ADRB1基因多態(tài)性和Lp-PLA2與高血壓冠狀動脈狹窄程度的關(guān)系

毛文星 潘昌 郭雅潔 謝渡江

冠心?。–oronary Heart Disease，CHD）全稱冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，是指血管腔狹窄閉塞導(dǎo)致心肌細(xì)胞缺血缺氧而引發(fā)的心臟病。流行病研究顯示［1］，CHD 在世界各國都具有較高的致死率，在我國的致死率僅次于腦卒中，嚴(yán)重威脅著公共健康安全。文獻(xiàn)記載［2］，CHD 致病因素復(fù)雜，可能與脂代謝紊亂相關(guān)，同時，高血壓、糖尿病、高血脂癥等常見心腦血管疾病也影響著CHD 的發(fā)生。近年來有研究表示，相關(guān)調(diào)控基因和血脂蛋白異常表達(dá)也是CHD 致病的危險因素［3］。ADRB1基因作用于心肌細(xì)胞，當(dāng)信號通路表現(xiàn)出高度活躍會導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡，而Lp-PLA2 是參與動脈粥樣化的中心進(jìn)程的重要磷脂酶［4-5］，目前對于兩者與CHD 的聯(lián)合報道較少，本研究通過分析CHD 與ADRB1基因多態(tài)性、Lp-PLA2、各項(xiàng)生化指標(biāo)的相關(guān)性并探討CHD 的危險因素，以期為CHD 的早期診斷和臨床預(yù)后提供參考價值，現(xiàn)將報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年3月至2020年12月期間南京醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院收治的高血壓患者248 例，按照冠脈造影檢查是否出現(xiàn)冠心病（CHD）分為60 例對照組（非冠心病組）和188 例觀察組（冠心病組），對照組任意主要冠狀動脈分支狹窄程度均＜50%，觀察組主要冠狀動脈分支狹窄程度≥50%。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合2017年美國心臟病學(xué)會/美國心臟協(xié)會（ACC/AHA）指南標(biāo)準(zhǔn)［6］，血壓≥130/80 mmHg；②臨床資料完整無缺失；③患者知情同意且依從性好，能夠配合全程研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、惡性腫瘤及其余重大器官疾病；②急性突發(fā)或慢性感染患者；③近期服用過脂代謝抑制藥物患者；④哺乳或妊娠期婦女；⑤不耐受冠脈造影檢查患者；⑥嚴(yán)重精神障礙或認(rèn)知異?；颊摺Ｆ渲袑φ战M男31 例，女29 例，平均年齡（57.13±9.23）歲，合并糖尿病18 例，合并高血脂癥13 例。觀察組男107例，女81 例，平均年齡（57.11±8.44）歲，合并糖尿病54 例，合并高血脂癥50 例。兩組一般基線資料（性別、年齡、合并糖尿病、合并高血脂癥）均衡可比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)過院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法與檢測指標(biāo)

①采用冠脈造影檢查及Gensini 評分系統(tǒng)評價兩組患者冠狀動脈狹窄程度［7］：在本院介入導(dǎo)管室進(jìn)行，由經(jīng)驗(yàn)豐富的資深心內(nèi)科介入醫(yī)師專項(xiàng)檢查，根據(jù)冠狀動脈程度和不同冠狀動脈的分支系數(shù)進(jìn)行評估，兩者乘積顯示各分支狹窄程度，以患者體內(nèi)各分支評分之和記為Gensini 評分，輕度冠狀動脈病變＜20 分，中度冠狀動脈病變20～40 分，重度冠狀動脈病變＞40 分。②聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性法（PCR-RFLP）法檢測ADRB1基因多態(tài)性［8］：采集入組患者空腹靜脈血，EDTA-K2 抗凝處理，按照DNA 試劑盒操作說明書提取DNA 產(chǎn)物，并用緩沖液GD、漂洗液PW、無水乙醇提純，制備引物、配置PCR 體系后將目的DNA 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，并且配置酶切體系。將PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物和酶切產(chǎn)物上樣，電泳30 min，最終產(chǎn)物采用溴乙錠-紫外顯色法進(jìn)行基因鑒定，結(jié)果顯示，ADRB1基因多態(tài)可分為GG/CC 型純合子和GC 型雜合子。③各項(xiàng)生化指標(biāo)檢測：采集入組患者空腹靜脈血，離心靜置分層后取上層血清，采用全自動生化檢測儀（購自日本東芝公司，型號TBA-2000FR）中檢測兩組患者血清空腹血糖（Serum Fasting Blood Glucose，GLU）、甘油三酯（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、Lp-PLA2 水平，其中Lp-PLA2 水平檢測采用免疫比濁法，GLU、TG、TC、HDL-C、LDL-C 水平檢測采用普通酶法。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；正態(tài)分布的計(jì)量資料用（）表示，采用單因素方差分析或t檢驗(yàn)；Hardy-Weinberg 基因平衡定律檢驗(yàn)基因型分布；pearson 法分析Lp-PLA2 水平與Gensini評分的相關(guān)性；ROC 曲線分析Lp-PLA2 水平診斷CHD 的效能；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Lp-PLA2、Gensini 評分、生化指標(biāo)比較

