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    夏季牛場(chǎng)使用不同噴淋頻率對(duì)奶牛降溫效果的對(duì)比評(píng)估

    2022-01-20 03:51:24郭子泰高勝濤卜登攀
    中國畜牧雜志 2022年1期
    關(guān)鍵詞:產(chǎn)奶量降溫間隔

    郭子泰,高勝濤,馬 露,卜登攀,2*

    (1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所,動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100193;2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院與世界農(nóng)用林業(yè)中心農(nóng)用林業(yè)與可持續(xù)畜牧業(yè)聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室,北京 100193)

    熱應(yīng)激是高溫環(huán)境下動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生的非特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)。熱應(yīng)激會(huì)影響奶牛的生產(chǎn)性能,導(dǎo)致乳蛋白及產(chǎn)奶量下降,影響奶牛養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。通常使用THI來反映熱應(yīng)激的影響程度,目前認(rèn)為奶牛在THI超過72為離開熱中性區(qū),即開始出現(xiàn)熱應(yīng)激。物理降溫可有效緩解熱應(yīng)激。較單獨(dú)使用通風(fēng),通風(fēng)結(jié)合噴淋后奶牛的呼吸頻率、直腸溫度顯著下降。但噴淋用水加劇了牛場(chǎng)環(huán)境及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),調(diào)研表明夏季噴淋用水量約占總用水量的1/5。因此,使用更為經(jīng)濟(jì)有效的物理降溫措施對(duì)提升夏季奶牛生產(chǎn)性能有非常重要的意義。

    Chen等研究發(fā)現(xiàn)縮短噴淋間隔或增加噴淋時(shí)間都能使奶牛的呼吸頻率及體溫降低,但不同噴淋降溫策略對(duì)奶牛具體生產(chǎn)性能的提升情況未見報(bào)道。本試驗(yàn)旨在分析2種噴淋頻率下奶牛生產(chǎn)性能的變化,并通過對(duì)比2種降溫策略下奶牛的瘤胃發(fā)酵、抗氧化及腸屏障功能等受指標(biāo)來研究不同噴淋策略對(duì)奶牛熱應(yīng)激的緩解效果,為進(jìn)一步優(yōu)化夏季牛舍物理降溫策略提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)開展于2019年7月,選取20頭泌乳日齡(175±25)d,產(chǎn)奶量為(27.5±2.5)kg/d的經(jīng)產(chǎn)健康荷斯坦奶牛,飼養(yǎng)于一處半開放牛舍內(nèi)(長(zhǎng)50 m、寬10 m)。采用強(qiáng)制通風(fēng)搭配噴淋的方式對(duì)奶牛進(jìn)行物理降溫,舍內(nèi)吊掛6臺(tái)風(fēng)機(jī)(轉(zhuǎn)速為550 r/min),具體安放位置為:臥床上方2臺(tái),間隔20 m;采食槽上方4臺(tái),間隔10 m。于采食槽上方2.5 m處每間隔2 m安裝灑水噴頭(流速為1.5 L/min),共20個(gè),分別于采食區(qū)域及臥床區(qū)域懸掛溫濕度計(jì)用于記錄每日環(huán)境溫度及濕度。試驗(yàn)期35 d,包括7 d預(yù)試期和28 d正試期。試驗(yàn)期內(nèi)強(qiáng)制通風(fēng)不間斷進(jìn)行,噴淋為每日3 h,時(shí)間為11:30—13:30及15:00—16:00。噴淋策略為:正試期1~14 d采用3|6的方式,即每間隔6 min噴淋3 min;15~28 d采用1.5|3的方式,即每隔3 min噴淋1.5 min。

    試驗(yàn)期間所有試驗(yàn)動(dòng)物自由飲水,每日早中晚飼喂3次(07:00、14:00和19:00)并擠奶3次(06:00、14:00和22:00)。飼料配制依照NRC(2001)奶牛營養(yǎng)需要量的推薦值,精粗比為50:50,其組成及營養(yǎng)水平參見表1。

    表1 試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

    1.2 樣品采集 正試期每天07:00、14:00和19:00記錄環(huán)境溫度(AT)和相對(duì)濕度(RH),THI計(jì)算參考Amundson等研 究,THI=0.8×AT+RH/ 100×(AT-14.4)+46.4。每日3次(07:00、14:00和19:00)記錄每頭牛的直腸溫度、呼吸頻率及皮膚溫度,其中直腸溫度使用獸用溫度計(jì)測(cè)得,皮膚溫度使用紅外線測(cè)溫儀檢測(cè)奶牛肩部溫度,呼吸頻率通過觀察1 min內(nèi)奶牛胸廓隆起次數(shù)計(jì)算所得;每日通過采食控制系統(tǒng)(UG8192,荷蘭InsenTec)記錄每頭牛采食量。

