基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討桂枝茯苓湯治療子宮肌瘤的活性成及分子機(jī)制

李桂春，王立新，張廣麗

（1.錦州市婦嬰醫(yī)院中醫(yī)婦科，錦州，121000；2.錦州市中心醫(yī)院康復(fù)科，錦州，121000）

子宮肌瘤是臨床婦科常見的一種疾病，多是由于女性在妊娠期間應(yīng)用激素以及遺傳、肥胖、人工流產(chǎn)等因素引起，嚴(yán)重者可導(dǎo)致不孕不育，極大地影響患者生活質(zhì)量。目前針對(duì)子宮肌瘤的治療包括西藥藥物和手術(shù)治療，在臨床中應(yīng)考慮患者的年齡、病情及個(gè)人需求等因素，上述治療仍有較多局限。有研究表明，中醫(yī)藥治療子宮肌瘤在療效、降低性激素水平上有一定優(yōu)勢(shì)，為臨床應(yīng)用帶來(lái)了新的觀點(diǎn)及良好的發(fā)展。

桂枝茯苓湯由赤芍、茯苓、桂枝、麥芽、牡丹皮、牛膝、生地黃、桃仁、天花粉、土鱉蟲等10 味中藥組成。赤芍其味苦，性微寒[1]，具有清熱涼血、散瘀止痛、活血之功效[2-3]。桂枝具有溫通經(jīng)脈、散寒解表、促陽(yáng)化氣之效，臨床醫(yī)師常用桂枝治療寒濕痹痛、百瘕結(jié)塊等癥[4-5]。茯苓為非褶菌目多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核[6]，具有利水滲濕、健脾的功效[7]。麥芽，又稱大麥芽[8]，功能主治行氣消食、健脾開胃、回乳消脹[9]。牡丹皮則具有活血化瘀，清熱涼血之功效[10]。牛膝性苦、酸、平，有通血脈，強(qiáng)筋骨，補(bǔ)肝腎及鎮(zhèn)痛等作用[11]。地黃具有清熱涼血、養(yǎng)陰和生津的功效[12]。桃仁性味苦、甘、平；歸心、肝、大腸經(jīng)，具有活血祛瘀、止咳平喘等功效[13]。天花粉具有清熱瀉火、生津止渴、消腫排膿之功效[14]。土鱉蟲具有小毒，具有破血逐瘀、續(xù)筋接骨之功效[15]。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)知識(shí)預(yù)測(cè)藥物—疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，分析藥物、靶點(diǎn)和疾病的相關(guān)性，探索桂枝茯苓湯治療子宮肌瘤的潛在作用機(jī)制，為后期桂枝茯苓湯的臨床應(yīng)用及有效治療子宮肌瘤提供理論基礎(chǔ)和方法。

1 資料與方法

1.1 桂枝茯苓湯中藥復(fù)方活性成分及藥物靶點(diǎn)篩選

在TCMSP(http://tcmspw.com/tcmsp.php)數(shù)據(jù)庫(kù)（https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php，2021-05-03）中檢索復(fù)方中藥物，TCMSP 中未收錄的用TCMID（http://119.3.41.228:8000/tcmid/，2021-05-03）數(shù)據(jù)庫(kù)檢索成分作為潛在活性成分。使用Pubchem（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）數(shù)據(jù)庫(kù)獲得上述成分的SDF 結(jié)構(gòu)，導(dǎo)入Swiss Target Prediction（http://www.swisstargetprediction.ch/，2021-05-03）數(shù)據(jù)庫(kù)，取預(yù)測(cè)得分大于0 的靶標(biāo)作為藥物靶點(diǎn)。將活性成分進(jìn)行拓?fù)浞治?，根?jù)介度（betweenness centrality，BC）、緊密度（closenesscentrality，CC）以及中心度（Degree）篩選關(guān)鍵活性成分。

1.2 疾病靶點(diǎn)的獲取

使用OMIM（https://omim.org/）、Disgenet（https://www.disgenet.org/）、Genecards（https://www.genecards.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.uniprot.org，2021-05-04）數(shù)據(jù)庫(kù)以“hysteromyoma”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，獲得疾病作用靶點(diǎn)。