兩組的GLU、TG、TCL、LDL-C 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），觀察組的Lp-PLA2 水平、Gensini 評分高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組Lp-PLA2、GLU、TG、TC、HDL-C、LDL-C 水平比較（±s）Table 1 Comparison of Lp-PLA2，GLU，TG，TC，HDL-C，LDL-C levels between the two groupsl（±s）

表1 兩組Lp-PLA2、GLU、TG、TC、HDL-C、LDL-C 水平比較（±s）Table 1 Comparison of Lp-PLA2，GLU，TG，TC，HDL-C，LDL-C levels between the two groupsl（±s）

組別對照組觀察組t 值P 值n 60 188 Lp-PLA2（ng/mL）180.12±16.98 246.03±34.85 14.109＜0.001 GLU（mmol/L）5.79±1.37 5.88±1.41 0.433 0.665 TG（mmol/L）1.17±0.16 1.20±0.15 1.325 0.186 TC（mmol/L）5.71±1.26 5.68±1.24-0.163 0.871 HDL-C（mmol/L）1.35±0.47 1.28±0.51-0.943 0.347 LDL-C（mmol/L）2.98±0.65 3.04±0.59 0.669 0.504 Gensini（分）13.10±4.16 39.89±19.43 10.592＜0.001

2.2 兩組ADRB1 基因多態(tài)性頻率分布

兩組的ADRB1基因GG、CC、GC 多態(tài)性頻率分布比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 兩組ADRB1 基因多態(tài)性頻率分布［n（%）］Table 2 Frequency distribution of polymorphisms in both ADRB1 genes［n（%）］

2.3 不同動脈狹窄程度的Lp-PLA2 水平、ADRB1基因多態(tài)性、Gensini 評分比較

隨著動脈狹窄程度增加，Lp-PLA2 水平、Gensini 評分升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），ADRB1基因多態(tài)性比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 3 組Lp-PLA2 水平、ADRB1 基因多態(tài)性、Gensini 評分比較［n（%）］Table 3 Comparison of for group Lp-PLA2 levels，ADRB1 gene polymorphisms，and Gensini scores［n（%）］

2.4 Lp-PLA2 水平、Gensini 評分的相關(guān)性

Lp-PLA2 水平Gensini 評分呈正相關(guān)（r=0.900，P＜0.001）。見圖1。

圖1 Lp-PLA2 水平與Gensini 評分的相關(guān)性Figure 1 Correlation of the Lp-PLA2 levels and the Gensini score

2.5 Lp-PLA2 水平對高血壓CHD 的診斷價值

Lp-PLA2 水平診斷高血壓CHD 的AUC值 為0.967，95%CI為0.947～0.987，約 登 指 數(shù)為0.837，靈 敏 度0.920，特 異 性0.917。 見圖2。

圖2 Lp-PLA2 水平診斷高血壓CHD 的ROC 曲線Figure 2 ROC curves for the Lp-PLA2 level diagnosis of hypertensive CHD

3 討論

高血壓是最常見的心血管疾病之一，診斷癥狀為血液在血管中流動時對血管壁造成的壓力值高于正常值。高血壓伴隨著腦卒中、心力衰竭等多種并發(fā)癥，研究表明，CHD 是高血壓的并發(fā)癥之一，當(dāng)高血壓患者體內(nèi)血壓持續(xù)上升時，容易對血管造成機(jī)械性壓力，劇烈的舒張收縮會導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，引起血小板在受損細(xì)胞表皮異常沉積，形成血管內(nèi)壁的粥樣斑塊，最終誘發(fā)心血管疾?。?］，目前臨床上對于高血壓患者動脈狹窄程度的研究較少，因此對高血壓CHD 的準(zhǔn)確診斷是提高患者預(yù)后效能的關(guān)鍵。

