NSCLC患者立體定向放射治療后T淋巴細(xì)胞亞群、Treg及NK細(xì)胞亞群變化及意義

祁紅 姚元虎 張璐

肺癌是目前臨床上最為常見(jiàn)的惡性腫瘤，其中以非小細(xì)胞肺癌（Non small cell lung cancer，NSCLC）多見(jiàn)，約占全部肺癌的75%～80%，因臨床療效較差，死亡率位居惡性腫瘤的首位［1］。放射治療是NSCLC 患者治療的重要手段，常規(guī)放射治療5年生存率不高，約為5%，局部未控或局部復(fù)發(fā)率可高達(dá)80%［2］。既往文獻(xiàn)顯示，提高放療劑量是提高療效的根本，但常規(guī)放療無(wú)法完成高劑量的放療，且在治療過(guò)程中對(duì)機(jī)體的免疫功能有一定的抑制作用［3］。立體定向放射治療很好地彌補(bǔ)劑量這一問(wèn)題，給NSCLC 治療帶來(lái)了新的希望［4］。本研究將觀察立體定向放射治療后NSCLC 患者T淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（Regulatory T cells，Treg）及NK 細(xì)胞亞群水平變化及其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院2018年12月至2020年12月收治的92 例NSCLC 患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合NSCLC 相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；②既往無(wú)過(guò)敏史；③臨床資料無(wú)丟失或缺損；④血液系統(tǒng)功能正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并冠心病、高血壓、糖尿病史者；②合并意識(shí)障礙、神經(jīng)功能異常者；③合并肝、腎功能異常者；④既往有手術(shù)史。其中男性68 例，女性24 例，平均年齡為（61.35±13.51）歲；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期48 例，Ⅲ～Ⅳ期44 例；病理類(lèi)型：腺癌36 例，鱗癌48 例，鱗腺癌8 例；病理分級(jí)：低分化72 例，高、中分化20 例。本研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，受試者或家屬均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 立體定向放射治療

采用全身伽馬射線立體定向放射系統(tǒng)。治療前先用CT 進(jìn)行定位掃描，層厚3～5 mm，采用負(fù)壓袋固定詳細(xì)記錄病灶、縱膈活動(dòng)度，利用配套工作站對(duì)圖像進(jìn)行分析及創(chuàng)建，確定腫瘤區(qū)域治療靶區(qū)。根據(jù)患者實(shí)際情況設(shè)置放射劑量：DT 60～70 Gy，單次劑量為2～7 Gy。

1.2.2 細(xì)胞因子檢測(cè)

于患者治療前、全部治療結(jié)束后空腹抽取3 mL 靜脈血，置入肝素鈉抗凝管內(nèi)。采用貝克曼流式細(xì)胞儀檢測(cè)患者外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg及NK 細(xì)胞亞群，詳細(xì)操作按配套試劑盒進(jìn)行檢測(cè)?？俆 細(xì)胞CD3+為均值，CD3+CD4+細(xì)胞為T(mén) 輔助細(xì)胞，CD3+CD8+細(xì)胞為T(mén) 抑制細(xì)胞，CD15+/CD65+細(xì)胞為NK 細(xì)胞。

1.3 隨訪

對(duì)患者進(jìn)行6 個(gè)月電話或門(mén)診隨訪（隨訪至2021年6月），分析其預(yù)后情況，并比較不同預(yù)后患者T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用F檢驗(yàn)；繪制受試者工作特征（ROC）曲線分析T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞對(duì)NSCLC治療后預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值，計(jì)算其檢測(cè)曲線下面積（AUC），以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者治療前后T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞水平比較

治療后，T 淋巴細(xì)胞亞群水平均較治療前增高，NK 細(xì)胞、Treg 水平較治療前顯著下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 患者治療前后T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞水平比較（±s）Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets，Treg and NK cell levels before and after treatment（±s）

表1 患者治療前后T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞水平比較（±s）Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets，Treg and NK cell levels before and after treatment（±s）

時(shí)間治療前治療后t 值P 值n 92 92 CD3+57.70±7.92 65.13±5.66 7.652＜0.001 CD3+CD4+31.54±4.20 41.77±5.59 13.718＜0.001 CD3+CD8+20.42±4.56 30.14±3.69 15.894＜0.001 Treg 8.54±2.11 5.63±1.11 11.707＜0.001 NK 17.66±4.69 12.49±3.19 8.743＜0.001

