• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同低氧訓(xùn)練模式通過激活小鼠脂肪組織脂噬作用調(diào)節(jié)脂代謝

    2022-02-04 08:14:20李夢(mèng)影李靈杰馬春偉邊靜高炳宏
    關(guān)鍵詞:皮下脂肪低氧脂質(zhì)

    李夢(mèng)影 李靈杰 馬春偉 邊靜 高炳宏

    1 上海體育學(xué)院運(yùn)動(dòng)健康學(xué)院(上海 200438)

    2 上海體育學(xué)院競(jìng)技訓(xùn)練學(xué)院(上海 200438)

    隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展與生活節(jié)奏的不斷加快,人們不規(guī)律的飲食作息和過度的生活壓力等各種原因?qū)е聶C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)蓄積。前人的研究表明,體內(nèi)脂質(zhì)堆積通常會(huì)提高多種代謝性疾病的發(fā)病率,嚴(yán)重威脅現(xiàn)代人的生命與健康[1]。2009 年,Singh 等在肝臟中發(fā)現(xiàn)并闡述了自噬對(duì)脂滴的選擇性降解作用,并引出“脂噬”這一全新的概念[2]。脂噬(Lipophagy)是將細(xì)胞內(nèi)脂滴和膽固醇當(dāng)作內(nèi)容物通過自噬體傳送到溶酶體,融合后在酸性脂肪酶和水解酶作用下將脂滴分解為甘油和游離脂肪酸的一種細(xì)胞內(nèi)脂肪降解途徑[3,4]。Kaushik和Cuervo的后續(xù)報(bào)道也進(jìn)一步支持Singh等的研究,揭示了分子伴侶誘導(dǎo)的自噬和巨自噬在清除肝臟脂滴方面的潛力[5]。脂噬最初在肝臟中被發(fā)現(xiàn),之后在其他類型細(xì)胞如神經(jīng)細(xì)胞[6]、巨噬細(xì)胞[7]和腫瘤細(xì)胞[8]中都發(fā)現(xiàn)脂噬能夠參與調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)的脂質(zhì)代謝[5]。饑餓[9]、運(yùn)動(dòng)[10]、寒冷環(huán)境[11]等外界刺激可以激活脂噬作用,細(xì)胞內(nèi)脂滴與自噬相關(guān)蛋白(autophagy-related gene or protein,Atg)結(jié)合激活自噬體的形成,之后自噬體與溶酶體融合降解脂質(zhì)。當(dāng)然這也存在著一種反向關(guān)系,即細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)儲(chǔ)存的異常也會(huì)影響脂噬。脂質(zhì)可以通過影響信號(hào)傳導(dǎo)、自噬體膜形成、擴(kuò)張等環(huán)節(jié),從而調(diào)控脂噬過程[12]。

    低氧訓(xùn)練作為一種新的治療策略,能通過促進(jìn)脂質(zhì)代謝來減控體脂[13]。研究表明長(zhǎng)期居住在高海拔地區(qū)的人比生活在低海拔地區(qū)的人的體脂更低,肥胖相關(guān)疾病也更少。低住高練(living-low/training-high,Lo-Hi)是指生活在常氧環(huán)境中,在低氧環(huán)境下運(yùn)動(dòng)的一種訓(xùn)練方式。與其他低氧訓(xùn)練方式相比,低住高練僅需要建造一個(gè)訓(xùn)練的低氧環(huán)境,而不需要低氧居住環(huán)境。這不僅能達(dá)到減控體重的目的還能保證受試者訓(xùn)練后疲勞得到正常的恢復(fù)[14]。高住低練(living-high/training-low,HiLo)是指居住在低氧環(huán)境下,在常氧環(huán)境進(jìn)行運(yùn)動(dòng)的一種訓(xùn)練方式。此模式解決了運(yùn)動(dòng)負(fù)荷和缺氧負(fù)荷同時(shí)存在的矛盾,但是對(duì)機(jī)體機(jī)能狀態(tài)的改善效果沒有低住高練模式顯著[15]。Lu 的研究表明4周的低氧訓(xùn)練能夠降低肥胖大鼠的體重、脂肪質(zhì)量和血脂水平[16]。運(yùn)動(dòng)和低氧能激活組織細(xì)胞中的脂噬作用,也能有效降低體脂。脂噬的激活能刺激脂滴(lipid droplets,LDs)降解并減少脂肪細(xì)胞中的脂質(zhì)積累[17]。低氧訓(xùn)練減少體脂是否與激活脂肪組織脂噬有關(guān)尚未見相關(guān)研究證實(shí)。因此,本研究主要探究不同低氧訓(xùn)練模式能否通過激活小鼠腹股溝皮下脂肪組織脂噬作用調(diào)節(jié)小鼠脂代謝,并結(jié)合前人研究探討低氧訓(xùn)練激活脂噬過程中可能的分子機(jī)制。

    1 材料和方法

    1.1 動(dòng)物分組和實(shí)驗(yàn)方案

    從上海南方模式生物科技股份有限公司購入40只2月齡C57BL/6健康雄性小鼠,在SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室分籠飼養(yǎng),自由飲食。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境溫度為22℃± 2℃,相對(duì)濕度50%~70%,12︰12 小時(shí)的光暗循環(huán)。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)上海體育學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(2017036)。

