• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    內生細菌對NaCl脅迫下小麥幼苗的緩解作用

    2022-02-05 00:18:15杜欣楊林美#姜夢柯曾忠秀李夢霜李中源李淑英
    安徽農學通報 2022年1期
    關鍵詞:NaCl脅迫生理生化

    杜欣 楊林美# 姜夢柯 曾忠秀 李夢霜 李中源 李淑英

    摘 要:選擇小麥種子作為研究材料,水培條件下進行種子萌發(fā),待小麥幼苗長至15cm時,對小麥幼苗進行NaCl脅迫培養(yǎng),同時接種紫莖澤蘭(Crofton Weed)根分離到的1株內生細菌,通過測定小麥葉片Pro(脯氨酸)和MDA(丙二醛)含量、PPO(多酚氧化酶)和CAT(過氧化氫酶)活性變化,探究內生細菌對NaCl脅迫培養(yǎng)后小麥的緩解作用。結果表明:NaCl脅迫培養(yǎng)條件下接種紫莖澤蘭內生細菌后,小麥葉片CAT活性及Pro含量增加;小麥葉片PPO活性及MDA含量變化沒有明顯規(guī)律性,低鹽(NaCl 150mmol/L)脅迫培養(yǎng)時接種紫莖澤蘭內生細菌短時間內(本試驗為7d)對小麥生長有緩解作用,說明紫莖澤蘭內生細菌對NaCl(150mmol/L)脅迫培養(yǎng)的小麥幼苗生長有一定的修復作用,紫莖澤蘭內生細菌在高鹽(NaCl 300mmol/L)條件下生長繁殖受抑制。

    關鍵詞:內生細菌;NaCl脅迫;小麥葉片;生理生化

    中圖分類號 S512.1 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731(2022)01-0015-04

    Alleviating Effect of Endophytic Bacteria on Wheat Seedlings under NaCl Stress

    DU Xin# ?YANG Linmei# ?JIANG Mengke ?ZENH Zhongxiu ?LI Mengshuang ?LI Zhongyuan ?LI Shuying

    (College of Chemical Biology and Environment, Yuxi Normal University, Yuxi 653100, China)

    Abstract: This experiment took wheat seeds as research materials, made seed germination under hydroponic conditions, cultured the wheat seedlings under NaCl stress when they grew to 15cm height, inoculated with an endophytic bacterium isolated from the root of Crofton Weed, and explored the alleviating effect of endophytic bacteria on wheat leaves after NaCl stress culture through determining the contents of ?Pro (proline) and MDA (malondialdehyde) and the changes of activity of PPO (polyphenol oxidase) and CAT (catalase). The results showed that the CAT activity and Pro content of wheat leaves increased after inoculation with endophytic bacteria of Crofton Weed under NaCl stress; no obvious regularity in the changes of PPO activity and MDA content was found in wheat leaves; inoculation of Eupatorium adenophorum endophytic bacteria could alleviate the growth of wheat in a short time (this experiment is 7d) under low salt (NaCl 150mmol/L), indicating that Crofton Weed endophytic bacteria can repair the growth of wheat seedlings cultured under NaCl (150mmol/L) condition, and the growth and reproduction of Endophytic Bacteria of Eupatorium adenophorum were inhibited under the condition of high salt (NaCl 300mmol/L).

    Key words: Endophytic bacteria; NaCl stress; Wheat leaf; Physiology and biochemistry

    鹽漬化嚴重影響作物生長,鹽漬化環(huán)境中生長的農作物會在生長特征和生理生化特征方面都呈現(xiàn)出一定的變化。田菁等[1]發(fā)現(xiàn)鹽脅迫處理影響小麥幼苗的形態(tài)和生理特性,對其生長有負面影響。當土壤的鹽濃度高于70mmol/L,農作物已經(jīng)表現(xiàn)出脅迫作用,高于100mmol/L則作物生長發(fā)育受到嚴重影響,產(chǎn)量急劇下降[2],同時植物中的游離脯氨酸、丙二醛、可溶性蛋白質會有明顯的增加[3,4],鹽脅迫使得小麥生長受阻,光合系統(tǒng)和酶系統(tǒng)受到干擾,進而影響小麥產(chǎn)量和質量[5]。

