IL-33在診斷慢性乙型肝炎肝纖維化中的應(yīng)用評(píng)價(jià)*

慢性乙型肝炎(CHB)若不及時(shí)治療可逐漸進(jìn)展到肝纖維化

。肝纖維化是CHB向肝硬化及肝癌發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，但肝纖維化在一定程度上可逆轉(zhuǎn)，因此積極治療和逆轉(zhuǎn)肝纖維化對(duì)延長(zhǎng)CHB患者的生存周期至關(guān)重要

。目前，肝組織學(xué)活檢仍是評(píng)估肝纖維化嚴(yán)重程度的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但因其屬于有創(chuàng)檢查且無(wú)法動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)CHB肝纖維化的變化程度，故而對(duì)于部分臨床患者應(yīng)用較為局限。IL-33屬于IL-1家族中的一種新型炎性因子

，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)IL-33與CHB、肝硬化及肝癌的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)

。我們通過(guò)檢測(cè)CHB患者血清IL-33的表達(dá)水平并探討其診斷肝纖維化的臨床效能，為CHB患者肝纖維化的診斷、治療及動(dòng)態(tài)檢測(cè)提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2019年6月于新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院感染科住院治療的98例CHB患者作為研究對(duì)象，其中男性45例，女性53例，平均年齡(55.23±10.78)歲，病程(14.22±5.39)年。另納入35例健康體檢者作為對(duì)照組，其中男性20例，女性15例，平均年齡(54.25±8.93)歲，兩組研究對(duì)象在性別、年齡方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述所有研究對(duì)象對(duì)本研究均知情同意且簽署知情同意協(xié)議書(shū)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) ①慢性乙型肝炎診斷符合2015年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)制定的慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)

；②均完成肝臟穿刺組織學(xué)活檢和B超檢查者；③納入研究時(shí)1年內(nèi)未進(jìn)行抗病毒和抗纖維化藥物治療者；④臨床資料完整者。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ①CHB近期急性加重者；②合并丙型肝炎、自身免疫性肝病、藥物性肝損傷、脂肪肝、肝癌等患者；③哺乳、妊娠及精神類(lèi)疾病者；④3個(gè)月內(nèi)采用激素治療者。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.3 肝組織活檢 CHB患者入院時(shí)在B超引導(dǎo)下行肝臟穿刺活檢，肝纖維化程度采用S0～S4分期評(píng)估，其中S0為無(wú)纖維化、S1～S2代表中度纖維化、S3～S4代表重度纖維化

。

“巴洛克”是一種代表歐洲文化的典型藝術(shù)風(fēng)格，追求宏偉、奔放、夸張的效果，而巴洛克音樂(lè)的特色便是“速度與激情”！維瓦爾第是當(dāng)時(shí)意大利巴洛克音樂(lè)的“高產(chǎn)大戶”，他一生創(chuàng)作過(guò)六百多首作品，其中最出名、最有新意的就是《四季》。維瓦爾第給《四季》中的每首協(xié)奏曲都單獨(dú)取了名字，分別是《春》《夏》《秋》《冬》，這就是最早的“標(biāo)題音樂(lè)”。相傳他還巧妙地為每首作品配上了唯美的十四行詩(shī)，這也是之前的音樂(lè)家沒(méi)做過(guò)的（至于那詩(shī)到底是不是他本人寫(xiě)的，就無(wú)從知曉了）。

1.4.2 肝臟B超檢查 CHB患者入院時(shí)采用超聲儀檢查肝臟的光滑度和肝實(shí)質(zhì)回聲情況。根據(jù)肝臟表面光滑、欠光滑、不光滑及有結(jié)節(jié)分別計(jì)0分、1分、2分和3分，肝臟實(shí)質(zhì)回聲均勻、略粗、較粗和粗糙分別計(jì)0分、1分、2分和3分

。通過(guò)B超檢測(cè)結(jié)果計(jì)算肝纖維化程度評(píng)分，B超評(píng)分越高，說(shuō)明肝纖維化程度越嚴(yán)重。

1.4.1 生化指標(biāo)檢查 檢測(cè)各組研究對(duì)象血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBil)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)水平；檢測(cè)各組研究對(duì)象血清肝纖維化指標(biāo)如Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)、透明質(zhì)酸(HA)、層黏蛋白(LN)水平；檢測(cè)各組研究對(duì)象WBC和PLT水平；計(jì)算肝纖維化評(píng)估模型S指數(shù)=1000×GGT/PLT×WBC2，F(xiàn)IB-4=年齡×AST/PLT×ALT1/2。