    在正試期第7、14、21、28天收集尿液、糞便、牛奶、血液、瘤胃液和TMR日糧樣品。每個(gè)采樣日收集TMR日糧3次(07:00、14:00和19:00),將3份樣品混合均勻后于-20℃存放。每個(gè)采樣日收集糞便和尿液4次(02:00、08:00、14:00和20:00),具體操作為每個(gè)采樣點(diǎn)直接從奶牛直腸內(nèi)收集糞便,同時(shí)通過按摩收集尿液,收集后將4次采集的糞便及尿液分別混合均勻后重新取樣,-20℃保存,其中糞便分為2份,其中1份加入20 mL的6 mol/L HCl用于粗蛋白檢測(cè)。每個(gè)采樣日隨擠奶收集奶樣3次,之后以4:3:3的比例分別混合均勻后加入重鉻酸鉀防腐劑(0.6 mg/mL)于4℃保存。于每個(gè)采樣日晨飼前采集尾動(dòng)/靜脈血10 mL,靜置0.5 h后4℃,3 000 ×g離心15min后收集血清,同時(shí)使用除熱源添加肝素鈉采血管(廈門鱟試劑生物技術(shù)有限公司)采集尾動(dòng)/靜脈血10 mL,使用相同配置離心后收集血漿,用于LPS的檢測(cè),血清及血漿樣品皆存放于-20℃。于每個(gè)采樣日晨飼前使用胃管式瘤胃液采樣器采集瘤胃液,采集后立刻使用電子pH計(jì)(pH-100A,上海力辰邦西儀器科技有限公司)檢測(cè)pH,之后經(jīng)4層紗布過濾收集,取其中10 mL瘤胃液用6mol/L HCl酸化用于測(cè)定氨態(tài)氮(NH-N),另分裝10 mL用于揮發(fā)性脂肪酸(VFA)及菌體蛋白(MCP)的測(cè)定,-20℃保存。

    1.3 指標(biāo)測(cè)定與方法 日糧樣品采集后置于強(qiáng)制對(duì)流烘箱UFE400(德國MEMMERT),65℃烘干48 h測(cè)定初水分,參照《飼料水分的測(cè)定方法》(GB/T 6435-2014)進(jìn)行測(cè)定,烘后樣品粉碎過40目篩,于-20℃保存,用于剩余飼料常規(guī)指標(biāo)的測(cè)定。參照國家標(biāo)準(zhǔn)《飼料中粗灰分的測(cè)定》(GB/T 6438-2007)使用箱式電阻爐(SRJX-8-13,天津市泰斯特儀器有限公司)分析粗灰分。粗脂肪參照《飼料中粗脂肪的測(cè)定》(GB/T 6433-2006)使用脂肪分析儀(SoxtecTM AVANTI 2043,丹麥FOSS)進(jìn)行測(cè)定 。粗蛋白質(zhì)參照《飼料中粗脂肪的測(cè)定》(GB/T 6432-1994)使用全自動(dòng)凱氏定氮儀(FOSS KJELTEC 2300,丹麥FOSS)進(jìn)行測(cè)定。中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)含量測(cè)定參照Van Soest等的方法,稱取樣品封裝于纖維測(cè)定專用濾袋(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院提供),使用全自動(dòng)纖維分析儀(A2000i,美國ANKOM)洗滌,洗滌過程中滴加2 滴淀粉酶。表觀消化率的計(jì)算使用TMR及糞便中的不可消化中性洗滌纖維(iNDF)作為標(biāo)記物,參考Lee等的研究,即養(yǎng)分的表觀消化率=[1-(A×F)/(A×F)]×100%,其中A和A分別是飼料與糞便樣品中iNDF含量;F和F是樣品中的養(yǎng)分含量。

    尿液中的尿酸及肌酐使用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定,,尿液中的尿囊素含量根據(jù)Borchers等的方法進(jìn)行測(cè)定。菌體蛋白產(chǎn)量依據(jù)Chen等的方法:

    使用紅外分光光度法(全自動(dòng)乳成分分析儀MilkoScan Type 78110,丹麥FOSS)分析乳成分;血清中過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性,丙二醛(MDA)、內(nèi)皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)和-乳酸含量的測(cè)定采用南京建成生物工程研究所的試劑盒;血漿中LPS濃度測(cè)定采用廈門鱟試劑生物技術(shù)有限公司試劑盒,具體操作方法如Mao等所述。

    1.4 統(tǒng)計(jì)分析 使用SAS 9.4中MIXED模型進(jìn)行方差分析,最小二乘均數(shù)法做平均值比較。每日THI、周平均THI以及試驗(yàn)牛群平均DIM用作協(xié)變量,模型將處理作為固定效應(yīng),試驗(yàn)牛為隨機(jī)效應(yīng),每日測(cè)得指標(biāo)或每周收集指標(biāo)作為重復(fù)測(cè)量或是協(xié)變量。<0.01為差異極顯著,<0.05為差異顯著,0.05≤<0.10為存在趨勢(shì)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。

    2 結(jié)果

    2.1 環(huán)境THI及奶牛直腸溫度、呼吸頻率 由表2可知,牛舍內(nèi)THI在1.5|3和3|6噴淋頻率之間沒有差異,與3|6相比,奶牛處于1.5|3時(shí)早中晚3次測(cè)得的呼吸頻率、直腸溫度及皮膚溫度均降低(<0.01)。由表3可得,正試期內(nèi)每日3次測(cè)量THI皆高于72。

    表2 不同噴淋頻率下奶牛直腸溫度、皮膚溫度和呼吸頻率以及環(huán)境THI

    表3 不同噴淋頻率下每日舍內(nèi)早上、下午及晚上環(huán)境THI

    2.2 不同噴淋頻率對(duì)DMI、乳品質(zhì)和奶產(chǎn)量的影響 由表4可知,1.5|3噴淋時(shí)奶牛DMI高于3|6噴淋(<0.01),奶牛日均產(chǎn)奶量、乳蛋白、乳糖含量差異不顯著。與處于3|6噴淋頻率下相比,奶牛在接受1.5|3噴淋時(shí)夜間產(chǎn)奶量、乳脂肪提高(<0.05),體細(xì)胞數(shù)有降低的趨勢(shì)(0.05≤<0.10)。

    表4 不同噴淋頻率下奶牛的產(chǎn)奶性能

    2.3 不同噴淋頻率對(duì)奶牛瘤胃發(fā)酵及表觀消化率的影響由表5可知,相對(duì)于處在3|6噴淋頻率下,奶牛接受1.5|3噴淋時(shí)瘤胃液LPS含量極顯著增加(<0.01)。總揮發(fā)性脂肪酸、乙酸、丁酸、戊酸含量降低(<0.05),丙酸含量降低(<0.01)。pH、氨態(tài)氮、菌體蛋白、異丁酸、異戊酸含量以及異丙比差異不顯著。由表6可知,在兩種噴淋頻率下奶牛的NDF、ADF、粗蛋白及有機(jī)質(zhì)的表觀消化率差異不顯著。

    表5 不同噴淋下奶牛的瘤胃發(fā)酵情況

    表6 不同噴淋頻率對(duì)奶牛表觀消化率情況

    2.4 不同噴淋頻率對(duì)奶牛抗氧化性能及腸屏障指標(biāo)的影響 由表7可知,與3|6的噴淋頻率相比,處于1.5|3噴淋下的奶牛血液中CAT、SOD的酶活性極顯著增加(<0.01),LPS含量(<0.01)及NO含量(<0.05)降低,-乳酸含量有降低趨勢(shì)(0.05≤<0.10),GSH-Px的酶活性、MDA、ET-1含量差異不顯著。

    表7 不同噴淋頻率下奶牛血液腸道屏障及抗氧化相關(guān)指標(biāo)情況

    3 討 論

    奶牛進(jìn)入熱應(yīng)激時(shí)生產(chǎn)性能出現(xiàn)明顯下降,且表現(xiàn)出呼吸急促,體溫過高等癥狀。高產(chǎn)奶牛在環(huán)境THI超過68后每日產(chǎn)奶量下降2.2 kg。本研究中,試驗(yàn)期內(nèi)環(huán)境日均THI及每日早中晚3次計(jì)算值均超過72,表明試驗(yàn)?zāi)膛L幱跓釕?yīng)激狀態(tài);舍內(nèi)環(huán)境溫濕度未受物理降溫措施的影響,這與Berman等的研究結(jié)果相符,說明強(qiáng)制通風(fēng)結(jié)合噴淋降溫是通過改善熱舒適性發(fā)揮作用而不是直接降低環(huán)境溫度。

