獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)員熒光定量PCR理論與操作的調(diào)查分析及培訓(xùn)建議

馮淑萍謝守玉 楊 榮 龍劍明

（1廣西壯族自治區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西南寧 530001；2廣西南寧神九生物制品有限責(zé)任公司，廣西南寧 530001）

熒光定量PCR是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中以熒光化學(xué)物質(zhì)測定每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法，最早也稱TaqMan PCR、Real-time PCR，是美國PE公司在1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)，也是目前病原檢測領(lǐng)域使用最為廣泛的核酸檢測方法。尤其是在非洲豬瘟和新冠疫情發(fā)生后，熒光定量PCR檢測技術(shù)得到了很大的應(yīng)用和普及。

為進(jìn)一步加強(qiáng)全區(qū)非洲豬瘟排查、檢測力量，做好非洲豬瘟防控工作，根據(jù)《廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室檢測工作的通知》文件要求，截至2021年1月，廣西共發(fā)布20批次非洲豬瘟檢測實(shí)驗(yàn)室名單，包括疫控獸醫(yī)系統(tǒng)、養(yǎng)殖企業(yè)、屠宰企業(yè)和第三方檢測等實(shí)驗(yàn)室，共計(jì)252個(gè)。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，2018年非洲豬瘟疫情發(fā)生前，廣西有12個(gè)市（縣）配備熒光PCR儀器；非洲豬瘟暴發(fā)后，市、縣級(jí)疫控獸醫(yī)系統(tǒng)及屠宰場、養(yǎng)殖場、第三方檢測等實(shí)驗(yàn)室配置PCR儀達(dá)到140余臺(tái)，數(shù)量急劇增長。熒光PCR儀器和檢測技術(shù)作為分子生物學(xué)最新的檢測方法，涉及數(shù)學(xué)原理、化學(xué)原理、光學(xué)原理和探針引物設(shè)計(jì)等多項(xiàng)復(fù)雜原理。多年來，縣級(jí)基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室大多數(shù)只做血清學(xué)檢測，實(shí)驗(yàn)室人員年齡結(jié)構(gòu)偏大（41～50歲占36.63%），縣級(jí)疫控獸醫(yī)系統(tǒng)、養(yǎng)殖場、屠宰場從事實(shí)驗(yàn)室檢測的人員存在學(xué)歷低 （大專及以下學(xué)歷占40.6%）、培訓(xùn)少等問題。因此，做好熒光PCR技術(shù)的有效培訓(xùn)，使基層一線實(shí)驗(yàn)室檢測人員能真正掌握熒光PCR檢測技術(shù)、提升檢測能力十分必要。

本調(diào)查問卷研究了市、縣級(jí)疫控獸醫(yī)系統(tǒng)及養(yǎng)殖場、屠宰場和第三方檢測等實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)員對(duì)熒光PCR儀的熟悉程度，分析了存在的問題，提出了有針對(duì)性的培訓(xùn)建議，以期為進(jìn)一步完善獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室培訓(xùn)制度提供參考。

1 問卷調(diào)查分析

1.1 調(diào)查內(nèi)容與方法

問卷調(diào)查的對(duì)象主要是市、縣級(jí)疫控獸醫(yī)系統(tǒng)和屠宰場、養(yǎng)殖場、第三方檢測等實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)員，他們在動(dòng)物疫病檢測一線，作為研究樣本具有代表性。

本次調(diào)查依據(jù)發(fā)現(xiàn)問題、分析問題、提出建議的設(shè)計(jì)思路，以市、縣級(jí)疫控獸醫(yī)系統(tǒng)及屠宰場、養(yǎng)殖場、第三方檢測等實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)員為樣本，利用“問卷星”在線設(shè)計(jì)并發(fā)布調(diào)查問卷。

1.2 調(diào)查結(jié)果

本次調(diào)查問卷共發(fā)布172份，回收答卷172份，回收率100%。問卷設(shè)置要求每個(gè)問題都回答才能提交，因而172份問卷均有效。獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室問卷調(diào)查人員占比分布見圖1。