洞庭湖地處長(zhǎng)江中游荊江南岸，地跨湘、鄂兩省，是我國(guó)第二大淡水湖，天然湖泊面積2 625km2，流域面積26.3萬(wàn)km2。洞庭湖生態(tài)經(jīng)濟(jì)區(qū)覆蓋湖南省岳陽(yáng)市、常德市、益陽(yáng)市及長(zhǎng)沙市望城區(qū)和湖北省荊州市33個(gè)縣（市、區(qū)）。作為長(zhǎng)江流域重要的調(diào)蓄性湖泊、生態(tài)凈化池（前置庫(kù)）和亞洲最大的內(nèi)陸濕地，洞庭湖在調(diào)節(jié)長(zhǎng)江徑流、維護(hù)生態(tài)平衡、保護(hù)生物多樣性等方面具有不可替代的重要作用，素有“長(zhǎng)江之腎”之稱(chēng)。

2.3 CHB患者血清IL-33表達(dá)水平與肝纖維化指標(biāo)的相關(guān)性 所有CHB患者B超評(píng)分、FIB-4和S指數(shù)分別為(2.81±0.34)、(1.57±0.47)和(0.21±0.11)。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CHB患者血清中IL-33表達(dá)水平與PCⅢ、Ⅳ-C、HA、LN、B超評(píng)分、FIB-4和S指數(shù)均呈顯著正相關(guān)性，結(jié)果見(jiàn)表3。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料若符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用

檢驗(yàn)，若不符合正態(tài)分布，以中位數(shù)表示M(P25，P75)，采用Mann-Whitney

檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)表示，組間比較采χ

檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用

檢驗(yàn)；以受試者操作特征(ROC)曲線探討血清IL-33診斷肝纖維化的臨床效能。以

<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.4 血清IL-33、FIB-4、S指數(shù)及B超評(píng)分診斷CHB患者肝纖維化的效能 將所有CHB患者血清IL-33水平、FIB-4、S指數(shù)及B超評(píng)分?jǐn)?shù)值作為檢驗(yàn)變量，其中S1～S4期CHB患者血清IL-33水平、FIB-4、S指數(shù)及B超評(píng)分作為狀態(tài)變量，繪制ROC曲線圖。血清IL-33、FIB-4、S指數(shù)及B超評(píng)分診斷CHB患者發(fā)生肝纖維化的AUC分別為0.951(95%

：0.905～0.996)、0.893(95%

：0.830～0.955)、0.889(95%

：0.826～0.951)和0.744(95%

：0.641～0.847)，與FIB-4、S指數(shù)和B超評(píng)分相比，血清IL-33診斷CHB患者發(fā)生肝纖維化的AUC較高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

=24.03，

=24.86，

=40.21，

<0.05)，提示血清IL-33診斷CHB患者發(fā)生肝纖維化的臨床效能較高。當(dāng)IL-33截?cái)嘀禐?63.52 pg/ml時(shí)，此時(shí)敏感度和特異度分別為92.14%和96.33%。結(jié)果見(jiàn)圖1和表4。

CHB可逐漸發(fā)展為肝纖維化，而持續(xù)的肝纖維化可導(dǎo)致肝硬化及肝癌的發(fā)生，故對(duì)CHB患者發(fā)生肝纖維化進(jìn)行早期診斷和及時(shí)治療具有重要意義。血清學(xué)標(biāo)志物具有無(wú)創(chuàng)性、易于檢測(cè)和操作等多種優(yōu)勢(shì)，且在一定程度上能反映肝臟整體的病變情況，使得血清學(xué)標(biāo)志物診斷CHB患者發(fā)生肝纖維化的研究成為近年來(lái)的熱點(diǎn)。

1.4.4 血清IL-33表達(dá)水平 所有研究對(duì)象均檢測(cè)IL-33水平。

2.1 兩組研究對(duì)象生化指標(biāo)及血清IL-33水平的比較 見(jiàn)表1。

以上述2個(gè)主成分因子為變量繪制載荷圖和得分圖，詳見(jiàn)圖5。由圖5可知，載荷圖結(jié)果與初始因子載荷矩陣結(jié)果相同，距離原點(diǎn)較遠(yuǎn)的點(diǎn)為主成分因子1和主成分因子2中權(quán)重值較大的成分；由得分圖可知，10批藥材樣品分散在不同區(qū)域，表明藥材樣品質(zhì)量與地域分布有關(guān)。

3 討論

2.2 不同肝纖維化程度CHB患者血清IL-33的表達(dá)水平 見(jiàn)表2。

IL-33于2005年被發(fā)現(xiàn)，屬于IL-1家族中的一員，主要在機(jī)體的上皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞高表達(dá)

，研究認(rèn)為IL-33與機(jī)體多種臟器纖維化的發(fā)生發(fā)展均密切相關(guān)

