MicroRNA、TIF1γ 和HBV- DNA 在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)中的表達(dá)分析

臧唯，索朗多吉，旦增群培

1.吉林市中心醫(yī)院肝膽外科，吉林吉林 132000；2.日喀則市定結(jié)縣人民醫(yī)院外科，西藏定結(jié) 857900

乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌是臨床常見腫瘤疾病，有較高發(fā)生率和病死率，嚴(yán)重危害患者的健康安全[1]。目前已知在乙肝相關(guān)性肝癌復(fù)發(fā)中乙肝病毒基因（HBVDNA）陽性的存在有重要意義，在腫瘤免疫中雖然轉(zhuǎn)錄中介因子1γ （TIF1γ）、MicroRNA 作用功能已被進(jìn)行了研究分析，但尚不確定三者間的關(guān)聯(lián)性在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌中的作用機(jī)制與表達(dá)情況[2]。 故該文選取2017 年1 月—2020 年12 月該院接收的78例乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者作為觀察組對(duì)象，并另選取非復(fù)發(fā)乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者78例作為作為對(duì)照組，分析在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)中TIF1γ、MicroRNA 和HBVDNA 的表達(dá)情況，并作進(jìn)一步闡述，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

把該院接收的78例乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者作為觀察組，男40例，女38例； 年齡54～79 歲，平均（66.52±2.14） 歲； 復(fù)發(fā)無法行手術(shù)治療的患者有42例，乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)采取多次或二次手術(shù)治療的患者有36例。 另選取非復(fù)發(fā)乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者78例作為對(duì)照組，男41例，女37例；年齡54～79歲，平均（66.48±1.26）歲。 兩組一般資料對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。 對(duì)于該研究，醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)知曉且同意研究進(jìn)行。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn)研究選取的乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌者均已經(jīng)手術(shù)病理、影像學(xué)檢查確診；研究所選病例年齡均≥54 歲，但≤79 歲；所選對(duì)象均簽署知情同意書，同意研究進(jìn)行。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn)凝血功能障礙者； 免疫能力低下者；精神功能嚴(yán)重障礙者；對(duì)研究不配合者。

1.3 方法

實(shí)施實(shí)時(shí)熒光定量PCR（realtime PCR）技術(shù)對(duì)研究所選對(duì)象血漿中MicroRNA 表達(dá)情況及對(duì)肝臟組織細(xì)胞表達(dá)情況實(shí)施檢測(cè)； 實(shí)施PCR 測(cè)定研究所選對(duì)象的HBV-DNA 情況，開展酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），操作時(shí)應(yīng)根據(jù)試劑盒說明步驟嚴(yán)格執(zhí)行，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷。 實(shí)施PCR 對(duì)TIF1γ 進(jìn)行檢測(cè)，PCR 產(chǎn)物與入線性化表達(dá)載體相連接，反應(yīng)條件是在42℃環(huán)境下連接15 min，在25℃環(huán)境下連接30 min。該次研究開展，所應(yīng)用的PCR 儀為醫(yī)療專用設(shè)備，型號(hào)為ABI-2720，由北京世紀(jì)科信科學(xué)儀器有限公司提供； 所應(yīng)用的DNA 測(cè)序儀則是由上海艾研生物科技有限公司提供，型號(hào)為ABI Prism 3730XL 型；所應(yīng)用的凝膠成像儀、凝膠成像儀均是由濟(jì)南好來寶醫(yī)療器械有限公司提供，型號(hào)分別為BG-gdsAUTO 520型、DYCA-20F 型等；TIF1γ （16G9）：TIF1γ 抗體是上海創(chuàng)高提供，以人和鼠為適應(yīng)物種。

1.4 觀察指標(biāo)

觀察分析對(duì)照組、觀察組TIF1γ、MicroRNA 高表達(dá)、低表達(dá)水平情況；觀察分析復(fù)發(fā)非手術(shù)組、復(fù)發(fā)手術(shù)組TIF1γ、MicroRNA 高表達(dá)、低表達(dá)水平情況；觀察分析手術(shù)前后對(duì)照組、復(fù)發(fā)手術(shù)組HBV-DNA 水平陽性率情況，并對(duì)手術(shù)前后的變化情況進(jìn)行探究。 陽性率=HBV-DNA 水平陽性例數(shù)/總例數(shù)×100.00%

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組、觀察組TIF1γ、MicroRNA 表達(dá)水平比較

