非布司他輔助治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的療效及對(duì)外周血中NLRP3 炎癥小體及血清IL-1β、IL-18 的調(diào)控作用

馬延娟 趙建芹 李春睿

糖尿病周圍神經(jīng)病變（Diabetic peripheral neuropathy，DPN）是常見的糖尿病微血管并發(fā)癥，表現(xiàn)為肢體麻木、肌力減退，也增加糖尿病足的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，需要進(jìn)行積極防治［1-2］。DPN 的發(fā)病涉及多因素，血糖控制不達(dá)標(biāo)、血糖波動(dòng)大、糖尿病病程長(zhǎng)是已知的DPN 相關(guān)因素，近些年的分子生物學(xué)研究還證實(shí)核甘酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（nucleotide- binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）炎癥小體介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)與DPN 的發(fā)病相關(guān)，抑制NLRP3 炎癥小體顯著改善DPN 的臨床癥狀［3-4］。高尿酸血癥是2 型糖尿病常見的合并癥，有研究報(bào)道尿酸（uric acid，UA）水平升高是DPN 發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示控制尿酸水平是防治DPN 的有效手段［5］。非布司他是一類通過抑制黃嘌呤氧化酶活性減少尿酸生成的藥物，相關(guān)的基礎(chǔ)研究還證實(shí)非布司他在降尿酸的同時(shí)對(duì)NLRP3 炎癥小體介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)具有抑制作用［6］。為了深入認(rèn)識(shí)非布司他在DPN 治療中的價(jià)值，本研究將分析非布司他輔助治療DPN 的療效及對(duì)NLRP3 炎癥小體的調(diào)控作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2019 年1 月至2020 年1 月期間陽(yáng)光融和醫(yī)院收治的DPN 合并高尿酸血癥患者作為研究對(duì)象200 例，其中男性114 例、女性86 例，年齡（61.11±9.62）歲，糖尿病病程（6.24±0.91）年。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合指南中DPN 的診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］；②血糖控制達(dá)標(biāo)，監(jiān)測(cè)糖化血紅蛋白（HbA1c）≤7%［7］；③合并高尿酸血癥；④取得入組患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近3 月使用過降尿酸藥物；②感染性多發(fā)性神經(jīng)炎、頸椎病、腰椎間盤突出癥等其他疾病導(dǎo)致周圍神經(jīng)病變；③合并自身免疫性疾病、惡性腫瘤、急慢性感染；④既往有痛風(fēng)病史。

1.2 分組及治療方法

采用數(shù)字表將入組患者分為觀察組和對(duì)照組，每組各100 例。觀察組中男性56 例、女性44例，年齡（61.38±9.32）歲，糖尿病病程（6.31±0.95）年；對(duì)照組中男性58 例、女性42 例，年齡（60.84±9.91）歲，糖尿病病程（6.18±1.03）年。兩組間一般資料的比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。兩組患者的治療如下：對(duì)照組接受常規(guī)降糖治療，給予甲鈷胺片0.5 mg 口服3 次/日，連續(xù)治療24 周；觀察組接受常規(guī)降糖及甲鈷胺片治療，加用非布司他片40 mg 口服1 次/日，連續(xù)治療24 周。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 實(shí)驗(yàn)室生化指標(biāo)

治療前和治療后24 周，均留取2 組患者的空腹外周靜脈血3～5 mL，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)HbA1c、空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）、總膽固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglycerides，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（Low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）、UA 的水平。

1.3.2 多倫多臨床神經(jīng)病變?cè)u(píng)分量表（Toronto clinical scoring system，TCSS）評(píng)分［7］

治療前和治療后24 周，參照指南［7］采用TCSS從癥狀、感覺、神經(jīng)反射三個(gè)方面進(jìn)行評(píng)分，癥狀包括足部疼痛、麻木、針刺感、無力、共濟(jì)失調(diào)、上肢癥狀，感覺包括觸壓覺、溫度覺、痛覺、振動(dòng)覺和位置覺，神經(jīng)反射包括膝反射、踝反射?？偡?9分，得分越高、周圍神經(jīng)病變?cè)絿?yán)重。