    將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(control,C組),運(yùn)動(dòng)組(exercise,E組),低氧組(hypoxia,H組),低住高練組(LoHi組)和高住低練(HiLo 組)五組,每組8 只。C 組在常氧下生活,不運(yùn)動(dòng)。E組、LoHi組和HiLo組小鼠在第1周進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練,速度從12 m/min 提高到25 m/min,運(yùn)動(dòng)時(shí)間從15 min/d 增加到了60 min/d。從第2 周開始對(duì)E組、H組、LoHi組和HiLo組小鼠進(jìn)行6周的訓(xùn)練干預(yù),運(yùn)動(dòng)方案為:25 m/min,1 h/d,5 d/w;E 組在常氧環(huán)境下進(jìn)行跑臺(tái)運(yùn)動(dòng);H 組每天8 點(diǎn)~18 點(diǎn)在13.6%(相當(dāng)于3600 m)低氧濃度下進(jìn)行低氧暴露;Lo-Hi組在常氧(21%)氧濃度下生活,在13.6%低氧濃度下進(jìn)行跑臺(tái)運(yùn)動(dòng);HiLo 組每天8 點(diǎn)~16 點(diǎn)在氧氣濃度為13.6%的低氧帳篷下進(jìn)行低氧暴露,每次低氧暴露結(jié)束后進(jìn)行常氧環(huán)境下的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)。低氧組和低氧訓(xùn)練組的低氧干預(yù)在低氧帳篷中進(jìn)行,采用Everest SummitⅡ低氧發(fā)生器(可模擬海拔0~8000 m 高度常壓低氧環(huán)境,美國Hypoxico Inc.公司)。從第1周開始,每周六稱量小鼠體重,共7周,體重增長(zhǎng)量=第7周體重-第1周體重(g)。

    1.2 體成分測(cè)試

    小鼠的體成分采用動(dòng)物體成分分析儀(Echo MRI,匯佳生物股份有限公司,中國)測(cè)量。首先在體成分測(cè)試前稱量小鼠體重,對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)后在軟件上輸入小鼠編號(hào)和體重等信息,之后將小鼠放入適合的Holder內(nèi),插入機(jī)器上部對(duì)應(yīng)空間,最后測(cè)完體成分獲得小鼠全身脂肪含量等數(shù)據(jù),進(jìn)而得到體脂比,體脂比=脂肪含量/體重×100%。

    1.3 動(dòng)物取材

    小鼠末次訓(xùn)練結(jié)束24 h后進(jìn)行取材,取材前禁食12 h。經(jīng)腹膜下注射水合氯醛麻醉,麻醉后小鼠內(nèi)眥靜脈叢取血,血液室溫靜置30 min 后,3000 rpm、22℃離心20 min 后收集血清。血清分裝在-80℃保存?zhèn)溆谩H⌒∈蟾构蓽现?,并使用分析電子天平測(cè)量其質(zhì)量,整個(gè)過程在冰上操作。稱量后取部分置于脂肪固定液(塞維爾,中國)中固定,用于制備切片;剩余組織迅速置于液氮,整理分類后置于-80℃超低溫冰箱備用。

    1.4 血清甘油三酯檢測(cè)

    血清甘油三酯(triglyceride,TG)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行檢測(cè)(南京建成生物工程研究所,中國),在酶標(biāo)板中分別加入2.5 μl 的蒸餾水、校準(zhǔn)品和血清以及250 μl 的工作液,之后在震蕩孔板混勻,37℃孵育10 min 波長(zhǎng)510 nm,最后用酶標(biāo)儀(DG5033A,南京華東電子廠,中國)測(cè)定各孔吸光度值并按照說明書中的公式計(jì)算。

    1.5 組織學(xué)分析

    從C、E、H、LoHi 和HiLo 組中各選擇5 只小鼠的脂肪組織進(jìn)行固定至少12 h 后,從脂肪固定液中取出長(zhǎng)、寬、高大致為4 mm的脂肪組織塊,修剪組織后置流水中2 h,用酒精脫水后浸蠟包埋,包好的石蠟塊修理好切片,使用Leica切片機(jī)切片(RM2135,Leica公司,德國),厚度為5 μm,烘干組織后用蘇木精和伊紅染色,奧林巴斯顯微鏡拍片,每張片子取3 個(gè)視野,保存照片。使用Image J 軟件測(cè)算每張照片中的細(xì)胞平均面積。

    1.6 免疫熒光共定位

    石蠟包埋及切片的步驟與上述一致,將石蠟切片在烘片機(jī)上58℃烘烤1 h 30 min,之后用二甲苯和酒精梯度脫蠟后進(jìn)行抗原修復(fù),驢血清封閉1小時(shí)后,使用LC3( 1︰200,CST 公司,美國)、LAMP-2(1︰200,proteintech 公司,美國)4℃孵育過夜,次日使用熒光染液(abcam,英國)在室溫下孵育90 min,然后用DAPI(上海碧云天生物技術(shù)公司,中國)對(duì)細(xì)胞核染色10 min 后加入2 μl 抗熒光淬滅封片液(上海碧云天生物技術(shù)公司,中國)封片。最后用蔡司LSM700 激光共聚焦顯微鏡觀察載玻片,選取合適視野拍照并保存LC3與LAMP-2共定位相關(guān)的數(shù)據(jù)。

    1.7 免疫印跡

    采用Western blot 方法檢測(cè)腹股溝皮下脂肪組織的微管相關(guān)蛋白1 輕鏈3 的比值(Microtubule-associated protein 1 light chain 3Ⅱ/Ⅰ,LC3Ⅱ/Ⅰ)、溶酶體相關(guān)2 型蛋白(Lysosome-associated membrane protein type Ⅱ,LAMP-2)、選擇性自噬接頭蛋白(Sequestosome1,p62)、BECN1 基因編碼蛋白(BCL 2 interacting protein,Beclin1)等自噬關(guān)鍵因子的蛋白表達(dá)。取適量的脂肪組織剪碎,加入300 μl 含有甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride,PMSF)的RIPA 裂解液中(PMSF:RIPA=1︰100,上海碧云天生物技術(shù)公司,中國),使用高通量組織研磨機(jī)(SCIENZ48,寧波新芝生物科技有限公司,中國)裂解組織,在4℃、12000 r/min離心20 min 后取上清,避免吸到脂質(zhì),重復(fù)兩次。用增長(zhǎng)型二辛可寧酸(bicinchoninic acid,BCA)試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)公司,中國)測(cè)定蛋白濃度。樣本通過聚丙烯酰胺凝膠電泳后轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride, PVDF)膜 上(Millipore,德國),用5%的脫脂奶粉溶液封閉2小時(shí)后加入LC3(1︰1000,CST 公司,美國)、LAMP-2(1︰1000,proteintech公司,美國)、Beclin1(1︰1000,CST公司,美國)、p62(1︰1000,CST 公司,美國)、內(nèi)參GAPDH(1︰1000,上海碧云天生物技術(shù)公司,中國)的抗體4℃孵育過夜,用1×TBST 沖洗3 次,每次8 min,再加入相應(yīng)的二抗(1︰1000,HRP標(biāo)記,proteintech 公司,中國),常溫孵育1小時(shí)后使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)(Tanon5200Muti,上海天能科技有限公司,中國)顯影,保存圖片。使用Image J軟件進(jìn)行蛋白定量,自噬相關(guān)蛋白數(shù)據(jù)采用GAPDH進(jìn)行歸一化處理。

