• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于重測序的不同生態(tài)型油梨的全基因組變異及進化分析

    2022-02-03 02:49:28葛宇徐梓寧馬蔚紅劉遠征王步天劉毅
    熱帶農業(yè)科學 2022年11期
    關鍵詞:油梨危地馬拉生態(tài)型

    葛宇 徐梓寧 馬蔚紅 劉遠征 王步天 劉毅

    (1. 云南農業(yè)大學熱帶作物學院 云南普洱 665099; 2. 中國熱帶農業(yè)科學院科技信息研究所海南海口 571101;3. 中國熱帶農業(yè)科學院海口實驗站 海南???571101;4. 云南天然橡膠產業(yè)集團江城有限公司 云南普洱 665909)

    油梨(Perseaamericana Mill.)是世界上重要的亞熱帶/熱帶經(jīng)濟作物之一,其原產于中美洲和墨西哥[1]。油梨遺傳多樣性豐富,迥異的生長環(huán)境最終演化出了不同的油梨生態(tài)型[2]。園藝學家廣泛認為,油梨有3種生態(tài)型,墨西哥生態(tài)型(P.americanavar.dryifolia)、危地馬拉生態(tài)型(P.americanavar.guatemala)和西印度群島生態(tài)型(P. americanavar.guatemala)[3]。這3種生態(tài)型無論在形態(tài)、園藝性狀還是生理性狀上均可以區(qū)分開[4]。墨西哥生態(tài)型被廣泛認為起源于墨西哥中部,適應相對寒冷的氣候,而危地馬拉生態(tài)型被認為主要分布在危地馬拉山脈的中高海拔地區(qū),同樣也具有一定的耐寒性[3]。西印度群島生態(tài)型起源于南美洲中部和北部,直到哥倫布時代后才被引入西印度群島,其生長環(huán)境為溫暖和潮濕的熱帶低地[3]。由于油梨雌雄花開花時間錯開,無法自交結實,只能通過自然雜交方式繁殖后代,并且3種生態(tài)型之間不存在生殖隔離,因此,世界上大多數(shù)廣泛種植的油梨栽培品種都是雜交種[5]。

    前人對油梨3種生態(tài)型的進化關系研究并未理清其遺傳關系,有些結果還存在互相矛盾。有些研究人員采用形態(tài)性狀和不同分子標記將危地馬拉和西印度生態(tài)型聚在一起[6-8]。然而,另一些研究人員利用同工酶和分子標記可以區(qū)分這兩種生態(tài)型[8-13]。Ashworth等[11]認為,與墨西哥生態(tài)型相比,危地馬拉與西印度群島生態(tài)型的親緣關系更密切,而Gross-German等[13]研究認為,危地馬拉和墨西哥生態(tài)型之間的親緣關系更密切。課題組前期通過特異長度擴增片段測序(SLAF-Seq)簡化基因組及二代轉錄組對3種油梨純生態(tài)型及兩種油梨雜交生態(tài)型品種分別測序,試驗結果表明,相對于西印度群島生態(tài)型,危地馬拉和墨西哥生態(tài)型之間的親緣關系更緊密[14]。進一步,課題組對3種油梨純生態(tài)型的6份品種葉綠體基因組測序并進行進化分析。結果表明,墨西哥生態(tài)型最先從鱷梨種中分化出來,然后是危地馬拉生態(tài)型,最后,也是最新分化出的,是西印度群島生態(tài)型[15]。

    隨著越來越多具有高經(jīng)濟價值的作物的基因組被測序公布,人們采用全基因組重測序技術可在全基因組范圍內篩選到大量的單核苷酸多態(tài)性位點(single nucleotide polymorphisms, SNP)與插入缺失位點(insertion/deletion, InDel),這些結構變異可能是導致作物遺傳進化變異的主要決定因素,對作物進化分析及分子輔助育種研究具有重要的作用[16-18]。本研究首次對3種油梨純生態(tài)型和1種油梨雜交種共4個油梨品種進行全基因組重測序,對其SNP和Small Indel進行深度挖掘,全面揭示不同油梨生態(tài)型在基因組水平上的變異基因,并進一步確認不同油梨生態(tài)型之間的進化關系。本試驗結果將為后續(xù)的油梨育種研究提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    供試材料Choquette為危地馬拉與西印度群島生態(tài)型油梨雜交品種,Donnie為西印度群島生態(tài)型油梨品種,Walter Hole墨西哥型生態(tài)型油梨品種,上述3份品種選育地均在美國;Nabal為危地馬拉型生態(tài)型油梨品種,選育地在危地馬拉(表1)。