    鹽漬化土壤修復技術較多,而微生物技術[6-8]由于其成本低、污染小、可持續(xù)等優(yōu)點,在開發(fā)利用方面得到重視。植物內生細菌分布于植物的不同組織中,受到植物組織的保護而不受外界惡劣環(huán)境(如強烈日光、紫外線、風雨等)的影響,而且有充足的營養(yǎng)物質,因此具有穩(wěn)定的生態(tài)環(huán)境,占據(jù)有利于生防的生態(tài)位,相對于腐生細菌更易于發(fā)揮生防作用[9]。在惡劣環(huán)境中,植物內生細菌可促進植物生長,改善植物營養(yǎng)吸收,影響酶及代謝產(chǎn)物活性,增強植物抗逆性。植物內生細菌作為生物防治菌株,發(fā)展迅速,成為當前微生物學領域研究的熱點[10]。本試驗選擇小麥種子在水培條件下萌發(fā)及培養(yǎng)一段時間后,接種從紫莖澤蘭根部分離到的內生細菌,通過檢測小麥葉片Pro(脯氨酸)、MDA(丙二醛)、PPO(多酚氧化酶)、CAT(過氧化氫酶)含量或活性變化,探討接種內生細菌對不同鹽濃度脅迫下小麥幼苗生長的影響。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料 小麥種子:市場購買。內生細菌:紫莖澤蘭(Crofton Weed)根部分離得到。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,蒸餾水1000mL,pH自然,121℃滅菌30min后35℃恒溫無菌檢查24h后備用。LB培養(yǎng)基:胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,NaCl 10g,蒸餾水1000mL,pH自然,121℃滅菌30min后35℃恒溫無菌檢查24h后備用。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 內生細菌的分離純化 新鮮健康紫莖澤蘭根沖洗干凈,吸干水分剪切成2cm的小段,75%乙醇漂洗3min,無菌水沖洗4~5次,5%次氯酸鈉溶液漂洗3min,無菌水沖洗4~5次,無菌濾紙吸干水分,研磨成汁過濾,取0.5mL置于4.5mL無菌水稀釋為10-1,10倍梯度稀釋至10-2、10-3,無菌操作分別取0.5mL涂布接種于牛肉膏蛋白胨平板,每個稀釋梯度接種2個平板,35℃培養(yǎng)24~48h后選取長勢良好單菌落純化2~3次后保存。

    1.2.2 內生細菌的活化和菌懸液制備 將所獲菌株接種至牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面,置于30℃恒溫培養(yǎng)24~48h后轉接于LB液體培養(yǎng)基,置于30℃(130r/min)震蕩培養(yǎng)5d,10000r/min離心10min,收集菌體,用無菌水稀釋成菌懸液,調整OD600值≈1,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.3 小麥種子鹽脅迫培養(yǎng)及內生細菌接種 挑選新鮮健康的小麥種子,用無水乙醇浸泡15~20s,置于5%次氯酸鈉溶液消毒3~5min,再用無菌水沖洗5~8次。無菌水浸泡小麥種子12h,白瓷盤鋪墊紗布,水量放至合適位置,均勻放置小麥種子。待小麥發(fā)芽,幼苗長至15cm高時進行NaCl脅迫培養(yǎng),設置1個對照組+4個試驗組:CK、低鹽脅迫(NaCl濃度為150mmol/L)、低鹽脅迫(NaCl濃度為150mmol/L)+接種內生細菌、高鹽脅迫(NaCl濃度為300mmol/L)、高鹽脅迫(NaCl濃度為300mmol/L)+接種內生細菌(NaCl濃度為300mmol/L)。具體過程:CK中加300mL無菌水,低鹽及高鹽試驗組各加300mL鹽溶液、低鹽及高鹽+內生細菌試驗組各加菌懸液鹽溶液300mL,隔1d加1次,共計10次;第7d時開始取樣測定小麥葉片中的脯氨酸和丙二醛含量,過氧化氫酶和多酚氧化酶活性,每隔7d測定1次,共測3次。

    1.3 測定項目 采用磺基水楊酸法[11]提取及測定小麥葉片脯氨酸(Pro)含量,波長520nm,標準曲線為:y=0.0226x-0.0019,R2=0.9915。采用雙組分分光光度法測定丙二醛(MDA)含量,具體過程及計算參照[11]進行,略作調整。多酚氧化酶(PPO)活性測定參照文獻[11]的方法,測定波長為410nm,具體過程參照[11]進行。采用紫外吸收法[12]測定過氧化氫酶(catalase,CAT)活性,波長240nm。