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，被調(diào)研的市級(jí)疫控獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室已100%配備熒光定量PCR儀器，縣級(jí)疫控獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室有91.56%已配備，屠宰場、養(yǎng)殖場、第三方檢測實(shí)驗(yàn)室有89.13%已配備，對(duì)熒光定量PCR儀器操作和理論知識(shí)有基本了解。調(diào)研中，172份問卷中對(duì)PCR儀操作的掌握程度，選擇“不了解，操作不熟悉”的占9.88%，選擇“基本了解，可以操作”的占61.05%，選擇“完全了解，熟悉操作”的只有29.07%。因其涉及多學(xué)科交叉綜合，調(diào)研對(duì)象對(duì)熒光定量PCR儀原理的掌握程度存在一定差距，未做到完全了解和熟練運(yùn)用（表1）。

表1 熒光定量PCR儀器原理掌握情況調(diào)查問卷匯總

2 存在的問題

2.1 缺乏定期培訓(xùn)

非洲豬瘟疫情暴發(fā)后，省、市級(jí)疫控獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室逐步開放檢測非洲豬瘟的資質(zhì)。隨著疫情的持續(xù)蔓延，越來越多縣級(jí)疫控獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室和養(yǎng)殖場、屠宰場、第三方檢測實(shí)驗(yàn)室通過實(shí)驗(yàn)比對(duì)獲得檢測資質(zhì)，但實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)熒光定量PCR理論掌握程度與實(shí)際操作水平參差不齊、基礎(chǔ)薄弱，亟須定期對(duì)新進(jìn)人員、非專業(yè)出身的實(shí)驗(yàn)操作人員、有實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的人員進(jìn)行定期培訓(xùn)和熒光定量PCR技術(shù)鞏固加強(qiáng)。

2.2 培訓(xùn)師資力量不足

掌握熒光定量PCR技術(shù)要求對(duì)儀器設(shè)置的數(shù)學(xué)原理、化學(xué)原理和光學(xué)原理等技術(shù)原理能夠熟悉了解，同時(shí)還包括軟件操作、數(shù)據(jù)分析、儀器日常維護(hù)等技術(shù)。相比疾病預(yù)防控制中心（CDC）、海關(guān)檢疫、市場監(jiān)督管理等系統(tǒng)來說，獸醫(yī)疫控系統(tǒng)師資力量明顯不足，需要管理培訓(xùn)部門在內(nèi)部不斷學(xué)習(xí)提升。

2.3 缺乏培訓(xùn)前調(diào)研培訓(xùn)后測評(píng)

在培訓(xùn)計(jì)劃制定和日常實(shí)施過程中，由于缺乏人力、財(cái)力的支持和時(shí)間成本的考慮，大部分實(shí)驗(yàn)室還存在如何根據(jù)人員需求制定培訓(xùn)計(jì)劃、如何更合理地進(jìn)行培訓(xùn)安排、如何有針對(duì)性地進(jìn)行培訓(xùn)考核、如何進(jìn)行培訓(xùn)效果評(píng)估等問題。

3 建議

為了能夠有效、更好地開展熒光定量PCR儀的理論與操作培訓(xùn)，提高基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室一線實(shí)驗(yàn)人員熒光定量PCR儀理論與操作水平，幫助他們切實(shí)掌握熒光定量PCR儀使用技術(shù)，可以從以下3個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)化完善。

3.1 建立定期培訓(xùn)機(jī)制

根據(jù)實(shí)驗(yàn)室總體目標(biāo)、疫病檢測技術(shù)發(fā)展趨勢和各層級(jí)實(shí)驗(yàn)室在實(shí)際工作中的培訓(xùn)需求，同時(shí)結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的管理評(píng)審、內(nèi)部審核、考核續(xù)證等活動(dòng)，堅(jiān)持適時(shí)有效的原則，建立定期培訓(xùn)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期派遣代表人員外出參加專業(yè)領(lǐng)域前沿技術(shù)或設(shè)備的培訓(xùn)，對(duì)新進(jìn)員工、臨時(shí)進(jìn)入人員進(jìn)行培訓(xùn)和指導(dǎo)，對(duì)有經(jīng)驗(yàn)的人員開展周期性再培訓(xùn)，采取多渠道、多形式、多層次的方式，力爭達(dá)到培訓(xùn)計(jì)劃的系統(tǒng)性、針對(duì)性、有效性[1]。