2.2 T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞水平與NSCLC 臨床病理特征的關(guān)系

NSCLC 患者不同年齡、性別、臨床分期、病理分級(jí)、病理類(lèi)型中T 淋巴細(xì)胞亞群、NK 細(xì)胞水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。NSCLC 臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、高中分化者Treg 水平顯著低于Ⅲ～Ⅳ期、低分化者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞水平與NSCLC 臨床病理特征的關(guān)系（±s）Table 2 The relationship between T lymphocyte subsets，Treg and NK cell levels and the clinicopathological characteristics of NSCLC（±s）

表2 T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞水平與NSCLC 臨床病理特征的關(guān)系（±s）Table 2 The relationship between T lymphocyte subsets，Treg and NK cell levels and the clinicopathological characteristics of NSCLC（±s）

注：與Ⅰ～Ⅱ期比較，aP＜0.05，與高中分化比較，bP＜0.05。

臨床病理特征年齡（歲）性別臨床分期病理分級(jí)病理類(lèi)型≤45＞45男女Ⅰ～Ⅱ期Ⅲ～Ⅳ期高中分化低分化腺癌鱗癌腺鱗癌n 36 56 68 24 48 44 20 72 36 48 8 CD3+57.12±6.18 58.07±5.26 57.34±7.92 58.72±6.18 57.47±8.23 57.95±7.34 57.93±6.54 57.63±5.01 57.13±8.15 58.19±7.93 57.32±7.29 CD3+CD4+31.89±8.56 31.31±7.56 32.03±7.14 30.15±6.99 32.12±6.62 30.90±5.31 33.05±6.96 31.12±5.95 31.58±6.12 31.28±7.63 32.91±4.99 CD3+CD8+20.96±3.84 20.07±3.14 20.06±3.56 21.44±4.01 21.28±6.65 19.48±7.12 19.65±3.31 20.63±5.45 19.95±8.55 20.74±8.51 20.61±8.63 Treg 8.53±1.56 8.54±1.23 8.26±1.42 9.33±1.96 6.54±0.36 10.72±2.01a 5.58±1.11 9.36±2.93b 8.97±0.89 8.43±1.12 7.23±1.32 NK 18.09±3.96 17.38±4.17 17.14±4.87 19.11±4.11 18.25±5.61 17.01±4.11 18.66±3.74 17.38±4.03 17.86±2.22 17.33±3.85 18.74±3.47

2.3 不同預(yù)后NSCLC 患者T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg及與NK 細(xì)胞水平比較

92 例患者中，預(yù)后死亡19 例（死亡組），生存73 例（生存組）。治療前后兩組T 細(xì)胞淋巴亞群、NK 細(xì)胞比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；但生存組Treg 水平顯著低于死亡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 不同預(yù)后NSCLC 患者T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞水平比較（±s）Table 3 Comparison of T lymphocyte subsets，Treg and NK cell levels in NSCLC patients with different prognosis（±s）

表3 不同預(yù)后NSCLC 患者T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞水平比較（±s）Table 3 Comparison of T lymphocyte subsets，Treg and NK cell levels in NSCLC patients with different prognosis（±s）

注：與同組治療前比較，aP＜0.05。

組別生存組死亡組t 值P 值n 73 19 CD3+治療前57.64±5.01 57.93±6.15 0.214 0.831治療后65.67±7.21a 63.05±8.23a 0.847 0.399 CD3+CD4+治療前31.15±3.54 33.03±4.11 1.145 0.255治療后42.14±5.15a 40.34±4.02a 1.413 0.161 CD3+CD8+治療前20.05±4.42 21.84±4.11 1.594 0.114治療后30.16±5.45a 30.06±4.27a 0.074 0.941 Treg治療前5.61±0.22 5.70±0.35 1.390 0.168治療后4.69±0.24a 9.24±2.09a 18.421＜0.001 NK治療前17.63±3.54 17.77±3.89 0.150 0..881治療后12.57±2.41a 12.18±3.01a 0.596 0.553

2.4 T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及NK 細(xì)胞對(duì)NSCLC預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值

ROC曲線結(jié)果顯示，T淋巴細(xì)胞亞群、Treg及NK細(xì)胞聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估NSCLC 預(yù)后的ACU 為0.802，明顯高于三者單獨(dú)診斷（P＜0.05）。見(jiàn)表4及圖1。