    2 結果與分析

    2.1 小麥葉片CAT活性變化 研究[13]發(fā)現(xiàn),CAT與鹽脅迫耐受相關,隨著脅迫時間的延長,處理組的過氧化氫酶活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢[14]。由圖1可知,對照組及2個試驗組21d水培過程中CAT的變化也表現(xiàn)為先升高后降低的趨勢,水培小麥7、14、21d在NaCl濃度為150mmol/L、300mmol/L時接種紫莖澤蘭內生細菌后CAT的活性均高于NaCl試驗組及對照組,說明在水培條件下紫莖澤蘭內生細菌可以在一定程度上緩解NaCl脅迫培養(yǎng)對小麥造成的影響,對小麥生長有一定的修復作用[15],能提高小麥對NaCl脅迫抗逆性,其中7d時低鹽(NaCl 150mmol/L)脅迫后紫莖澤蘭內生細菌對小麥的修復效果達到79.11%,比CK高44.02%,高鹽(NaCl 300mmol/L)時也有一定修復效果,達到19.11%;14d時CK及試驗組CAT都有降低,但紫莖澤蘭內生細菌對低鹽(NaCl 150mmol/L)及高鹽(NaCl 300mmol/L)脅迫培養(yǎng)小麥后依然有修復作用,低鹽(NaCl 150mmol/L)脅迫條件下修復作用較明顯,高達109.49%;水培條件21d時,紫莖澤蘭內生細菌對NaCl 脅迫培養(yǎng)小麥后的修復效果明顯,低鹽(NaCl 150mmol/L)時修復效果達到108.17%,高于CK 118.37%,高鹽(NaCl 300mmol/L)時達到59.94%,高于CK 106.94%,說明水培時間越長,紫莖澤蘭內生細菌對NaCl脅迫修復效果越明顯,具體有效修復時間及機理有待深入研究。

    2.2 小麥葉片PPO活性變化 PPO對植物抵御外界脅迫、光合作用、生物合成等起重要作用[16],是參與酚類聚合的酶,酚類物質可促進細胞壁和組織木質化,影響細胞壁中木質素的合成,木質素是植物抵御外界脅迫的天然屏障之一[17],酚類物質的積累被認為與植物抵御非生物脅迫有關,在冷脅迫、水分脅迫條件下均觀察到該現(xiàn)象[18,19]。由圖2可知,CK及試驗組的PPO均呈現(xiàn)出先升高后降低趨勢。彭淼[20]研究發(fā)現(xiàn),外源鈣對干旱脅迫下草莓PPO活性變化也表現(xiàn)為先升高再降低。低鹽(NaCl 150mmol/L)脅迫培養(yǎng)小麥后接種紫莖澤蘭內生細菌試驗組,脅迫培養(yǎng)7d時PPO活性低于CK及低鹽(NaCl 150mmol/L)試驗組,說明紫莖澤蘭內生細菌的外源性添加在短時間內可以提高小麥對NaCl的抗性,表現(xiàn)出一定修復作用,修復效果為44.50%,隨著脅迫時間延長,NaCl(150mmol/L)接種紫莖澤蘭內生細菌后PPO活性高于NaCl(150mmol/L)脅迫試驗組,紫莖澤蘭內生細菌的修復作用逐漸消失;高鹽(NaCl 300mmol/L)接種紫莖澤蘭內生細菌試驗組7、14、21d時,小麥葉片中的PPO都高于高鹽(NaCl 300mmol/L)試驗組,說明紫莖澤蘭內生細菌在高鹽(300mmol/L)狀態(tài)下沒有對小麥生長產(chǎn)生修復作用。研究[21] 發(fā)現(xiàn)NaCl濃度過高會影響內生細菌的生長繁殖。

    2.3 小麥葉片Pro含量變化 植株體內脯氨酸(Pro)含量在一定程度上反映了植株體的抗逆能力[22]。滕松山[23]在鹽生植物堿蓬中分離獲得1株內生細菌(Pseudomonas oryzihabitans LP11),在鹽分脅迫條件下可提高種子萌發(fā)率,增加植物葉綠素、可溶性糖及脯氨酸含量,促進植物生長,提高抗鹽性。由圖3可知,小麥幼苗在低鹽(NaCl 150mmol/L)和高鹽(NaCl 300mmol/L)脅迫培養(yǎng)條件下,小麥葉片中的Pro含量明顯增加,Pro變化與時間及NaCl濃度等有一定關系。謝強等[24]認為,在脅迫條件下,大多抗逆性強的品種能夠積累較多的脯氨酸。本試驗中,低鹽(NaCl 150mmol/L)及低鹽(NaCl 150mmol/L)接種紫莖澤蘭內生細菌脅迫小麥時,小麥葉片中Pro含量隨培養(yǎng)時間延長逐漸增加,7d時高于CK 215.29%、465.63%,14d時高于CK 109.95%、223.34%,21d時高于CK 421.03%、426.54%,低鹽(NaCl 150mmol/L)脅迫且接種紫莖澤蘭內生細菌試驗組Pro含量均高于低鹽(NaCl 150mmol/L)脅迫試驗組,說明紫莖澤蘭內生細菌對低鹽(NaCl 150mmol/L)脅迫小麥有一定修復作用[25],修復效果分別為79.40%(7d)、54.01%(14d)、1.06%(21d),修復效果在逐漸減弱;高鹽(NaCl 300mmol/L)及高鹽(NaCl 300mmol/L)接種紫莖澤蘭內生細菌后試驗組Pro有明顯增加,Pro含量均高于低鹽(NaCl 150mmol/L)脅迫試驗組,但高鹽(NaCl 300mmol/L)脅迫接種紫莖澤蘭內生細菌后小麥葉片Pro含量低于高鹽(NaCl 300mmol/L)脅迫試驗組及低鹽(NaCl 150mmol/L)接種紫莖澤蘭內生細菌試驗組,修復效果逐漸減弱,這可能是NaCl會影響內生細菌的生長繁殖[21]進而影響到對小麥生長損傷的修復效果 。

