血清C1q/腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白3、C1q/腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白9水平與冠狀動(dòng)脈鈣化及嚴(yán)重程度的關(guān)系

汪化文，申侖

動(dòng)脈粥樣硬化是冠心病、心絞痛等心血管疾病的主要原因，冠狀動(dòng)脈鈣化（coronary artery calcification，CAC）是動(dòng)脈粥樣硬化的一種類(lèi)型。研究表明，CAC程度高的病人發(fā)生心血管疾病的概率高于CAC程度低的病人，且已發(fā)生CAC的病人治療難度遠(yuǎn)高于未發(fā)生CAC的病人[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，CAC在40～49歲人群的發(fā)生率高達(dá)50%[2]。因此，尋找與CAC發(fā)生、鈣化加重有關(guān)的因子尤為重要。C1q/腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白（C1q/tumor necrosis factor related protein，CTRP）3、CTRP9是新發(fā)現(xiàn)CTRP家族成員，在脂肪組織中強(qiáng)表達(dá)，與糖尿病、冠心病、高血脂、高血壓等心血管疾病均有相關(guān)，參與炎癥反應(yīng)、物質(zhì)代謝、血管擴(kuò)張等多項(xiàng)病理或生理過(guò)程[3-4]。目前，血清CTRP3、CTRP9水平在心血管疾病上有所研究，但與CAC有關(guān)的研究相對(duì)較少。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)CAC病人血清中CTRP3、CTRP9表達(dá)水平，探討二者與CAC病人冠狀動(dòng)脈鈣化病變程度的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年8月至2019年7月在邯鄲市中心醫(yī)院收治的CAC病人（CAC組）128例，男66例，女62例；年齡（62.48±10.27）歲，范圍為36～88歲；體質(zhì)量指數(shù)（23.84±2.37）kg/m2，范圍為20～28 kg/m2。選取健康者（健康對(duì)照組）130例，男66例，女64例；年齡（63.64±12.33）歲，范圍為35～89歲；體質(zhì)量指數(shù)（23.86±2.69）kg/m2，范圍為 20～27 kg/m2。兩組性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)比較，均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）CAC組冠狀動(dòng)脈CT診斷為CAC病人，健康對(duì)照組體檢結(jié)果為CAC陰性，所有受試者均測(cè)定收縮壓、舒張壓；（2）簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）活動(dòng)性出血、貧血、甲狀腺疾病、細(xì)菌或病毒感染者、自身免疫性疾病或長(zhǎng)期使用免疫抑制藥物、嚴(yán)重心肺肝腎功能障礙、惡性腫瘤、代謝性疾病、糖尿病者；（2）近期重大創(chuàng)傷或重大手術(shù)病人、冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)史、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療病史者、長(zhǎng)期酗酒史者；（3）過(guò)敏體質(zhì)或?qū)z查所需試劑過(guò)敏者；（4）服用影響CTRP3、CTRP9和血脂水平藥物者；（5）妊娠期婦女；（6）最近3個(gè)月內(nèi)進(jìn)行其他臨床試驗(yàn)者；（7）依從性差、不能按時(shí)復(fù)診者；（8）資料不真實(shí)或不完整者。

冠狀動(dòng)脈鈣化積分（coronary artery calcification score，CACS）分組：待病人心率控制在90次/分鐘以下時(shí)做冠狀動(dòng)脈鈣化掃描，使用計(jì)算機(jī)評(píng)分軟件Agatston根據(jù)鈣化體積、面積和峰值計(jì)算CACS。根據(jù)CACS將CAC組病人分為4組，其中，少量鈣化組（28例）：CACS 0～<10分；輕度鈣化組（32例）：CACS 10～<100分；中度鈣化組（38例）：CACS 100～<400分；重度鈣化組（30例）：CACS≥400分。

1.2 試劑與儀器所用人CTRP3酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法試劑盒購(gòu)自艾美捷科技，貨號(hào)580200-1；所用人CTRP9 ELISA試劑盒購(gòu)自上海恒渡生物科技，貨號(hào)HD39923；MODEL550型酶標(biāo)儀，美國(guó)Bio-Rad公司；AU5800型全自動(dòng)生化分析儀，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司。

1.3 血清中CTRP3、CTRP9表達(dá)水平及血脂水平檢測(cè)清晨抽取CAC病人及健康體檢者空腹外周靜脈血10 mL，置于EDTA管中，平均分成兩份，一份4℃低溫3 000 r/min離心10 min，吸取0.5 mL上層血清于無(wú)菌EP管，ELISA法檢測(cè)病人血清中CTRP3、CTRP9的表達(dá)水平，試驗(yàn)方法均按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值，波長(zhǎng)為450 nm，取3次重復(fù)平均值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出換算方程，計(jì)算CTRP3、CTRP9表達(dá)水平。