3.2 建立培訓(xùn)講師培養(yǎng)機(jī)制

技術(shù)培訓(xùn)的質(zhì)量與培訓(xùn)講師自身的能力和教學(xué)水平有正向關(guān)聯(lián)。因此，主管部門應(yīng)選拔業(yè)務(wù)水平高的人員組建高質(zhì)量的講師團(tuán)。自治區(qū)級(jí)科研院所、高校實(shí)驗(yàn)室專業(yè)領(lǐng)頭人、技術(shù)骨干、研發(fā)企業(yè)高級(jí)職稱人才應(yīng)成為講師團(tuán)的人選。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室不同層次、不同需求制定培訓(xùn)內(nèi)容、培訓(xùn)方式，有條件的實(shí)驗(yàn)員最好能夠到講師實(shí)驗(yàn)室“一對(duì)一”進(jìn)行短期跟班學(xué)習(xí)，積極發(fā)揮專業(yè)技術(shù)骨干人才“傳、幫、帶”的作用，提高培訓(xùn)的技術(shù)性，提升學(xué)員學(xué)習(xí)的積極性[2]。

3.3 建立培訓(xùn)前調(diào)研和培訓(xùn)后測評(píng)機(jī)制

樹立“以人為本”理念，通過培訓(xùn)前調(diào)研和培訓(xùn)后測評(píng)確定培訓(xùn)的方式和內(nèi)容，確保培訓(xùn)的針對(duì)性和時(shí)效性。信息時(shí)代，可通過網(wǎng)絡(luò)問卷小程序等節(jié)約調(diào)研人力成本，或者結(jié)合平時(shí)其他工作，組織培訓(xùn)前調(diào)研，根據(jù)不同疫病檢測項(xiàng)目、不同檢測技術(shù)、對(duì)培訓(xùn)的不同需求等制定科學(xué)的實(shí)驗(yàn)室操作人員技術(shù)培訓(xùn)方案。調(diào)研內(nèi)容可包括實(shí)驗(yàn)室不同層次和崗位需求、操作人員亟須更新的技術(shù)和人才培養(yǎng)對(duì)象等方面[3]。調(diào)查問卷顯示，自治區(qū)集中培訓(xùn)班（40.12%）、到上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室跟班學(xué)習(xí)（37.21%）、外聘講師到本實(shí)驗(yàn)室專題授課（20.93%）是最受歡迎的培訓(xùn)方式。

建立培訓(xùn)后測評(píng)機(jī)制，從檢驗(yàn)參訓(xùn)人學(xué)習(xí)效果和培訓(xùn)評(píng)價(jià)2個(gè)方面入手，檢驗(yàn)培訓(xùn)是否達(dá)到預(yù)期效果。如果效果未達(dá)到目標(biāo)，就需要重新修正本次培訓(xùn)存在的缺陷和不足，及時(shí)補(bǔ)充修正，以便保證后續(xù)培訓(xùn)效果。同時(shí)，培訓(xùn)后的測評(píng)也可以作為培訓(xùn)講師的一項(xiàng)績效考核指標(biāo)，從而激發(fā)講師積極改進(jìn)教學(xué)方式方法的熱情，提高工作質(zhì)量，達(dá)到講師和參訓(xùn)人員的雙提升目的[4]。

4 結(jié)語

熒光定量PCR技術(shù)依靠高度特異性及高敏感性，是近幾年分子生物診斷檢測領(lǐng)域最常用、最熱門的方法，大量應(yīng)用于非洲豬瘟、新冠病毒的核酸檢測。熒光定量PCR技術(shù)的普及應(yīng)用、檢測方法的快速發(fā)展和大量的檢測任務(wù)使廣西壯族自治區(qū)各級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測水平跨越新的臺(tái)階，也對(duì)檢測人員提出了更高的要求，有針對(duì)性、合理、高效的技術(shù)培訓(xùn)能夠提高人員操作標(biāo)準(zhǔn)化水平和實(shí)驗(yàn)室核心競爭力。