    2.4 小麥葉片MDA含量變化 研究[26]發(fā)現(xiàn)采用NaCl處理后蓮藕幼苗后葉片中的丙二醛含量升高,鹽脅迫對植物造成質膜氧化,產(chǎn)生大量的丙二醛(MDA),并調節(jié)抗氧化酶活性來抵御逆境環(huán)境[27],MDA含量變化與NaCl濃度有正相關關系[28]。由圖4可知,4個試驗組MDA的含量幾乎都高于CK,NaCl脅迫培養(yǎng)導致小麥葉片MDA含量增加,其中低鹽(NaCl 150mmol/L)接種紫莖澤蘭內生細菌試驗組脅迫培養(yǎng)小麥7d后,比低鹽(NaCl 150mmol/L)脅迫試驗組中MDA含量低,而脅迫培養(yǎng)14d和21d后都高于低鹽(NaCl 150mmol/L)脅迫試驗組中MDA,說明紫莖澤蘭內生細菌在短時間內對小麥生長有一定修復作用,修復效果為8.37%;高鹽(NaCl 300mmol/L)接種紫莖澤蘭內生細菌后小麥葉片MDA含量變化不明顯(分別為34.32、35.93、35.77μmol/g),而高鹽(NaCl 300mmol/L)脅迫培養(yǎng)小麥后,小麥葉片的MDA呈上升趨勢,說明高濃度NaCl(300mmol/L)對小麥葉片細胞膜有損傷,紫莖澤蘭內生細菌可以在一定程度上減輕這種損傷作用。

    3 結論與討論

    本研究結果表明,NaCl脅迫培養(yǎng)小苗使小麥葉片CAT活性先升后降,NaCl脅迫培養(yǎng)條件下接種內生細菌可以使CAT的活性增加,說明紫莖澤蘭內生細菌對NaCl脅迫培養(yǎng)的小麥生長有一定的修復作用。小麥葉片 Pro的含量受脅迫培養(yǎng)時間及NaCl濃度的影響,NaCl脅迫導致小麥葉片Pro含量增加,低鹽(NaCl 150mmol/L)脅迫培養(yǎng)時外源加入紫莖澤蘭內生細菌對小麥的生長有修復作用,而脅迫培養(yǎng)時間延長及高鹽(NaCl 300mmol/L)脅迫培養(yǎng)條件下,紫莖澤蘭內生細菌對小麥的生長也沒有明顯的修復作用。小麥葉片PPO活性及MDA含量的變化表明,小麥在低鹽(NaCl 150mmol/L)脅迫培養(yǎng)時加入紫莖澤蘭內生細菌短時內(本試驗為7d)對小麥的生長有修復作用,而脅迫培養(yǎng)時間延長及高鹽(NaCl 300mmol/L)脅迫培養(yǎng)條件下,紫莖澤蘭內生細菌對小麥的生長沒有明顯修復作用。

    參考文獻

    [1]田菁,宋爽.鹽脅迫對小麥幼苗形態(tài)及生理特性的影響[J].安徽農業(yè)科學,2010,38(15):7784-7787.

    [2]卞阿娜,林鳴,王文卿,等.根系鹽脅迫鹽生植物和甜土植物的幼苗生長及礦質元分布的影響[J].熱帶亞熱帶植物學報,2015,23(4):405-412.

    [3]郭紅玲.鹽脅迫下小麥幼苗生長的影響及機理研究[J].農業(yè)開發(fā)與裝備,2018(8):120,124.

    [4]胡愛雙,張小棟,王文成,等.鹽脅迫對不同耐鹽性八棱海棠株系生理特性的影響[J].果樹學報,2021,38(3):335-343.

    [5]陳劉平,陳巧艷,李新華,等.NaCl脅迫對小麥苗期和灌漿期生理生化特性及產(chǎn)量性狀的影響[J].江蘇農業(yè)科學,2019,47(13):85-90.

    [6]楊璐,周蓓蓓,侯亞玲,等.枯草芽孢桿菌菌劑對鹽脅迫下冬小麥生長與土壤水氮分布的影響[J].排灌機械工程學報,2021,39(5):517-523.

    [7]王魯,魏宏達,方可,等.解淀粉芽孢桿菌HM618對鹽脅迫下小麥幼苗生長及生理特性的影響[J].天津農業(yè)科學,2020,26(12):33-37.

