NIPT聯(lián)合孕婦血清HGB、SF、TfR對胎兒β-地中海貧血的診斷價值

滕信剛 關(guān)艷梅 陳靜 劉紅

胎兒β-地中海貧血（β-地貧）屬于染色體遺傳病，可對胎兒健康造成危害?，F(xiàn)階段，臨床主要采取羊膜腔穿刺術(shù)（利用基因檢測技術(shù)獲得診斷結(jié)果）對胎兒β-地貧進(jìn)行產(chǎn)前診斷，但存在胎兒丟失、羊水泄露或者胎兒損傷等風(fēng)險［1-2］。尋找安全性高且有效的方式進(jìn)行胎兒β-地貧診斷具有重要意義。無創(chuàng)產(chǎn)前檢測（Noninvasive prenatal testing，NIPT）由于對胎兒創(chuàng)傷小以及診斷準(zhǔn)確性高等特點，逐漸成為了胎兒β-地貧產(chǎn)前診斷研究熱點［3］。有報道稱，胎兒β-地貧臨床診斷與預(yù)后評估中，相關(guān)血清標(biāo)志物水平檢測起著重要作用［4］。紅細(xì)胞關(guān)鍵組成成分為血紅蛋白（Hemoglobin，HGB），其能有效反映貧血程度情況［5］。相關(guān)研究顯示，鐵蛋白（serum ferritin，SF）為機體之中貯存鐵蛋白質(zhì)，血液轉(zhuǎn)運過程和SF 以及轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（transferrin receptor，TfR）密切相關(guān)［6］。以往關(guān)于HGB、SF 及TfR用于胎兒β-地貧的研究鮮少。本文主要探究NIPT聯(lián)合孕婦血清HGB、SF、TfR 對胎兒β-地貧的診斷價值，以期為該病產(chǎn)前篩查提供一定指導(dǎo)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取北京華信醫(yī)院2019年3月至2020年8月92 例胎兒β-地貧孕婦。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)羊膜腔穿刺術(shù)檢測胎兒β-地貧基因并分型，證實為胎兒β-地貧［7］；②單胎妊娠；③資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他溶血性貧血（包括鐮狀細(xì)胞貧血或者小細(xì)胞低血素貧血等）胎兒以及微缺失綜合征胎兒；②夫妻雙方之一存在染色體異常；③孕婦為β 地貧患者。根據(jù)《諸福棠實用兒科學(xué)》［7］有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，將其分為三個亞組：輕型組、中型組及重型組。并將同期50 例產(chǎn)檢健康者納入對照組。所有研究對象認(rèn)知正常，均簽署研究知情同意書。研究符合《赫爾辛基宣言》原則。各組孕婦年齡、孕周等基線資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 4 組基線資料比較 （±s）Table 1 Comparison of baseline data among the four groups（±s）

表1 4 組基線資料比較 （±s）Table 1 Comparison of baseline data among the four groups（±s）

組別重型組中型組輕型組對照組F 值P 值n 23 32 37 50年齡（歲）35.27±4.05 34.89±4.01 35.96±3.82 34.58±3.74 0.953 0.417孕周（周）15.08±2.64 15.37±2.72 16.02±2.53 15.59±2.68 0.682 0.564

1.2 方法

抽取孕婦空腹?fàn)顟B(tài)靜脈血6 mL，分為兩份。其中一份進(jìn)行NIPT，以乙二胺四乙酸（Ethylene Diamine Tetraacetic Acid，EDTA）進(jìn)行抗凝處理。通過DNA 提取試劑盒（上海睿時生物科技有限公司）獲得胎兒細(xì)胞外游離狀態(tài)DNA（Cell free DNA，cfDNA）。通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）分析儀（型號：英德9700，河北德科機械科技有限公司）處理胎兒cfDNA，對其中β 珠蛋白基因片段進(jìn)行擴(kuò)增；通過β-地貧基因檢測試劑盒（上海朗賦實業(yè)有限公司），采取PCR-反向點雜交技術(shù)處理cfDNA 擴(kuò)增產(chǎn)物，并對胎兒β-地貧基因予以分型［8］。

另一份進(jìn)行血清指標(biāo)檢測，采取高效離心機（型號：Avanti JXN-30/26，美國貝克曼庫爾特有限公司）完成離心處理（2 500 r/min，15 min）過程，然后分離血清樣本，以電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（型號：羅氏Cobas e601，北京東方邁潤醫(yī)療器械有限公司）與配套試劑盒進(jìn)行HGB、SF 水平測定；以酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行TfR 水平測定，相關(guān)試劑盒購自上海信帆生物科技有限公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采取SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)資料的處理，正態(tài)分布計量資料以（）表示，多組比較使用單因素方差分析法，多組兩兩比較使用SNK 檢驗法；相關(guān)性分析采取Spearman 分析法；利用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線進(jìn)行診斷效能分析。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4 組血清HGB、SF、TfR 比較

HGB、SF 水平：重型組＜中型組＜輕型組＜對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；TfR 水平：重型組＞中型組＞輕型組＞對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 4 組血清HGB、SF、TfR 比較（±s）Table 2 Comparison of serum HGB，SF and TfR among the four groups（±s）

表2 4 組血清HGB、SF、TfR 比較（±s）Table 2 Comparison of serum HGB，SF and TfR among the four groups（±s）

注：與對照組比較，aP＜0.05；與輕型組比較，bP＜0.05；與中型組比較，cP＜0.05。

組別重型組中型組輕型組對照組F 值P 值n 23 32 37 50 HGB（g/L）90.76±13.36abc 100.45±14.28ab 108.46±16.35a 119.85±18.46 19.728＜0.001 SF（μg/L）42.27±7.01abc 46.83±7.26ab 52.19±8.04a 56.74±8.23 22.057＜0.001 TfR（mg/L）4.92±0.75abc 4.28±0.76ab 3.85±0.57a 2.76±0.51 75.506＜0.001