1.3 桂枝茯苓湯—疾病共同靶點(diǎn)的獲取

在Venny2.1 在線軟件作圖工具平臺(tái)上輸入藥物靶點(diǎn)、疾病靶點(diǎn)，繪制韋恩圖，交集后獲得共同靶點(diǎn)。

1.4 構(gòu)建“藥物—成分—靶點(diǎn)—疾病”網(wǎng)絡(luò)

使用Cytoscape 3.7.2軟件，構(gòu)建“藥物—成分—疾病—靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。

1.5 構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)

將所選靶點(diǎn)輸入到STRING(https://string-db.org/，2021-05-03)數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，設(shè)置蛋白種類為“Homo sapiens”，最低相互作用閾值為0.4，獲取靶點(diǎn)相互作用的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系數(shù)據(jù)，將其導(dǎo)入Cytoscape軟件，繪制蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖。

1.6 富集分析

基于R軟件使用Bioconductor生物信息軟件包以P＜0.05，count 值進(jìn)行關(guān)鍵靶基因GO 與KEGG功能富集分析，并將結(jié)果以氣泡圖形式輸出。

1.7 動(dòng)物分組及處理

雌性SPF級(jí)大鼠40 只，周齡6～8 周，平均體重（230±10.5）g。動(dòng)物購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)[SCXK（京）2018-00054]。SPF 級(jí)大鼠購(gòu)置后適應(yīng)性喂養(yǎng)5～7 d，期間定期觀察大鼠外形、體形、行動(dòng)、有無(wú)異常損傷等。飼養(yǎng)條件：每籠5 只飼養(yǎng)，室溫恒定26 ℃，濕度60%～70%，光照為12 h 明暗交替，實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由飲用蒸餾水。將40只SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、模型組、米非司酮組和桂枝茯苓湯組，每組10 只。大鼠模型制備方法如下：采用雌激素負(fù)荷法構(gòu)建子宮肌瘤大鼠模型，對(duì)模型組、米非司酮組以及桂枝茯苓組大鼠每周進(jìn)行3次腹腔注射苯甲酸雌二醇（0.5 mg/kg），隔天注射1次，連續(xù)注射16 周；從第12 周起每只大鼠增加注射黃體酮（0.9 mg/kg）3 次/周，連續(xù)注射4 周?？瞻捉M大鼠接收等劑量生理鹽水腹腔注射。第16 周每組各取2 只行病理檢查，大鼠子宮病理學(xué)顯示腺體增生及肌肉纖維增生提示造模成功。

給藥方法：桂枝茯苓湯的中藥組分由本院中藥房監(jiān)制，用蒸餾水煎煮濃縮配置成1 g生藥/mL的藥液，冰箱保存。米非司酮片25 mg/片（國(guó)藥準(zhǔn)字H10950202，公司：上海新華聯(lián)制藥有限公司），使用時(shí)研磨成粉狀，并用蒸餾水至所需濃度的混懸液。桂枝茯苓湯組按劑量8 g·kg-1·d-1桂枝茯苓湯劑量灌胃，米非司酮組按2.4 mg·kg-1·d-1米非司酮灌胃，空白組、模型組每日等劑量生理鹽水灌胃。喂養(yǎng)8周。末次給藥24 h后，采用頸椎脫臼法處死大鼠用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR定各mRNA表達(dá)水平

