過敏性紫癜患兒血清基質(zhì)金屬蛋白酶-13、白細(xì)胞介素-9和腫瘤壞死因子-α表達(dá)水平變化及意義

王曉亮，趙光宇

(1.榆林市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西 榆林 719000；2.西安市中心醫(yī)院兒科，陜西 西安 710004)

過敏性紫癜(Henoch-schonlein purpura，HSP)多見于幼兒園幼兒與小學(xué)生，可歸為血管炎疾病類型，年發(fā)病率為萬分之一左右，已成為了一種公共衛(wèi)生問題[1-2]。該病在臨床上的主要癥狀為紫癜，伴有腹痛、腎臟病變、關(guān)節(jié)痛等，機(jī)體可表現(xiàn)為小血管嗜酸粒細(xì)胞、周圍中性粒細(xì)胞侵襲與浸潤，存在血液高凝狀態(tài)，甚至有微血栓形成。HSP常具有自限性，部分患兒不經(jīng)過治療就可好轉(zhuǎn)，需要治療的很多患兒在對(duì)癥治療后臨床癥狀可明顯好轉(zhuǎn)[3]。但是部分患兒如果不及時(shí)進(jìn)行診治，可出現(xiàn)顱內(nèi)出血而危及生命，因此對(duì)于HSP治療的要求也比較高[4]。同時(shí)，HSP在發(fā)病時(shí)無特異性臨床癥狀，容易導(dǎo)致誤診與漏診情況發(fā)生，為此加強(qiáng)早期診斷也具有重要意義。HSP具體發(fā)病機(jī)制還不明確，病因比較多，涉及多種細(xì)胞因子的異常表達(dá)[5]?；|(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases，MMP)為一組蛋白水解酶，包括數(shù)十種蛋白，可降解細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)。MMP-13是MMP的主要類型，也是降解Ⅳ型膠原最主要的酶，與川崎病、大動(dòng)脈炎的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)[6]，但其具體機(jī)制尚不清楚。白細(xì)胞介素-9(Interleukin，IL-9)為常見促炎因子，不僅可對(duì)機(jī)體發(fā)生炎性反應(yīng)，也可誘導(dǎo)其他促炎因子的釋放，從而使患者病情惡化[7]。腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor，TNF-α)也為一種炎癥因子，在局部組織炎癥的發(fā)生中發(fā)揮重要作用，可誘導(dǎo)其他炎癥因子的釋放，增強(qiáng)細(xì)胞間黏附分子-1的表達(dá)，從而在多種炎性疾病的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮重要作用[8]。本研究觀察HSP患兒血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年3月至2021年2月在本院接受診治的HSP患兒96例為HSP組，選擇同期在本院進(jìn)行健康體檢的兒童96例為對(duì)照組。HSP組中，男性49例，女性47例；平均年齡(7.39±0.58)歲；平均體重(24.02±2.14)kg；平均病程(2.92±0.25)周；平均身高(128.76±10.48)cm；腹型34例，關(guān)節(jié)型36例，腎型16例，混合型10例；急性期50例，緩解期46例；腎受累56例。對(duì)照組中，男性50例，女性46例；平均年齡(7.41±0.41)歲；平均體重(24.42±1.49)kg；平均身高(128.77±9.17)cm。兩組兒童性別、年齡、體重、身高比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：HSP組患兒符合HSP診斷標(biāo)準(zhǔn)；所有兒童臨床資料完整；檢查前1個(gè)月未服用抗組胺類藥物，檢查前3個(gè)月未服用長效皮質(zhì)類固醇激素；HSP組患兒為首次發(fā)病；所有兒童凝血功能正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并腫瘤等免疫異常疾病的患兒；既往有凝血功能異常，導(dǎo)致出、凝血病史的患兒；繼發(fā)性腎病患兒；患有腫瘤及合并心血管疾病的患兒。所有患兒家屬簽署知情同意書。本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了本研究。

1.2 治療方法 HSP組所有患兒都給予綜合治療，予以維生素C(國藥準(zhǔn)字：H20058523)1.0 g/d靜脈滴注，孟魯司特鈉顆粒(國藥準(zhǔn)字：H20203044)4 mg/d口服，西咪替丁氯化鈉注射液(國藥準(zhǔn)字：H20030076)10 mg/kg靜脈滴注，10%葡萄糖酸鈣(國藥準(zhǔn)字：H20020311)1 ml/kg靜脈滴注，低分子肝素鈣(國藥準(zhǔn)字：H20060190)60～80 μg/kg皮下注射，連續(xù)治療2周。

1.3 療效判定標(biāo)準(zhǔn) 臨床癥狀有顯著緩解，治療期間無復(fù)發(fā)，判定為痊愈；臨床癥狀有好轉(zhuǎn)，治療期間無復(fù)發(fā)，判定為顯效；未達(dá)到以上標(biāo)準(zhǔn)甚或惡化，判定為無效。有效包括痊愈和顯效。有效率=(痊愈+顯效)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4 血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平檢測(cè) 采集所有兒童空腹肘靜脈血2～3 ml，低溫靜置30 min后，2000 r/min離心10 min，取上層血清進(jìn)行低溫保溫。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平(試劑盒批號(hào)依次為ab221839、ab242237、ab181421，均購自美國R&D Systems公司)，檢測(cè)過程與檢測(cè)體系的質(zhì)量控制都符合要求。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.00統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。MMP-13表達(dá)水平等計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearsman法。多因素分析采用Logistic回歸模型分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，組間比較采用卡方χ2檢驗(yàn)； 檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平比較 見表1。HSP組血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平高于對(duì)照組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