    [8]邊建文,崔巖,楊宋琪,等.衣藻和固氮魚腥藻對鹽脅迫下小麥幼苗生長的影響[J].浙江農業(yè)學報,2020,32 (10):1748 -1756.

    [9]冉國華,張志元.植物內生細菌研究及其應用[J].海南大學學報(自然科學版),2004,22(4):366-370.

    [10]強夢軻,徐奕卓,高蕊. 植物內生細菌介導的植物抗逆性研究進展[J].植物學研究,2020,9(3):226-239.

    [11]劉新,劉洪慶.植物生理學試驗[M].北京:高等教育出版社,2018:3.

    [12]湯紹虎,羅充.植物生理學試驗教程[M].重慶:西南師范大學出版社,2012:6.

    [13]GONDIM F A,GOMES- FILHO E,COSTA J H,et al. Catalase plays a key role in salt stress acclimation induced by hydrogen peroxide pretreatment in maize[J]. Plant Physiology & Biochemistry,2012,56:62-71.

    [14]李博書,秦昕宇,董文濤,等.干旱脅迫對大豆幼苗過氧化物酶和過氧化氫酶活性的影響[J].糧油農資,2020(10):8-9.

    [15]趙龍飛,徐亞軍,賴心河,等.內生細菌252和254對鹽脅迫下小麥幼苗過氧化物酶和過氧化氫酶活性的影響[J].應用生態(tài)學報,2017,28(9):2984-2992.

    [16]王馨雨,楊綠竹,王婷,等.植物多酚氧化酶的生理功能、分離純化及酶促褐變控制的研究進展[J].食品科學,2020,41(09):222-236.

    [17]REN G H,WANG B J,ZHU X D,et al. Cloning,expression,and characterization of miR058 and its target PPO during the development of grapevine berry stone[J].Gene,2014,548(2):166-173.

    [18]AHMADIPOUR S,ARJI I,EBADI A,et al. Physiological and biochemical responses of some olive cultivars (Olea europaea L.) to water stress[J]. Cellular and Molecular Biology,2018,64(15):20-29.

    [19]ORTEGA-GARCíA F,PERAGóN J. The response of phenylalanine ammonia-lyase,polyphenol oxidase and phenols to cold stress in the olive tree (Olea europaea L. cv. Picual)[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture,2009,89(9):1565-1573.

    [20]彭淼,鐘曉紅,張玲,等.鈣對干旱脅迫下草莓SOD、CAT、PPO活性的影響[J].長江大學學報(自然科學版),2009,6(1):11-14.

    [21]傅蕾,李霞,高璐,等.鹽脅迫下泛菌屬內生細菌對雜交狼尾草發(fā)芽及生理的影響[J].草業(yè)科學,2017,34(10):2099-2108.

    [22]朱虹,祖元剛,王文杰,等.逆境脅迫條件下脯氨酸對植物生長的影響[J].東北林業(yè)大學學報,2009,37(4):86-89.

    [23]滕松山.具ACC脫氨酶活性的堿蓬內生細菌對植物的解鹽促生作用及其ACC脫氨酶基因的克隆[D].濟南:山東師范大學,2011.

    [24]謝強,陳莉.在抗性條件下脯氨酸積累對苔蘚植物的作用[J].現(xiàn)代園藝,2020(15):51-51,130.

    [25]徐亞軍,趙龍飛,邢鴻福,等.內生細菌對鹽脅迫下小麥幼苗脯氨酸和丙二醛的影響[J].生態(tài)學報,2020,40(11):3726-3737.

    [26]李淑艷,印荔,蔣潤枝,等.外源Ca2+對蓮藕幼苗鹽脅迫的緩解效應[J].試驗研究,2017(6):11-19.

    [27]賀韻雅,于海峰,楊蕾.鹽脅迫下發(fā)狀念珠藻膜脂的過氧化及抗氧化響應[J].青島科技大學學報(自然科學版),2011,32(6):626-629.

    [28]劉慧,劉治婷,於麗華,等.不同NaCl濃度下甜菜葉片MDA含量及抗氧化酶活性的動態(tài)變化[J].中國甜菜糖業(yè),2017(1):1-4.