圖1 ROC 曲線圖Figure 1 ROC curve

表4 T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞對(duì)NSCLC 預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值Table 4 The prognostic evaluation value of T lymphocyte subsets，Treg and NK cells in NSCLC

3 討論

放射治療是臨床治療肺癌的主要手段，機(jī)體的免疫功能狀態(tài)是放射治療后腫瘤是否復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的重要因素。大量研究發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤患者T細(xì)胞亞群狀態(tài)均存在不同程度的異常與比例失調(diào)，其機(jī)制可能與腫瘤在發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中分泌大量免疫抑制因子有關(guān)［6-7］。免疫抑制因子可抑制殺傷細(xì)胞的活性，同時(shí)在腫瘤抗原刺激下，免疫抑制細(xì)胞前體被激活，分泌免疫抑制因子，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤患者免疫功能低下［8-9］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)立體定向放射治療后，NSCLC 患者T 淋巴細(xì)胞亞群水平均較治療前增高，NK 細(xì)胞、Treg 水平較治療前顯著下降，說(shuō)明立體定向放射治療NSCLC 時(shí)可調(diào)節(jié)患者T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞表達(dá)，改善其免疫功能。

T 淋巴細(xì)胞亞群在機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)中具有很好的調(diào)控作用［10］。在免疫學(xué)上，CD3+為總T 細(xì)胞水平，可反映機(jī)體總的細(xì)胞免疫狀態(tài)；CD4+為T(mén) 輔助細(xì)胞，可輔助誘導(dǎo)其它免疫細(xì)胞共同發(fā)揮抗腫瘤作用［11-12］。CD3+、CD4+T 淋巴細(xì)胞減少，患者免疫功能亦會(huì)下降。CD8+為T(mén) 抑制細(xì)胞，可通過(guò)自身及抑制因子在免疫反應(yīng)中起負(fù)向作用，進(jìn)而抑制抗體形成及細(xì)胞免疫反應(yīng)［13］。Treg 則屬于一類(lèi)具有免疫調(diào)節(jié)功能的T 細(xì)胞亞群，在抗腫瘤免疫中，Treg 細(xì)胞發(fā)揮重要抑制效應(yīng)［14］。NK 細(xì)胞屬于一種特殊的細(xì)胞群體，可直接殺傷部分腫瘤細(xì)胞或病毒感染細(xì)胞，NK細(xì)胞數(shù)量減少會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫功能下降［15］。因此，NSCLC 患者T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及與NK 細(xì)胞的變化是機(jī)體抗腫瘤免疫功能的一個(gè)側(cè)面反映。

本研究中，NSCLC 患者不同臨床分期、病理分級(jí)及病理類(lèi)型中T 淋巴細(xì)胞亞群、NK 細(xì)胞比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但結(jié)果顯示，隨NSCLC 患者臨床分期增加、惡性程度加深，機(jī)體細(xì)胞免疫功能有逐漸下降趨勢(shì)。而NSCLC 臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、高中分化者Treg 水平顯著低于Ⅲ～Ⅳ期、低分化者，提示腫瘤細(xì)胞分化越差、分期越高，Treg 占外周血單核細(xì)胞比例越高。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，預(yù)后生存組Treg 水平顯著低于死亡組，與胡曉雨等［16］報(bào)道相符，Treg可為患者預(yù)后情況評(píng)估的輔助指標(biāo)之一。但兩組治療前后T 淋巴細(xì)胞亞群、NK 細(xì)胞水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Turna 等人［17］通過(guò)ROC 曲線分析發(fā)現(xiàn)，與單一指標(biāo)檢測(cè)相比，多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌患者預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值更高。本研究與上述報(bào)道相符，可見(jiàn)3 個(gè)指標(biāo)對(duì)NSCLC 患者預(yù)后評(píng)估存在一定參考機(jī)制，可作為NSCLC 患者預(yù)后預(yù)測(cè)的理想指標(biāo)。

綜上所述，立體定向放射治療可調(diào)節(jié)T 淋巴細(xì)胞亞群、Treg 及NK 細(xì)胞表達(dá)，通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)上述細(xì)胞因子可進(jìn)一步提高對(duì)NSCLC 患者預(yù)后的預(yù)測(cè)能力。