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理,結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,多組之間的比較采用單因素方差分析,P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 不同低氧訓(xùn)練模式對(duì)小鼠體重、體脂和血清甘油三酯的影響

    如圖1所示,6周的實(shí)驗(yàn)干預(yù)后,與對(duì)照組相比,運(yùn)動(dòng)組、低氧組、低住高練組、高住低練組四組體重增長(zhǎng)量都有相應(yīng)的減少,低住高練組體重增長(zhǎng)減少有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與運(yùn)動(dòng)組和低氧組相比,低住高練組和高住低練組的體重增長(zhǎng)量也有相應(yīng)減少,但沒有顯著變化(P>0.05)。

    圖1 6周低氧訓(xùn)練干預(yù)后各組小鼠體重增長(zhǎng)量、體脂百分比和血清甘油三酯水平比較

    小鼠體脂比變化與體重變化有細(xì)微差異,與對(duì)照組、低氧組和運(yùn)動(dòng)組相比,低住高練組與高住低練組的體脂比都有減少的趨勢(shì),但是沒有顯著性差異(P>0.05),且不同低氧訓(xùn)練模式之間也未見顯著差異(P>0.05)。

    低氧組、運(yùn)動(dòng)組、低住高練組和高住低練組四組的血清甘油三酯(TG)水平較對(duì)照組顯著下降(P<0.01),且低住高練組和高住低練組與運(yùn)動(dòng)組和低氧組相比以及不同低氧訓(xùn)練模式之間未見明顯變化(P>0.05)。

    2.2 不同低氧訓(xùn)練模式對(duì)皮下脂肪細(xì)胞形態(tài)的影響

    如圖2所示,6周的實(shí)驗(yàn)干預(yù)后,與對(duì)照組相比,經(jīng)過運(yùn)動(dòng)、低氧以及低氧訓(xùn)練干預(yù)后的小鼠皮下脂肪細(xì)胞直徑明顯減少,同一視野下脂肪細(xì)胞的數(shù)量明顯增多;此外,統(tǒng)計(jì)分析同一視野下皮下脂肪細(xì)胞的平均面積,結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,運(yùn)動(dòng)、低氧和低氧訓(xùn)練干預(yù)后的小鼠皮下脂肪細(xì)胞的平均面積顯著減?。≒<0.01);運(yùn)動(dòng)組、低氧組、高住低練組和低住高練組四組之間脂肪細(xì)胞平均面積沒有明顯差異,但低住高練組和高住低練組細(xì)胞的平均面積較運(yùn)動(dòng)組和低氧組更?。徊煌脱跤?xùn)練組平均面積相差較小。

    圖2 6周低氧訓(xùn)練干預(yù)后各組小鼠腹股溝皮下脂肪細(xì)胞大小比較(400×)

    2.3 不同低氧訓(xùn)練模式對(duì)皮下脂肪組織LC3與LAMP-2共定位的影響

    如圖3所示,與對(duì)照組相比,6周的干預(yù)之后,出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)組、低氧組、低住高練組、高住低練組四組皮下脂肪細(xì)胞中的橙黃色斑點(diǎn)增多的現(xiàn)象,且6 周的實(shí)驗(yàn)干預(yù)后,與對(duì)照組相比,運(yùn)動(dòng)、低氧、低住高練、高住低練組四組的共定位系數(shù)都顯著提高(P<0.01,P<0.05);同樣的,從圖3B中可以觀察到皮下脂肪細(xì)胞的直徑明顯縮減。此外,運(yùn)動(dòng)組的共定位系數(shù)顯著高于低氧組(P<0.01);低住高練組的共定位系數(shù)也顯著高于低氧組和運(yùn)動(dòng)組(P<0.01);低住高練組和高住低練組沒有明顯差異(P>0.05)。

    圖3 6周低氧訓(xùn)練干預(yù)后各組小鼠腹股溝皮下脂肪組織免疫熒光共定位圖(400×)

    2.4 不同低氧訓(xùn)練模式對(duì)皮下脂肪組織自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

    如圖4 所示,與對(duì)照組相比,運(yùn)動(dòng)、低氧、低住高練、高住低練組LC3Ⅱ/Ⅰ、LAMP-2蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.01,P<0.05)。此外,低住高練組LC3Ⅱ/Ⅰ的比值顯著大于低氧組(P<0.01),低住高練組LAMP-2的蛋白表達(dá)顯著高于運(yùn)動(dòng)組(P<0.05)。與對(duì)照組相比,低住高練、高住低練組的Beclin1 蛋白表達(dá)水平顯著提高(P<0.01);低住高練組、高住低練組、運(yùn)動(dòng)組和低氧組四組之間也未見顯著差異。與對(duì)照組相比,運(yùn)動(dòng)組、低住高練組和高住低練組p62 的蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01);同時(shí),低住高練組的p62蛋白表達(dá)顯著低于低氧組(P<0.05);但不同低氧訓(xùn)練組之間未見顯著性差異(P>0.05)。