    表1 四份油梨品種來源及其生態(tài)型

    1.2 方法

    1.2.1 基因組DNA提取及重測序 采集4份油梨品種幼嫩葉片,采用CTAB法進行DNA提取,3株混樣進行全基因組重測序。樣品基因組DNA檢測合格后,用超聲波法將DNA片段化,進而對處理后的DNA進行純化、末端修復、3′端加A、連接測序接頭。而后采用瓊脂糖凝膠電泳選擇片段大小,進而采用PCR形成測序文庫,構建完畢的文庫首先開展文庫質檢,合格后采用Illumina開展測序。

    1.2.2 基因組變異檢測與注釋 首先采用bwa軟件[19]將Clean reads與參考基因組序列(https://genomevolution.org/coge//GenomeInfo.pl?gid=29302)[20]進行比對。其次,基于Clean Reads在油梨參考基因組的定位結果,使用Picard軟件(http://sourceforge.net/projects/picard/)過濾冗余的reads,保證檢測結果準確。而后采用GATK軟件[21]開展SNP與Indel 檢測,采用 SnpEff[22]軟件對SNP與Indel進行注釋。

    1.2.3 數(shù)據(jù)分析 采用NTSYS 2.1對數(shù)據(jù)進行聚類分析。

    2 結果與分析

    2.1 四份不同生態(tài)型油梨基因組重測序分析

    利用 Illumina 高通量技術分別對西印度群島生態(tài)型油梨品種Donnie、墨西哥型生態(tài)型油梨品種Walter Hole、危地馬拉型生態(tài)型油梨品種Nabal與危地馬拉型與西印度群島生態(tài)型油梨雜交品種Choquette進行全基因組重測序,得到原始測序數(shù)據(jù),然后過濾獲得114.86 Gb的Clean Data,平均Q30達到93.07%。4份樣品與參考基因組危地馬拉與墨西哥型生態(tài)型油梨雜交品種Hass平均比對率為97.85%,平均覆蓋深度為26×,平均基因組覆蓋度為89.39%(表2)。

    表2 四份不同生態(tài)型油梨品種測序數(shù)據(jù)評估及與參考基因組Hass比對結果

    2.2 四份不同生態(tài)型油梨SNP位點檢測與注釋

    對4份不同生態(tài)型油梨進行SNP檢測,SNP數(shù)量3 854 384~6 290 629個,其中在轉換和顛換中,最高的SNP數(shù)量均來自于危地馬拉與西印度群島生態(tài)型油梨雜交品種Choquette,最少的SNP數(shù)量均來自于危地馬拉型生態(tài)型油梨品種Nabal(表3)。4份不同生態(tài)型油梨雜合型SNP數(shù)量2 071 788~4 403 582個,雜合率35.34%~77.09%。除了西印度群島生態(tài)型油梨品種Donnie的雜合率最低,為35.34%,剩下3份油梨品種的雜合率均超過70%。對4份不同生態(tài)型油梨進行SNP注釋,發(fā)生在編碼區(qū)內的SNP位點數(shù)量51 565~126 799,其中同義突變39 652~61 541,占比48.29%~48.61%,非同義突變40 940~63 790,占比50.19%~50.49%(表4)。危地馬拉與西印度群島生態(tài)型油梨雜交品種Choquette在除了終止密碼子獲得與終止密碼子丟失這兩種統(tǒng)計指標之外的其它14種統(tǒng)計指標中,SNP數(shù)量均為最高,而西印度群島生態(tài)型油梨品種Donnie在終止密碼子獲得類型中,SNP數(shù)量最高,墨西哥型生態(tài)型油梨品種Walter Hole在終止密碼子丟失類型中,SNP數(shù)量最高。

