白酒中甲醛含量檢測方法的比較研究

徐亞輝，顧中建，崔 磊，孫 偉，董思文，席鮮會，代艷利，段雪梅

（1.安徽文王釀酒股份有限公司，安徽 臨泉 236400；2.臨泉縣市場監(jiān)督檢驗所，安徽 臨泉 236400）

近年來隨著人們生活水平的提升，對健康的關注度也越來越高，甲醛作為一種會危害人體健康的化學物質，備受人們關注。某些發(fā)酵食品如啤酒、白酒在生產(chǎn)加工過程中本身也會產(chǎn)生甲醛。現(xiàn)行有效的《發(fā)酵酒及其配制酒》GB 2758—2012 規(guī)定，啤酒中的甲醛含量≤2.0 mg/L，但是，對于白酒并未出臺關于甲醛限量要求，也無檢測白酒中甲醛含量的國家標準，因此本研究旨在探索研究一種簡單有效的白酒中甲醛檢測方法，控制白酒中甲醛含量，保障消費者健康，為未來白酒行業(yè)甲醛檢測提供借鑒。

通常，傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)的白酒在加水降度后會出現(xiàn)失光即白色渾濁現(xiàn)象。在白酒甲醛的檢測過程中的稀釋操作會使樣品失光，導致分光光度計的讀數(shù)不準確，導致測定結果出現(xiàn)較大的偏差。本次試驗建立了一種新的白酒中甲醛含量檢測方法，通過與已有的兩種檢測方法從前處理、水浴影響、標準曲線、重復性試驗、加標回收等方面對比分析，選出更優(yōu)的檢測方法，為檢測白酒中甲醛含量提供科學有效的方法。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

樣品：采用市面隨機購買的不同廠家的40%vol、50 %vol、60 %vol 固態(tài)發(fā)酵成品酒；以及安徽文王釀酒股份有限公司某批次固態(tài)發(fā)酵52 d 的4 個原酒樣品（前段原酒、中段原酒、后段原酒和帶有渾濁酒尾）。

試劑：甲醛標準溶液（濃度為100 mg/L、2 mg/L、1 mg/L；按GB/T 5009.49—2008 配制)，乙酰丙酮，乙酸銨，冰乙酸，磷酸，無水乙醇。

儀器設備：紫外可見分光光度計，上海光學儀器一廠；水蒸氣蒸餾裝置，移液管，比色管，容量瓶。檢測原理參照GB/T 5009.49—2008標準。

1.2 檢測方法

1.2.1 蒸餾法（以下簡稱A法）

參照GB/T 5009.49—2008標準。

移取25 mL 白酒倒入500mL 蒸餾瓶中，加入20 mL的200 g/L磷酸溶液于蒸餾瓶，接水蒸氣蒸餾裝置蒸餾，收集餾出液于100 mL 容量瓶中冷卻后加水稀釋至刻度。吸取10 mL 餾出液于25 mL 比色管中，再加入2 mL 乙酰丙酮溶液，搖勻后在沸水浴中加熱10 min，取出冷卻后于415 nm 測定吸光度；甲醛含量公式:

式中：X 為白酒中甲醛的含量，mg/L；c為根據(jù)標準曲線得到的甲醛質量，μg；c為試劑空白溶液得到的甲醛質量，μg；V為餾出液定容體積，mL；V為移取白酒體積，mL；V為吸取白酒體積，mL。

1.2.2 直接稀釋法（以下簡稱B法）

參考《兩種前處理方法檢測白酒中甲醛含量的比較》中的直接法。

移取1 mL 白酒于25 mL 比色管中，加入蒸餾水到10 mL 刻度后，再加入2 mL 乙酰丙酮溶液，搖勻后在沸水浴中加熱10 min，取出冷卻后于415 nm測定吸光度；甲醛含量公式：

式中：X為白酒中甲醛的含量，mg/L；c為根據(jù)標準曲線得到的甲醛質量，μg；c為試劑空白溶液得到的甲醛質量，μg；V為吸取白酒體積，mL。

1.2.3 直接測量法（以下簡稱C法）

移取10 mL 白酒于25 mL 比色管中，再加入2 mL 乙酰丙酮溶液，搖勻后在77 ℃水浴中加熱40 min，取出冷卻后于415 nm 測定吸光度；甲醛含量公式:

式中：X 為白酒中甲醛的含量，mg/L；c 為根據(jù)標準曲線得到的甲醛質量，μg；c為試劑空白溶液得到的甲醛質量，μg；V為吸取白酒體積，mL。

2 結果與分析

2.1 不同前處理對樣品吸光值的影響

將8 個不同的固態(tài)發(fā)酵白酒樣品：60 %vol 成品酒、50 %vol 成品酒、40 %vol 成品酒、前段原酒、中段原酒、后段原酒、酒尾（有渾濁）、酒尾稀釋樣（用無水乙醇稀釋1 倍），按照3 種試驗方法進行前處理后，不加入顯色劑乙酰丙酮溶液，也不經(jīng)水浴，以溶劑空白（水）作為吸光值0 點在415 nm 處測定吸光值。