    圖4 6周低氧訓(xùn)練干預(yù)后各組小鼠腹股溝皮下脂肪組織脂噬蛋白表達(dá)比較

    3 討論

    脂肪組織作為“脂肪的儲(chǔ)存庫”積蓄體內(nèi)脂質(zhì)。近些年的研究發(fā)現(xiàn),除了傳統(tǒng)的脂肪酶的脂解作用,細(xì)胞內(nèi)的脂噬作用同樣能降解細(xì)胞內(nèi)的脂滴[18]。機(jī)體在正常的生理狀態(tài)下存在基礎(chǔ)自噬,不同類型的脂肪細(xì)胞的自噬水平不同[19,20]。低氧和運(yùn)動(dòng)已經(jīng)被證明可以激活細(xì)胞內(nèi)的脂噬作用,也可以通過增加脂質(zhì)代謝,減少機(jī)體內(nèi)的脂質(zhì)儲(chǔ)存[21-24]。但低氧訓(xùn)練減控體脂是否與脂噬作用的激活有關(guān)尚未可知。

    低氧訓(xùn)練可能通過降解脂滴促進(jìn)小鼠體內(nèi)的脂質(zhì)代謝。本研究表明在經(jīng)過6 周的低氧訓(xùn)練干預(yù)后,與低氧組相比,運(yùn)動(dòng)組、低住高練組、高住低練組有體重增長(zhǎng)減少,體脂百分比減小的趨勢(shì),但無明顯變化。這可能是因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)使用的小鼠體內(nèi)皮下脂肪組織沒有過度積累,所以脂肪代謝之后脂肪減少量較少,差異性難以體現(xiàn)。對(duì)脂肪細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)脂肪細(xì)胞中央被脂滴占據(jù)而呈現(xiàn)空泡狀,細(xì)胞質(zhì)貼于四周細(xì)胞壁,細(xì)胞核扁長(zhǎng)位于細(xì)胞邊緣。在同樣視野下,運(yùn)動(dòng)組、低氧組、低住高練組和高住低練組的脂肪細(xì)胞直徑減小,數(shù)量增多,低住高練組與高住低練組的平均脂肪細(xì)胞面積較運(yùn)動(dòng)組和低氧組更小,但這兩組的平均脂肪面積差別很小。這也與免疫熒光共定位的結(jié)果中脂肪細(xì)胞的形態(tài)大小變化一致。這提示我們低氧訓(xùn)練確實(shí)能減少皮下脂肪細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)儲(chǔ)存,低住高練和高住低練的干預(yù)效果相似。為了進(jìn)一步確認(rèn)低氧和運(yùn)動(dòng)對(duì)脂肪儲(chǔ)存的影響促進(jìn)了脂質(zhì)代謝,我們測(cè)試了血清中TG水平,如圖1所示,運(yùn)動(dòng)、低氧和低氧訓(xùn)練都能降低血清中的TG水平。上述的形態(tài)學(xué)、生化指標(biāo)等結(jié)果表明不同低氧訓(xùn)練干預(yù)方式促進(jìn)了小鼠皮下脂肪組織中脂質(zhì)的分解代謝,減少了細(xì)胞中的脂質(zhì)儲(chǔ)存,且低住高練和高住低練的干預(yù)效果一致。Gunadi等研究不同訓(xùn)練強(qiáng)度對(duì)Wistar大鼠肝臟中與自噬相關(guān)的基因表達(dá)和蛋白水平的影響,發(fā)現(xiàn)高強(qiáng)度訓(xùn)練大鼠血清甘油三酯水平降低更為明顯,同時(shí)高強(qiáng)度訓(xùn)練組的LC3 和p62 mRNA表達(dá)下降,Beclin1、Atg5、LC3的蛋白表達(dá)顯著增加,這可能意味著中、高強(qiáng)度訓(xùn)練更有助于激活肝臟內(nèi)的脂噬作用,減少肝臟內(nèi)的脂質(zhì)沉積[25]。Song 等的研究發(fā)現(xiàn)適度低氧能夠降低前脂肪細(xì)胞(3T3-L1)中的甘油三酯水平和脂滴大小[26]。低氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)信號(hào)通路與低氧誘導(dǎo)的自噬密切相關(guān),低氧預(yù)適應(yīng)能夠通過激活HIF-1α/Beclin1信號(hào)通路激活神經(jīng)細(xì)胞的自噬,從而保護(hù)神經(jīng),避免缺氧誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷[27]。因此,低氧訓(xùn)練刺激降解脂質(zhì),減少脂質(zhì)儲(chǔ)存可能與低氧訓(xùn)練激活了腹股溝皮下脂肪組織的脂噬作用有關(guān)。

