù)x與y的線性關(guān)系求出毒力回歸曲線方程y=a+bx、相關(guān)系數(shù)(r)、有效抑制中濃度(EC50)。

1.5 復(fù)配劑聯(lián)合毒力和共毒系數(shù)測(cè)定根據(jù)毒力測(cè)定結(jié)果，選取毒力較強(qiáng)且在藥劑類型上具有代表性的甲霜靈、烯酰嗎啉、嘧菌酯、霜脲氰4種藥劑按照1∶1、1∶2、2∶1、1∶3、3∶1 5個(gè)配比進(jìn)行兩兩復(fù)配試驗(yàn)，以尋求對(duì)大豆疫霉毒力更強(qiáng)的藥劑復(fù)配組合。試驗(yàn)采用Sun等[15]的方法。在測(cè)定單劑毒力的基礎(chǔ)上，分別測(cè)定不同組合各配比混劑的聯(lián)合毒力，再計(jì)算各混劑的理論毒力指數(shù)TTI、實(shí)際毒力指數(shù)ATI和共毒系數(shù)CTC。

毒力指數(shù)(TI)= 標(biāo)準(zhǔn)藥劑EC50/ 供試藥劑EC50× 100

混劑實(shí)際毒力指數(shù)(ATI)= 標(biāo)準(zhǔn)藥劑EC50/ 混劑EC50× 100

混劑理論毒力指數(shù)(TTI)= 單劑A的TI × PA + 單劑B的TI × PB

(PA和PB分別是混劑中有效成分的百分含量)

混劑的共毒系數(shù)(CTC)= ATI /TTI × 100

2種藥劑復(fù)配的相互作用判斷：當(dāng)CTC ≥ 120時(shí)，判定2種藥劑具有增效作用；當(dāng)80

2 結(jié)果與分析

2.1 8種殺菌劑對(duì)大豆疫霉根腐病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明，供試8種藥劑對(duì)大豆疫霉菌株的EC50值表現(xiàn)為甲霜靈<烯酰嗎啉<霜脲氰<氟嗎啉<嘧菌酯<啶酰菌胺<苯甲·丙環(huán)唑<霜霉威；其中，甲霜靈、烯酰嗎啉、霜脲氰、氟嗎啉和嘧菌酯對(duì)大豆疫霉毒力強(qiáng)(EC50<1 μg/mL)；啶酰菌胺和苯甲·丙環(huán)唑毒力中等(1 μg/mL< EC50< 5 μg/mL)；霜霉威對(duì)大豆疫霉毒力最弱(EC50= 48.342 9 μg/mL>10 μg/mL)(表1)。

表1 供試藥劑對(duì)大豆疫霉根腐病菌的毒力Table 1 Toxicity of the tested fungicides to Phytophthora sojae isolate

2.2 4種殺菌劑復(fù)配對(duì)大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力及共毒系數(shù)聯(lián)合毒力測(cè)定結(jié)果顯示，甲霜靈、烯酰嗎啉、嘧菌酯、霜脲氰4種藥劑兩兩復(fù)配所形成的6個(gè)復(fù)配組合在試驗(yàn)設(shè)定的5種配比范圍內(nèi)，均存在產(chǎn)生一定增效作用的復(fù)配組合(表2～7)。其中，嘧菌酯+甲霜靈、烯酰嗎啉+甲霜靈、烯酰嗎啉+霜脲氰3個(gè)復(fù)配組合在5種配比下均有增效作用(表2～4)；霜脲氰+甲霜靈復(fù)配組合在1∶3、1∶2、2∶1、3∶1配比時(shí)有增效作用，1∶1配比時(shí)為相加作用(表5)，嘧菌酯+烯酰嗎啉復(fù)配組合在1∶1、1∶2、2∶1配比時(shí)有增效作用，其余為相加作用(表6)；嘧菌酯+霜脲氰復(fù)配在1∶2配比時(shí)有增效作用，其余比例為相加作用(表7)。