    表3 四份不同生態(tài)型油梨品種的SNP統(tǒng)計

    表4 四份不同生態(tài)型油梨品種的SNP注釋結果

    2.3 四份不同生態(tài)型油梨Small In del檢測與注釋

    對4份不同生態(tài)型油梨進行Small InDel檢測發(fā)現(xiàn),全基因組范圍的Small Indel總數(shù)為1 432 406~1 707 608個,編碼區(qū)Small Indel總數(shù)12 148~14 027個,編碼區(qū)插入突變?yōu)?0 211~11 113個,編碼區(qū)缺失突變?yōu)? 937~2 914個,在這4種統(tǒng)計指標中,最高的Small Indel數(shù)量均來自于危地馬拉型西印度群島生態(tài)型油梨雜交品種Choquette,最少的Small Indel數(shù)量均來自于危地馬拉型生態(tài)型油梨品種Nabal(表5)。4份不同生態(tài)型油梨編碼區(qū)雜合型Small Indel數(shù)量為3 353~7 704個,雜合率24.71%~59.76%。除了西印度群島生態(tài)型油梨品種Donnie的編碼區(qū)雜合型Small Indel雜合率最低,為24.71%,剩下3份油梨品種的Small Indel雜合率均超過47%。采用SnpEff軟件對4份不同生態(tài)型油梨全基因組Small Indel進行注釋(表6),危地馬拉與西印度群島生態(tài)型油梨雜交品種Choquette在除了剪切供體突變(外顯子前2BP內)、非密碼子邊界上的3的整數(shù)倍的刪除與終止密碼子獲得這3種統(tǒng)計指標之外的其它15種統(tǒng)計指標中,Small Indel數(shù)量均為最高,而墨西哥型生態(tài)型油梨品種Walter Hole在其它3種統(tǒng)計指標中Small Indel數(shù)量均為最高。根據(jù)4份不同生態(tài)型油梨在編碼區(qū)和全基因組范圍的Small Indel長度進行統(tǒng)計(圖1),在編碼區(qū)域存在較多的+1、–1、+3、–3類型突變,全基因組范圍+1、–1、+2、–2類型突變相對占比較多。

    圖1 全基因組和編碼區(qū)Small Indels長度分布

    表5 四份不同生態(tài)型油梨品種的Small Indels統(tǒng)計

    表6 四份不同生態(tài)型油梨品種的Small Indels注釋結果

    2.4 四份不同生態(tài)型油梨DNA水平變異基因分析

    通過尋找參考基因組與4份不同生態(tài)型油梨間發(fā)生非同義突變SNP、編碼區(qū)發(fā)生Small InDel的基因,尋找4份不同生態(tài)型油梨與參考基因組危地馬拉與墨西哥型生態(tài)型油梨雜交品種Hass之間可能存在功能差異的基因。與參考基因組危地馬拉與墨西哥型生態(tài)型油梨雜交品種Hass相比,危地馬拉與西印度群島生態(tài)型油梨雜交品種Choquette發(fā)生非同義突變基因數(shù)量為18 143個。發(fā)生Small InDel的基因數(shù)量為7 958個。GO分析表明,生物過程中的代謝過程(4 325個基因)、細胞組件中的細胞組分(2 071個基因)和分子功能中的催化活性(3 580個基因)存在最多的變異基因(圖2-A)。KEGG分析表明,淀粉和蔗糖的代謝(144個基因)與植物激素信號轉導(144個基因)存在最多的變異基因(圖2-B)。與參考基因組危地馬拉與墨西哥型生態(tài)型油梨雜交品種Hass相比,西印度群島生態(tài)型油梨品種Donnie發(fā)生非同義突變基因數(shù)量為17 616個,發(fā)生Small InDel的基因數(shù)量為7 405個。GO分析表明,生物過程中的代謝過程(4 214個基因)、細胞組件中的細胞組分(2 001個基因)和分子功能中的催化活性(3 487個基因)存在最多的變異基因(圖2-C)。KEGG分析表明,淀粉和蔗糖的代謝(144個基因)存在最多的變異基因(圖2-D)。與參考基因組危地馬拉與墨西哥型生態(tài)型油梨雜交品種Hass相比,墨西哥型生態(tài)型油梨品種Walter Hole發(fā)生非同義突變基因數(shù)量為17 701個,發(fā)生Small InDel的基因數(shù)量為7 768個。GO分析表明,生物過程中的代謝過程(4 206個基因)、細胞組件中的細胞組分(2 008個基因)和分子功能中的催化活性(3 487個基因)存在最多的變異基因(圖2-E)。KEGG分析表明,淀粉和蔗糖的代謝(145個基因)存在最多的變異基因(圖2-F)。與參考基因組危地馬拉與墨西哥型生態(tài)型油梨雜交品種Hass相比,危地馬拉型生態(tài)型油梨品種Nabal發(fā)生非同義突變基因數(shù)量為13 864個,發(fā)生Small InDel的基因數(shù)量為6 935個。GO分析表明,生物過程中的代謝過程(3 477個基因)、細胞組件中的細胞組分(1 669個基因)和分子功能中的催化活性(2 872個基因)存在最多的變異基因(圖2-G)。KEGG分析表明,淀粉和蔗糖的代謝(119個基因)存在最多的變異基因(圖2-H)。