    脂噬過程的調(diào)節(jié)涉及許多復(fù)雜的級(jí)聯(lián)信號(hào),為了確認(rèn)在不同低氧訓(xùn)練模式干預(yù)后的小鼠皮下脂肪中發(fā)生了脂噬作用,本研究測(cè)試了LC3 Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、LAMP-2、p62 等自噬關(guān)鍵蛋白表達(dá)。在脂噬的起始階段,腺苷5`-單磷酸(AMP)活化的蛋白激酶(adenosine5`-monophosphate activated protein kinase,AMPK)能夠直接調(diào)控UNC-51 激酶1(UNC-51 like kinase,ULK1),也可通過抑制雷帕霉素靶蛋白1(mechanistic target of rapamycin,mTOR1)間接激活ULK1,從而導(dǎo)致Atg13、Beclin1 和Ⅲ型磷脂酰肌醇激酶(vacuolar protein sorting 34,VPS34)底物的磷酸化,促進(jìn)Beclin1-Vps34-Vps15 復(fù)合物的形成,從而誘導(dǎo)脂噬的激活[28]。本研究中不同的低氧訓(xùn)練模式都顯著提高了Beclin1的蛋白表達(dá),低氧和運(yùn)動(dòng)也有提高Beclin1蛋白表達(dá)的趨勢(shì),表明低住高練和高住低練干預(yù)都激活了脂肪組織的脂噬。Liu等[29]的研究表明定期有氧運(yùn)動(dòng)顯著增加AMPKα1 的表達(dá)以及磷酸化活性水平,上調(diào)海馬中Beclin1 和LC3 的表達(dá)來誘導(dǎo)自噬。這同樣證明Beclin1是運(yùn)動(dòng)調(diào)控細(xì)胞自噬的重要調(diào)節(jié)因子。脂噬被激活后,自噬體膜借助LC3 與脂滴結(jié)合后繼續(xù)擴(kuò)展延伸形成封閉的自噬小體。因此,LC3 是自噬體的標(biāo)志分子,LC3 的表達(dá)強(qiáng)度及LC3Ⅱ/Ⅰ的比值與自噬呈正相關(guān)[30]。如圖4所示,6周的低氧訓(xùn)練干預(yù)后,與對(duì)照組相比,LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、LAMP-2 等蛋白表達(dá)顯著提高。自噬被激活后,細(xì)胞內(nèi)LC3 蛋白的表達(dá)水平及其LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化的數(shù)量會(huì)顯著提高[31]。自噬水平升高,LC3Ⅱ/Ⅰ也隨之升高,這也與本研究結(jié)果一致。前人的研究中對(duì)大鼠進(jìn)行9周的耐力運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練激活了自噬作用,與對(duì)照組相比,附睪白色脂肪組織的LC3Ⅱ和p62以及腹股溝脂肪組織的LC3-Ⅱ和Atg7的表達(dá)水平也是顯著升高[32]。當(dāng)然這種LC3 的增加可能不是因?yàn)樽允苫钚缘脑黾?,而是由于?xì)胞內(nèi)自噬體的大量堆積,無法快速降解造成的,所以這就需要結(jié)合p62 蛋白的表達(dá)水平來評(píng)價(jià)自噬才更加準(zhǔn)確。p62 是細(xì)胞自噬的經(jīng)典底物,其蛋白表達(dá)的增多表明自噬對(duì)細(xì)胞內(nèi)損傷蛋白或者其他底物的降解能力下降或者是失能[33]。p62將脂滴鏈接到自噬體后,隨溶酶體的降解而減少[34]。本研究結(jié)果顯示,運(yùn)動(dòng)和低氧訓(xùn)練都能降低小鼠皮下脂肪組織p62 蛋白表達(dá),且低氧訓(xùn)練的效果更加顯著,這與LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表達(dá)相符。包裹脂滴的自噬體與溶酶結(jié)合后形成自噬溶酶體,在此結(jié)合過程中,溶酶體表面蛋白LAMP-2 發(fā)揮重要作用。前人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,LAMP-1和LAMP-2雙缺陷細(xì)胞延遲了溶酶體轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子Ras 相關(guān)蛋白7(Ras-related protein,Rab7 )的募集,并且破壞了自噬體與溶酶體融合,從而破壞了自噬過程[35]。本研究中,經(jīng)過6 周的干預(yù),運(yùn)動(dòng)、低氧和低氧訓(xùn)練組的LAMP-2蛋白表達(dá)都顯著提高,且低住高練較單純運(yùn)動(dòng)的干預(yù)效果更明顯。為了再次確認(rèn)自噬體是否與溶酶體結(jié)合,本研究利用LC3 和LAMP-2 進(jìn)行免疫熒光共定位,如圖3 所示,紅色熒光代表的是LAMP-2,綠色熒光代表的是LC3,藍(lán)色的斑點(diǎn)則是細(xì)胞核的發(fā)光顏色。自噬體與溶酶體結(jié)合后,自噬體標(biāo)記蛋白LC3和溶酶體標(biāo)記蛋白LAMP-2共同定位于自噬溶酶體膜上,綠色熒光與紅色熒光疊加后形成黃色的熒光。與對(duì)照組相比,6 周的干預(yù)之后,出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)組、低氧組、低住高練組、高住低練組四組皮下脂肪細(xì)胞中的橙黃色斑點(diǎn)增多的現(xiàn)象。免疫熒光共定位結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,不同的低氧訓(xùn)練模式干預(yù)后LC3 與LAMP-2 熒光共定位系數(shù)都顯著提高;此外,低住高練組、高住低練組也顯著高于運(yùn)動(dòng)組、低氧組。LAMP-2是一種單跨溶脂膜蛋白,能保持溶解質(zhì)穩(wěn)定并參與自噬[36],在運(yùn)動(dòng)和低氧干預(yù)后皮下組織細(xì)胞中LAMP-2與LC3蛋白表達(dá)升高以及免疫熒光信號(hào)增強(qiáng),LC3和LAMP-2在自噬中發(fā)揮重要作用,并且二者增強(qiáng)信號(hào)高度重合,均證實(shí)腹股溝皮下脂肪細(xì)胞發(fā)生了脂噬作用。前人的研究表明運(yùn)動(dòng)、低氧以及饑餓等刺激時(shí),mTOR 受到抑制,Beclin1 被激活,LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的轉(zhuǎn)化增加,p62表達(dá)減少,從而增強(qiáng)自噬活性,蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)的激活可以上調(diào)mTOR從而抑制自噬,而AMPK活化也能抑制mTOR增加自噬[37,38]。Liu等[39]的研究給纖維連接蛋白Ⅲ型結(jié)構(gòu)域蛋白5(fibronectin type Ⅲ domain-containing protein 5,F(xiàn)NDC5)缺乏的小鼠補(bǔ)充FNDC5,結(jié)果顯示,外源補(bǔ)充FNDC5 能通過恢復(fù)AMPK/mTOR 信號(hào)通路,上調(diào)LC3Ⅱ的蛋白表達(dá),從而激活自噬,減少肝臟中的脂質(zhì)累積。這與本研究的結(jié)果一致,也提示了脂噬的調(diào)控不僅與LC3、Beclin1、p62、LAMP-2 等關(guān)鍵因子的調(diào)控有關(guān),還可能與AMPK/mTOR等信號(hào)調(diào)節(jié)因子有關(guān)。

