老年腦梗死頸動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊與血清RBP4水平及氧化應(yīng)激的關(guān)系

王青青，肖大海，田 沙，趙若彤，張曉璇，焦光美，馬 征

0 引 言

有研究顯示，中風(fēng)仍是導(dǎo)致中國(guó)人死亡與殘疾生存的首位疾病[1]。在所有腦梗死患者中，年齡≥60歲的患者占80%[2]。Yang等[3]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，視黃醇結(jié)合蛋白4(retinol binding protein 4，RBP4)是一種新型蛋白，主要由脂肪細(xì)胞分泌。高濃度的RBP4 不僅與高血壓、糖耐量受損、2型糖尿病、代謝綜合征等疾病有關(guān)，且可能引起氧化應(yīng)激損傷[4-9]。過(guò)氧化氫酶(Catalase，CAT)屬于抗氧化系統(tǒng)中的一員。8-異前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)是一種比較穩(wěn)定的脂質(zhì)過(guò)氧化物，是目前最容易被接受的氧化應(yīng)激的生物標(biāo)志物[10]。目前多數(shù)研究報(bào)道了RBP4與氧化應(yīng)激標(biāo)志物(8-iso-PGF2α)呈正相關(guān)，與抗氧化劑(CAT)呈負(fù)相關(guān)[11-13]。在高脂飲食小鼠模型中，發(fā)現(xiàn)CAT可改善動(dòng)脈粥樣硬化[14]。2012年，F(xiàn)arjo團(tuán)隊(duì)證明了RBP4引發(fā)氧化應(yīng)激的機(jī)制可能是RBP4激活了內(nèi)皮炎癥相關(guān)基因的產(chǎn)生[15-16]。已有研究表明，氧化應(yīng)激損傷參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展[17]。關(guān)于老年腦梗死患者血清RBP4水平與氧化應(yīng)激損傷及頸動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊之間關(guān)系的研究相對(duì)較少。本文探討老年腦梗死患者血清RBP4水平的變化，及其與氧化應(yīng)激、頸動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊的關(guān)系，以期為臨床診療提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象前瞻性納入2020年8月至2021年6月期間診斷為腦梗死的患者136例，其中男89例、女47例，年齡60～80歲，平均(68.7±5.3)歲。依據(jù)超聲結(jié)果分為內(nèi)膜增厚組31例、穩(wěn)定斑塊組51例、易損斑塊組54例。另選取于本院體檢，且無(wú)新發(fā)腦梗死的患者40例作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有腦梗死患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合《中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南2018》；②首次發(fā)生腦梗死；③發(fā)病72h內(nèi)到達(dá)醫(yī)院；④入院72h內(nèi)能夠配合完善頸動(dòng)脈超聲檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期(6個(gè)月內(nèi))心功能不全(NYHA II - IV級(jí))、惡性疾病、重大創(chuàng)傷或外科手術(shù)、嚴(yán)重腎臟(肌酐>2mg/dL)或肝功能不全(肝酶>正常值上限3倍)、急性或慢性感染性疾病、血液病、任何一種免疫介導(dǎo)疾病、服用二甲雙胍、服用他汀類藥物、服用降低同型半胱氨酸(Hcy)藥物和抗氧化維生素補(bǔ)充劑(維生素E和C)的患者。本研究經(jīng)過(guò)承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號(hào)：CYFYLL2021165)。所有受試者及其家屬均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1 臨床資料收集獲取納入研究對(duì)象年齡、性別、體重指數(shù)(BMI)、受教育程度、既往史、手術(shù)史、疫苗接種史等資料。

1.2.2超聲測(cè)量由同一超聲科醫(yī)師應(yīng)用索諾聲Edge型號(hào)彩色多普勒超聲診斷儀對(duì)所有受試者行頸部血管超聲檢查，測(cè)量頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度(intima-media thickness，IMT)。依據(jù)IMT及斑塊性質(zhì)分為：①IMT≤1.0 mm，為內(nèi)膜正常組；②1.0 mm

