小兒急性腹瀉常見(jiàn)病原微生物感染分析

邵偉芳 劉祺 林素珍 唐莉莉

急性腹瀉是發(fā)病率較高的一種兒科病癥，若未及時(shí)進(jìn)行正確有效的治療，則會(huì)對(duì)患兒的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生限制性影響，甚至威脅生命安全。因?yàn)閶胗變旱纳硇陌l(fā)育尚不成熟，身體免疫力低下，極其容易受到病原微生物的侵襲［1］。相關(guān)臨床研究表明，病毒、真菌、細(xì)菌均是引起患兒發(fā)生急性腹瀉的主要影響因素，其中病毒最為常見(jiàn)。臨床上，由于病原微生物的檢測(cè)與鑒定需要一定的時(shí)間，進(jìn)而容易耽誤治療［2］。因此，如果醫(yī)護(hù)人員能夠熟悉掌握急性腹瀉患兒的病原微生物分布特性及其發(fā)病規(guī)律，便可以及時(shí)給予有效治療。本研究收集了140例急性腹瀉患兒的糞便標(biāo)本，分析不同性別、年齡、季節(jié)下小兒急性腹瀉的常見(jiàn)病原微生物檢驗(yàn)結(jié)果。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年1月至2020年6月本院接診的急性腹瀉患兒140例，主要臨床表現(xiàn)為惡心、嘔吐、發(fā)熱、大便黃綠色或黃色，無(wú)膿血。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：持續(xù)腹瀉時(shí)間≤3天，每日排便次數(shù)≥3次，大便性狀改變，呈現(xiàn)蛋花湯樣、稀糊樣、黏液樣以及稀水樣等，未出現(xiàn)膿血，且大便常規(guī)檢測(cè)結(jié)果提示W(wǎng)BC計(jì)數(shù)＜10/hp；年齡≤5歲。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：大便量少于3 mL；患有先天性肺炎、貧血以及炎性胃腸道病癥的患兒；食物中毒、脂瀉病或囊胞性纖維病患兒；治療護(hù)理依從性較差的患兒。其中，男患兒76例，女患兒64例；從病情發(fā)作至入院治療的時(shí)間為48～72 h，平均（60.24±5.13）h；年齡2個(gè)月～5歲，平均（2.46±0.36）歲；年齡＜1歲患兒32例，1～2歲患兒82例，3～5歲患兒26例；在12月至2月發(fā)病者44例，3月至5月發(fā)病者27例，6月至8月發(fā)病者40例，9月至11月發(fā)病者29例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法 患兒入院接受治療后，醫(yī)護(hù)人員選用無(wú)菌一次性吸管采取新鮮糞便標(biāo)本4～8 mL，2 h內(nèi)送檢。（1）細(xì)菌分離培養(yǎng)及鑒定：沙氏瓊脂培養(yǎng)基（鄭州人福博賽生物技術(shù)有限責(zé)任公司），XLD平板、麥康凱平板（上?？片敿挝⑸锛夹g(shù)有限公司），堿性蛋白胨水、4號(hào)平板（江門(mén)市凱林貿(mào)易有限公司），哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基（廣州市迪景微生物科技有限公司），將患兒糞便樣本在培養(yǎng)基上接種，并作分離培養(yǎng)，按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行操作。采取梅里埃全自動(dòng)鑒定儀Vitek2-compact及配套試劑對(duì)所培養(yǎng)的菌株進(jìn)行鑒定。同時(shí)，通過(guò)血清凝集對(duì)沙門(mén)、志賀菌進(jìn)行分群分型，通過(guò)核酸檢測(cè)測(cè)定致瀉性大腸埃希菌等微生物。（2）病毒學(xué)檢測(cè)：10%的便懸液標(biāo)本制備采用標(biāo)本處理液試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司），采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)人輪狀病毒，具體操作參照酶聯(lián)免疫吸附試劑盒的說(shuō)明書(shū)。（3）逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)：通過(guò)ROCHE全自動(dòng)核酸純化儀檢測(cè)腺病毒、杯狀病毒以及人星狀病毒，對(duì)病毒RNA核酸進(jìn)行提取并純化，將《全國(guó)病毒性腹瀉監(jiān)測(cè)方案》作為參考對(duì)引物序列進(jìn)行設(shè)計(jì)，依據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京鴻躍創(chuàng)新科技有限公司）以及PCR擴(kuò)增試劑盒（上海恪敏生物科技有限公司）說(shuō)明書(shū)，開(kāi)展逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果提示PCR陽(yáng)性產(chǎn)物應(yīng)送到測(cè)序中心進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) 糞便標(biāo)本中真菌、寄生蟲(chóng)、致病菌以及病毒等病原微生物的檢出情況以及感染特點(diǎn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采取SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)/百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 糞便標(biāo)本中病原微生物的檢出情況 病毒的檢出率最高，主要是人杯狀病毒（50.58%）和人輪狀病毒（15.29%）。見(jiàn)表1。

