液基薄層細胞學(xué)檢查聯(lián)合HPV、P16蛋白免疫組化染色檢測對宮頸癌的篩查價值

楊曉林

（朝陽市中心醫(yī)院病理科，遼寧 朝陽 122000）

宮頸癌在我國女性中屬于一種較為常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率在不斷增高，且呈現(xiàn)出年輕化趨勢，倘若得不到及時有效的治療，會給患者的身體健康造成嚴重影響[1-2]。宮頸癌的進展需要經(jīng)過長時間癌變階段，為降低宮頸癌的發(fā)病率、病死率，通過對宮頸病變患者進行科學(xué)的篩查具有重要意義。脫落細胞學(xué)檢查，尤其是近些年臨床推廣的液基薄層脫落細胞檢查應(yīng)用于宮頸癌篩查中臨床意義顯著。但是，單純根據(jù)細胞學(xué)檢查并不能完善篩查出宮頸癌，仍有少數(shù)女性疾病惡化發(fā)展為浸潤性宮頸癌。高危型人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染是誘發(fā)宮頸癌的始動因子，因此加強高危型HPV DNA檢測對于宮頸癌疾病篩查也有顯著意義[3-4]。P16蛋白異常與宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌發(fā)生密切相關(guān)，而且隨著病情惡化加重，病情呈動態(tài)變化，關(guān)于宮頸癌疾病篩查應(yīng)受到臨床重視[5]。為了探討行之有效的診斷方案，本文以我院近年來收治的宮頸上皮病變患者80例為研究對象，就診斷方案的效果進行了探索，以供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2018年2月至2019年3月間，80例進行TCT和HPV檢測的患者，僅有一項檢查異?；颊呔瓦M行P16免疫組化染色和陰道鏡下宮頸組織活檢。80例患者其年齡24～73歲，平均（48.50±3.40）歲，其中宮頸接觸性出血25例，宮頸分泌物異常29例，宮頸糜爛、肥大、充血者26例，均為已婚或未婚有性生活史超過3年，全面接受病理學(xué)活檢以及陰道鏡檢查，其余細胞學(xué)標本重新紙片，用于P16免疫組化染色，剔除合并系統(tǒng)抑制性疾病、妊娠者。

1.2 方法

1.2.1 液基薄層細胞學(xué)檢查（TCT）使用取材專用毛刷在宮頸口與黏膜交界位置沿同一方向旋轉(zhuǎn)2～5圈，然后對毛刷上的細胞進行洗脫，保存在細胞保存液中備用。采用沉降式制片術(shù)及巴氏染色技術(shù)染色。對于液基薄層細胞學(xué)檢測結(jié)果的判定，嚴格按照第三版TBS報告系統(tǒng)分類標準，其中NILM：表示無上皮內(nèi)病變或惡性病變；ASC包括ASC-US和ASC-H，ASCUS：表示意義不明確的非典型鱗狀細胞；ASC-H：非典型鱗狀細胞，不除外高級別鱗狀上皮內(nèi)病變；LSIL：表示低級別鱗狀上皮內(nèi)病變；HSIL：表示高級別鱗狀上皮內(nèi)病變；SCC：表示鱗狀細胞癌。除NILM外，其他檢驗結(jié)果均視為陽性。癌前病變：CIN（宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變）。

1.2.2 人乳頭狀瘤病毒（HPV）檢測。采用雜交捕獲2代技術(shù)（HC-Ⅱ）對細胞學(xué)標本進行測試，LV/CO的比值≥1.0，檢測結(jié)果為陽性。

1.2.3 P16蛋白免疫組化檢測。把TCT和HPV檢測后剩余標本制成細胞薄片，并采用鏈霉素抗生物素蛋白—過氧化物酶法（S-P法）對P16蛋白進行檢測，使用北京邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司試劑盒，嚴格按照說明書進行操作。P16蛋白免疫組織化學(xué)檢測診斷標準（陽性細胞呈現(xiàn)黃色或棕黃色）：細胞染色為單個，陽性細胞百分比＜5%，檢測結(jié)果為陰性；細胞染色為散在或小的細胞團染色，5%≤陽性細胞百分比≤24%，檢測結(jié)果為弱陽性；細胞染色為片狀或簇狀細胞染色，25%≤陽性細胞百分比≤50%，檢測結(jié)果為陽性；細胞染色為彌漫的細胞著色，陽性細胞百分比＞50%，檢測結(jié)果為強陽性。