    圖2 四個不同生態(tài)型油梨變異基因GO和KEGG注釋分類圖

    2.5 不同生態(tài)型油梨聚類分析

    基于油梨3份純生態(tài)型及1份危地馬拉與西印度群島生態(tài)型品種全基因組重測序數(shù)據(jù)及作為參考基因組的危地馬拉與墨西哥型生態(tài)型品種基因組數(shù)據(jù),對5份不同生態(tài)型油梨進行聚類分析。如圖3所示,5份不同生態(tài)型油梨品種可劃分為2組:其中一組包含墨西哥型生態(tài)型油梨品種Walter Hole、危地馬拉型生態(tài)型油梨品種Nabal和危地馬拉與墨西哥型生態(tài)型油梨雜交品種Hass;另外一組包含西印度群島生態(tài)型油梨品種Donnie和危地馬拉與西印度群島生態(tài)型油梨雜交品種Choquette。聚類分析表明,相對于西印度群島生態(tài)型,危地馬拉和墨西哥生態(tài)型油梨品種親緣關系更近。

    圖3 基于全基因組重測序的不同生態(tài)型油梨聚類分類圖

    3 討論與結論

    本研究選取了油梨3份純生態(tài)型及1份危地馬拉與西印度群島生態(tài)型品種進行全基因組重測序,外加參考基因組的危地馬拉與墨西哥型生態(tài)型品種,均具有一定的代表性,能在一定程度上反映不同生態(tài)型油梨在基因組水平的差異?;谕ㄟ^和參考基因組對比獲得的雜合型SNP數(shù)量,西印度群島生態(tài)型油梨品種Donnie的雜合率最低,為35.34%(若按照913 MB計算,雜合度為2.27%),剩下墨西哥型生態(tài)型油梨品種Walter Hole(若按照1.06 G計算,雜合度為4.66%)、危地馬拉型生態(tài)型油梨品種Nabal(若按照913 MB計算,雜合度為3.26%)與危地馬拉與西印度群島生態(tài)型油梨雜交品種Choquette(若按照913 MB計算,雜合度為4.82%)的雜合率均超過70%。不同生態(tài)型油梨普遍較高的雜合度與油梨屬于異花授粉作物這一自身特性有關。此外,本研究表明,相對于西印度群島生態(tài)型,危地馬拉和墨西哥生態(tài)型油梨品種雜合度更高?;谇捌诤喕蚪M測序分析,課題組同樣發(fā)現(xiàn),危地馬拉和墨西哥生態(tài)型油梨品種比西印度群島生態(tài)型油梨品種具有更高的遺傳多樣性,雜合度也較高[14]。Schnell等[12]也發(fā)現(xiàn),墨西哥和危地馬拉生態(tài)型油梨品種是高度雜合的,而西印度群島生態(tài)型油梨品種則相對于更加純合?;谌蚪M重測序,聚類分析表明,相對于西印度群島生態(tài)型,危地馬拉和墨西哥生態(tài)型油梨品種親緣關系更近。前期課題組選取21份不同生態(tài)型油梨進行SLAF簡化基因組重測序,基于來自于簡化基因組的701 352個SNP進行聚類分析[14],相關試驗結果與本研究聚類分析結果一致。