2.2 胎兒β-地貧病情與HGB、SF、TfR 相關(guān)性分析

HGB、SF 與胎兒β-地貧病情呈顯著負(fù)相關(guān)（r1=-0.593，r2=-0.612，P＜0.05），TfR 與胎兒β-地貧病情呈顯著正相關(guān)（r=0.548，P＜0.05）。

2.3 NIPT聯(lián)合HGB、SF、TfR對胎兒β-地貧診斷價值

NIPT 聯(lián)合HGB、SF、TfR 診斷胎兒β-地貧的ROC 分析曲線下面積（area under the cure，AUC）為0.927，優(yōu)于各指標(biāo)單獨診斷（P＜0.05）。見表3、圖1。

圖1 NIPT、HGB、SF、TfR 診斷胎兒β-地貧ROC 曲線圖Figure 1 ROC curves of NIPT，HGB，SF and TfR for diagnosing fetal β-thalassemia

表3 NIPT 聯(lián)合HGB、SF、TfR 診斷胎兒β-地貧ROC曲線分析Table 3 ROC curve analysis of NIPT combined with HGB，SF and TfR in the diagnosis of fetal β-thalassemia

3 討論

HGB 可以和氧結(jié)合，具有運輸氧與二氧化碳的作用，使血液呈現(xiàn)為紅色，其組成包括珠蛋白及血紅素。有報道稱，貧血患者珠蛋白鏈合成受到珠蛋白基因缺失以及突變影響會發(fā)生障礙，導(dǎo)致HGB 組成改變［9］。SF 能夠貯存鐵，而鐵為生成血紅蛋白不可缺少的部分。血清內(nèi)所含轉(zhuǎn)鐵蛋白和TfR 均為復(fù)合物形式，其中80%左右TfR源于早期紅細(xì)胞，如若鐵含量不足與紅細(xì)胞生成活性升高，將提高TfR 合成水平，導(dǎo)致血清TfR濃度升高［10-11］。有研究指出，血清TfR 水平出現(xiàn)異常時，將對幼紅細(xì)胞吸收鐵造成影響，導(dǎo)致血清SF 減少，影響到造血功能，最終引發(fā)貧血［12］。相關(guān)研究表明，HGB 可用于地貧的篩查［13］。本研究發(fā)現(xiàn)，HGB、SF、TfR 與胎兒β-地貧病情呈存在顯著相關(guān)性，HGB、SF 水平越低、TfR 水平越高，胎兒病情越重，提示孕婦血清HGB、SF、TfR檢測結(jié)果與胎兒β-地貧病情密切相關(guān)，可為胎兒β-地貧病情評估提供一定指導(dǎo)，與上述研究觀點相符?？赡苡捎谠袐D血清內(nèi)HGB、SF、TfR水平變化，可在一定程度上影響胎兒發(fā)育狀況，因此孕婦血清指標(biāo)的檢測有利于胎兒β-地貧病情診斷。

近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，NIPT 已成為胎兒β-地貧的重要診斷手段。有研究指出，NIPT 可準(zhǔn)確檢出染色體異常，診斷假陽性率低，可于胎兒染色體篩查中發(fā)揮重要作用［14］。亦有報道稱，在二代測序技術(shù)不斷發(fā)展條件下，基于cfDNA 的分子檢測結(jié)果靈敏度得到了大大提升［15］。本研究發(fā)現(xiàn)，NIPT 對胎兒β-地貧診斷敏感度與特異度相對較高，與上述研究觀點相符，表明NIPT 可獲得良好的診斷效果。但本研究中NIPT診斷依然存在漏診與誤診情況，可能與NIPT 檢測樣本為孕婦血漿有關(guān)，孕婦外周血液中胎兒cfDNA含量較低，從而對NIPT 結(jié)果造成影響。此外，有研究指出，孕5 周后孕婦外周血里面存在特定胎兒cfDNA 片段，這種現(xiàn)象將維持至孕婦分娩后1 d，此后將迅速被產(chǎn)婦免疫功能系統(tǒng)廓清，其中部分cfDNA 片段來自體內(nèi)胎盤單元，根據(jù)孕婦情況（比如不同強度運動以及妊娠期合并癥等），其所占比例產(chǎn)生生理性波動，有時胎盤源性cfDNA 甚至可達(dá)35%［16］，影響到NIPT 結(jié)果。有研究表明，單一指標(biāo)在胎兒β-地貧診斷及臨床預(yù)后評估方面具有局限性，有必要采用不同指標(biāo)及技術(shù)進(jìn)行聯(lián)合診斷［17］。本研究ROC 曲線分析結(jié)果顯示，NIPT 聯(lián)合HGB、SF、TfR 診斷AUC 較高，為0.927，表明相較于各指標(biāo)單獨診斷，四者聯(lián)合能夠有效提高診斷效能，與上述研究觀點基本相符。分析原因，聯(lián)合診斷時，臨床根據(jù)NIPT 與孕婦血清指標(biāo)（HGB、SF、TfR）檢測結(jié)果，可從不同角度了解胎兒β-地貧發(fā)生情況，減弱了其他影響因素造成的干擾，因此診斷效能更高。

綜上，孕婦血清HGB、SF、TfR 水平變化與胎兒β-地貧病情程度顯著相關(guān)，HGB、SF 濃度越低、TfR 濃度越高，胎兒β-地貧越嚴(yán)重；NIPT 聯(lián)合HGB、SF、TfR 對胎兒β-地貧診斷效能更高，具有重要檢測價值。