1.2.4 陰道鏡下活檢。對受試者宮頸可疑發(fā)生病變位置進行活檢，倘若鏡下沒有明顯的病灶或者圖像不符合，應(yīng)對宮頸多點組織進行活檢?；顧z標本進行組織學(xué)病理診斷。

1.3 觀察指標 ①記錄TCT檢查與陰道鏡活檢診斷結(jié)果。觀察HPV檢測與陰道鏡活檢的病理診斷結(jié)果。②分析P16蛋白表達與陰道鏡活檢病理診斷結(jié)果。記錄TCT檢查、HPV檢測、P16蛋白表達單獨與聯(lián)合檢測效能。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 SPSS21.0軟件處理文中數(shù)據(jù)，無序分類資料經(jīng)百分比（%）表示，行χ2檢驗；數(shù)值變量資料經(jīng)（）表示，采取t檢驗；P＜0.05為顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 對比液基薄層細胞學(xué)檢查（TCT）與陰道鏡活檢診斷結(jié)果 TCT鱗狀上皮細胞異型越明顯，則宮頸病變程度越高。見表1。

表1 對比液基脫落細胞學(xué)檢查與陰道鏡活檢診斷結(jié)果[n（%）]

2.2 對比人乳頭狀瘤病毒（HPV）檢測與陰道鏡活檢診斷結(jié)果 宮頸病變程度越高，HPV檢測的陽性率越高。見表2。

表2 對比人乳頭狀瘤病毒檢測與陰道鏡活檢診斷結(jié)果[n（%）]

2.3 對比P16蛋白與陰道鏡活檢診斷結(jié)果 隨著病理活檢診斷宮頸病變的程度越高，P16蛋白陽性率越高；同時，把患者進一步分為≤C I N Ⅰ和≥CINⅡ兩組，≤CINⅠ組的P16蛋白表達的陽性率明顯低于≥CINⅡ組（χ2=20.978；P＜0.05），見表3。

表3 對比P16蛋白與陰道鏡活檢診斷結(jié)果

2.4 對比3種檢測方式對宮頸病變的診斷效能 陰道鏡組織活檢病理診斷結(jié)果顯示：陽性26例（≥CINⅡ），陰性54例（≤CINⅠ）。HPV、TCT、P16聯(lián)合檢測的靈敏度、特異性、準確性均高于單獨HPV檢測、TCT檢測、P16檢測。見表4。

表4 對比3種檢測方式對宮頸病變的診斷效能

3 討論

宮頸癌在我國屬于一種較為常見的女性惡性腫瘤，研究表明絕大多數(shù)宮頸癌是通過鱗狀上皮內(nèi)瘤變（CIN）發(fā)展而來的。宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變（CIN）又稱為宮頸癌前病變，是指患者宮頸鱗狀上皮異型增生，然而又不足以診斷為癌的宮頸上皮異常增殖性病變，具有發(fā)展成為惡性腫瘤的潛能，倘若長期存在極易轉(zhuǎn)變?yōu)閷m頸癌。目前由于對于宮頸癌的發(fā)病機制尚未完全明確，以至于無法對其進行針對性治療[6-7]，但HPV感染，尤其是高危型HPV感染是引起宮頸癌前病變的主要危險因素。據(jù)學(xué)者[8]研究表明，在宮頸癌病變前階段，倘若進行科學(xué)的處理，不但能夠有效控制病情的進一步惡化，同時還有助于治療宮頸病變，從而在較大程度上降低了對患者的不良影響。

