超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測 蒸餾酒中的3種非法添加物質(zhì)

◎ 楊 針，王東江，黎姝蔓，鄧 雄

（重慶市永川食品藥品檢驗所，重慶 402160）

我國白酒多以高粱、小麥等谷物為原料發(fā)酵后蒸餾儲藏所制，以蒸餾酒為主導(dǎo)[1]。大多數(shù)白酒中含有一定比例的醛類、甲醇和雜醇油等物質(zhì)，這些物質(zhì)易引發(fā)飲酒者的上頭、口干等不適反應(yīng)。名優(yōu)白酒往往通過改進釀造工藝提升酸類、酯類等香氣物質(zhì)含量，降低醛類等有害物質(zhì)含量，然而，一些不法商販違規(guī)在白酒中添加頭痛粉（主要成分為對乙酰氨基酚、水楊酸和咖啡因）以緩解劣質(zhì)白酒引起的頭痛等不適癥狀，投機取巧，以次充好。頭痛粉作為藥品被添加入白酒中本就是非法添加成分[2]，其藥品說明及病例報道也明確表示其與酒精混服對肝功能有損傷[3-4]。

目前，針對頭痛粉及其主要成分出現(xiàn)在白酒中的不良現(xiàn)象報道較多，其作為食品中的非法添加物檢測采用是高效液相色譜法和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[5-7]，但檢測方法存在靈敏度不高、分辨率不高、回收率不高、操作復(fù)雜、需不斷更換流動相及分析時間長等不足，相關(guān)方法無法滿足高靈敏度與較強抗干擾能力檢測微量或痕量成分的需求。因此本研究旨在建立蒸餾酒中對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因的UPLC-MS/MS檢測方法，為蒸餾酒中非法添加頭痛粉的準(zhǔn)確、快速判定檢測提供科學(xué)依據(jù)，為市場監(jiān)管部門執(zhí)法提供有力的技術(shù)支撐，從而達到保障人們飲食用藥安全的 目的。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

水楊酸標(biāo)準(zhǔn)對照品，壇墨質(zhì)檢-標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，批號為1921804，含量為99.7%；對乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)對照品，壇墨質(zhì)檢-標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，批號為1201801，含量為98.0%；咖啡因標(biāo)準(zhǔn)對照品，壇墨質(zhì)檢-標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，批號為0981904，含量為98.0%；蒸餾酒酒樣，市售；甲酸（色譜純），山東西亞化學(xué)股份有限公司；甲醇（色譜純），Merck KGaA。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1290型高效液相色譜儀（包括二元泵，在線脫氣機，自動進樣器），Agilent 6420型三重四極桿質(zhì)譜儀（包括電噴霧離子源，Masshunter數(shù)據(jù)工作站），美國Agilent公司；XP205型萬分之一電子天平，瑞士梅特勒-托利多儀器公司；JA5003N型千分之一電子天平，上海佑科儀器儀表有限公司；HH-8型水浴鍋，江蘇盛藍儀器制造有限公司；Mtegral5型超純水機，美國密理博公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別精密稱定對照品對乙酰氨基酚10.50 mg，咖啡因10.60 mg，水楊酸10.90 mg置于 25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。分別得到對乙酰氨基酚儲備液（411.60 μg·mL-1）、咖啡因儲 備液（415.52 μg·mL-1）和水楊酸儲備液 （434.69 μg·mL-1），-18 ℃低溫避光保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別精密移取對乙酰氨基酚、水楊酸和咖啡因儲備液各2.5 mL于同一20 mL容量瓶中，用超純水稀釋定容至刻度并搖勻，得到混混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，乙酰氨基酚、水楊酸和咖啡因的濃度分別為51.450 μg·mL-1、51.940 μg·mL-1和54.336 μg·mL-1， 4 ℃避光保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別精密移取對乙酰氨基酚、水楊酸和咖啡因?qū)φ掌穬湟焊?.1 mL于同一20 mL容量瓶中，用超純水稀釋定容至刻度并搖勻，得到混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，乙酰氨基酚、水楊酸和咖啡因的濃度分別為2.058 μg·mL-1、2.078 μg·mL-1和2.173 μg·mL-1，4 ℃避光保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)曲線系列工作液：分別吸取適量體積的混合 標(biāo)準(zhǔn)工作液，用水稀釋，配制成濃度分別為0 ng·mL-1、 10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、80 ng·mL-1、 100 ng·mL-1和120 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.2 樣品前處理優(yōu)化