對(duì)照組、觀察組患者的TIF1γ、MicroRNA 高表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；較觀察組，對(duì)照組的TIF1γ、MicroRNA 低表達(dá)水平更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 對(duì)照組、觀察組TIF1γ、MicroRNA 表達(dá)水平比較（±s）

表1 對(duì)照組、觀察組TIF1γ、MicroRNA 表達(dá)水平比較（±s）

組別TIF1γ高表達(dá) 低表達(dá)MicroRNA高表達(dá) 低表達(dá)觀察組（n=78）對(duì)照組（n=78）t 值P 值0.10±0.09 0.08±0.05 1.716 0.088 0.49±0.06 0.01±0.02 67.028 0.001 0.12±0.07 0.10±0.09 1.549 0.123 0.52±0.14 0.01±0.06 29.572 0.001

2.2 復(fù)發(fā)非手術(shù)組、復(fù)發(fā)手術(shù)組TIF1γ、MicroRNA表達(dá)水平比較

復(fù)發(fā)非手術(shù)組、復(fù)發(fā)手術(shù)組患者TIF1γ、MicroRNA 高表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；較復(fù)發(fā)非手術(shù)組，復(fù)發(fā)手術(shù)組患者TIF1γ、MicroRNA 低表達(dá)水平更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 復(fù)發(fā)非手術(shù)組、復(fù)發(fā)手術(shù)組TIF1γ、MicroRNA 表達(dá)水平對(duì)比（±s）

表2 復(fù)發(fā)非手術(shù)組、復(fù)發(fā)手術(shù)組TIF1γ、MicroRNA 表達(dá)水平對(duì)比（±s）

組別TIF1γ高表達(dá) 低表達(dá)MicroRNA高表達(dá) 低表達(dá)復(fù)發(fā)非手術(shù)組（n=42）復(fù)發(fā)手術(shù)組（n=36）t 值P 值0.54±0.14 0.57±0.15 0.913 0.364 0.32±0.05 0.67±0.09 21.623 0.001 0.69±0.20 0.61±0.16 1.928 0.058 0.48±0.11 0.59±0.12 4.222 0.001

2.3 對(duì)照組、復(fù)發(fā)手術(shù)組手術(shù)前后HBV-DNA 水平陽性率比較

術(shù)前急性期、術(shù)后3 d、術(shù)后2 周時(shí)段，復(fù)發(fā)手術(shù)組、對(duì)照組陽性率比較，前者所占比高于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 對(duì)照組、復(fù)發(fā)手術(shù)組手術(shù)前后HBV-DNA 水平陽性率比較[n（%）]

3 討論

乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌是臨床常見惡性腫瘤疾病，有較高的病死率及發(fā)生率，嚴(yán)重威脅患者健康安全，影響患者生存時(shí)間。手術(shù)療法是目前臨床治療該疾病的常用方法，雖然能取得較好效果，但也存在疾病復(fù)發(fā)概率。 研究證實(shí)，導(dǎo)致乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)的原因和多因素相關(guān)，如TIF1γ、MicroRNA 異常水平等[3]。 而且也有報(bào)道表明，不僅在其他直腸腫瘤中MicroRNA的低表達(dá)水平處于較高狀態(tài)，而且MicroRNA 的低水平表達(dá)異常情況也會(huì)出現(xiàn)在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌中[4]，由此能說明，MicroRNA 屬于乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌的抑制因子。 轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）-β1通路橋架功能在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌肝細(xì)胞中是相對(duì)繁瑣的[5-6]。 有研究指出，在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌中TGF-β1 通路的激活較為常見[7]，由此得出，TIF1γ 具有能對(duì)TGF-p/Smad 激活予以調(diào)控的通路功能[8]。研究表明，肝臟癌細(xì)胞經(jīng)水平表達(dá)較低的TGF-β1來使其對(duì)TGF-β1促癌效應(yīng)的敏感性增強(qiáng)，進(jìn)而會(huì)提高腫瘤復(fù)發(fā)情況發(fā)生[9]。 另外，在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)中HBV-DNA 擔(dān)任重要角色[10]。有研究報(bào)道指出，乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌的復(fù)發(fā)病死率和HBV-DNA 陽性高表達(dá)有一定關(guān)聯(lián)性，且量效關(guān)系明顯，術(shù)后HBV-DNA 的高量效則是導(dǎo)致術(shù)后乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)的主要原因[11]。