1.3.3 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度（Motor nerve conduction velocity，MCV）和感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度（Sensory nerve conduction velocity，SCV）

治療前和治療后24 周，根據(jù)指南［7］，采用肌電圖儀檢測(cè)正中神經(jīng)和腓神經(jīng)MCV、正中神經(jīng)和腓神經(jīng)SCV。

1.3.4 外周血NLRP3、ACS、Caspase-1 表達(dá)

治療前和治療后24 周，均留取2 組患者的空腹外周靜脈血3～5 mL，采用全血RNA 提取試劑盒（北京天根公司）提取外周血中的總RNA，采用cDNA 第一鏈合成試劑盒（北京天根公司）將外周血總RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用熒光定量檢測(cè)試劑盒（北京天根公司）對(duì)cDNA 中NLRP3、ACS、Caspase-1 的表達(dá)水平進(jìn)行PCR 檢測(cè)，按照試劑盒配置熒光定量PCR 反應(yīng)體系，在PCR 儀中完成反應(yīng)后計(jì)算NLRP3、ACS、Caspase-1 的mRNA相對(duì)表達(dá)水平。

1.3.5 血清IL-1β、IL-18 含量

治療前和治療后24 周，均留取2 組患者的空腹外周靜脈血3～5 mL，靜置30 min 后離心分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)試的試劑盒（上海酶聯(lián)公司）檢測(cè)IL-1β、IL-18 的含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后生化指標(biāo)的比較

治療前，兩組患者的HbA1c、FBG、TC、TG、LDL-C、UA 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者的HbA1c、FBG、TC、TG、LDL-C 水平與治療前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），觀察組患者的UA 水平較治療前降低、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者治療前后生化指標(biāo)的比較（±s）Table 1 Comparison of biochemical index of patients between 2 groups before and after treatment（±s）

表1 兩組患者治療前后生化指標(biāo)的比較（±s）Table 1 Comparison of biochemical index of patients between 2 groups before and after treatment（±s）

組別觀察組對(duì)照組t 值P 值TC（mmol/L）治療前5.85±0.94 5.81±0.92 0.304 0.761治療后5.73±0.98 5.69±0.74 0.326 0.745 TG（mmol/L）治療前2.00±0.62 2.04±0.48 0.510 0.510治療后1.94±0.42 1.97±0.61 0.405 0.405 HbA1c（%）治療前6.85±0.95 6.79±0.84 0.473 0.637治療后6.77±0.91 6.63±0.96 1.508 0.291 FBG（mmol/L）治療前6.32±0.94 6.29±0.91 0.229 0.819治療后6.21±1.03 6.35±1.08 0.938 0.349 LDL-C（mmol/L）治療前2.75±0.88 2.72±0.71 0.265 0.791治療后2.61±0.79 2.65±0.83 0.349 0.727 UA（mmol/L）治療前354.41±62.31 346.41±59.39 0.929 0.354治療后277.31±41.32 340.31±61.23 8.533 0.000

2.2 兩組患者治療前后TCSS 評(píng)分的比較

治療前，兩組患者的TCSS 評(píng)分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后觀察組患者的TCSS 評(píng)分低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者治療前后TCSS 評(píng)分的比較Table 2 Comparison of TCSS score of patients between 2 groups before and after treatment

2.3 兩組患者治療前后MCV 和SCV 的比較

治療前，2 組患者的正中神經(jīng)和腓神經(jīng)MCV、正中神經(jīng)和腓神經(jīng)SCV 比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后觀察組患者的正中神經(jīng)和腓神經(jīng)MCV、正中神經(jīng)和腓神經(jīng)SCV 均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組患者治療前后MCV 和SCV 的比較（m/s）（±s）Table 3 Comparison of MCV and SCV of patients between 2 groups before and after treatment（m/s）（±s）