準(zhǔn)確稱取5 g試樣（精確至0.01 g）置于50 mL燒杯中，于60 ℃水浴加熱30 min，殘渣全部轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用純水定容至刻度并搖勻，經(jīng)0.22 μm水相微孔濾膜過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。

1.3.3 色譜條件優(yōu)化

色譜柱：ZORBAX RRHD SB-C18（2.1 mm×100 mm， 1.8 μm）；流速：0.3 mL·min-1；柱溫：25 ℃；進樣量：2.0 μL。流動相及梯度洗脫程序，如表1所示。

表1 流動相梯度洗脫程序表

1.3.4 質(zhì)譜條件

電噴霧電離正負離子模式：ESI（±）；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；離子化溫度：350 ℃；干燥器流量：10 L·min-1；噴霧電壓（IS）：+4000 V/-3500V； 霧化器壓力：30 psi；監(jiān)測離子及對應(yīng)檢測參數(shù)如表2所示。

表2 監(jiān)測離子及對應(yīng)參數(shù)表

（1）定性測定。在相同的實驗條件下測定試樣溶液，若試樣溶液質(zhì)量色譜圖中各物質(zhì)的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液一致（變化范圍在±2.5%以內(nèi)），且試樣定性離子的相對豐度與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液中定性離子的相對豐度，其偏差不超過表3中規(guī)定，則可判定樣品中存在該物質(zhì)。

表3 定性離子相對豐度的最大允許偏差表

（2）定量測定。將試樣溶液注入液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀中，得到各物質(zhì)的定量離子峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算試樣溶液中各物質(zhì)的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢出限與定量限的確定

將各組分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)逐級稀釋，找到信噪比S/N=3時各組分濃度，結(jié)果確定對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因的檢出限分別為6 ng·mL-1、6 ng·mL-1、6 ng·mL-1，定 量 限（S/N=10）分 別 為20 ng·mL-1、20 ng·mL-1、 20 ng·mL-1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)

將配制好的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液按照濃度由低到高的順序進樣測定，以各組分定量離子的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，以對應(yīng)的濃度作為橫坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程見圖1。

由圖1可得，對乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=180.486176x+529.528216，相關(guān)系數(shù)為0.99936；咖啡因標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=53.704895x+50.217223，相關(guān)系數(shù)為0.99993；水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=11.006995x+21.250089，相關(guān)系數(shù)為0.99989。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程圖

2.3 檢測精密度及回收率

選用的蒸餾酒酒樣基質(zhì)均為空白基質(zhì)，本底值均為未檢出。

2.3.1 精密度

由表5可知，3種非法添加物質(zhì)在空白基質(zhì)中按照1倍、2倍、5倍定量限進行添加，樣品經(jīng)處理后上機檢測，實驗結(jié)果精密度均≤3.0%，表明該方法處理的樣品含量結(jié)果精密度高。

表5 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸檢測結(jié)果表

2.3.2 回收率

由表6可知，3種物質(zhì)在不同的加標(biāo)濃度水平下的平均回收率為95.2%～105.0%。

表6 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸回收率表

2.4 譜圖

50 ng·mL-1對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流色譜圖見圖2。

圖2 50 ng·mL-1對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流色譜圖

50 ng·mL-1對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液的提取離子色譜圖見圖3。

圖3 50 ng·mL-1對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液的提取離子色譜圖

2.5 樣品測定結(jié)果

采用本檢驗方法對市售的20種白酒進行了檢測，均未檢出非法添加對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因。

3 結(jié)論

蒸餾酒中非法添加物質(zhì)的查處和檢測能夠完善市場監(jiān)管需求。本文用超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法檢測蒸餾酒中頭痛粉的3種主要成分（包含水解成分），即對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因。結(jié)果顯示，該方法靈敏度、加標(biāo)回收率高，重復(fù)性好，不僅對蒸餾酒中非法添加對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因的分析檢測方法起到了優(yōu)化作用，還為食品安全的市場監(jiān)管工作提供了準(zhǔn)確有效的科學(xué)依據(jù)。