高效液相色譜法測(cè)定3-巰基丙酸中硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸的含量

賈玉榮，張建超，尤昆，賈玉靜

（江蘇正大清江制藥有限公司，江蘇南京 210033）

巰基丙酸是一種有機(jī)物，化學(xué)式為C3H6O2S，為透明液體，有強(qiáng)烈的硫化物氣味，有臭味、有毒。該物質(zhì)為藥品芬那露的中間體，可用作聚氯乙烯的穩(wěn)定劑[1]，也有企業(yè)將其作為合成舒更葡糖鈉原料藥的起始物料進(jìn)行研究。

目前的文獻(xiàn)報(bào)道[1-4]主要是關(guān)于3-巰基丙酸制備與合成工藝，對(duì)于其雜質(zhì)檢測(cè)方法的研究，可供參考的文獻(xiàn)較少[5-6]，且操作煩瑣，不夠簡(jiǎn)便快速。

本文建立了高效液相色譜法檢測(cè)3-巰基丙酸中的雜質(zhì)的方法，并進(jìn)行了相應(yīng)的方法學(xué)驗(yàn)證，該方法簡(jiǎn)便快速，靈敏度高，可為3-巰基丙酸的質(zhì)量?jī)?yōu)化提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

UltiMate 3000高效液相色譜儀，美國(guó)Thermo Fisher公司；XS-205DU電子天平，梅特勒-托利多集團(tuán)。

硫代乳酸，批號(hào)：ICWDM-LM，含量95.72%，梯希愛（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司；3,3-二硫代二丙酸，批號(hào)：IP85H-QM，含量99.03%，梯希愛（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司；巰基乙酸，批號(hào)：HB190009，含量91.96%，安耐吉公司；乙腈，色譜純，默克公司；磷酸，色譜純，阿拉丁公司；純化水，杭州娃哈哈有限公司；3-巰基丙酸樣品，山東濰坊精細(xì)化工有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，如 Thermo BDS Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相A：0.1%磷酸水溶液；流動(dòng)相B：乙腈；梯度洗脫程序見表1；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；波長(zhǎng)：200 nm；進(jìn)樣量：10 μL；進(jìn)樣盤控溫：10 ℃。

表1 梯度洗脫程序

1.3 溶液制備

1.3.1 空白溶液

乙腈-0.1%磷酸水溶液（1∶1）。

1.3.2 供試品溶液

取3-巰基丙酸約40 mg，精密稱定，置20 mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

1.3.3 對(duì)照溶液

取上述供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。

1.3.4 對(duì)照品溶液

取巰基乙酸、3,3-二硫代二丙酸各10 mg，精密稱定，分別置不同100 mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

1.3.5 系統(tǒng)適用性溶液

取巰基乙酸對(duì)照品40 mg，精密稱定，置20 mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為巰基乙酸對(duì)照品儲(chǔ)備液。

取3,3-二硫代二丙酸對(duì)照品80 mg，硫代乳酸對(duì)照品12 mg，精密稱定，置同一個(gè)100 mL量瓶中，加溶劑溶解，再精密量取巰基乙酸對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品混合儲(chǔ)備液。

取3-巰基丙酸對(duì)照品200 mg，置100 mL量瓶，再取對(duì)照品混合儲(chǔ)備液1 mL，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。

2 結(jié)果與分析

2.1 溶劑和濃度的選擇

硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸在水中的溶解度較好，在乙腈中微溶，而3-巰基丙酸在水中和乙腈中的溶解度均較好，由于流動(dòng)相中添加了磷酸作為pH調(diào)節(jié)劑，為了減少溶劑效應(yīng)的影響，因此選擇乙腈-0.1%的磷酸溶液按照1∶1的比例混合后作為溶劑。硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸的紫外吸收均較弱，因此選擇末端吸收200 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，在該波長(zhǎng)條件下，當(dāng)供試品溶液為2.0 mg/mL時(shí)，硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸的檢測(cè)限均為0.01%，方法靈敏度好。