8 周后取各組大鼠60 mg 子宮肌瘤組織均勻研磨加入1 mL Trizol 提取總RNA，將RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，反應(yīng)體系：cDNA模板1.0 μL，正向引物0.5 μL，反向引物0.5 μL，SYBR Green Master 5 μL，加ddH2O 至10 μL。反應(yīng)條件：95 ℃，5 min，95 ℃、10 s，62 ℃、33 s，共40個(gè)循環(huán)。引物序列（5’～3’）如下：AKT1，上游：GAGGCGAGCTCTTCTTCCACC，下游：GGACACAATCTCCGCACCGTAG；TP53，上游：TAGCAGGAGAGGAGGAGCAG，下游：ATGGTCCTGGCTGGTAGGTA；VEGFA，上游：AATCAGTTCGAGGAAAGGGAAAGG，下游：AGGCTCACAGTGAACGCTCCAG；MAPK3，上游：CCAAACAAGCGCATCACAGT，下游：CCACTGGTTCATCTGTCGGA；EGFR，上游：GGCATCATGGGGGAGAACAA，下游：TCTTTGGCCCATAGGTACAGT。以Ct 值表示循環(huán)miRNA 表達(dá)水平，采用2-ΔΔCt法計(jì)算AKT1、TP53、VEGFA、MAPK3、EGFR等核心基因靶點(diǎn)的mRNA表達(dá)水平。

2 結(jié)果

2.1 桂枝茯苓湯活性成分、潛在靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及關(guān)鍵藥效分子的分析

在TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)中設(shè)定OB≥30%、DL≥0.18，對(duì)赤芍、茯苓、桂枝、麥芽、牡丹皮、牛膝、桃仁、天花粉的有效成分進(jìn)行篩選，在TCMID 數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索生地黃、土鱉蟲，共得到潛在活性成分135 個(gè)（包括鞣花酸、芍藥苷元、芍藥新苷、芍藥苷、黃芩素、黃芩苷、β-谷甾醇、谷甾醇、菠甾醇、豆甾醇、芍藥內(nèi)酯苷、吳萸素B、氫化松苓酸、茯苓酸、紫杉葉素、花翠素、雙沒食子酸酯、木犀草素、維生素E、槲皮素、二齒皂苷、β-脫皮甾酮、漢黃芩素等），使用Swiss Target Prediction 數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出860 個(gè)藥物靶點(diǎn),見表1。135 個(gè)活性成分拓?fù)浞治龊蟾鶕?jù)介度、緊密度以及中心度（Degree）排名篩選出7 個(gè)關(guān)鍵活性成分，見表2。

表1 藥物組中藥—成分—靶標(biāo)基本信息統(tǒng)計(jì)表

表2 關(guān)鍵活性成分拓?fù)浞治霰?/p>

2.2 子宮肌瘤疾病靶點(diǎn)篩選

以“hysteromyoma”為關(guān)鍵詞分別在OMIM、Disgenet、Genecards 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，去重后共獲得疾病靶點(diǎn)1 217個(gè)。

2.3 桂枝茯苓湯—子宮肌瘤靶點(diǎn)篩選

在Venny2.1在線軟件作圖工具平臺(tái)上輸入860個(gè)藥物靶點(diǎn)、1 217個(gè)疾病靶點(diǎn)，繪制韋恩圖，兩者取交集后獲得藥物—疾病共同靶點(diǎn)147個(gè)，見圖1。

圖1 中藥復(fù)方—疾病靶點(diǎn)韋恩圖

2.4 構(gòu)建藥物—成分—靶點(diǎn)—疾病網(wǎng)絡(luò)

將中藥復(fù)方中135 個(gè)潛在活性成分與147 個(gè)藥物—疾病共同靶點(diǎn)輸入Cytoscape軟件中，刪除與靶點(diǎn)無(wú)交集的孤立成分，繪制出“藥物—成分—靶點(diǎn)—疾病”相互作用的網(wǎng)絡(luò)圖，見圖2。圖中紫色代表藥物，綠色代表中藥復(fù)方中的114種活性成分，藍(lán)色代表147個(gè)共同靶點(diǎn)，紅色代表疾病。

圖2 藥物—成分—靶點(diǎn)—疾病作用網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)分析

將上述147個(gè)共同靶點(diǎn)輸入到STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，設(shè)置蛋白種類為“Homo sapiens”，最低相互作用閾值為0.4，獲取靶點(diǎn)相互作用的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系數(shù)據(jù)，將其導(dǎo)入Cytoscape 軟件，得到蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖（圖3），蛋白之間相互作用密切，其中，節(jié)點(diǎn)的大小、顏色及其深淺變化代表作用的個(gè)數(shù)，如節(jié)點(diǎn)大、紅色、深紅代表該靶點(diǎn)作用邊數(shù)越多，越重要。