    綜上所述,不同低氧訓(xùn)練方式都能通過激活皮下脂肪組織脂噬作用降解脂滴,調(diào)控脂代謝,但具體的調(diào)控機(jī)制尚未明確,下一步的研究可以從低氧訓(xùn)練激活脂噬作用促進(jìn)脂代謝入手,進(jìn)一步探討此過程的具體調(diào)控機(jī)制,為低氧訓(xùn)練調(diào)控脂代謝提供理論依據(jù)。

    4 結(jié)論

    6 周的低氧訓(xùn)練能夠通過激活小鼠腹股溝皮下脂肪組織的脂噬作用促進(jìn)脂質(zhì)分解代謝,且低住高練和高住低練的干預(yù)效果沒有明顯區(qū)別。

    猜你喜歡
    皮下脂肪低氧脂質(zhì)
    定量CT評(píng)估內(nèi)臟脂肪及皮下脂肪與結(jié)直腸腺瘤的相關(guān)性
    間歇性低氧干預(yù)對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的影響
    復(fù)方一枝蒿提取物固體脂質(zhì)納米粒的制備
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:18:36
    白楊素固體脂質(zhì)納米粒的制備及其藥動(dòng)學(xué)行為
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:19:53
    馬錢子堿固體脂質(zhì)納米粒在小鼠體內(nèi)的組織分布
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:26
    Wnt/β-catenin信號(hào)通路在低氧促進(jìn)hBMSCs體外增殖中的作用
    患者皮下脂肪厚度與丙泊酚麻醉應(yīng)用劑量相關(guān)性的臨床觀察
    日本推出新款皮下脂肪儀 檢測(cè)精度達(dá)毫米級(jí)
    家電科技(2014年5期)2014-04-16 03:11:28
    川陳皮素固體脂質(zhì)納米粒的制備
    中成藥(2014年9期)2014-02-28 22:28:50
    裸鼴鼠不同組織中低氧相關(guān)基因的表達(dá)
    亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产一区二区在线观看日韩| 国产熟女午夜一区二区三区 | 在线精品无人区一区二区三| 久热这里只有精品99| 91精品国产九色| 色视频www国产| 日韩一区二区三区影片| 韩国高清视频一区二区三区| 久久久久久人妻| 免费看日本二区| 天美传媒精品一区二区| 一级二级三级毛片免费看| 日韩中字成人| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 成人亚洲精品一区在线观看| 久久久久久久久久久免费av| 不卡视频在线观看欧美| 免费大片黄手机在线观看| .国产精品久久| .国产精品久久| 在线天堂最新版资源| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| av有码第一页| 大香蕉久久网| 日韩视频在线欧美| 成年女人在线观看亚洲视频| 18+在线观看网站| 亚洲三级黄色毛片| 高清毛片免费看| 91成人精品电影| 国产成人精品一,二区| 精品一品国产午夜福利视频| 男女无遮挡免费网站观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 赤兔流量卡办理| 国产又色又爽无遮挡免| 伦精品一区二区三区| 国产毛片在线视频| 亚洲欧美日韩东京热| 久久鲁丝午夜福利片| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产精品一区二区在线观看99| 99视频精品全部免费 在线| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲经典国产精华液单| av.在线天堂| 久久热精品热| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 欧美bdsm另类| 免费观看a级毛片全部| 99热国产这里只有精品6| 国产又色又爽无遮挡免| 国产欧美日韩精品一区二区| 成人午夜精彩视频在线观看| 熟女av电影| 麻豆成人av视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 男的添女的下面高潮视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产极品天堂在线| 男女边摸边吃奶| 26uuu在线亚洲综合色| 日韩中文字幕视频在线看片| 一边亲一边摸免费视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 中国三级夫妇交换| 日韩三级伦理在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美另类一区| 免费大片18禁| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲综合精品二区| 麻豆乱淫一区二区| 18禁动态无遮挡网站| 精品人妻一区二区三区麻豆| 成年女人在线观看亚洲视频| kizo精华| 伊人久久精品亚洲午夜| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 婷婷色麻豆天堂久久| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产精品福利在线免费观看| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 欧美日韩av久久| 男人和女人高潮做爰伦理| 人妻人人澡人人爽人人| 水蜜桃什么品种好| 亚洲成人一二三区av| 香蕉精品网在线| 日韩一区二区三区影片| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 蜜臀久久99精品久久宅男| 日本午夜av视频| 亚洲欧洲国产日韩| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日本午夜av视频| 国产成人91sexporn| 在线观看三级黄色| 久久久精品94久久精品| 亚洲国产精品一区三区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 日日摸夜夜添夜夜爱| 99九九在线精品视频 | 十八禁网站网址无遮挡 | 多毛熟女@视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 欧美日韩视频精品一区| 久久久久久久久大av| 久久久久久久久大av| 看非洲黑人一级黄片| av播播在线观看一区| 欧美bdsm另类| 哪个播放器可以免费观看大片| 日本av免费视频播放| 久久久久精品久久久久真实原创| www.色视频.com| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 日本色播在线视频| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 视频区图区小说| 国产男人的电影天堂91| 有码 亚洲区| 国产免费一区二区三区四区乱码| av不卡在线播放| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲综合色惰| 少妇的逼好多水| 搡老乐熟女国产| 一区二区三区四区激情视频| 丰满少妇做爰视频| 97在线人人人人妻| 精品酒店卫生间| 免费观看在线日韩| 人妻夜夜爽99麻豆av| 只有这里有精品99| 亚洲国产精品专区欧美| 日韩三级伦理在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 免费大片18禁| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲美女视频黄频| 国产免费视频播放在线视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | av视频免费观看在线观看| 国产永久视频网站| 亚洲精品国产色婷婷电影| 青春草国产在线视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 街头女战士在线观看网站| 综合色丁香网| 日韩免费高清中文字幕av| 黄色毛片三级朝国网站 | 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 日韩成人伦理影院| 波野结衣二区三区在线| 国产精品一区二区性色av| 国产极品天堂在线| 