    (責編:徐世紅)

    猜你喜歡
    NaCl脅迫生理生化
    小麥抗旱生理生化和分子生物學研究進展與趨勢
    NaCl脅迫對喜鹽鳶尾和馬藺部分生理代謝的影響
    鍶脅迫對玉米幼苗生長及生理生化響應的研究
    NaCl脅迫對牛角瓜種子萌發(fā)及幼苗生理特性的影響
    廣西農學報(2016年3期)2017-02-06 17:46:10
    不同NaCl濃度脅迫對冰菜種子萌發(fā)和組培苗生長的影響
    一株植物內生放線菌次級代謝產(chǎn)物的提取及抑菌活性研究
    科技視界(2016年11期)2016-05-23 17:09:25
    水楊酸浸種對NaCl脅迫下黍稷種子萌發(fā)時α—淀粉酶活性的影響
    植物組織培養(yǎng)生理機制的研究進展
    NaCl脅迫不同品種秋地黃瓜種子發(fā)芽期耐鹽性研究與評價
    久久鲁丝午夜福利片| 亚洲在线观看片| 国产一级毛片在线| 一级av片app| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产日韩欧美在线精品| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲在久久综合| 一个人看的www免费观看视频| 中文欧美无线码| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲国产色片| 一级毛片aaaaaa免费看小| 成年女人看的毛片在线观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 午夜老司机福利剧场| 欧美高清性xxxxhd video| 看免费成人av毛片| 日韩伦理黄色片| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久久久久久午夜电影| 国产视频内射| 亚洲欧美成人精品一区二区| 欧美日韩在线观看h| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 插阴视频在线观看视频| 日韩视频在线欧美| 1000部很黄的大片| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲精品第二区| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 91午夜精品亚洲一区二区三区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 国产高清有码在线观看视频| 晚上一个人看的免费电影| 国产成人一区二区在线| 男女下面进入的视频免费午夜| av在线播放精品| 欧美日韩亚洲高清精品| 黄色日韩在线| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲综合精品二区| 一级爰片在线观看| av网站免费在线观看视频| 午夜激情久久久久久久| 亚洲国产色片| a级一级毛片免费在线观看| 欧美精品一区二区大全| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 在现免费观看毛片| 看黄色毛片网站| 国产乱人视频| 久久综合国产亚洲精品| a级毛色黄片| 日韩成人伦理影院| 又大又黄又爽视频免费| 毛片女人毛片| av在线app专区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 日韩免费高清中文字幕av| 男女那种视频在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲国产欧美人成| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 日韩在线高清观看一区二区三区| 少妇被粗大猛烈的视频| 最近手机中文字幕大全| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲精品视频女| 久久影院123| 久久99热6这里只有精品| 亚洲性久久影院| 国产 一区精品| 校园人妻丝袜中文字幕| 伊人久久国产一区二区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 色5月婷婷丁香| 亚洲自拍偷在线| 校园人妻丝袜中文字幕| 老女人水多毛片| 国产成人精品久久久久久| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产乱来视频区| 国产精品不卡视频一区二区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 美女内射精品一级片tv| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 91久久精品电影网| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产一级毛片在线| 免费观看在线日韩| 国产视频首页在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 看免费成人av毛片| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品熟女久久久久浪| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产成人精品福利久久| 久久影院123| 一区二区三区精品91| 搞女人的毛片| 免费高清在线观看视频在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 嫩草影院新地址| 亚洲欧美一区二区三区国产| 简卡轻食公司| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产高潮美女av| 人体艺术视频欧美日本| freevideosex欧美| av在线天堂中文字幕| 亚洲高清免费不卡视频| 美女高潮的动态| 国产 一区 欧美 日韩| 国产伦理片在线播放av一区| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲最大成人av| 色婷婷久久久亚洲欧美| 九九爱精品视频在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 中文字幕久久专区| 日韩亚洲欧美综合| 男女无遮挡免费网站观看| 免费av不卡在线播放| 亚洲成人中文字幕在线播放| 视频中文字幕在线观看| 秋霞在线观看毛片| 国产伦理片在线播放av一区| 久久久午夜欧美精品| 男女国产视频网站| 亚洲人与动物交配视频| 熟女av电影| 22中文网久久字幕| 国产精品爽爽va在线观看网站| 韩国高清视频一区二区三区| 日韩成人伦理影院| 国产精品国产三级专区第一集| 国产精品三级大全| 国产在视频线精品| 丝瓜视频免费看黄片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 99久久中文字幕三级久久日本| 少妇人妻久久综合中文| 少妇的逼好多水| 在线观看免费高清a一片| 欧美日韩亚洲高清精品| 尾随美女入室| 人妻夜夜爽99麻豆av| 我的女老师完整版在线观看| 精品久久久久久久末码| 国产91av在线免费观看| 国产男女超爽视频在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 久久久色成人| 丝袜喷水一区| 精品酒店卫生间| 日日撸夜夜添| 亚洲精品影视一区二区三区av| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 一级毛片aaaaaa免费看小| 成人亚洲精品一区在线观看 | kizo精华| 天堂中文最新版在线下载 | 久久国产乱子免费精品| 国产精品一区二区性色av| 免费观看在线日韩| 色网站视频免费| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产高潮美女av| 99久久精品热视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 国模一区二区三区四区视频| 99热这里只有精品一区| 久久久欧美国产精品| 国产乱来视频区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| av免费在线看不卡| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲色图av天堂| 人妻 亚洲 视频| 欧美成人午夜免费资源| 国产精品99久久99久久久不卡 | 