表1 病原微生物感染情況分析

2.2 不同條件下患兒糞便標(biāo)本的病原微生物檢出情況分析 男、女患兒糞便標(biāo)本的病原微生物檢出率分別為52.94%、47.06%，性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同年齡段患兒糞便標(biāo)本的病原微生物檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不同季節(jié)發(fā)病患兒糞便標(biāo)本的病原微生物檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同條件下患兒病原微生物檢出情況分析

2.3 病原微生物感染季節(jié)分布特性分析 病原微生物感染可以在全年任意季節(jié)發(fā)作，人杯狀病毒感染的高發(fā)期是6月至8月，人輪狀病毒感染的高發(fā)期是12月至2月。病原微生物感染的季節(jié)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 病原微生物感染季節(jié)分布特性分析

3 討論

小兒腹瀉是發(fā)病率較高的一種消化道綜合征，致病原因復(fù)雜，受諸多因素影響，臨床癥狀主要表現(xiàn)為排便次數(shù)顯著增加、大便性狀改變。本研究收集140例腹瀉患兒的糞便標(biāo)本開(kāi)展病原微生物檢驗(yàn)，探討病原微生物的分布規(guī)律及構(gòu)成情況。結(jié)果顯示，140例糞便標(biāo)本的病原微生物檢出率為60.71%，病毒占比75.29%，主要是人杯狀病毒和人輪狀病毒，說(shuō)明導(dǎo)致患兒腹瀉的主要因素是病毒感染［3］，與其他國(guó)家的相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果相似。而人輪狀病毒是導(dǎo)致小兒出現(xiàn)腹瀉的主要病原體，本組病例中出現(xiàn)人輪狀病毒感染的幾率高達(dá)50.58%。研究報(bào)道，我國(guó)成都地區(qū)人輪狀病毒感染的幾率高達(dá)37.76%。其實(shí)，大部分小兒在5歲之前均發(fā)生過(guò)人輪狀病毒感染所導(dǎo)致的腹瀉，其中1～2歲期間的感染幾率較高［4］。本研究結(jié)果顯示，年齡＜1歲患兒糞便標(biāo)本的病原微生物檢出率為29.41%，1～2歲患兒糞便標(biāo)本的病原微生物檢出率為54.12%，3～5歲患兒糞便標(biāo)本的病原微生物檢出率為17.65%，與上述研究結(jié)果相符。病原微生物檢出率的年齡差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），可能與患兒的機(jī)體免疫力水平存在一定的關(guān)聯(lián)性。年齡＜1歲的患兒能夠從母乳中吸收IgG、IgA抗體，可對(duì)病原微生物的入侵產(chǎn)生抵抗作用；年齡＞2歲患兒的機(jī)體免疫系統(tǒng)逐步完善，自身對(duì)病原微生物抵抗能力得到提升；12個(gè)月至2歲患兒，不僅是從母體吸收的抗體減弱，而且自身發(fā)育系統(tǒng)尚不完善，因此更容易導(dǎo)致病原微生物的入侵［5］。140例患兒糞便樣本的人杯狀病毒檢出率為15.29%，國(guó)外急性腹瀉患兒人杯狀病毒的檢出率為1.32%～15.72%。人杯狀病毒由兩個(gè)屬性組成，即札如病毒和諾如病毒，主要感染對(duì)象為人類，2歲以下的幼兒極其容易感染［6］。人杯狀病毒感染的主要臨床表現(xiàn)為喘息、嘔吐、發(fā)熱、水樣便、咳嗽等。由本研究結(jié)果可知，病原微生物感染能夠在全年任意季節(jié)發(fā)作，人杯狀病毒的高發(fā)期是6月至8月，人輪狀病毒高發(fā)期是12月至2月，與國(guó)內(nèi)報(bào)道結(jié)果相符［7］。由此可知，人輪狀病毒感染與季節(jié)變換存在緊密相關(guān)，該病毒感染發(fā)病高峰期為冬季，提示可依據(jù)病毒感染的季節(jié)性特征，提早加強(qiáng)對(duì)患兒的保護(hù)，對(duì)降低小兒急性腹瀉的發(fā)病率有著積極影響。此外，還發(fā)現(xiàn)細(xì)菌感染導(dǎo)致的小兒急性腹瀉主要發(fā)生在夏季，致病菌、真菌以及寄生蟲(chóng)感染同樣是導(dǎo)致小兒急性腹瀉的影響因素。臨床上，應(yīng)依據(jù)病原微生物感染種類開(kāi)展針對(duì)性治療，由于病原微生物的鑒定、培養(yǎng)需要時(shí)間較長(zhǎng)，通過(guò)全面掌握了解病原微生物感染的分布特點(diǎn)及發(fā)病規(guī)律，有助于早期指導(dǎo)臨床診斷及治療預(yù)防工作［8］，不至于貽誤病情。

綜上所述，1～2歲是小兒急性腹瀉的高發(fā)年齡段，大部分為病毒感染所致，與季節(jié)分布存在關(guān)聯(lián)性，與性別不存在關(guān)聯(lián)性。但本研究的樣本量較少，極有可能存在抽樣誤差，下一步將擴(kuò)大樣本量探索病原微生物感染的相關(guān)影響因素。