人人妻人人澡人人看| 久久人人爽人人爽人人片va| 欧美性感艳星| 久久午夜福利片| 黄色视频在线播放观看不卡| 欧美丝袜亚洲另类| 久久精品国产亚洲av天美| 在线观看人妻少妇| av视频免费观看在线观看| 国产在线视频一区二区| 全区人妻精品视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 最黄视频免费看| 国产精品免费大片| 最近中文字幕高清免费大全6| 最后的刺客免费高清国语| 日韩一区二区三区影片| 新久久久久国产一级毛片| 日韩在线高清观看一区二区三区| 成年人免费黄色播放视频 | 国产有黄有色有爽视频| 22中文网久久字幕| 日本午夜av视频| 欧美精品国产亚洲| 欧美性感艳星| 亚洲国产最新在线播放| 国产精品国产三级国产专区5o| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 一级a做视频免费观看| 成人影院久久| 婷婷色综合www| 亚洲av综合色区一区| 国产日韩欧美亚洲二区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 久久人妻熟女aⅴ| 国产精品国产三级专区第一集| 精品一区二区免费观看| 日韩强制内射视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| a 毛片基地| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 中文字幕久久专区| 国产在线免费精品| 男人舔奶头视频| 美女国产视频在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 一本久久精品| 热re99久久精品国产66热6| 丝袜喷水一区| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国模一区二区三区四区视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 另类亚洲欧美激情| 女性生殖器流出的白浆| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 久久久久精品久久久久真实原创| 久久久精品94久久精品| 插阴视频在线观看视频| 国产69精品久久久久777片| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲av欧美aⅴ国产| 99热网站在线观看| 久久久久久久精品精品| 日韩欧美精品免费久久| 妹子高潮喷水视频| 精品一品国产午夜福利视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 这个男人来自地球电影免费观看 | 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 欧美最新免费一区二区三区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 一级毛片 在线播放| 嫩草影院新地址| 国产中年淑女户外野战色| 国产色爽女视频免费观看| 十八禁网站网址无遮挡 | 一本大道久久a久久精品| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 岛国毛片在线播放| 日韩av在线免费看完整版不卡| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 美女国产视频在线观看| 嫩草影院新地址| 一级黄片播放器| 国产色婷婷99| 色5月婷婷丁香| 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久久久精品久久久久真实原创| 成人影院久久| 乱系列少妇在线播放| 精品亚洲成国产av| 国产一区二区三区综合在线观看 | 五月天丁香电影| 伊人久久国产一区二区| 亚洲在久久综合| 男女边摸边吃奶| 亚洲自偷自拍三级| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产69精品久久久久777片| 国产欧美日韩精品一区二区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产视频首页在线观看| 最近手机中文字幕大全| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 在线播放无遮挡| 高清黄色对白视频在线免费看 | 成人二区视频| 国产av一区二区精品久久| 亚洲欧美精品自产自拍| 日韩制服骚丝袜av| 国产成人免费无遮挡视频| 国产亚洲一区二区精品| 午夜视频国产福利| 制服丝袜香蕉在线| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 能在线免费看毛片的网站| 十八禁高潮呻吟视频 | 搡老乐熟女国产| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 97在线人人人人妻| 成人亚洲精品一区在线观看| 日本色播在线视频| 观看美女的网站| 久久99热6这里只有精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日韩人妻高清精品专区| 九色成人免费人妻av| 热99国产精品久久久久久7| 丝袜喷水一区| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲精品日韩av片在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日韩电影二区| 美女大奶头黄色视频| 有码 亚洲区| 国产成人aa在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲av男天堂| 亚洲va在线va天堂va国产| 老女人水多毛片| 九九在线视频观看精品| www.色视频.com| 热re99久久国产66热| 自线自在国产av| www.av在线官网国产| 精品国产乱码久久久久久小说| 日本爱情动作片www.在线观看| 另类精品久久| 欧美高清成人免费视频www| 永久免费av网站大全| 99热网站在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 三上悠亚av全集在线观看 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 青春草国产在线视频| av有码第一页| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产老妇伦熟女老妇高清| 熟女av电影| 久久精品国产自在天天线| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 日韩精品有码人妻一区| 一二三四中文在线观看免费高清| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 伦理电影大哥的女人| 日韩中文字幕视频在线看片| 老司机影院成人| 赤兔流量卡办理| 色网站视频免费| 国产亚洲欧美精品永久| 韩国高清视频一区二区三区| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 18禁在线播放成人免费| 晚上一个人看的免费电影| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲伊人久久精品综合| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| av.