    本研究對4份不同生態(tài)型油梨進行重測序,與參考基因組危地馬拉與墨西哥型生態(tài)型油梨雜交品種Hass相比,獲得3 854 384~6 290 629個SNP和1 432 406~1 707 608個Small Indels,這些突變導致了13 864~18 143個基因的變異。KEGG分析表明,淀粉和蔗糖的代謝通路存在最多的變異基因。這些基因變異可能導致不同生態(tài)型油梨碳代謝的變化,最終導致從糖轉化成的脂肪酸含量差異。前人研究表明,墨西哥型生態(tài)型油梨脂肪酸含量普遍較高,危地馬拉型生態(tài)型油梨脂肪酸含量其次,西印度群島生態(tài)型油梨脂肪酸含量最低[12]。此外,針對這些突變位點,開發(fā)相應標記,挖掘優(yōu)異基因,可為分子標記輔助育種提供重要的標記資源。進一步揭示不同生態(tài)型油梨基因組組成,對油梨育種研究具有重要的指導意義,能夠有效提升油梨育種的指向性,推動油梨產業(yè)發(fā)展。

    猜你喜歡
    油梨危地馬拉生態(tài)型
    多元策略的生態(tài)型游客中心
    嚴格管控
    Agg Hab生態(tài)型聚合棲地
    番茄有機生態(tài)型無土栽培
    微生物內核 生態(tài)型農資
    新農業(yè)(2016年23期)2016-08-16 03:38:14
    墨西哥油梨生產商和包裝商協(xié)會將擴大油梨種植面積
    新西蘭油梨價格將上漲
    澳大利亞油梨價格飛漲
    危地馬拉向歐洲國家、智利出口芒果
    歐洲市場夏季油梨銷售狀況良好
    麻豆国产av国片精品| 免费av不卡在线播放| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 久久精品综合一区二区三区| 欧美色视频一区免费| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产真实伦视频高清在线观看 | 亚洲国产欧美人成| 禁无遮挡网站| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美+日韩+精品| 久久久久亚洲av毛片大全| www.999成人在线观看| 亚洲av熟女| 欧美丝袜亚洲另类 | 少妇高潮的动态图| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 久久精品综合一区二区三区| 国产日本99.免费观看| 中文字幕av在线有码专区| 12—13女人毛片做爰片一| 精品一区二区免费观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 黄色一级大片看看| 午夜a级毛片| 国产高清有码在线观看视频| 日本三级黄在线观看| 黄色一级大片看看| 高清日韩中文字幕在线| 日韩亚洲欧美综合| 欧美潮喷喷水| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 成人av在线播放网站| 中文字幕久久专区| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产一区二区激情短视频| 十八禁人妻一区二区| 免费黄网站久久成人精品 | 老鸭窝网址在线观看| 极品教师在线视频| av天堂中文字幕网| 亚洲av成人av| 国内精品久久久久久久电影| 老女人水多毛片| 一本综合久久免费| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 桃红色精品国产亚洲av| 久久九九热精品免费| 热99re8久久精品国产| 亚洲男人的天堂狠狠| 免费一级毛片在线播放高清视频| 成年版毛片免费区| 日本黄大片高清| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产真实伦视频高清在线观看 | 999久久久精品免费观看国产| ponron亚洲| 久久精品国产自在天天线| 国产成年人精品一区二区| 偷拍熟女少妇极品色| 十八禁人妻一区二区| 国产精品久久久久久久电影| 永久网站在线| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产91精品成人一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三| 九九热线精品视视频播放| 欧美激情在线99| 久久久色成人| 日韩欧美在线乱码| av国产免费在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产成+人综合+亚洲专区| 精品人妻1区二区| 露出奶头的视频| 无人区码免费观看不卡| 国产毛片a区久久久久| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 51午夜福利影视在线观看| 美女高潮的动态| 搞女人的毛片| 精品乱码久久久久久99久播| 精品欧美国产一区二区三| 看免费av毛片| 成人国产一区最新在线观看| 欧美日韩乱码在线| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产成人福利小说| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久久久久久久久成人| 香蕉av资源在线| 欧美乱妇无乱码| 国产在线精品亚洲第一网站| 成人国产一区最新在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲精品在线美女| 偷拍熟女少妇极品色| 极品教师在线视频| 国产精品一区二区性色av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲成人久久爱视频| 在线观看舔阴道视频| 国产av在哪里看| 狠狠狠狠99中文字幕| 欧美极品一区二区三区四区| 999久久久精品免费观看国产| 国产精品一区二区三区四区久久| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产精品亚洲美女久久久| 一a级毛片在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 成人永久免费在线观看视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美丝袜亚洲另类 | 丁香欧美五月| 性色av乱码一区二区三区2| 一级av片app| 亚洲av二区三区四区| 日本 av在线| 桃红色精品国产亚洲av| 18+在线观看网站| 亚洲国产精品999在线| 久久午夜福利片| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 成人av一区二区三区在线看| 