1.2.3實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)所有受試者禁食8h以上。隨后抽取靜脈血送檢，檢測(cè)血常規(guī)、生化、糖化血紅蛋白(HbA1c)、Hcy等。

1.2.4血清RBP4、8-iso-PGF2α、CAT檢測(cè)所有受試者禁食8 h以上，抽取靜脈血3 mL并放置于離心箱離心10 min后，取上清液移至新的EP管中。上述指標(biāo)均嚴(yán)格按照于武漢華美公司所購(gòu)買的ELISA試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1 一般資料各組的性別、BMI、高血壓、糖尿病、吸煙、飲酒等一般臨床資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表 1 各組研究對(duì)象一般臨床資料比較

2.2各組實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較各組TC、TG、HDL-C、LDL-C、HbA1c、Hcy、WBC水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各組的RBP4、8-iso-PGF2α、CAT、IMT、頸動(dòng)脈斑塊面積比較，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。與對(duì)照組比較，內(nèi)膜增厚組、穩(wěn)定斑塊組、易損斑塊組的RBP4、8-iso-PGF2α、CAT、IMT水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，且穩(wěn)定斑塊組和易損斑塊組的頸動(dòng)脈斑塊面積較對(duì)照組明顯升高。穩(wěn)定斑塊組和易損斑塊組的RBP4、IMT、頸動(dòng)脈斑塊面積及易損斑塊組的8-iso-PGF2α水平高于內(nèi)膜增厚組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。易損斑塊組的RBP4、8-iso-PGF2α、IMT水平高于穩(wěn)定斑塊組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表2。

2.3血清RBP4水平與氧化應(yīng)激比較與對(duì)照組相比，老年腦梗死患者血清RBP4及8-iso-PGF2α水平均明顯升高，而血清CAT明顯降低(P<0.05)，見表2。

2.4頸動(dòng)脈粥樣硬化指標(biāo)比較與對(duì)照組相比，老年腦梗死患者頸動(dòng)脈斑塊面積及IMT明顯升高(P<0.05)，見表2。

2.5老年腦梗死血清RBP4水平與氧化應(yīng)激及頸動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)性Pearson相關(guān)分析顯示，血清RBP4水平與8-iso-PGF2α水平、IMT、頸動(dòng)脈斑塊面積均呈正相關(guān)(P<0.05)，而與血清CAT水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見表3。

表 2 各組研究對(duì)象實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較

表 3 老年腦梗死患者血清RBP4水平的相關(guān)性分析

2.6ROC曲線分析血清RBP4水平預(yù)測(cè)頸動(dòng)脈易損斑塊發(fā)生的ROC曲線下面積為0.778，當(dāng)Cut-off值為22.215mg/L，其敏感性為81.5%、特異性為64.8%，見圖1。

圖 1 血清RBP4對(duì)頸動(dòng)脈易損斑塊的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討 論

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是腦梗死的主要發(fā)病機(jī)制。頸動(dòng)脈易損性斑塊是導(dǎo)致老年腦梗死發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[19]。既往臨床研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病合并冠心病患者和腦梗死患者的RBP4水平增加，RBP4與頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度(carotid intima media thickness，CIMT)呈正相關(guān)[20-21]。RBP4濃度與AS和冠心病的發(fā)生呈正相關(guān)[22-24]。另有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，RBP4與冠心病的嚴(yán)重程度及預(yù)后相關(guān)[25]。但是到目前為止，RBP4在AS中的作用機(jī)制尚無(wú)定論。Gao 等[26]的研究表明，RBP4 通過(guò) PI3K/AKT信號(hào)通路促進(jìn) VSMC 的增殖，從而進(jìn)一步導(dǎo)致 AS 的發(fā)生。Liu等[27]通過(guò)研究人與小鼠模型發(fā)現(xiàn)，RBP4基因的表達(dá)促進(jìn)AS的發(fā)生，可能是通過(guò)促進(jìn)巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞的形成導(dǎo)致的。