另一份使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)三酰甘油（triglyceride，TG）水平、總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平以及低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法利用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 24.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布，采用±s描述，四/五組組內(nèi)不同鈣化數(shù)據(jù)行單因素方差分析，兩兩比較行LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料均以例（%）表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)。Pearson法分析CAC病人血清中CTRP3、CTRP9與TG、TC、HDL-C、LDL-C的相關(guān)性。采用多因素logistic回歸分析影響CAC發(fā)生的因素。當(dāng)P<0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清中CTRP3、CTRP9水平比較CAC組病人血清中CTRP3、CTRP9水平較健康對(duì)照組明顯下降（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 冠狀動(dòng)脈鈣化（CAC）組與健康對(duì)照組血清中C1q/腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白（CTRP）3、CTRP9水平比較/（μg/L，±s）

表1 冠狀動(dòng)脈鈣化（CAC）組與健康對(duì)照組血清中C1q/腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白（CTRP）3、CTRP9水平比較/（μg/L，±s）

組別健康對(duì)照組CAC組t值P值例數(shù)130 128 CTRP3 80.05±16.23 67.26±7.58 8.09 0.000 CTRP9 39.26±3.12 34.15±2.65 14.17 0.000

2.2 兩組血脂、血壓水平比較與健康對(duì)照組相比，CAC組病人TC、TG、LDL-C、收縮壓、舒張壓水平明顯升高，HDL-C水平明顯降低（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 冠狀動(dòng)脈鈣化（CAC）組與健康對(duì)照組血脂、血壓水平比較/（mmol/L，±s）

表2 冠狀動(dòng)脈鈣化（CAC）組與健康對(duì)照組血脂、血壓水平比較/（mmol/L，±s）

注：TG為三酰甘油，TC為總膽固醇，HDL-C為高密度脂蛋白膽固醇，LDL-C為低密度脂蛋白膽固醇。

組別健康對(duì)照組CAC組t值P值舒張壓/mmHg 70.67±6.01 85.42±7.84 16.98 0.000例數(shù)130 128 TG/（mmol/L）1.58±0.27 1.99±0.41 9.50 0.000 TC/（mmol/L）4.52±0.53 5.43±0.86 10.25 0.000 HDL-C/（mmol/L）1.64±0.31 1.17±0.22 14.02 0.000 LDL-C/（mmol/L）3.06±0.19 3.57±0.34 14.84 0.000收縮壓/mmHg 121.74±11.85 134.78±12.63 8.55 0.000

2.3 五組血清中CTRP3、CTRP9水平比較五組血清中CTRP3、CTRP9水平的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與健康對(duì)照組相比，少量鈣化組CAC病人血清中CTRP3、CTRP9水平無(wú)明顯變化（P>0.05），輕度、中度、重度鈣化組CAC病人血清中CTRP3、CTRP9水平明顯降低（P<0.05）；與少量鈣化組相比，輕度、中度、重度鈣化組CAC病人血清中CTRP3、CTRP9水平明顯降低（P<0.05）；與輕度鈣化組相比，中度、重度鈣化組CAC病人血清中CTRP3、CTRP9水平明顯降低（P<0.05）；與中度鈣化組相比，重度鈣化組CAC病人血清中CTRP3、CTRP9水平明顯降低（P<0.05）。見(jiàn)表3。

表3 冠狀動(dòng)脈鈣化（CAC）不同積分組與健康對(duì)照組血清中C1q/腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白（CTRP）3、CTRP9水平比較/±s

表3 冠狀動(dòng)脈鈣化（CAC）不同積分組與健康對(duì)照組血清中C1q/腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白（CTRP）3、CTRP9水平比較/±s

注：①與健康對(duì)照組相比較，P<0.05。②與少量鈣化組相比較，P<0.05。③與輕度鈣化組相比較，P<0.05。④與中度鈣化組相比較，P<0.05。

CTRP9/（μg/L）39.26±3.12 38.84±3.02 36.91±2.86①②33.84±2.57①②③27.23±2.48①②③④115.64<0.001組別健康對(duì)照組少量鈣化組輕度鈣化組中度鈣化組重度鈣化組F值P值例數(shù)130 28 32 38 30 CTRP3/（μg/L）80.05±16.23 77.84±10.76 70.35±9.48①②64.32±6.57①②③57.82±6.05①②③④25.25<0.001

2.4 五組血脂水平比較五組血脂水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與健康對(duì)照組相比，少量鈣化組CAC病人TG、TC、HDL-C水平無(wú)明顯變化（P>0.05），LDL-C水平明顯升高（P<0.05），輕度、中度、重度鈣化組CAC病人TC、TG、LDL-C水平明顯升高（P<0.05），HDL-C水平明顯降低（P<0.05）；與少量鈣化組相比，輕度、中度、重度鈣化組CAC病人TC、TG、LDL-C水平明顯升高，HDL-C水平明顯降低（P<0.05）；與輕度鈣化組相比，中度、重度鈣化組CAC病人TC、TG、LDL-C水平明顯升高，HDL-C水平明顯降低（P<0.05）；與中度鈣化組相比，重度鈣化組CAC病人TC、TG、LDL-C水平明顯升高，HDL-C水平明顯降低（P<0.05）。見(jiàn)表4。