表3 兩組患者治療前后MCV 和SCV 的比較（m/s）（±s）Table 3 Comparison of MCV and SCV of patients between 2 groups before and after treatment（m/s）（±s）

組別觀察組對(duì)照組t 值P 值正中神經(jīng)MCV治療前40.10±5.42 40.83±4.87 1.002 0.318治療后46.52±4.95 43.24±5.12 4.606 0.000正中神經(jīng)SCV治療前42.31±5.23 42.24±4.89 0.097 0.923治療后48.46±4.49 45.01±4.26 5.574 0.000腓神經(jīng)MCV治療前37.51±4.42 37.14±4.19 0.608 0.544治療后42.86±3.92 40.04±4.52 4.713 0.000腓神經(jīng)SCV治療前30.12±3.42 30.44±3.27 0.676 0.499治療后35.23±3.14 33.01±2.95 5.123 0.000

2.4 兩組患者治療前后外周血NLRP3、ACS、Caspase-1 表達(dá)水平的比較

治療前，2 組患者的外周血NLRP3、ACS、Caspase-1 mRNA 相對(duì)表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后對(duì)照組患者的外周血NLRP3、ACS、Caspase-1 mRNA 相對(duì)表達(dá)水平與治療前比較、差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）且觀察組患者的外周血NLRP3、ACS、Caspase-1 mRNA 相對(duì)表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 兩組患者治療前后外周血NLRP3、ACS、Caspase-1表達(dá)水平的比較（±s）Table 4 Comparison of expression levels of NLRP3，ACS，Caspase-1 in peripheral blood of patients between 2 groups before and after treatment（±s）

表4 兩組患者治療前后外周血NLRP3、ACS、Caspase-1表達(dá)水平的比較（±s）Table 4 Comparison of expression levels of NLRP3，ACS，Caspase-1 in peripheral blood of patients between 2 groups before and after treatment（±s）

組別觀察組對(duì)照組t 值P 值NLRP3治療前1.04±0.15 1.00±0.14 1.732 0.083治療后0.74±0.12 0.98±0.12 14.142 0.000 ACS治療前1.02±0.17 1.00±0.18 0.808 0.807治療后0.71±0.14 1.03±0.12 17.354 0.000 Caspase-1治療前0.97±0.14 1.00±0.17 1.362 0.175治療后0.78±0.10 0.96±0.14 17.352 0.000

2.5 兩組患者治療前后血清IL-1β、IL-18 含量的比較

治療前，2 組患者的血清IL-1β、IL-18 含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后對(duì)照組患者的血清IL-1β、IL-18 含量與治療前比較、差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）且觀察組患者的血清IL-1β、IL-18 含量低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表5。

表5 兩組患者治療前后血清IL-1β、IL-18含量的比較（±s）Table 5 Comparison of serum IL-1β，IL-18 contents of patients between 2 groups before and after treatment（±s）

表5 兩組患者治療前后血清IL-1β、IL-18含量的比較（±s）Table 5 Comparison of serum IL-1β，IL-18 contents of patients between 2 groups before and after treatment（±s）

組別觀察組對(duì)照組t 值P 值IL-1β(ng/mL)治療前8.39±1.25 8.51±1.33 0.657 0.512治療后6.14±0.93 8.38±1.21 14.678 0.000 IL-18(pg/mL)治療前69.51±12.14 68.47±9.39 0.677 0.499治療后50.31±8.84 66.96±10.32 12.253 0.000