本研究發(fā)現(xiàn)，腦梗死患者血清RBP4水平較對(duì)照組升高，提示RBP4可能參與腦梗死等血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。這與Sasaki等[28-29]的研究結(jié)果一致。然而，在中風(fēng)方面，一項(xiàng)基于護(hù)士健康研究的前瞻性病例對(duì)照研究報(bào)告了循環(huán)RBP4濃度升高與女性缺血性卒中風(fēng)險(xiǎn)的增加沒(méi)有明顯的關(guān)系[30]。這些研究結(jié)果的不一致可能來(lái)自于RBP4濃度測(cè)量方法的不同及受試者特征、樣本量的差異。

2015年的一項(xiàng)研究指出，RBP4水平升高可導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷[16]；而且細(xì)胞氧化應(yīng)激已被多項(xiàng)研究證明可以引起血管炎癥的激活[31-32]。由此推測(cè)RBP4在血管內(nèi)皮炎癥的發(fā)生中發(fā)揮作用，可能是因?yàn)槠浯龠M(jìn)了氧化應(yīng)激損傷。Farjo等[15]研究指出，RBP4可通過(guò)介導(dǎo)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶及核因子KB的活化，導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷，從而誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)，從而在心血管疾病以及其他血管疾病的血管炎癥中起作用。CAT屬于抗氧化酶。8-iso-PGF2α是自由基催化花生四烯酸的過(guò)氧化反應(yīng)產(chǎn)物，其來(lái)源與過(guò)氧化損傷有關(guān)。已有研究表明，氧化應(yīng)激與 AS 的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[33-35]。本研究發(fā)現(xiàn)，血清RBP4水平與8-iso-PGF2α水平呈正相關(guān)，與CAT水平呈負(fù)相關(guān)。這提示我們，老年腦梗死患者RBP4水平升高，促進(jìn)氧化應(yīng)激損傷，可能是其發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制之一。

既往研究表明，頸動(dòng)脈易損性斑塊與腦梗死發(fā)生存在較強(qiáng)的正相關(guān)性[19]。2020年的一項(xiàng)研究結(jié)果顯示，在1078例腦梗死患者中，頸動(dòng)脈斑塊組NIHSS評(píng)分比無(wú)頸動(dòng)脈斑塊組的NIHSS評(píng)分高，表明腦梗死患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生與神經(jīng)功能缺損程度相關(guān)[36]。另有研究結(jié)果表明，在腦梗死患者中易損斑塊組IMT和NIHSS評(píng)分明顯高于斑塊穩(wěn)定組，提示頸動(dòng)脈IMT值越大，則斑塊越不穩(wěn)定；同時(shí)，腦梗死患者的神經(jīng)功能缺損程度就越嚴(yán)重[37]。本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組、內(nèi)膜增厚組、穩(wěn)定斑塊組、易損斑塊組的血清RBP4水平呈遞增趨勢(shì)，并且通過(guò)描繪ROC曲線發(fā)現(xiàn)，血清RBP4水平預(yù)測(cè)腦梗死患者頸動(dòng)脈易損斑塊發(fā)生的曲線下面積為0.778，最佳截?cái)嘀凳?2.215mg/L，在該值下預(yù)測(cè)頸動(dòng)脈易損斑塊發(fā)生的敏感性達(dá)81.5%、特異性達(dá)64.8%。通過(guò)以上分析我們得到血清RBP4有可能成為預(yù)測(cè)腦梗死患者頸動(dòng)脈易損斑塊的一項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)。同時(shí)，本研究也證明了在臨床上檢測(cè)血清RBP4水平可能有助于發(fā)現(xiàn)頸動(dòng)脈易損斑塊的高危人群，起到預(yù)警腦梗死發(fā)生的作用。

綜上所述，老年腦梗死患者血清RBP4水平明顯升高，并且與氧化應(yīng)激損傷及AS程度相關(guān)。另外，通過(guò)ROC曲線分析得到RBP4水平可以用來(lái)預(yù)測(cè)頸動(dòng)脈易損斑塊的發(fā)生，因此可以指導(dǎo)臨床制定及時(shí)有效的干預(yù)措施。RBP4參與AS發(fā)生發(fā)展的確切機(jī)制仍然需要繼續(xù)深入研究。