18禁在线播放成人免费| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产精品影院久久| 色播亚洲综合网| 99久久成人亚洲精品观看| 身体一侧抽搐| 久久6这里有精品| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 村上凉子中文字幕在线| 老鸭窝网址在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲美女搞黄在线观看 | 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 欧美午夜高清在线| 欧美色视频一区免费| 韩国av一区二区三区四区| 一a级毛片在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 搞女人的毛片| 久久人人爽人人爽人人片va | 国产午夜福利久久久久久| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 在线看三级毛片| 国产精品国产高清国产av| 在线免费观看的www视频| 三级毛片av免费| 国产午夜精品论理片| 亚洲美女视频黄频| 三级毛片av免费| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚州av有码| 亚洲欧美激情综合另类| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲男人的天堂狠狠| 精品一区二区三区人妻视频| 91久久精品国产一区二区成人| 国产久久久一区二区三区| 国产精品一区二区性色av| 免费大片18禁| 精品一区二区三区av网在线观看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 久久午夜福利片| 国产在线男女| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 午夜激情欧美在线| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产一区二区在线av高清观看| 国产视频内射| 悠悠久久av| 国产精品精品国产色婷婷| 久久伊人香网站| 久久久久久九九精品二区国产| 深爱激情五月婷婷| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 2021天堂中文幕一二区在线观| 夜夜爽天天搞| 99精品在免费线老司机午夜| 91av网一区二区| 成年人黄色毛片网站| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩欧美精品v在线| 俺也久久电影网| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲片人在线观看| 国产亚洲欧美98| 日韩中文字幕欧美一区二区| 观看美女的网站| 亚洲avbb在线观看| 日韩欧美 国产精品| 日本a在线网址| 老女人水多毛片| 村上凉子中文字幕在线| 一进一出抽搐动态| 亚洲av二区三区四区| 欧美性猛交黑人性爽| 别揉我奶头 嗯啊视频| 在线观看av片永久免费下载| 久久性视频一级片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 90打野战视频偷拍视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲精品成人久久久久久| 给我免费播放毛片高清在线观看| 91九色精品人成在线观看| 久久这里只有精品中国| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 看十八女毛片水多多多| 我要搜黄色片| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 亚洲真实伦在线观看| 日韩欧美精品免费久久 | 欧美成人性av电影在线观看| 在线播放无遮挡| 免费av毛片视频| 国产视频内射| 好男人电影高清在线观看| 欧美在线一区亚洲| 国产av麻豆久久久久久久| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 久久久国产成人免费| 老司机深夜福利视频在线观看| 高清日韩中文字幕在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 亚洲国产欧美人成| 国产成人a区在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 少妇人妻精品综合一区二区 | 免费大片18禁| 看黄色毛片网站| 他把我摸到了高潮在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久热精品热| 亚洲av免费高清在线观看| 国产精品国产高清国产av| 淫秽高清视频在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| www.色视频.com| 久久99热6这里只有精品| 国产午夜福利久久久久久| 丝袜美腿在线中文| 欧美乱色亚洲激情| 舔av片在线| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 婷婷色综合大香蕉| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 九九热线精品视视频播放| 国产色爽女视频免费观看| 午夜福利欧美成人| 两人在一起打扑克的视频| 在线天堂最新版资源| 一区二区三区四区激情视频 | 天美传媒精品一区二区| 午夜日韩欧美国产| 欧美一区二区国产精品久久精品| 真实男女啪啪啪动态图| 久久精品国产清高在天天线| 日韩欧美在线二视频| 亚洲自拍偷在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品女同一区二区软件 | 精品国产亚洲在线| 最近中文字幕高清免费大全6 | 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产91精品成人一区二区三区| 欧美黄色淫秽网站| 日本黄大片高清| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产伦一二天堂av在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 麻豆一二三区av精品| 