香蕉精品网在线| 在现免费观看毛片| 亚洲,一卡二卡三卡| 麻豆国产97在线/欧美| 国产精品秋霞免费鲁丝片| freevideosex欧美| 日本免费在线观看一区| 日本熟妇午夜| 国产探花在线观看一区二区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 成人漫画全彩无遮挡| 免费电影在线观看免费观看| 国产精品成人在线| 国产午夜福利久久久久久| 不卡视频在线观看欧美| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 亚洲人成网站在线播| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 国产视频首页在线观看| 亚洲av免费在线观看| bbb黄色大片| 黄片无遮挡物在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 毛片一级片免费看久久久久| 日本av手机在线免费观看| 久久久精品94久久精品| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 水蜜桃什么品种好| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲精品av麻豆狂野| 成人影院久久| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产成人免费观看mmmm| 最黄视频免费看| 国产精品偷伦视频观看了| 国产福利在线免费观看视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 欧美日本中文国产一区发布| 国产一卡二卡三卡精品 | 啦啦啦 在线观看视频| 熟女av电影| 街头女战士在线观看网站| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产一区二区激情短视频 | 亚洲美女视频黄频| 两性夫妻黄色片| 男女边摸边吃奶| 中文天堂在线官网| av.在线天堂| 色网站视频免费| 亚洲成色77777| 看免费成人av毛片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 宅男免费午夜| 国产精品国产av在线观看| 一区福利在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 国产日韩欧美在线精品| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产爽快片一区二区三区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久久精品区二区三区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产黄色视频一区二区在线观看| 成年人午夜在线观看视频| 热99国产精品久久久久久7| 人妻人人澡人人爽人人| 丰满少妇做爰视频| 国产av一区二区精品久久| 国产欧美亚洲国产| 搡老岳熟女国产| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产欧美亚洲国产| 精品一区二区免费观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 高清在线视频一区二区三区| 国产熟女欧美一区二区| 狂野欧美激情性xxxx| 免费日韩欧美在线观看| av在线老鸭窝| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产成人免费观看mmmm| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 不卡av一区二区三区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| av网站免费在线观看视频| 欧美久久黑人一区二区| 自线自在国产av| 满18在线观看网站| 久久ye,这里只有精品| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 99国产综合亚洲精品| 大片电影免费在线观看免费| 国产日韩欧美视频二区| 在线天堂中文资源库| 免费不卡黄色视频| 国产片特级美女逼逼视频| 国产探花极品一区二区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| svipshipincom国产片| 免费少妇av软件| 国产成人免费观看mmmm| 精品亚洲成a人片在线观看| 操出白浆在线播放| 18禁观看日本| 成人国产麻豆网| 国产成人欧美| 美女主播在线视频| 亚洲三区欧美一区| 18在线观看网站| 国产 精品1| 国产伦人伦偷精品视频| 不卡av一区二区三区| 大陆偷拍与自拍| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美人与善性xxx| 成人影院久久| 黄片小视频在线播放| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 性少妇av在线| 精品亚洲成a人片在线观看| bbb黄色大片| 晚上一个人看的免费电影| 中文欧美无线码| 亚洲熟女毛片儿| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 老司机影院成人| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲男人天堂网一区| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲,欧美精品.| 丰满乱子伦码专区| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 一区二区日韩欧美中文字幕| 精品一区在线观看国产| 国产又色又爽无遮挡免| 搡老乐熟女国产| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 丝袜脚勾引网站| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 精品少妇内射三级| 人体艺术视频欧美日本| 中文字幕精品免费在线观看视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲欧美清纯卡通| 国产伦人伦偷精品视频| a级毛片黄视频| 在线看a的网站| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 最近手机中文字幕大全| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 丝袜脚勾引网站| 男的添女的下面高潮视频| 久久久久网色| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 水蜜桃什么品种好| 超色免费av| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久热在线av| 十八禁网站网址无遮挡| 一级毛片电影观看| 国产成人系列免费观看| 2018国产大陆天天弄谢| 精品一区二区三卡| 国产一区二区在线观看av| 青春草国产在线视频| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲精品国产区一区二| av福利片在线| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲国产欧美在线一区| avwww免费| svipshipincom国产片| 国产午夜精品一二区理论片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 大香蕉久久网| 午夜福利影视在线免费观看| 久久99一区二区三区| 9热在线视频观看99| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲五月色婷婷综合| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲熟女毛片儿| 中文欧美无线码| 悠悠久久av| 视频区图区小说| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲国产av影院在线观看| 男女午夜视频在线观看| 精品午夜福利在线看| 精品一品国产午夜福利视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产黄色免费在线视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 