雖然TGF-β1和MicroRNA 水平在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)時(shí)和信號(hào)通路的功能機(jī)制、機(jī)體免疫功能機(jī)制尚未全部闡述清楚，但經(jīng)測(cè)定免疫指標(biāo)得出，TGFβ1與MicroRNA 存在于復(fù)發(fā)型肝相關(guān)肝細(xì)胞癌中[12-13]。TGF-β1與MicroRNA 作為一種媒介參與乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌的復(fù)發(fā)。由于乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌的發(fā)生屬于一個(gè)多步驟、多因素參與的復(fù)雜過程，和乙肝病毒（HBV）慢性持續(xù)性感染有一定關(guān)聯(lián)性[14]。HBV 慢性感染易誘發(fā)肝細(xì)胞增殖與再生、繼發(fā)性肝纖維化和肝臟炎癥受損等，從而造成肝臟惡性變化。 大部分乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者死于腫瘤快速進(jìn)展相關(guān)病癥，對(duì)其進(jìn)行早期診斷時(shí)只有肝移植或肝切除可作為可行有效的治愈方法[15]，然而，更為有效的治療靶點(diǎn)與診斷方法則無法確定。 有報(bào)道表明，在對(duì)基本細(xì)胞調(diào)節(jié)期間MicroRNA 能起到重要作用，這些過程包括細(xì)胞命運(yùn)選擇和發(fā)育、凋亡和增殖，基本上60%左右的人類基因受MicroRNA 調(diào)控。 MicroRNA 能對(duì)多種類型腫瘤進(jìn)行調(diào)控，其異常表達(dá)和一些腫瘤的發(fā)生有一定關(guān)聯(lián)性，其作用機(jī)制為當(dāng)MicroRNA 呈現(xiàn)異常表達(dá)時(shí)，經(jīng)對(duì)癌基因或腫瘤抑制基因的表達(dá)下調(diào)，能對(duì)腫瘤發(fā)生過程予以抑制或促進(jìn)。 在該次研究中，以該院接收的78例乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者為觀察組，并另選取非復(fù)發(fā)乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者78例作為對(duì)照組，從結(jié)果中可知，在比較TIF1γ、MicroRNA 表達(dá)水平中，觀察組的低表達(dá)水平分別是（0.49±0.06）、（0.52±0.14），均高于對(duì)照組的（0.01±0.02）、（0.01±0.06）（P＜0.05）；復(fù)發(fā)手術(shù)組患者TIF1γ、MicroRNA 低表達(dá)水平分別是（0.67±0.09）、（0.59±0.12），明顯高于復(fù)發(fā)非手術(shù)組的（0.32±0.05）、（0.48±0.11）（P＜0.05）；復(fù)發(fā)手術(shù)組術(shù)前急性期、術(shù)后3 d、術(shù)后2 周HBV-DNA 水平陽性率占比分別是86.11%、80.56%、41.67%，明顯高于對(duì)照組的12.82%、17.95%、1.28%（P＜0.05）。 與周瑩等[16]的研究結(jié)果類似： 復(fù)發(fā)手術(shù)組術(shù)后3 d 占91.2%、術(shù)后2 周41.7%高于對(duì)照組。 說明TIF1γ、MicroRNA 低表達(dá)水平，HBV-DNA 的高度復(fù)制能使腫瘤對(duì)機(jī)體的復(fù)發(fā)侵犯率增加，能對(duì)乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者的預(yù)后帶來嚴(yán)重影響。 由此說明，針對(duì)乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)患者，在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌早期治療診斷中上述3種因子對(duì)其評(píng)價(jià)有重要作用，臨床應(yīng)用價(jià)值高[17]。

在肖鐘迪等[18]的研究中雖然只分析了MicroRNA，并未對(duì)HBV-DNA、TIF1γ 做過多研究，但從分析可知，在肝癌中miR-218 低表達(dá)，且和肺癌預(yù)后及轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)有一定關(guān)聯(lián)性。 這一結(jié)果與該次研究證實(shí)的MicroRNA 低表達(dá)相一致。

綜上所述，在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者中，誘發(fā)乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)的因素主要為HBV-DNA 陽性表達(dá)，以及TIF1γ、MicroRNA 低表達(dá)水平增高，且能對(duì)乙肝相關(guān)細(xì)胞癌患者預(yù)后帶來影響。