CHD 是一種存在多基因參與調(diào)控進(jìn)程的疾病，國內(nèi)外都有相關(guān)研究報道，其中便包括ADRB1基因。邵夢嬌的研究［10］發(fā)現(xiàn)，ADRB1基因具有介導(dǎo)心臟正性肌力的作用，能激活β 腎上腺素的信號通道，激活相關(guān)受體蛋白，促使心肌細(xì)胞靶通道介導(dǎo)磷酸化，心肌細(xì)胞離子通道改變，證實(shí)ADRB1基因在心血管疾病中具有調(diào)控作用?；蚨鄳B(tài)性又叫做遺傳多態(tài)性［11］，表現(xiàn)為基因突變，人類的基因多態(tài)性既來源于基因組中重復(fù)序列拷貝數(shù)的不同，也來源于單拷貝序列的變異，以及雙等位基因的轉(zhuǎn)換或替換，這種現(xiàn)象在生物群體中普遍存在，但研究表明，基因多態(tài)性一般表現(xiàn)在非編碼序列或不具備調(diào)控作用的區(qū)域，在相關(guān)報道中可以證實(shí)。例如，李瑾［12］研究ABCA1基因69C/T 變異與CHD 的病情程 度 相 關(guān) 性，袁 托 亞［13］研 究 的CXCL12和CXCR4基因多態(tài)性與CHD 及動脈狹窄程度的聯(lián)系，均得出相似結(jié)論。而本研究結(jié)果顯示，ADRB1基因多態(tài)性與冠狀動脈狹窄程度無關(guān)聯(lián)，與鄭曦等人研究ADRB1基因多態(tài)性與CHD 病情程度的關(guān)系結(jié)果具有相似性，提示ADRB1基因多態(tài)性對CHD 病情調(diào)控作用微弱，而負(fù)責(zé)調(diào)控的蛋白信號通路才是ADRB1基因參與疾病進(jìn)程的主要原因。

Lp-PLA2 是一種由巨噬細(xì)胞和T 淋巴細(xì)胞分泌的磷脂酶蛋白，具有較強(qiáng)的脂親和力，能夠在血液循環(huán)中與脂蛋白結(jié)合，增加血液粘稠度，并促進(jìn)血液中炎性介質(zhì)水平升高，對血管造成損傷，引起血小板在損傷處沉積聚集形成粥樣化斑塊，且伴隨著動脈粥樣化斑塊的不穩(wěn)定，在血管中造成斑塊潰散。斑塊潰散后容易沿著血液循環(huán)的作用彌散，迅速引起白血栓形成，阻斷血管的血流，最終引發(fā)CHD 疾?。?4-16］。本研究結(jié)果顯示，高血壓CHD 患者體內(nèi)Lp-PLA2 高于非CHD患者，而隨著動脈狹窄程度提高，Lp-PLA2 也升高，對Lp-PLA2 與Gensini 評分進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，兩者呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系，提示Lp-PLA2 是造成心血管疾病的重要炎性因子之一，高血壓CHD患者體內(nèi)存在Lp-PLA2 過度表達(dá)的情況，且隨著病情加重，表達(dá)上升，通過降血脂藥物調(diào)節(jié)Lp-PLA2 水平是控制CHD 病情的關(guān)鍵，與劉向陽［17］的研究結(jié)果一致。

CHD 的病情程度可用冠狀動脈狹窄程度進(jìn)行評估，Gensini 評分則能夠動態(tài)化顯示血管的狹窄程度，提示CHD 病情進(jìn)展。Gensini 評分是冠心病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，在臨床上應(yīng)用較為廣泛，經(jīng)過冠狀造影，評分系統(tǒng)評分，能夠客觀展示冠狀動脈情況，但是患者對于冠狀造影的不熟悉很容易產(chǎn)生恐懼感等負(fù)面情緒，同時其診斷的經(jīng)濟(jì)成本相對較高，對高血壓CHD 的早期診斷帶來一定的局限性。本研究結(jié)果顯示，Lp-PLA2 水平診斷高血壓CHD 的AUC 值為0.967，95%CI 為0.947～0.987，約登指數(shù)為0.837，靈敏度92.00%，特異性91.7%，提示Lp-PLA2 水平對高血壓CHD 診斷具有較好的參考價值。

綜上可知，Lp-PLA2 水平能夠反映冠狀動脈狹窄程度，具有診斷高血壓患者CHD 的價值，且靈敏度、特異性較好，而ADRB1基因多態(tài)性與冠狀動脈狹窄程度無關(guān)聯(lián)。但本研究由于選取的樣本較少，可能存在主觀上的偏移，仍存在一定局限性，還需要后續(xù)進(jìn)行大樣本測試得出更為準(zhǔn)確的結(jié)論，為高血壓患者CHD 的診斷提供更為可靠的參考價值。