在线天堂| av一本久久久久| 亚洲av不卡在线观看| 麻豆成人av视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 日韩电影二区| 美女主播在线视频| videossex国产| 国产成人精品一,二区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| av在线播放精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久久久久久久久久久大奶| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 午夜影院在线不卡| 黄色日韩在线| 97在线视频观看| 精品人妻熟女av久视频| 桃花免费在线播放| 成人免费观看视频高清| 一级毛片 在线播放| 麻豆成人午夜福利视频| 久久av网站| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产乱人偷精品视频| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国产精品一区二区在线不卡| 中文字幕制服av| 制服丝袜香蕉在线| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 亚洲色图综合在线观看| 午夜影院在线不卡| 午夜av观看不卡| 婷婷色综合www| 亚洲欧美成人精品一区二区| 哪个播放器可以免费观看大片| 婷婷色综合www| 18+在线观看网站| 国产 一区精品| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲无线观看免费| 中国三级夫妇交换| 性色av一级| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 一级a做视频免费观看| 热re99久久精品国产66热6| 大陆偷拍与自拍| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美成人午夜免费资源| a级毛片在线看网站| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 秋霞伦理黄片| 亚洲伊人久久精品综合| 国产精品一二三区在线看| 亚洲成人av在线免费| 777米奇影视久久| 超碰97精品在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产毛片在线视频| 五月玫瑰六月丁香| 嘟嘟电影网在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 最近中文字幕高清免费大全6| 美女中出高潮动态图| 免费播放大片免费观看视频在线观看| av女优亚洲男人天堂| 看十八女毛片水多多多| 嫩草影院新地址| 中文字幕制服av| 男人舔奶头视频| 日韩欧美精品免费久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 人妻人人澡人人爽人人| 一个人看视频在线观看www免费| 精品午夜福利在线看| 九九爱精品视频在线观看| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲欧美清纯卡通| 国产在线免费精品| 日韩强制内射视频| 涩涩av久久男人的天堂| 久久久亚洲精品成人影院| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久久久国产网址| 青春草亚洲视频在线观看| 少妇精品久久久久久久| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产精品久久久久久久电影| 91久久精品国产一区二区成人| a级一级毛片免费在线观看| 成人国产av品久久久| 国产黄色视频一区二区在线观看| 免费大片黄手机在线观看| 看非洲黑人一级黄片| 久久精品国产亚洲网站| 天堂中文最新版在线下载| 六月丁香七月| 精品少妇黑人巨大在线播放| 18禁在线播放成人免费| 人妻 亚洲 视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲精品,欧美精品| av女优亚洲男人天堂| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲人成网站在线观看播放| 日韩中文字幕视频在线看片| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 亚洲av中文av极速乱| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久av网站| 黑人猛操日本美女一级片| 成人美女网站在线观看视频| 人人妻人人澡人人看| 国产69精品久久久久777片| 一级,二级,三级黄色视频| 一本久久精品| 少妇高潮的动态图| 欧美性感艳星| 亚洲欧美成人精品一区二区| 欧美精品国产亚洲| 久久久a久久爽久久v久久| 又大又黄又爽视频免费| 香蕉精品网在线| 只有这里有精品99| 少妇人妻精品综合一区二区| 寂寞人妻少妇视频99o| 一区二区三区乱码不卡18| 久久久久国产网址| 久久午夜综合久久蜜桃| 夜夜爽夜夜爽视频| 日本vs欧美在线观看视频 | 日本色播在线视频| 三级国产精品片| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久久久久久久久免费av| 久久97久久精品| 国产伦在线观看视频一区| av天堂久久9| 精品视频人人做人人爽| 亚洲精品色激情综合| av黄色大香蕉| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 韩国高清视频一区二区三区| 久久免费观看电影| 2021少妇久久久久久久久久久| 成人亚洲精品一区在线观看| 午夜免费鲁丝| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲精品国产成人久久av| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久人人爽人人爽人人片va| 丝袜喷水一区| 一本色道久久久久久精品综合| 高清在线视频一区二区三区| 日韩精品有码人妻一区| 香蕉精品网在线| 69精品国产乱码久久久| 亚洲成人一二三区av| av在线观看视频网站免费| 午夜激情福利司机影院| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 99久国产av精品国产电影| 熟女电影av网| 国产免费一区二区三区四区乱码| 久久国产精品大桥未久av | 亚洲在久久综合| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产精品不卡视频一区二区| 免费av中文字幕在线| 成年女人在线观看亚洲视频| 日韩av免费高清视频| 久久婷婷青草| 九色成人免费人妻av| 成人美女网站在线观看视频| 久久久国产一区二区| 久久婷婷青草| 亚洲内射少妇av| h视频一区二区三区| 日韩中文字幕视频在线看片| 老女人水多毛片| 日韩三级伦理在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 伊人久久国产一区二区| www.色视频.com| 新久久久久国产一级毛片| 国产成人免费观看mmmm| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲国产av新网站| 极品少妇高潮喷水抽搐| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久精品国产亚洲av天美| 色婷婷av一区二区三区视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 丰满人妻一区二区三区视频av| 一个人免费看片子| 99久久中文字幕三级久久日本| 丁香六月天网| 大码成人一级视频| 日本91视频免费播放| 国产男人的电影天堂91| 一级毛片aaaaaa免费看小| 免费av中文字幕在线| 国产成人午夜福利电影在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 在线精品无人区一区二区三| 一级毛片久久久久久久久女| 久久精品国产亚洲av涩爱| 一级毛片久久久久久久久女| 国产探花极品一区二区| 精品亚洲成国产av| 草草在线视频免费看| 中文在线观看免费www的网站| 97超视频在线观看视频| 久久婷婷青草| av天堂久久9| 在线精品无人区一区二区三| 国精品久久久久久国模美| .国产精品久久| 免费观看性生交大片5| av有码第一页| videossex国产| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲国产色片| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久精品国产亚洲网站| 日本av免费视频播放| 亚洲av不卡在线观看| www.色视频.com| 国产日韩欧美在线精品| 一级片'在线观看视频| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 女性被躁到高潮视频| 在线看a的网站| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| av在线观看视频网站免费| 如何舔出高潮| 亚洲美女视频黄频| 在线观看一区二区三区激情| 欧美国产精品一级二级三级 | 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 熟妇人妻不卡中文字幕| 十分钟在线观看高清视频www | 国产免费福利视频在线观看| 99热6这里只有精品| 免费观看a级毛片全部|