3 討論

DPN 是常見的糖尿病微血管并發(fā)癥之一，控制血糖、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)、改善微循環(huán)是臨床治療DPN 的常用手段，但整體療效并不理想。近些年關(guān)于DPN發(fā)病機(jī)制及危險(xiǎn)因素的研究認(rèn)為血尿酸水平升高與DPN 的發(fā)病及嚴(yán)重程度密切相關(guān)［8-9］。尿酸是體內(nèi)嘌呤代謝的產(chǎn)物，具有促炎、促氧化的生物學(xué)作用，不僅參與痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病，還能損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞、造成多種大血管并發(fā)癥和微血管并發(fā)癥的發(fā)生［10-11］。因此，針對(duì)DPN 患者進(jìn)行降尿酸治療能夠削弱尿酸介導(dǎo)的促炎、促氧化作用，進(jìn)而抑制高尿酸對(duì)血管內(nèi)皮的損傷并起到血管并發(fā)癥的防治作用。

非布司他是用于高尿酸血癥及痛風(fēng)治療的降尿酸藥物，通過抑制黃嘌呤氧化酶的活性減少尿酸生成，本研究將非布司他用于DPN 合并高尿酸血癥患者的輔助治療，旨在發(fā)揮該藥物的降尿酸作用，進(jìn)而減輕高尿酸對(duì)周圍神經(jīng)的損害。經(jīng)過24 周的非布司他聯(lián)合常規(guī)治療后，患者的UA 水平較治療前降低且低于接受常規(guī)治療的對(duì)照組，而其他糖脂代謝指標(biāo)在治療后未發(fā)生明顯變化、與對(duì)照組比較也無差異，提示非布司他用于DPN合并高尿酸血癥患者的輔助治療顯著減少尿酸生成且不影響糖脂代謝。進(jìn)一步通過TCSS 評(píng)分和肌電圖檢測(cè)對(duì)DPN 的病情進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)照組經(jīng)常規(guī)降糖及營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)治療后的TCSS 評(píng)分及MCV、SCV 均較治療前改善，提示治療后DPN 的病情得到改善；觀察組經(jīng)常規(guī)治療聯(lián)合非布司他降尿酸后TCSS 評(píng)分及MCV、SCV 的改善較對(duì)照組顯著，提示非布司他用于DPN 輔助治療能夠改進(jìn)療效、改善神經(jīng)傳導(dǎo)功能。

近些年關(guān)于DPN 的分子生物學(xué)研究認(rèn)為炎癥反應(yīng)在周圍神經(jīng)損害中起到重要作用，血糖升高、血糖波動(dòng)大以及合并高尿酸血癥均具有促炎作用［12-13］。NLRP3 炎癥小體在炎癥反應(yīng)的調(diào)控中發(fā)揮重要作用，該小體由NLRP3、ASC、Caspase-1 組成，其功能是促進(jìn)下游炎癥細(xì)胞因子IL-1β、IL-18生成。在DPN 的發(fā)病過程中，NLRP3 炎癥小體的激活與周圍神經(jīng)損害有關(guān)［14］；另有痛風(fēng)相關(guān)的研究證實(shí)UA 對(duì)NLRP3 炎癥小體的激活具有促進(jìn)作用，非布司他在降尿酸的提示顯著抑制NLRP3 炎癥小體的激活［6，15］。本研究將非布司他輔助治療用于DPN 后，對(duì)NLRP3 炎癥小體的激活進(jìn)行了評(píng)價(jià)，常規(guī)治療后NLRP3 炎癥小體無明顯變化，而加用非布司他輔助治療后外周血NLRP3、ASC、Caspase-1 的表達(dá)及血清IL-1β、IL-18 的含量均明顯降低，表明非布司他輔助治療用于DPN 顯著抑制NLRP3 炎癥小體的激活，這也可能是非布司他起到DPN 治療作用的相關(guān)分子機(jī)制。

綜上所述，非布司他輔助治療DPN 合并高尿酸血癥顯著降低UA、改善神經(jīng)傳導(dǎo)功能并抑制NLRP3炎癥小體激活，這為今后發(fā)現(xiàn)DPN 新的治療手段、使用非布司他治療DPN 提供了臨床研究證據(jù)。