表4 冠狀動(dòng)脈鈣化（CAC）不同積分組與健康對(duì)照組血脂比較/（mmol/L，±s）

表4 冠狀動(dòng)脈鈣化（CAC）不同積分組與健康對(duì)照組血脂比較/（mmol/L，±s）

注：TG為三酰甘油，TC為總膽固醇，HDL-C為高密度脂蛋白膽固醇，LDL-C為低密度脂蛋白膽固醇。①與健康對(duì)照組相比較，P<0.05。②與少量鈣化組相比較，P<0.05。③與輕度鈣化組相比較，P<0.05。④與中度鈣化組相比較，P<0.05。

組別健康對(duì)照組少量鈣化組輕度鈣化組中度鈣化組重度鈣化組F值P值LDL-C 3.06±0.19 3.17±0.16①3.46±0.18①②3.68±0.27①②③3.92±0.33①②③④133.45 0.000例數(shù)130 28 32 38 30 TG 1.58±0.27 1.61±0.29 1.81±0.31①②2.11±0.47①②③2.43±0.52①②③④47.09 0.000 TC 4.52±0.53 4.67±0.56 5.22±0.64①②5.65±0.88①②③6.12±0.92①②③④50.38 0.000 HDL-C 1.64±0.31 1.59±0.30 1.31±0.27①②1.06±0.21①②③0.80±0.19①②③④76.55 0.000

2.5 CAC不同積分組年齡、血壓比較CAC不同積分組年齡、血壓比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與少量鈣化組相比，輕度、中度、重度鈣化組CAC病人年齡、收縮壓、舒張壓明顯升高（P<0.05）；與輕度鈣化組相比，中度、重度鈣化組年齡、收縮壓、舒張壓均明顯升高（P<0.05）；與中度鈣化組相比，重度鈣化組年齡、收縮壓、舒張壓明顯升高（P<0.05）。見(jiàn)表5。

表5 冠狀動(dòng)脈鈣化（CAC）不同積分組年齡、血壓比較/±s

表5 冠狀動(dòng)脈鈣化（CAC）不同積分組年齡、血壓比較/±s

注：①與少量鈣化組相比較，P<0.05。②與輕度鈣化組相比較，P<0.05。③與中度鈣化組相比較，P<0.05。

舒張壓/mmHg 80.15±6.47 83.61±6.82①86.92±6.88①②90.39±7.24①②③12.09 0.000組別少量鈣化組輕度鈣化組中度鈣化組重度鈣化組F值P值例數(shù)28 32 38 30年齡/歲40.15±8.26 55.28±8.86①67.72±9.27①②84.37±8.33①②③135.51 0.000收縮壓/mmHg 124.62±12.22 131.24±12.57①137.55±12.88①②144.52±13.11①②③13.25 0.000

2.6 CAC病人血清中CTRP3、CTRP9水平與血脂水平的相關(guān)性分析CAC病人血清中CTRP3、CTRP9水平與TC、TG水平均明顯負(fù)相關(guān)（P<0.05），與HDL-C水平均明顯正相關(guān)（P<0.05），與LDL-C水平均相關(guān)性不明顯（P>0.05）。見(jiàn)表6。

表6 冠狀動(dòng)脈鈣化（CAC）血清中C1q/腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白（CTRP）3、CTRP9水平與血脂水平的相關(guān)性分析

2.7 影響CAC發(fā)生的多因素分析將是否患CAC作為因變量，CTRP3、CTRP9、TG、TC、HDL-C及LDLC水平為自變量，進(jìn)行多因素logistic回歸分析，結(jié)果顯示CTRP3、CTRP9、HDL-C是影響CAC的保護(hù)因素，TC、TG、LDL-C水平均是影響CAC發(fā)生的危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表7。

