腫瘤相關巨噬細胞在子宮內膜癌增殖、轉移中的作用機制的研究

閆攀

（河南神火集團總醫(yī)院 醫(yī)務科，河南 商丘 476600）

子宮內膜癌（EC）為女性常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，雖然近年來臨床診療手段不斷改進、完善，但是發(fā)病率仍然持逐年增高趨勢，發(fā)病率僅次于子宮癌，在女性癌癥全因死亡中占2.1%［1］。近年來研究發(fā)現(xiàn)早期患者預后良好，然而對于一些特殊病理學類型及晚期患者而言則預后較差［2］，因此對EC 的發(fā)生、發(fā)展、增殖及轉移機制進行探討十分必要。腫瘤相關巨噬細胞（TAMs）為腫瘤微環(huán)境中重要的細胞亞群，在腫瘤增殖、侵襲中參與調控，其中M1 型巨噬細胞參與炎性反應，M2 型巨噬細胞參與腫瘤發(fā)生、進展過程，多項研究證實，M2 型巨噬細胞浸潤與EC 有關，然而其作用機制尚不完全明確［3］，鑒于此，本研究在前期研究基礎上，選取河南神火集團總醫(yī)院收治的50 例EC 患者作為研究對象，進一步檢測TAMs 在EC 增殖、轉移中的參與機制，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

研究經醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準，選取2019 年4 月至2020 年12 月在河南神火集團總醫(yī)院接受診斷、治療的EC 患者50 例作為研究組，年齡38～70 歲，平均（57.28±3.33）歲；其中Ⅰ型EC 26 例，TNM 分期Ⅰ期12 例，Ⅱ～Ⅳ期14例，肌層浸潤深度≥1/2 共13 例，伴盆腔淋巴結轉移10 例；Ⅱ型EC 24 例，TNM 分期Ⅰ期11 例，Ⅱ～Ⅳ期13 例，肌層浸潤深度≥1/2 共10 例，伴盆腔淋巴結轉移9 例；均為診斷性刮宮、全子宮切除術、雙側附件切除和盆腔淋巴結清掃術后，無放療、化療以及其他抗腫瘤治療史。選取同期在河南神火集團總醫(yī)院接受治療的增生性病變子宮內膜病患者50 例作為對照組，年齡35～70 歲，平均（56.99±3.29）歲；其中增殖期6 例，分泌期8例，單純型增生9 例，復雜不典型增生期27 例。兩組患者年齡比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

收集子宮內膜組織后放入福爾馬林液中固定，常規(guī)石蠟包埋并切片進行蘇木素伊紅染色，3 μm連續(xù)切片。免疫組織化學染色二步法檢測CD68，腫瘤間質TAMs 胞質，棕黃色顆粒為CD68 細胞陽性，選擇合適區(qū)域拍照，對視野內（5 個視野，放大400 倍）陽性細胞數(shù)進行統(tǒng)計，取平均值。免疫組織化學法檢測增殖細胞核抗原（PCNA），細胞核內有棕黃色顆粒為PCNA 陽性，對腫瘤細胞密集區(qū)域拍照，對視野內（5 個視野，放大400倍）每100 個腫瘤細胞中陽性細胞數(shù)進行統(tǒng)計，取平均值作為PCNA 指數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0 軟件分析數(shù)據，符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，用t檢驗；計數(shù)資料以百分率（%）表示，用χ2檢驗；相關性分析采用Pearson 相關分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組CD68 表達個數(shù)

免疫組織化學結果顯示，研究組內CD68 陽性表達集中于腫瘤間質TAMs 的胞質，在癌巢、病灶周圍、中央壞死區(qū)亦存在大量巨噬細胞，TAMs大小不一、分布不規(guī)則、胞質豐富，核偏位，泡沫樣細胞。Ⅰ型EC 患者CD68 表達細胞個數(shù)均值為（57.92±16.28）個，Ⅱ型EC 患者CD68 表達細胞個數(shù)均值為（68.00±16.73）個；對照組內6 例增殖期患者CD68 較少見，細胞個數(shù)均值為（5.82±2.09）個，散在分布，集中在血管周圍；8 例分泌期患者CD68 細胞個數(shù)均值為（13.75±2.88）個，呈染色加深；9 例單純增生CD68 細胞個數(shù)均值為（25.46±23.03）個，散在分布；27 例復雜不典型增生CD68 細胞個數(shù)均值為（25.46±23.03）個，成團分布，出現(xiàn)明顯的吞噬顆粒、吞噬空泡，病變部位巨噬細胞形態(tài)不規(guī)則，大于正常組織，核呈馬蹄形或新月形，胞質內可見大量吞噬顆粒，巨噬細胞周圍可見大量淋巴細胞，巨噬細胞浸潤至腺體，增殖期＜分泌期＜單純型增生＜復雜型增生＜不典型增生期＜Ⅰ型EC＜Ⅱ型EC，差異有統(tǒng)計學意義（F=3.271,P=0.000）。