2.2 色譜條件的選擇

硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸均顯酸性，在常規(guī)的甲醇-水、乙腈-水體系下，峰型較差，均有比較明顯的拖尾，因此在流動(dòng)相中加入適當(dāng)?shù)乃嶙鳛閽呶矂?，可明顯改善峰型；對(duì)比了甲酸、乙酸及磷酸，結(jié)果顯示，在磷酸條件下，峰型最好，響應(yīng)最高；考察了不同比例的磷酸（0.05%、0.10%、0.20%），最終確定磷酸的比例為0.10%時(shí)，可滿足要求。各目標(biāo)分析物峰形尖銳，分離度良好（圖1）。

圖1 最優(yōu)色譜條件下樣品圖譜

2.3 專屬性

分別按“1.3”配制專屬性-空白溶劑［乙腈-0.1%磷酸水溶液（1∶1）］、專屬性-對(duì)照品溶液（硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸）、專屬性-供試品溶液和專屬性-系統(tǒng)適用性溶液。按“1.2”項(xiàng)下分析方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示溶劑和供試品溶液不影響硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸的檢測(cè)，該方法專屬性良好。

2.4 檢測(cè)限及定量限

取“1.3.4”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋，根據(jù)信噪比S/N=3計(jì)算檢出限；根據(jù)信噪比S/N=10計(jì)算定量限；按“1.2”項(xiàng)下分析方法測(cè)定，測(cè)得硫代乳酸的定量限濃度為0.7900 μg/mL，3,3-二硫代二丙酸的定量限濃度為0.3249 μg/mL；硫代乳酸的檢測(cè)限濃度為0.2528 μg/mL，3,3-二硫代二丙酸的檢測(cè)限濃度為0.1624 μg/mL；表明本方法的靈敏度較好。

2.5 線性試驗(yàn)

取硫代乳酸對(duì)照品溶液稀釋制成0.75 μg/mL、1.20μg/mL、1.50 μg/mL、2.25 μg/mL 和 3.00 μg/mL的溶液，3,3-二硫代二丙酸對(duì)照品溶液稀釋制成4.0 μg/mL、6.4 μg/mL、8.0 μg/mL、12.0 μg/mL 和16.0 μg/mL的溶液，照上述“1.2”分析方法分析測(cè)定。

以待測(cè)物濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，待測(cè)物峰面積為縱坐標(biāo)，按最小二乘法進(jìn)行線性回歸。得到硫代乳酸在0.756～3.025 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性良好，線性方程為y=7.0696x+0.0398（r=0.9998，n=5）；3,3-二硫代二丙酸在0.322～16.086 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性良好，線性方程為y=6.5076x+0.134 9（r=0.9997，n=5）。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

按“1.3”項(xiàng)下制備空白溶液、供試品溶液、對(duì)照溶液及系統(tǒng)適用性溶液，其中供試品溶液及對(duì)照溶液制備6份，按“1.2”分析方法測(cè)定，結(jié)果表明6份供試品溶液中均未檢出硫代乳酸，3,3-二硫代二丙酸和總雜含量的RSD分別為1.5%和1.6%，表明本測(cè)定方法的重復(fù)性良好，見表2。

表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

按照“1.3”分別配制含硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸50%、100%、150%的供試品（加標(biāo)）溶液，各配制3份。采用“1.2”分析方法測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果表明，各雜質(zhì)加標(biāo)回收率均在90.0%～110.0%，方法的準(zhǔn)確度良好，見表3、表4。

表3 硫代乳酸準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

表4 3,3-二硫代二丙酸準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定

取3批3-巰基丙酸樣品，按“1.3”項(xiàng)下制備供試品溶液和對(duì)照溶液，按“1.2”項(xiàng)下分析方法測(cè)定，結(jié)果如表5所示。

表5 硫代乳酸及3,3-二硫代二丙酸檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié)論

本文以硫代乳酸及3,3-二硫代二丙酸為研究對(duì)象，建立了3-巰基丙酸中雜質(zhì)含量的高效液相分析方法。該方法具有專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確快速、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，符合定量分析要求，可用于實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)化生產(chǎn)質(zhì)量控制分析。