A 法和B 法處理酒樣，酒樣出現(xiàn)不同程度的渾濁現(xiàn)象，在顯色劑加入之前樣液已經(jīng)具有一定的吸光值，會使測定結果明顯偏高。C 法的樣液均為均一透明，其中酒尾樣品用無水乙醇稀釋1 倍后渾濁消失，吸光值均為零。結果表明，A 法的水蒸氣蒸餾和B 法的稀釋操作均導致白酒出現(xiàn)渾濁，影響測定結果，而C 法結果準確，適用于分光光度計法測定固態(tài)發(fā)酵白酒的甲醛。

表1 酒樣經(jīng)不同前處理后的吸光值

2.2 不同水浴條件下樣液損失

取上述6 個酒樣，用3 種方法進行前處理，加入2 mL 乙酰丙酮溶液后，用干濾紙擦干比色管外表及蓋子，4 位數(shù)天平稱重后按各自水浴條件進行水浴，冷卻后用干濾紙擦干比色管外表及蓋子稱重，計算重量差，見表2。

表2 3種不同檢測方法水浴前后重量差

其中A 法樣品在水浴時會有明顯的沸騰現(xiàn)象，B 法水浴初期有輕微沸騰現(xiàn)象，低沸點的甲醛在水浴時來不及反應就隨著沸騰蒸發(fā)損失，導致結果偏低，C 法水浴過程中未出現(xiàn)沸騰現(xiàn)象；重量損失A法＞B 法＞C 法，重量損失與處理后樣液的低沸點有機物（主要是乙醇）含量呈正相關，重量損失越大樣液總體積減少越多，導致結果偏高。A 法、B 法的水浴條件影響測定，C 法樣液基本無損失不影響測定。

2.3 標準曲線建立與比較

A法、B法：精密吸取0.00 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、8.00 mL、10.00 mL的1 mg/L 甲醛標準溶液于25 mL 比色管中，加水至10 mL 刻度后，再加入2 mL 乙酰丙酮溶液，搖勻后在沸水浴中加熱10 min，取出冷卻后于415 nm 測定吸光度，繪制標準曲線，從標準曲線上查出試樣的含量。

線性相關系數(shù)R=0.9998。

C 法：精密吸取0.00 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL、6.00 mL、8.00 mL、10.00 mL 的2 mg/L 甲醛標準溶液于25 mL 比色管中，加水至10 mL 刻度后，再加入2 mL 乙酰丙酮溶液，搖勻后在77 ℃水浴中加熱40 min，取出冷卻后于415 nm測定吸光度，繪制標準曲線，從標準曲線上查出試樣的含量。

表3 A法、B法甲醛溶液標準系列吸光度

線性相關系數(shù)R=0.9998。

表4 C法甲醛溶液標準系列吸光度

兩種水浴方式甲醛含量和吸光值線性關系基本一致，線性關系良好；C法標曲范圍更廣。

2.4 重復性試驗

取上述60%vol 成品酒、中段原酒、酒尾樣品，用3 種測定方法各測定6 份酒樣，試驗結果及數(shù)據(jù)分析見表5。

表5 重復性試驗結果

A 法由于蒸餾后渾濁導致吸光值增大、水浴時沸騰導致樣液體積變化和甲醛損失等原因，測得含量很不穩(wěn)定；B 法測定值和C 法測定值較為穩(wěn)定，但B 法測定值大于C 法，稀釋產(chǎn)生的渾濁使B 法測得結果偏大，差值大小與表1吸光值相對應；A法和B 法由于稀釋了樣品，導致樣液甲醛衍生物吸光值很低，測定甲醛低的樣品時重復性測定結果RSD較大，C法未進行稀釋，重復性測定穩(wěn)定。

2.5 加標回收率實驗

取白酒樣品1000 mL 加入100 mg/L 甲醛標準溶液2.00 mL，相當于每1 mL 酒樣中加0.2 μg 甲醛。分別用3 種方法各取6 組上述酒樣，做加標回收實驗，結果見表6。

表6 加標回收試驗結果 (mg/L)

A法白酒樣品中甲醛回收率為68.30%；B法白酒樣品中甲醛回收率為95.25%；C 法白酒樣品中甲醛回收率為97.03%。表明A 法準確度較差，B 法、C法的準確度好。

3 結論

A 法和B 法前處理導致渾濁，不適用于分光光度計法測定固態(tài)發(fā)酵白酒中的甲醛含量；從加標回收率、精密度、重復性方面來看C 法測定結果準確可靠。對于出現(xiàn)渾濁的后段酒和酒尾等可用無水乙醇稀釋1 倍后進行測定；對于甲醛含量較高的樣品，可用60%乙醇溶液稀釋數(shù)倍后進行測定。

直接測定法C 法操作簡單方便，測定結果準確可靠，適用于白酒中甲醛含量的測定。