圖3 靶點(diǎn)相互作用PPI網(wǎng)絡(luò)

2.6 GO分析及KEGG通路富集分析結(jié)果

2.6.1 GO 分析 將147 個(gè)共同靶點(diǎn)經(jīng)R 語(yǔ)言運(yùn)行后GO分析選取生物學(xué)過(guò)程（BP）、細(xì)胞組分（CC）及分子功能（MF）3 個(gè)部分。GO 結(jié)果顯示，交集基因集合共富集至2 401條生物學(xué)過(guò)程、72條細(xì)胞組分、159 個(gè)與分子功能相關(guān)的過(guò)程中。P值越小富集越顯著，3個(gè)部分根據(jù)P值最小各取count值排名前20的氣泡圖（見圖4，文字說(shuō)明：Padjust 越小代表富集的顯著性，P值由小到大，顏色由紅到藍(lán)，count代表富集到GO分析中基因個(gè)數(shù)）。BP排名前20主要富集到氧化應(yīng)激反應(yīng)（response to oxidative stress）、腺體發(fā)育（gland development）、生殖結(jié)構(gòu)發(fā)育（reproductive structure development）、上皮細(xì)胞增殖（epithelial cell proliferation）、老化（aging）等過(guò)程中。CC 排名前20 主要富集到膜筏（membrane raft）、膜微疇（membrane microdomain）、膜區(qū)（membrane region）、局灶性粘連（focal adhesion）、細(xì)胞—基底粘附體連接（cell-substrate adherens junction）等細(xì)胞組分中。MF 排名前20 主要富集到蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸激酶活性（protein serine/threonine kinase activity）、磷酸酶結(jié)合（phosphatase binding）、蛋白質(zhì)酪氨酸激酶活性（protein tyrosine kinase activity）、核受體活性（nuclear receptor activity）、跨膜受體蛋白激酶活性（transmembrane receptor protein kinase activity）等分子功能中。

圖4 GO分析結(jié)果

2.6.2 KEGG通路富集分析 將147個(gè)共同靶點(diǎn)經(jīng)R語(yǔ)言運(yùn)行后共得到156條KEGG通路，取P值小于0.05，count 值進(jìn)行排名取前20 條通路結(jié)果形成KEGG 富集的氣泡圖（見圖5，文字說(shuō)明：Padjust 越小代表富集的顯著性，P值由小到大，顏色由紅到藍(lán)，count代表富集通路的差異基因個(gè)數(shù)）。主要富集到癌癥中的蛋白聚糖（proteoglycans in cancer）、PI3K-Akt 信號(hào)通路（PI3K-Akt signaling pathway）、癌癥中的MicroRNA（MicroRNAs in cancer）、糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE 信號(hào)通路（AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications）、HIF-1信號(hào)通路（HIF-1 signaling pathway）、磷脂酶D 信號(hào)通路（phospholipase D signaling pathway）、EGFR 酪氨酸激酶抑制劑耐藥（EGFR tyrosine kinase inhibitor resistance）等通路?；钚猿煞滞?fù)浞治龊笸诰虺? 個(gè)關(guān)鍵活性成分，共有727 個(gè)藥物靶點(diǎn)，刪除重復(fù)值剩228個(gè)藥物靶點(diǎn)。228個(gè)藥物靶點(diǎn)和1 217個(gè)疾病靶點(diǎn)取交集得到60 個(gè)關(guān)鍵活性成分作用疾病靶點(diǎn)，將這60 個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 通路富集分析，發(fā)現(xiàn)主要涉及到HIF-1 信號(hào)通路、PI3K-Akt 信號(hào)通路等信號(hào)通路。

圖5 KEGG富集通路圖

2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法測(cè)定各mRNA 表達(dá)水平的結(jié)果