液基薄層細胞學(xué)檢查（TCT）在臨床上屬于一種經(jīng)典的宮頸癌篩查技術(shù)，該技術(shù)在篩查宮頸癌時，具有無創(chuàng)、快速等優(yōu)點，在較大程度上提高了對宮頸癌早期病變的確診率，所以在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用[9]。在此次研究過程中，液基薄層細胞學(xué)檢查與陰道鏡活檢診斷結(jié)果，之所以會產(chǎn)生差異，其原因通常是取材方式及細胞形態(tài)學(xué)觀察兩方面，首先是正確規(guī)范的取材，保證獲得足夠有效的細胞；然后是提高細胞形態(tài)學(xué)觀察準確率。形態(tài)學(xué)觀察雖然能夠分辨不同時期的宮頸病變，然而由于主觀因素的限制，以至于降低了對病變的診斷率[10]。液基薄層細胞學(xué)檢查屬于一種形態(tài)學(xué)檢查，由于取材的位置、深度、制片方式以及染色水平等因素，極易影響診斷的準確性[11]。倘若僅通過液基薄層細胞學(xué)檢查對早期宮頸癌患者進行篩選，極易導(dǎo)致發(fā)生假陰性、假陽性等情況，從而降低了診斷的靈敏度，增大了發(fā)生誤診、漏診情況的概率。據(jù)于樂等[12]學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，在對早期宮頸癌患者進行診斷時，采用TCT及其聯(lián)合HPV、P16蛋白免疫組化染色檢測，能夠提高對疾病的診斷效果。

現(xiàn)代分子生物學(xué)研究已經(jīng)證實，高危型HPV DNA檢測可作為宮頸癌前病變敏感有效的篩查方法。但是，只有高危型HPV持續(xù)性感染才會導(dǎo)致宮頸癌及其癌前病變發(fā)生，多數(shù)患者未高危型HPV一過性感染，這些與宮頸癌發(fā)生關(guān)系并不密切[13-14]。因此，HPV DNA檢測單獨篩查存在特異性過低的不足，因此不能用于初篩工作中。P16基因也可稱為多瘤抑制因子（MTS1）基因或CDKN2基因，是NK4家族的中藥成員，編碼產(chǎn)物為P16單蛋白。P16基因缺失、突變在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，P16表達陽性率會隨著病情嚴重程度而升高，表達強度從弱變強，這表明P16檢測可作為宮頸癌前病變、宮頸癌的早期篩查指標[15]。HPV是引起宮頸癌的發(fā)生的重要病原微生物，特別是當自身免疫能力處于低水平，人們性生活增加、分娩宮頸受損等情況發(fā)生時，加之HPV的持續(xù)感染，宮頸上皮病變發(fā)生的危險性會隨之增加[16]。另外，據(jù)何旻等[18]學(xué)者調(diào)查表明，當機體持續(xù)感染高危人乳頭狀瘤病毒后，會導(dǎo)致增加E7蛋白表達，降低Rb的活性，從而進一步激活了P16蛋白的表達。P16基因在臨床上屬于一種多腫瘤抑制因子，其蛋白的表達可能與宮頸上皮瘤變的發(fā)生存在較大的關(guān)系。所以此次研究通過選取P16染色聯(lián)合其他檢測輔助檢查宮頸癌及其早期病變。研究結(jié)果證實，3種檢測方式聯(lián)合的靈敏性、特異性以及準確性，明顯高于單獨HPV檢測、TCT檢測、P16檢測（P＜0.05）。說明將TCT聯(lián)合HPV、P16蛋白免疫組化染色檢測應(yīng)用于診斷宮頸癌及其早期病變中有價值，深受人們認同。單獨應(yīng)用TCT檢測宮頸病變，一部分患者可能會出現(xiàn)過度診斷情況，而若僅應(yīng)用HPV-DNA檢測、篩查宮頸病變，可能會導(dǎo)致一部分低度病變漏診，二者聯(lián)合可一定程度提高宮頸病變篩查的敏感度，降低誤診、漏診[19]。雖然聯(lián)合應(yīng)用診斷宮頸病變可提高檢出率，但降低診斷特異度，可能會導(dǎo)致過度診斷治療。結(jié)合P16免疫組化檢測，可顯著提高檢測特異度，尤其是診斷CINⅠ及以上病變的敏感度與特異度高。一般臨床中，CINⅠ只需要隨訪，CINⅠ及以上病變需接受積極治療，因此臨床脫落細胞學(xué)P16檢測，可提高疾病診斷價值，并用于指導(dǎo)臨床治療[20]。

綜上所述，采用TCT聯(lián)合HPV、P16蛋白免疫組化染色檢測，能夠提高患者宮頸上皮瘤變的檢測靈敏度、特異性以及準確度，降低漏診或過度診斷情況，對于宮頸癌的篩查有重要意義，其應(yīng)用前景廣闊。