    噴淋降溫能否緩解奶牛因熱應(yīng)激帶來的產(chǎn)奶量降低在先前的研究報(bào)道中存在分歧。Domingos等在擠奶前噴淋1次、5次以及9次,結(jié)果表明9次噴淋組的夜間產(chǎn)奶量相較對(duì)照組(不進(jìn)行噴淋)顯著提升,而早晨擠奶的產(chǎn)奶量沒有差異。本研究中,在噴淋間隔更短時(shí)(1.5|3)奶牛夜間產(chǎn)奶量存在顯著增加,與Domingos等的結(jié)果一致。由于早晨及下午產(chǎn)奶量差異不顯著,不同噴淋頻率對(duì)日均產(chǎn)奶量的提升效果沒有顯著影響,這與Brouk等的結(jié)論相符。熱應(yīng)激可改變奶牛的采食行為,Eslamizad等試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)熱應(yīng)激下奶牛采食飼料頻率增加,但每頓持續(xù)時(shí)間及采食量均下降,故熱應(yīng)激下奶??赡芨淖儾墒巢呗砸詼p少自身產(chǎn)熱。本試驗(yàn)中,1.5|3噴淋策略下奶牛的DMI顯著提升,兩階段奶牛產(chǎn)奶量差異不顯著,表明提升的DMI未用于乳蛋白合成。Bu等研究發(fā)現(xiàn)熱應(yīng)激下奶牛肝臟和乳腺組織對(duì)乳蛋白前體物分配利用存在協(xié)同機(jī)制,故施加物理降溫時(shí),環(huán)境溫濕度未改變,奶牛仍處于熱中性區(qū)外,提升的DMI吸收后養(yǎng)分更多為其他組織利用,而未被乳腺上皮細(xì)胞攝入?yún)⑴c泌乳過程。綜合考慮,以較短噴淋間隔降溫時(shí)奶牛夜間產(chǎn)奶量有顯著提升,但不同噴淋間隔可能并未影響熱應(yīng)激直接對(duì)奶牛體內(nèi)養(yǎng)分的代謝的改變,而僅是協(xié)助熱增耗的散失,其帶來的DMI的恢復(fù)可能更多為乳腺外其他器官所利用。

    熱應(yīng)激導(dǎo)致乳品質(zhì)下降,其通過引起DMI下降以及營養(yǎng)物質(zhì)重分配使乳蛋白合成下降,然而目前相關(guān)研究尚未報(bào)道經(jīng)過降溫緩解后熱應(yīng)激奶牛乳成分的變化。本研究中,熱應(yīng)激奶牛在2種噴淋頻率下的乳蛋白含量無顯著差異,表明在處于1.5|3噴淋頻率時(shí)奶牛提升的DMI部分并未用于乳蛋白合成,與之前的討論結(jié)果相符,很可能與熱應(yīng)激下奶牛營養(yǎng)物質(zhì)重分配相關(guān)。此外,1.5|3噴淋策略下奶牛乳脂率較3|6時(shí)顯著降低,泌乳過程中脂肪酸通過從頭合成或直接從血液中攝取的方式獲得,其中前者受到前體物-羥基丁酸的供應(yīng)的限制,而-羥基丁酸在奶牛體內(nèi)通過瘤胃上皮吸收的丁酸及乙酸合成得到,這表明乳脂含量應(yīng)與瘤胃吸收的乙酸及丁酸的量有關(guān)。因此,在使用較短噴淋間隔(1.5|3)降溫時(shí)乳脂率的降低可能與奶牛此時(shí)的瘤胃液乙酸、丁酸濃度下降相關(guān)聯(lián)。