。本研究對(duì)CHB患者肝纖維化嚴(yán)重程度進(jìn)行不同分期后發(fā)現(xiàn)，不同分期患者血清中IL-33表達(dá)水平存在顯著差異，且IL-33水平隨著肝纖維化分期的升高而升高；此外，F(xiàn)IB-4、S指數(shù)及肝臟B超評(píng)分均是既往評(píng)估肝纖維化的指標(biāo)，相關(guān)性分析結(jié)果同樣證實(shí)血清IL-33水平與FIB-4、S指數(shù)及B超評(píng)分均呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性，提示IL-33能顯著促進(jìn)CHB患者肝纖維的進(jìn)展。研究證實(shí)IL-33通過(guò)其受體作用于Th2細(xì)胞從而促進(jìn)IL-4、IL-13等Th2型細(xì)胞因子的高表達(dá)，而IL-4及IL-13對(duì)維持肝臟炎癥和介導(dǎo)肝纖維化的發(fā)生具有重要作用

；另一方面，IL-33與其受體ST2，即IL-33/ST2信號(hào)通路參與肝纖維化的調(diào)控進(jìn)程

，Marvie等

發(fā)現(xiàn)，小鼠和人肝臟纖維化組織中IL-33 mRNA和ST2 mRNA表達(dá)水平均顯著上調(diào)，在肝纖維化進(jìn)程中扮演重要作用且異?；罨母涡菭罴?xì)胞是IL-33主要來(lái)源，對(duì)IL-33受體ST2進(jìn)行特異性敲除后能顯著改善肝纖維化的程度。固有淋巴樣2型細(xì)胞(ILC2)屬于IL-33的一個(gè)經(jīng)典效應(yīng)細(xì)胞，ILC2在受IL-33刺激后能誘導(dǎo)Th2細(xì)胞炎性反應(yīng)從而參與肝纖維的發(fā)生發(fā)展

。朱海軍等

發(fā)現(xiàn)采用IL-33抗體對(duì)肝纖維化小鼠模型進(jìn)行干預(yù)后能顯著改善肝纖維化嚴(yán)重程度和降低血清ALT和AST水平，且小鼠肝臟勻漿組織中IL-4和IL-13水平顯著降低，肝臟組織中MMP9表達(dá)水平同樣降低，而MMP9早已被證實(shí)促進(jìn)了肝纖維化的發(fā)病機(jī)制

。本研究中對(duì)反映肝纖維化的血清學(xué)指標(biāo)如PCⅢ、Ⅳ-C、HA、LN檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，IL-33與上述指標(biāo)均呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性，提示IL-33可作為診斷肝纖維的一項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)。

將飼料粉碎至一定粒度（過(guò)40目篩），放置陰涼干燥處密閉保存。將所需用的磷酸鹽緩沖溶液、氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液、磺基水楊酸溶液配好備用，實(shí)驗(yàn)所需的胃蛋白酶溶液、胰液素和氯霉素溶液在做實(shí)驗(yàn)前配制。

蔡元培對(duì)但采爾赴北平的要求表示支持，2月9日致許壽裳的信中說(shuō)：“但采爾夫婦既往北平，使我等減少責(zé)任，亦復(fù)甚好?！盵11]14考慮到北平?jīng)]有民族學(xué)組，蔡元培又要求許壽裳等把但采爾介紹到歷史語(yǔ)言研究所，因?yàn)檫@個(gè)所的人類(lèi)學(xué)“與民族學(xué)密接，且考古學(xué)與語(yǔ)言學(xué)，亦與民族學(xué)有關(guān)”[11]14。

CHB患者血清IL-33水平顯著升高，同時(shí)在一定程度上可反映肝纖維的嚴(yán)重程度。本研究結(jié)果顯示，血清IL-33診斷CHB患者肝纖維化的AUC為0.951，提示血清IL-33診斷CHB患者肝纖維化的臨床效能較高，敏感度和特異度分別為92.14%和96.33%。另一方面，F(xiàn)IB-4、S指數(shù)、B超評(píng)分也是臨床上常用于評(píng)估CHB患者肝纖維化的指標(biāo)，但FIB-4和S指數(shù)受到的影響因素較多，而血清中IL-33水平較為穩(wěn)定，受到影響因素較少。我們對(duì)比IL-33與FIB-4、S指數(shù)和B超評(píng)分在診斷CHB患者肝纖維化臨床效能的差異，發(fā)現(xiàn)IL-33診斷CHB患者肝纖維化的臨床效能均顯著高于FIB-4、S指數(shù)和B超評(píng)分，提示IL-33診斷CHB患者肝纖維化的準(zhǔn)確率較高，可在臨床推廣。

綜上所述，CHB患者血清IL-33水平促進(jìn)了肝纖維的發(fā)生發(fā)展，且能夠較為準(zhǔn)確的評(píng)估CHB患者發(fā)生肝纖維化，這一結(jié)果對(duì)于臨床上動(dòng)態(tài)檢測(cè)CHB患者肝纖維化的進(jìn)展程度具有一定參考意義。然而，也需要大樣本量的結(jié)果來(lái)證實(shí)我們的結(jié)論，同時(shí)IL-33如何參與CHB患者肝纖維化的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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