在嘧菌酯+甲霜靈復(fù)配組合中，復(fù)配劑CTC在1∶1配比時(shí)最大，CTC1∶1=261，2∶1配比時(shí)其次(表2)。烯酰嗎啉+甲霜靈復(fù)配組合中，復(fù)配劑CTC在1∶3配比時(shí)最大，CTC1∶3=174，1∶1配比時(shí)其次(表3)。烯酰嗎啉+霜脲氰復(fù)配組合中，復(fù)配劑CTC在1∶3配比時(shí)最大，CTC1∶3=356，1∶1配比時(shí)其次(表4)。霜脲氰+甲霜靈復(fù)配組合中，復(fù)配劑CTC在1∶3配比時(shí)最大，CTC1∶3=272，3∶1配比時(shí)其次(表5)。嘧菌酯+烯酰嗎啉復(fù)配組合中，復(fù)配劑CTC在1∶1配比時(shí)最大，CTC1∶1=326，2∶1配比時(shí)其次(表6)。嘧菌酯+霜脲氰復(fù)配組合中，復(fù)配劑CTC在1∶2配比時(shí)最大，CTC1∶2=267(表7)。綜上所述，烯酰嗎啉與霜脲氰按1∶3復(fù)配，嘧菌酯和烯酰嗎啉按1∶1復(fù)配，霜脲氰和甲霜靈按1∶3復(fù)配，嘧菌酯和霜脲氰按1∶2復(fù)配，嘧菌酯和甲霜靈按1∶1復(fù)配，烯酰嗎啉+甲霜靈按1∶3復(fù)配，復(fù)配劑CTC最大，增效作用最佳。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，藥劑復(fù)配CTC大小不僅與藥劑種類有關(guān)，還與藥劑配比有關(guān)。

表2 嘧菌酯和甲霜靈復(fù)配對(duì)大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力Table 2 Combined toxicity of azoxystrobin and metalaxyl to Phytophthora sojae

表3 烯酰嗎啉和甲霜靈復(fù)配對(duì)大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力Table 3 Combined toxicity of dimethomorph and metalaxyl to Phytophthora sojae

表4 烯酰嗎啉和霜脲氰復(fù)配對(duì)大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力Table 4 Combined toxicity of dimethomorph and cymoxanil to Phytophthora sojae

表5 霜脲氰和甲霜靈復(fù)配對(duì)大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力Table 5 Combined toxicity of cymoxanil and metalaxyl to Phytophthora sojae

表6 嘧菌酯和烯酰嗎啉復(fù)配對(duì)大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力Table 6 Combined toxicity of azoxystrobin and dimethomorph to Phytophthora sojae

表7 嘧菌酯和霜脲氰復(fù)配對(duì)大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力Table 7 Combined toxicity of azoxystrobin and cymoxanil to Phytophthora sojae

3 結(jié)論與討論

采用菌絲生長(zhǎng)速率法，測(cè)定了甲霜靈、烯酰嗎啉、氟嗎啉、嘧菌酯、霜脲氰、霜霉威、啶酰菌胺、苯甲·丙環(huán)唑8種殺菌劑對(duì)大豆疫霉根腐病菌的室內(nèi)毒力。結(jié)果表明，甲霜靈、烯酰嗎啉、霜脲氰、氟嗎啉和嘧菌酯對(duì)大豆疫霉菌毒力較強(qiáng)，可用于大豆疫霉根腐病的防治。甲霜靈作為防治作物疫病的主打藥劑在多年使用后，仍對(duì)大豆疫霉有很強(qiáng)的毒力，而有些報(bào)道[6-8]指出在一些地區(qū)大豆疫霉已對(duì)甲霜靈產(chǎn)生了抗藥性。其原因可能與安徽大豆產(chǎn)區(qū)較少使用甲霜靈防治大豆疫霉根腐病有關(guān)。為了避免或延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生，在病害防治上應(yīng)盡量避免長(zhǎng)期單一使用某一殺菌劑，提倡不同藥劑交替使用或混合使用。

經(jīng)藥劑復(fù)配篩選，發(fā)現(xiàn)甲霜靈、烯酰嗎啉、霜脲氰和嘧菌酯兩兩復(fù)配均可產(chǎn)生對(duì)抑制大豆疫霉有顯著增效作用的配比混合物；其中，尤以烯酰嗎啉與霜脲氰按1∶3復(fù)配、嘧菌酯和烯酰嗎啉按1∶1復(fù)配、霜脲氰和甲霜靈按1∶3復(fù)配、嘧菌酯和霜脲氰按1∶2復(fù)配、嘧菌酯和甲霜靈按1∶1復(fù)配、烯酰嗎啉+甲霜靈按1∶3復(fù)配，增效作用最佳。該研究結(jié)果為防治大豆疫霉根腐病的新型復(fù)配劑開(kāi)發(fā)及生產(chǎn)上藥劑合理混用提供了科學(xué)依據(jù)。