    奶牛處于熱應(yīng)激時(shí)其瘤胃液總VFA、各組分含量以及乙丙比增加。此外還表現(xiàn)出表觀消化率提升,這與奶牛處于熱應(yīng)激時(shí)DMI下降有關(guān)。熱應(yīng)激還會(huì)破壞腸道屏障完整性,Hall等研究表明熱應(yīng)激下豬和小鼠腸屏障受損,表現(xiàn)為腸道內(nèi)微生物代謝產(chǎn)物L(fēng)PS及-乳酸在血液中濃度增加。而組織中LPS增加可誘導(dǎo)iNOS的表達(dá),從而引起血液中NO的異常增加。故可通過奶牛表觀消化率、瘤胃發(fā)酵情況以及血液中反映腸屏障功能的相關(guān)指標(biāo)推斷奶牛所受熱應(yīng)激嚴(yán)重程度。本研究發(fā)發(fā)現(xiàn)1.5|3噴淋頻率下奶牛表現(xiàn)較低的養(yǎng)分表觀消化率及瘤胃液中VFA含量下降,且血液中LPS、NO及-乳酸含量下降,提示此降溫策略下奶牛熱應(yīng)激癥狀較3|6噴淋時(shí)減輕。但1.5|3噴淋時(shí)奶牛瘤胃液中LPS濃度極顯著提升,說明不同噴淋降溫可能并未對(duì)奶牛瘤胃異常代謝產(chǎn)物的合成產(chǎn)生影響。

    熱應(yīng)激可通過誘導(dǎo)機(jī)體活性氧過度產(chǎn)生導(dǎo)致機(jī)體氧化應(yīng)激?;钚匝酰≧eactive Oxygen Species,ROS)作為呼吸代謝產(chǎn)物在機(jī)體調(diào)節(jié)中具有兩面性,ROS參與協(xié)助機(jī)體免疫,個(gè)別類型如過氧化氫(HO)可作為第二信使參與信息交換,而高濃度的ROS引起代謝功能障礙甚至可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。動(dòng)物體內(nèi)存在酶抗氧化系統(tǒng)和非酶抗氧化系統(tǒng)以防止氧化損傷,當(dāng)機(jī)體產(chǎn)生ROS速度過快,機(jī)體抗氧化系統(tǒng)失衡時(shí),即產(chǎn)生氧化應(yīng)激。機(jī)體氧化應(yīng)激下過量的ROS造成細(xì)胞線粒體DNA(mtDNA)的氧化損傷進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,影響奶牛健康,而乳腺細(xì)胞的凋亡直接影響奶牛泌乳。通常使用測(cè)定活性氧消除酶、抗氧化物及相關(guān)過氧化產(chǎn)物含量可定量評(píng)價(jià)機(jī)體氧化應(yīng)激狀態(tài),借以推斷奶牛遭受熱應(yīng)激損害程度?;钚匝跸赴℅SH-Px、SOD和CAT等,其中SOD可催化超氧化物自由基歧化為分子氧及HO、CAT和GSH-Px可將組織中過量的HO分解為水,此外GSH-Px還可將脂質(zhì)過氧化物轉(zhuǎn)化為無毒的醇類化合物。而MDA是脂質(zhì)過氧化物的分解產(chǎn)物,其在血液中的含量可間接反映組織細(xì)胞的損傷。本研究中,處于3|6噴淋頻率下的奶牛血液中CAT和SOD酶活性均低于處于1.5|3噴淋頻率時(shí),表明使用較長(zhǎng)噴淋間隔時(shí)奶牛組織氧化應(yīng)激更嚴(yán)重,提示奶牛可能遭受更多的熱應(yīng)激損傷。2種噴淋策略下血液中MDA含量及GSH-Px酶活性表明奶牛的脂質(zhì)氧化水平相近。

    綜合得出,在同等溫?zé)岘h(huán)境下,采用較短間隔的噴淋策略更大程度降低奶牛呼吸頻率及直腸、皮膚溫度,且通過瘤胃發(fā)酵,表觀消化、腸道屏障及組織氧化應(yīng)激水平等多方面驗(yàn)證,此噴淋間隔下奶牛熱應(yīng)激癥狀表現(xiàn)更輕微,而在DMI增加后熱應(yīng)激奶牛日均產(chǎn)奶量以及乳蛋白含量沒有變化,僅有夜間產(chǎn)奶量出現(xiàn)差異,提示物理噴淋產(chǎn)生的降溫可能主要通過協(xié)助散發(fā)代謝熱發(fā)揮效果,沒有改善熱應(yīng)激直接造成的養(yǎng)分代謝變化的能力。

    4 結(jié) 論

    本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),噴淋降溫可能僅存在減少奶牛代謝熱的效果,而不能直接改善熱應(yīng)激奶牛體內(nèi)養(yǎng)分的代謝進(jìn)而促進(jìn)生產(chǎn)性能的提升。在相同噴淋時(shí)間及用水量下,使用較短噴淋間隔進(jìn)行物理降溫對(duì)熱應(yīng)激緩解更有效。

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