久久久久久久久久黄片| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产野战对白在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产精品久久视频播放| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲国产精品成人综合色| 91在线观看av| 国产精品三级大全| 丁香六月欧美| 一二三四社区在线视频社区8| 精品日产1卡2卡| 99国产极品粉嫩在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 国产毛片a区久久久久| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 日韩欧美三级三区| 亚洲第一电影网av| 精品久久久久久久久亚洲 | 国产伦精品一区二区三区四那| 久久久成人免费电影| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| av天堂在线播放| 在现免费观看毛片| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产在线男女| 国产精品爽爽va在线观看网站| 日本一本二区三区精品| 88av欧美| 日本一本二区三区精品| 五月玫瑰六月丁香| 看免费av毛片| 国产一区二区激情短视频| 九色国产91popny在线| 国产高清激情床上av| 国产亚洲欧美98| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 午夜福利视频1000在线观看| 欧美三级亚洲精品| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产黄片美女视频| 天天躁日日操中文字幕| 在线观看66精品国产| 搡老妇女老女人老熟妇| 91狼人影院| 嫩草影院精品99| 人人妻人人看人人澡| 国产亚洲欧美在线一区二区| 欧美潮喷喷水| 欧美性猛交黑人性爽| 看片在线看免费视频| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲第一电影网av| 美女黄网站色视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 美女高潮的动态| 欧美日本亚洲视频在线播放| 免费在线观看成人毛片| 国产三级中文精品| 最新在线观看一区二区三区| 国产精品影院久久| 免费在线观看成人毛片| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久草成人影院| 少妇人妻一区二区三区视频| 精品日产1卡2卡| 精品久久久久久久久亚洲 | 欧美日韩国产亚洲二区| 精品免费久久久久久久清纯| 少妇高潮的动态图| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产探花极品一区二区| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 一本综合久久免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲精品日韩av片在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 如何舔出高潮| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 欧美另类亚洲清纯唯美| 精品久久久久久久久亚洲 | 91狼人影院| 日韩欧美免费精品| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美性感艳星| 国内精品一区二区在线观看| 欧美黑人巨大hd| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲专区国产一区二区| 日本 欧美在线| 国产精品亚洲一级av第二区| 桃红色精品国产亚洲av| 国产一区二区三区视频了| 午夜福利视频1000在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 国产日本99.免费观看| 午夜福利18| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产男靠女视频免费网站| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 91久久精品电影网| 欧美色欧美亚洲另类二区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 麻豆av噜噜一区二区三区| 日本与韩国留学比较| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 内地一区二区视频在线| 久久中文看片网| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲av.av天堂| 久久久精品大字幕| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲无线观看免费| 丝袜美腿在线中文| 欧美三级亚洲精品| 热99re8久久精品国产| 男人舔奶头视频| 性欧美人与动物交配| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久人妻av系列| 精品乱码久久久久久99久播| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 免费av观看视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 内射极品少妇av片p| 色播亚洲综合网| 午夜两性在线视频| 精品一区二区三区视频在线| 午夜福利在线在线| 亚洲av不卡在线观看| 热99在线观看视频| 亚洲在线观看片| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 在线观看舔阴道视频| 日韩欧美免费精品| 欧美不卡视频在线免费观看| 99riav亚洲国产免费| 一区二区三区激情视频| 国产成人av教育| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产v大片淫在线免费观看| 久久亚洲精品不卡| 观看免费一级毛片| 久久久久久大精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日韩中字成人| 乱码一卡2卡4卡精品| 床上黄色一级片| 欧美日本视频| а√天堂www在线а√下载| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 在线观看午夜福利视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 