實(shí)時(shí)熒光定量PCR 結(jié)果顯示模型組VEGFA、EGFR、MAPK3 等mRNA 表達(dá)水平高于空白組（均P＜0.05），AKT1、TP53的mRNA表達(dá)水平低于空白組（均P＜0.05）；與模型組相比，桂枝茯苓湯組和米非司酮組VEGFA、EGFR 和MAPK3 mRNA 表達(dá)水平降低（P＜0.05 或P＜0.01）；米非司酮組AKT1、TP53 mRNA 表達(dá)水平高于模型組（均P＜0.01），但模型組AKT1、TP53 mRNA與桂枝茯苓湯組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見圖6。

圖6 AKT1、TP53、VEGFA、EGFR和MAPK3 mRNA表達(dá)水平

3 討論

本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)復(fù)雜技術(shù)，預(yù)測(cè)中藥復(fù)方中活性成分及疾病作用靶點(diǎn)，從微觀角度探索桂枝茯苓湯治療子宮肌瘤的潛在作用機(jī)制。研究桂枝茯苓湯中的10 味中藥主要具有有抗氧化、抗炎、抗衰老、抗腫瘤等作用，還有促性激素分泌、調(diào)節(jié)泌乳素和免疫調(diào)節(jié)等作用[16]。

基于活性成分拓?fù)浞治?，得? 個(gè)關(guān)鍵活性成分。其中黃芩素是一種三羥基黃酮，其具有抗氧化、拮抗激素機(jī)前列腺素合成、抑制EC 1.13.11.31（花生四烯酸12-脂氧合酶）生成、清除自由基、EC 3.4.21.26（脯氨酰寡肽酶）抑制劑、抗炎和植物代謝物等作用；漢黃芩素是一種二羥基和單甲氧基黃酮，其作為環(huán)加氧酶2 抑制劑、抗腫瘤劑、血管生成抑制劑和植物代謝產(chǎn)物發(fā)揮作用；槲皮素是一種多酚類黃酮，具有潛在的化學(xué)預(yù)防活性?？赏ㄟ^(guò)調(diào)節(jié)EGFR或雌激素受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑產(chǎn)生抗增殖作用，槲皮素還通過(guò)抑制脂氧合酶和環(huán)氧化酶途徑產(chǎn)生抗炎和抗過(guò)敏作用，從而防止促炎介質(zhì)的產(chǎn)生；木犀草素是一種天然存在的黃酮類化合物，具有潛在的抗氧化、抗炎、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和化學(xué)預(yù)防活性，木犀草素可以清除自由基，保護(hù)細(xì)胞免受活性氧誘導(dǎo)的損傷，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的直接細(xì)胞周期停滯和凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞增殖并抑制轉(zhuǎn)移；5，7-二羥基-3’，4’，5’-三甲氧基黃酮是一種三甲基黃酮，屬于黃酮類，具有抗炎、抗氧化的作用；山奈素是一種四羥基黃酮，是黃酮醇、7-羥基黃酮醇和四羥基黃酮的成員，具有抗氧化應(yīng)激、抗腫瘤作用；β-脫皮甾酮作為“植物類雌激素”，具有刺激蛋白質(zhì)合成、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞免于凋亡并誘導(dǎo)其增殖的作用[17]。子宮肌瘤的發(fā)病因素涉及遺傳因素、生長(zhǎng)因子及其受體過(guò)度表達(dá)、細(xì)胞凋亡與增殖改變、類固醇激素及其受體表達(dá)異常增高等方面，細(xì)胞凋亡過(guò)度抑制在子宮肌瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到了重要作用[18]。