表1 兩組血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平比較

2.2 不同療效患兒血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平比較 見表2。在HSP組中，治療后痊愈54例，顯效36例，無效6例，有效率為93.75%。有效患兒血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平低于無效患兒(均P<0.05)。

表2 不同療效患兒血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平比較

2.3 HSP患兒預(yù)后與血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平相關(guān)性分析 Spearsman相關(guān)性分析顯示，HSP患兒預(yù)后與血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.722、0.542、0.443，均P<0.05)。

2.4 HSP患兒預(yù)后影響因素分析 見表3。Logistic回歸分析顯示，血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平均為患兒預(yù)后的影響因素(均P<0.05)。

表3 HSP患兒預(yù)后影響因素分析

3 討 論

HSP當(dāng)前在臨床上比較常見，是一種變態(tài)反應(yīng)性疾病，主要表現(xiàn)為全身細(xì)小動(dòng)脈、毛細(xì)血管異常[9]。HSP多發(fā)生在小兒，在不同性別患兒中的發(fā)病率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，雖然發(fā)病比較急促，但是病程具有自限性，可反復(fù)發(fā)病，從而影響患兒的身心健康，也影響家庭生活質(zhì)量。HSP病理改變?yōu)檠苄匝仔苑磻?yīng)，涉及大量異常細(xì)胞因子的表達(dá)，但是具體發(fā)病機(jī)制還不明確。本研究顯示，HSP組血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平高于對(duì)照組，表明HSP患兒多伴有血清MMP-13、IL-9和TNF-α的高表達(dá)。從機(jī)制上分析，作為一種鈣離子、鋅離子依賴性蛋白水解酶，MMP-13可參與調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的炎癥反應(yīng)，其高表達(dá)可破壞血管內(nèi)皮屏障，促進(jìn)大量炎癥因子釋放和白細(xì)胞滲出、遷移，增加內(nèi)皮細(xì)胞通透性，導(dǎo)致患兒出現(xiàn)血管性疾病[10-11]。IL-9具有強(qiáng)大的促炎作用，可直接或者與其他炎癥因子協(xié)同驅(qū)動(dòng)T細(xì)胞應(yīng)答，誘發(fā)炎癥活性基因表達(dá)，可參與HSP的發(fā)生與發(fā)展。在機(jī)體受到病原體侵襲時(shí)，血清中會(huì)產(chǎn)生大量TNF-α，后者可促進(jìn)機(jī)體大量分泌趨化因子，還能刺激上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、氣道平滑肌細(xì)胞分泌大量炎癥因子與造血細(xì)胞因子，引起骨髓細(xì)胞系增生，以增強(qiáng)局部炎癥[12-13]。

本研究顯示，在HSP組中，治療后痊愈54例，顯效36例，無效6例，有效率為93.75%，有效患兒血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平低于無效患兒。HSP的治療藥物與方法比較多，包括維生素C、孟魯司特、西咪替丁、葡萄糖酸鈣、低分子肝素鈣，在臨床上多采用藥物聯(lián)合治療，可根據(jù)患兒病情狀況調(diào)整用藥類型與用藥劑量[14-15]。特別是孟魯司特可降低免疫球蛋白水平、血管內(nèi)皮生長因子和堿性成纖維細(xì)胞生長因子的表達(dá)水平，發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫及抗血管生成等作用，從而緩解HSP患兒臨床癥狀，改善預(yù)后。

當(dāng)前HSP患兒相對(duì)較多，也存在遷延不愈等特點(diǎn)，可嚴(yán)重影響患兒的生活質(zhì)量[16-17]。本研究中，Spearsman相關(guān)性分析顯示HSP患兒預(yù)后與血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平呈正相關(guān)，Logistic回歸分析顯示血清MMP-13、IL-9和TNF-α表達(dá)水平為影響患兒預(yù)后的重要因素。從機(jī)制上分析，MMP-13多來源于內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等，正常情況下在機(jī)體中很少表達(dá)，但在內(nèi)外在各種因素刺激下，MMP-13的大量釋放可造成腎小球基膜的損傷，也可破壞血管基底膜及組織結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)血管性疾病[18]。IL-9也能增加微血管通透性，進(jìn)而參與血管的病理損傷[19]。TNF-α高表達(dá)也能產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，增加單核細(xì)胞及中性粒細(xì)胞，從而降解血管基底膜，直接破壞血管內(nèi)皮屏障，導(dǎo)致患兒預(yù)后變差[20-21]。

綜上所述，HSP患兒血清MMP-13、IL-9和TNF-α呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，與患兒預(yù)后存在相關(guān)性，也是影響患兒預(yù)后的重要因素。