美女 人体艺术 gogo| 精品久久久久久,| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲av.av天堂| av专区在线播放| 一级毛片久久久久久久久女| 一级黄色大片毛片| 午夜福利成人在线免费观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 老女人水多毛片| 久久久久久久午夜电影| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 嫩草影院入口| ponron亚洲| 国产成人欧美在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 日韩欧美在线乱码| 老鸭窝网址在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久99热6这里只有精品| 久久亚洲精品不卡| 国产成人a区在线观看| 亚洲最大成人av| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲第一区二区三区不卡| x7x7x7水蜜桃| 草草在线视频免费看| 久久久精品大字幕| 免费大片18禁| 在线天堂最新版资源| 在线免费观看不下载黄p国产 | а√天堂www在线а√下载| 全区人妻精品视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| av国产免费在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产黄片美女视频| 国产成人aa在线观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 怎么达到女性高潮| 18禁在线播放成人免费| 在线观看免费视频日本深夜| 99精品久久久久人妻精品| 国产av在哪里看| www.熟女人妻精品国产| 色综合站精品国产| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲人成电影免费在线| 美女大奶头视频| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 精品福利观看| 在现免费观看毛片| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 色尼玛亚洲综合影院| 波多野结衣高清作品| 亚洲,欧美,日韩| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产精品综合久久久久久久免费| 首页视频小说图片口味搜索| 久久99热这里只有精品18| 99热这里只有是精品50| 一个人免费在线观看电影| 欧美三级亚洲精品| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 免费在线观看日本一区| 亚洲av一区综合| 精品国产亚洲在线| 国产视频内射| 丰满人妻一区二区三区视频av| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产黄色小视频在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 精品无人区乱码1区二区| 精品一区二区免费观看| 欧美日本视频| 禁无遮挡网站| 一级a爱片免费观看的视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 又紧又爽又黄一区二区| 三级毛片av免费| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产色婷婷99| 91久久精品国产一区二区成人| 色哟哟哟哟哟哟| 欧美成人免费av一区二区三区| 在线免费观看的www视频| 亚洲,欧美,日韩| 在现免费观看毛片| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美潮喷喷水| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 精品人妻偷拍中文字幕| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲18禁久久av| 亚洲最大成人中文| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲美女视频黄频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 久久午夜福利片| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲av成人精品一区久久| а√天堂www在线а√下载| 成人av一区二区三区在线看| 国产精品久久久久久久久免 | 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产三级黄色录像| 亚洲色图av天堂| 精品人妻熟女av久视频| 丰满的人妻完整版| 久久久久久久久久成人| 久久久国产成人免费| 3wmmmm亚洲av在线观看| 成人精品一区二区免费| 日本 欧美在线| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 成人美女网站在线观看视频| 69av精品久久久久久| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产精品国产高清国产av| 国产成人av教育| 黄色女人牲交| 亚洲,欧美,日韩| 99精品久久久久人妻精品| 男女下面进入的视频免费午夜| 99久久精品一区二区三区| 久久久久国内视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 淫妇啪啪啪对白视频| 最近中文字幕高清免费大全6 | 久久久精品大字幕| 夜夜爽天天搞| 男人舔奶头视频| 十八禁国产超污无遮挡网站| 69人妻影院| 97碰自拍视频| 成人美女网站在线观看视频| 免费搜索国产男女视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲三级黄色毛片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 午夜免费成人在线视频| 真实男女啪啪啪动态图| 欧美zozozo另类| av在线观看视频网站免费| 中文字幕久久专区| 97热精品久久久久久| 国产野战对白在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产成人影院久久av| 日韩欧美精品v在线| 真人做人爱边吃奶动态| 老鸭窝网址在线观看|