基于PPI 網(wǎng)絡(luò)分析，得到5 個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)。AKT1是3種密切相關(guān)的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（AKT1、AKT2 和AKT3）之一，可調(diào)節(jié)許多過(guò)程，包括代謝、增殖、細(xì)胞存活、生長(zhǎng)和血管生成。TP53 充當(dāng)腫瘤抑制因子,根據(jù)生理環(huán)境和細(xì)胞類型誘導(dǎo)生長(zhǎng)停滯或凋亡作為反式激活劑,參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)，通過(guò)控制細(xì)胞分裂過(guò)程所需的一組基因來(lái)負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂。VEGFA在血管生成、血管生成和內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)中具有活性的生長(zhǎng)因子。誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞遷移，抑制凋亡和誘導(dǎo)血管通透性。MAPK3是磷酸腺苷激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的重要組成部分，參與由激活的KIT和KITLG/SCF啟動(dòng)的信號(hào)級(jí)聯(lián)，根據(jù)細(xì)胞環(huán)境，MAPK/ERK 級(jí)聯(lián)通過(guò)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、翻譯和細(xì)胞骨架重排介導(dǎo)多種生物功能，如細(xì)胞生長(zhǎng)、黏附、存活和分化。EGFR 是表皮生長(zhǎng)因子家族的受體酪氨酸激酶結(jié)合配體，并激活幾種信號(hào)級(jí)聯(lián)，磷酸化的受體招募銜接蛋白相互作用積極調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移。以上關(guān)鍵靶點(diǎn)與子宮肌瘤的重要發(fā)病機(jī)制-細(xì)胞凋亡過(guò)度抑制密切相關(guān)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，桂枝茯苓湯組EGFR、VEGFA和AKT1等mRNA表達(dá)水平比模型組明顯降低，提示桂枝茯苓湯治療子宮肌瘤的機(jī)制可能是通過(guò)作用于抗炎、抗氧化、改善細(xì)胞內(nèi)皮功能等相關(guān)的靶點(diǎn)及通路?；贕O分析，得到藥物活性成分—作用靶點(diǎn)主要富集于氧化應(yīng)激反應(yīng)、腺體發(fā)育、生殖結(jié)構(gòu)發(fā)育、上皮細(xì)胞增殖、老化等生物學(xué)過(guò)程中，和關(guān)鍵成分及靶點(diǎn)的功能部分相吻合?；贙EGG 分析結(jié)合文獻(xiàn)得到子宮肌瘤治療的核心通路為HIF-1、PI3K-Akt 等信號(hào)通路。HIF-1 信號(hào)通路通過(guò)調(diào)節(jié)關(guān)鍵環(huán)節(jié)TuberinmTOR 信號(hào)通路失調(diào)引起子宮肌瘤，mTOR 信號(hào)通路是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化的重要信號(hào)通路，提高mTOR 信號(hào)通路活性，可以調(diào)控子宮平滑肌細(xì)胞的分化，抑制細(xì)胞的增殖[19]。PI3K/Akt 信號(hào)通路是目前干預(yù)子宮肌瘤備受關(guān)注的通路之一，PI3K 活化后將下游的磷脂酰肌醇催化成二磷酸磷酯酰肌醇、三磷酸磷酯酰肌醇，下游的AKT被活化，AKT的功能涉及細(xì)胞周期調(diào)控、凋亡的啟動(dòng)、細(xì)胞侵襲性等多個(gè)方面[20]。說(shuō)明桂枝茯苓湯中的活性成分可能通過(guò)作用于細(xì)胞代謝、增殖、凋亡的相關(guān)通路治療子宮肌瘤。

本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，預(yù)測(cè)和分析了桂枝茯苓湯治療子宮肌瘤的活性成分、潛在靶點(diǎn)及富集通路，而桂枝茯苓湯可通過(guò)槲皮素、5，7-二羥基-3’，4’，5’-三甲氧基黃酮、木犀草素等活性化合物作用于AKT1、TP53、VEGFA、MAPK3、EGFR 等多個(gè)潛在靶點(diǎn)，調(diào)控HIF-1 信號(hào)通路、PI3K-AKT 信號(hào)通路等達(dá)到治療子宮肌瘤的結(jié)果，體現(xiàn)中藥復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn)，關(guān)鍵核心靶點(diǎn)VEGFA、MAPK3 均可富集到PI3K-Akt 信號(hào)通路、VEGF信號(hào)通路中。為桂枝茯苓湯的后續(xù)研究和臨床使用提供了理論基礎(chǔ)。但本研究也存在一定的局限性，缺乏“多中心、大樣本”的論證，有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。