表7 影響冠狀動(dòng)脈鈣化（CAC）發(fā)生的多因素分析

3 討論

CAC是血管鈣化的一種，是鈣鹽在冠狀動(dòng)脈壁上積聚導(dǎo)致的病理?yè)p害，CACS增高則冠狀動(dòng)脈狹窄加劇，血管壁脆性和僵硬度增加，易導(dǎo)致血管壁破裂、出血和血栓形成，最終增加不良心血管事件發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[5]。目前，我國(guó)心血管疾病死亡率較高，占所有疾病總死亡率的40%以上，且患病率和死亡率還在持續(xù)上升，而CAC作為冠狀動(dòng)脈硬化病變標(biāo)志，對(duì)心血管疾病的發(fā)生具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值[6-7]。目前臨床上應(yīng)用冠狀動(dòng)脈CT、血管內(nèi)超聲或冠狀動(dòng)脈血管照影等影像學(xué)手段預(yù)測(cè)CAC發(fā)生并判斷鈣化程度，一些實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)同樣具有預(yù)測(cè)判斷意義[8]。近年來(lái)對(duì)其發(fā)病機(jī)制和影響因素研究表明，CAC的發(fā)生機(jī)制復(fù)雜且可調(diào)控，其發(fā)生與動(dòng)脈粥樣硬化程度顯著相關(guān)，且其發(fā)生主要可歸因于血管平滑肌細(xì)胞表型的轉(zhuǎn)化[9]。

CTRP3在脂肪、心臟、血管平滑肌細(xì)胞等多種組織和細(xì)胞中均有表達(dá)，能調(diào)控心肌纖維化、血管新生等過(guò)程[10]。研究表明，CTRP3通過(guò)激活ROSERK1/2-Runx2信號(hào)通路，上調(diào)骨標(biāo)志物的表達(dá)，降低收縮表型的表達(dá)，使血管平滑肌細(xì)胞由收縮表型向成骨表型轉(zhuǎn)換，進(jìn)而促進(jìn)血管鈣化[11]。但劉海玲發(fā)現(xiàn)，CAC病人血清CTRP3水平與非冠狀動(dòng)脈鈣化組相比有所降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為循環(huán)中CTRP3水平可能不能代表血管鈣化部位CTRP3的表達(dá)水平[12]。CTRP9可通過(guò)調(diào)節(jié)AdipoR1/AMPK/eNOS/NO信號(hào)通路，減輕血管損傷，改善內(nèi)皮細(xì)胞功能，促進(jìn)主動(dòng)脈血管內(nèi)皮產(chǎn)生NO，誘導(dǎo)血管舒張，抑制平滑肌細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、葡萄糖等過(guò)程，發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化及穩(wěn)定斑塊作用[13]。吳愛(ài)成研究CTRP9發(fā)現(xiàn)，其在無(wú)癥狀冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病人血清中的表達(dá)明顯低于健康對(duì)照組，認(rèn)為CTRP9可作為早期診斷依據(jù)[14]。CTRP3、CTRP9在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和保護(hù)心血管調(diào)節(jié)途徑中均有參與[15]。在本研究中，CAC組病人血清CTRP3、CTRP9水平明顯低于健康對(duì)照組，其表達(dá)水平均隨著CAC組病人冠狀動(dòng)脈鈣化程度的加重而下調(diào)；提示CTRP3、CTRP9與CAC的關(guān)系密切，隨著疾病嚴(yán)重而下調(diào)明顯；CTRP3表達(dá)結(jié)果與劉海玲的研究有所差異，可能是由于劉海玲的對(duì)照組為有胸痛癥狀的非冠狀動(dòng)脈鈣化病人，而本研究對(duì)照組為健康體檢者，或是兩個(gè)研究選用的樣本都不夠大，產(chǎn)生的結(jié)果不夠穩(wěn)定所致。血脂指標(biāo)TC、TG、LDL-C水平明顯升高，HDL-C水平明顯降低，其表達(dá)水平均隨著CAC組病人動(dòng)脈鈣化程度的加重而異常表達(dá)加劇，提示血脂指標(biāo)TC、TG、LDL-C、HDL-C參與CAC組病人的動(dòng)脈鈣化過(guò)程，與動(dòng)脈鈣化程度緊密相關(guān)。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CAC組病人血清中CTRP3、CTRP9表達(dá)水平與TC、TG水平均明顯負(fù)相關(guān)，與HDL-C水平均明顯正相關(guān)；多因素回歸分析表明，CTRP3、CTRP9、HDL-C是影響CAC發(fā)生的保護(hù)因素，TC、TG、LDL-C水平均是影響CAC發(fā)生的危險(xiǎn)因素。提示CTRP3、CTRP9與部分血脂水平關(guān)系密切，且均為影響CAC發(fā)生的保護(hù)因素，其下調(diào)可促進(jìn)冠狀動(dòng)脈鈣化，可通過(guò)調(diào)控血脂異常表達(dá)進(jìn)而導(dǎo)致CAC發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述，CAC病人血清CTRP3、CTRP9水平下調(diào)，且與部分血脂指標(biāo)水平相關(guān)性明顯，可能通過(guò)血脂水平影響疾病的發(fā)生發(fā)展，是CAC發(fā)生的保護(hù)因素，可作為CAC早期診斷的依據(jù)及鈣化程度的判斷依據(jù)。但本研究存在不足：樣本量略小，可進(jìn)一步擴(kuò)大樣本。