2.2 Ⅰ型EC、Ⅱ型EC 的PCNA 表達

PCNA 陽性表達于腫瘤上皮細胞核，Ⅰ型EC組PCNA 指 數(shù) 為（24.36±4.00），Ⅱ型EC 組PCNA 指數(shù)為（27.00±3.89），組間比較差異有統(tǒng)計學意義（t=2.362,P=0.011）。在Ⅰ型EC 中，Ⅱ～Ⅳ期、伴有盆腔淋巴結轉移、肌層浸潤深度≥1/2患者PCNA 指數(shù)明顯較高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；Ⅱ型EC 中，伴有盆腔淋巴結轉移、肌層浸潤深度≥1/2 患者的PCNA 指數(shù)明顯較高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 Ⅰ型EC、Ⅱ型EC 的PCNA 表達（±s）

表1 Ⅰ型EC、Ⅱ型EC 的PCNA 表達（±s）

2.3 TAMs 數(shù)量與PCNA 指數(shù)相關性分析

Pearson 相關分析顯示，Ⅰ型EC、Ⅱ型EC 的TAMs 數(shù)量與PCNA 指數(shù)呈正相關關系（r1=0.440,r2=0.578；P1=0.021,P2=0.010）。

3 討論

既往研究顯示，長期使用外源性雌激素、肥胖、酒精攝入量過度、炎癥過程等為EC 的常見因素，而隨著研究的深入，學者們發(fā)現(xiàn)，腫瘤微環(huán)境TAMs 更是研究的重中之重。巨噬細胞在維持機體穩(wěn)態(tài)、修復與重塑應激反應后受損組織中至關重要，被認為是抵抗病原體的首道防線，多項研究證實，TAMs 與前列腺癌、乳腺癌、甲狀腺癌、結腸癌與EC 等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在直接關系，直接參與腫瘤的血管形成、侵襲轉移等［4］。

本研究發(fā)現(xiàn)，在浸潤數(shù)目方面，CD68 陽性細胞數(shù)目隨著子宮內膜增生病變的進展而相應增加，提示巨噬細胞浸潤增多以及伴發(fā)的炎癥微環(huán)境加重，可能在EC 增生病變中有所參與。EC 組患者CD68 形態(tài)方面，形態(tài)不規(guī)則、巨噬細胞增大、核呈現(xiàn)出馬蹄形或新月形，且胞質內存在大量的吞噬顆粒，這些都說明癌前病變或者癌變組織中的巨噬細胞是已經活化且發(fā)揮功能作用的細胞。本次研究中Ⅱ型EC 的TAMs 數(shù)量多于Ⅰ型EC（P＜0.05），分析認為可能與Ⅱ型EC 的進展速度快、增值浸潤快有關。PCNA 為細胞增殖必須的核抗原，參與DNA 合成、修復、核酸代謝、復制、細胞增殖及細胞周期調控等，PCNA 在靜止期細胞中含量較少，而當細胞進入G1 晚期，其含量顯著增加，到S 期時達到高峰，因此成為臨床研究細胞增殖動力學的重要指標［5］。本次研究中，PCNA指數(shù)在Ⅰ型EC 組Ⅱ～Ⅳ期、所有伴盆腔淋巴結轉移、肌層浸潤深度≥1/2 中均呈現(xiàn)出高表達，證明PCNA 不僅可表現(xiàn)腫瘤的增殖狀態(tài)，同時能夠反映其進展能力。Ⅰ型、Ⅱ型EC 患者TAMs 數(shù)量與PCNA 指數(shù)均呈正相關（P＜0.05），提示TAMs 浸潤增多可能是EC 腫瘤細胞增殖生長能力增強的重要原因。

綜上所述，TAMs 與子宮內膜異常增生之間密切相關，可能在EC 發(fā)生、增殖及轉移中發(fā)揮重要作用。