日韩精品有码人妻一区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 夫妻午夜视频| 亚洲久久久国产精品| 久久99热这里只频精品6学生| 黄色视频不卡| 亚洲欧美一区二区三区久久| 男女下面插进去视频免费观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 日本av免费视频播放| 亚洲精品国产av蜜桃| 99热网站在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 男女国产视频网站| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国精品久久久久久国模美| 亚洲人成77777在线视频| 我要看黄色一级片免费的| 在线看a的网站| 在线免费观看不下载黄p国产| av在线观看视频网站免费| 如何舔出高潮| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 午夜影院在线不卡| 国产精品一区二区在线不卡| av有码第一页| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲人成电影观看| 久久久久久人妻| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲色图综合在线观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产片特级美女逼逼视频| 18在线观看网站| 晚上一个人看的免费电影| 国产一区二区在线观看av| 亚洲第一av免费看| 在线观看国产h片| 黄色视频不卡| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 国产精品一二三区在线看| 99精品久久久久人妻精品| 日日啪夜夜爽| 国产国语露脸激情在线看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美精品一区二区大全| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲综合色网址| 不卡av一区二区三区| 黄色一级大片看看| 在线观看国产h片| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲伊人久久精品综合| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲国产欧美一区二区综合| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲久久久国产精品| 大片电影免费在线观看免费| 新久久久久国产一级毛片| 少妇人妻久久综合中文| 高清在线视频一区二区三区| 日韩大片免费观看网站| 亚洲av在线观看美女高潮| 香蕉国产在线看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 天天添夜夜摸| 日韩成人av中文字幕在线观看| 免费少妇av软件| 日韩大片免费观看网站| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲男人天堂网一区| 91老司机精品| 国产不卡av网站在线观看| 久久久精品94久久精品| 国产av一区二区精品久久| 男女高潮啪啪啪动态图| 少妇被粗大的猛进出69影院| 成人国语在线视频| 免费黄频网站在线观看国产| 精品久久蜜臀av无| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲成国产人片在线观看| 91成人精品电影| e午夜精品久久久久久久| 精品亚洲成国产av| 中文字幕色久视频| 亚洲美女搞黄在线观看| av福利片在线| 纯流量卡能插随身wifi吗| 精品国产一区二区久久| 成年av动漫网址| 只有这里有精品99| 亚洲av综合色区一区| 街头女战士在线观看网站| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲精品一区蜜桃| 少妇的丰满在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 一级黄片播放器| 老鸭窝网址在线观看| 欧美日韩av久久| 亚洲一码二码三码区别大吗| 午夜福利影视在线免费观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 精品国产国语对白av| 伦理电影大哥的女人| 久久 成人 亚洲| 久久久久久久久久久免费av| 99久久综合免费| 在线天堂最新版资源| 99久国产av精品国产电影| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产成人免费观看mmmm| av在线老鸭窝| 亚洲国产欧美在线一区| 国产淫语在线视频| 国产精品欧美亚洲77777| 精品人妻在线不人妻| 成人影院久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 深夜精品福利| 午夜福利视频精品| 1024视频免费在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 99国产综合亚洲精品| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 女人精品久久久久毛片| 欧美人与善性xxx| 日本欧美国产在线视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 亚洲伊人色综图| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产av精品麻豆| 天堂俺去俺来也www色官网| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲男人天堂网一区| av不卡在线播放| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 在线观看免费视频网站a站| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲av国产av综合av卡| videos熟女内射| 我的亚洲天堂| 天天操日日干夜夜撸| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产精品av久久久久免费| 久久久久久免费高清国产稀缺| 成年女人毛片免费观看观看9 | 人成视频在线观看免费观看| 九九爱精品视频在线观看| 国产视频首页在线观看| 欧美激情高清一区二区三区 | 狂野欧美激情性xxxx| 国产一区二区三区综合在线观看| 成年人午夜在线观看视频| 日韩精品有码人妻一区| kizo精华| 不卡av一区二区三区| 少妇被粗大猛烈的视频| av视频免费观看在线观看| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产精品无大码| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 精品少妇内射三级| 国产黄频视频在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 男男h啪啪无遮挡| av在线观看视频网站免费| 天天影视国产精品| 午夜福利视频精品| 久久99精品国语久久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| av卡一久久| 国产精品成人在线| avwww免费| 日韩欧美精品免费久久| 国产精品一国产av| 久热这里只有精品99| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 波多野结衣一区麻豆| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 波多野结衣一区麻豆| 欧美变态另类bdsm刘玥| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 另类亚洲欧美激情| 亚洲四区av| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 宅男免费午夜| a级毛片黄视频| 99热网站在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 一级黄片播放器| 亚洲综合色网址| 国产免费现黄频在线看| 亚洲av综合色区一区|