CYP3A5和COQ基因多態(tài)性對(duì)他汀類(lèi)藥物導(dǎo)致肌病病人的影響

劉 揚(yáng)，宋翠云，趙正陽(yáng)，侯麗艷

他汀類(lèi)藥物是血脂異常病人中廣泛使用的藥物，血脂異常是冠心病的主要危險(xiǎn)因素之一[1]。有研究顯示，氧化應(yīng)激、線粒體功能異常和肌肉鈣穩(wěn)態(tài)失衡導(dǎo)致肌肉副作用(如肌痛、肌炎、橫紋肌溶解、肌肉無(wú)力和肌肉痙攣)是他汀類(lèi)藥物停藥的常見(jiàn)原因[2-4]。有研究表明，遺傳影響某些他汀類(lèi)藥物引起的肌病[4]。他汀類(lèi)藥物藥代動(dòng)力學(xué)中具有潛在作用的候選基因包括有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族(SLCO)、細(xì)胞色素P450家族(CYP3A4、CYP3A5和CYP3C9)及三磷酸腺苷結(jié)合盒家族(ABCB1、ABCC2和ABCG2)，這些基因中的單核苷酸多態(tài)性可能影響他汀類(lèi)藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝，最終影響藥物的藥代動(dòng)力學(xué)，從而增加全身和器官暴露，引起肌病[5]。分析他汀類(lèi)藥物的藥物遺傳學(xué)影響對(duì)建立這些藥物的藥代動(dòng)力學(xué)、功效和耐受性是必要的。本研究旨在分析他汀類(lèi)藥物引起肌病與病人CYP3A5＊3 T>C(rs776746)、COQ G>C(rs4693075)和有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1B1(SLCO1B1 T)>C(rs4149056)基因多態(tài)性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究納入267例接受阿托伐他汀或瑞舒伐他汀治療的病人，年齡32～90歲，平均62.22歲；女95例，男172例。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并肝功能不全的病人；嚴(yán)重血液系統(tǒng)、腎臟、肝臟疾病或惡性疾??；甲狀腺功能減退；維生素D缺乏癥，可能與他汀類(lèi)藥物相互作用的藥物；入組前7 d內(nèi)發(fā)生重大出血事件的病人；使用口服抗凝劑。根據(jù)他汀類(lèi)藥物治療后是否發(fā)生肌病分為肌病組和耐受組。入組時(shí)記錄他汀類(lèi)藥物引起肌病的輕度或中度癥狀，包括疲勞、肌肉疼痛、肌肉壓痛、肌肉無(wú)力、夜間痙攣和肌腱疼痛。將血清肌酸激酶(CK)水平超過(guò)正常值5倍的病人作為肌病組[6]，其余無(wú)癥狀和CK水平正常的病人作為耐受組。

1.2 基因分析 收集全血樣品于乙二胺四乙酸中，使用標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)苯酚-氯仿程序進(jìn)行基因組DNA提取，之后使用NanoDrop儀器進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估(Thermo Fisher Scientific)。從Ensembl在線數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索到CYP3A5＊3(rs776746)、COQ(rs4693075)和SLCO1B1(rs4149056)的參考基因組序列。使用Primer 3 設(shè)計(jì)目標(biāo)特異性引物對(duì)，使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法確定基因型多態(tài)性。使用以下引物對(duì)對(duì)多態(tài)性進(jìn)行PCR擴(kuò)增。CYP3A5＊3 c.6986A>G(rs776746)：正向引物5′-TCACGTCGGGATCTGTGAT-3′；反向引物5′-GACTGTGGAGTGCTGTGGAG-3′。SLCO1B1(rs4149056)Val174Ala：正向引物5′-CTTCATCTTCCGCCATGATT-3′；反向引物5′-GATCCCAGGGTAAAGCCAAT-3′。COQ rs4693075：正向引物5′-CGTTGTACTGCAATGACCTGTT-3′；反向引物5′-TCCGGCACTTACTTATTTCAG-3′。擴(kuò)增的PCR條件：94 ℃條件下初始變性5 min；之后進(jìn)行38個(gè)循環(huán)，94 ℃ 30 s，52.2 ℃30 s和72 ℃ 30 s延伸，72 ℃延長(zhǎng)10 min。

在10 μL反應(yīng)混合物中進(jìn)行PCR，該反應(yīng)混合物包括0.15 μL的每種引物(10 pmol/μL)，5 μL的Takara EmeraldAmp GT PCR預(yù)混液，2 μL的DNA模板(50 ng/μL)和2.8 μL雙蒸餾水在熱循環(huán)儀(Eppendorf)中進(jìn)行。對(duì)擴(kuò)增的PCR片段進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳的定性檢查，根據(jù)說(shuō)明，使用ABI Prism 3730xl基因分析儀(Applied Biosystems)上的BigDye終止循環(huán)測(cè)序反應(yīng)準(zhǔn)備試劑盒3.1版(Applied Biosystems)對(duì)擴(kuò)增子進(jìn)行測(cè)序。使用FinchTV軟件用肉眼觀察測(cè)序色譜圖，并記錄基因型信息。

2 結(jié) 果

2.1 不同性別臨床資料比較 糖尿病、高血壓病人占比分別為67.42%和79.03%，159例(59.55%)病人使用瑞舒伐他汀，108例(40.45%)病人使用阿托伐他汀。關(guān)于他汀類(lèi)藥物的劑量，大多數(shù)病人每日服用10 mg阿托伐他汀或瑞舒伐他汀，其中50例(18.73%)病人發(fā)生肌病。詳見(jiàn)表1。

表1 不同性別臨床資料比較

2.2 肌病組和耐受組CYP3A5＊3、COQ和SLCO1B1基因型和等位基因頻率分布 CYP3A5＊3、COQ和SLCO1B1等位基因和基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。CYP3A5＊3、COQ和COQ多態(tài)性的遺傳數(shù)據(jù)根據(jù)他汀類(lèi)藥物是否引起的肌病進(jìn)行分組。肌病組和耐受組CYP3A5＊3基因多態(tài)性基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[TT+TC與CC，OR=2.093，95%CI(1.124，3.898)，P=0.023]。肌病組和耐受組COQ基因多態(tài)性基因型分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[GG+GC與CC，OR=0.961，95%CI(0.519，1.778)，P=1.000；GG與GC+GC，OR=1.503，95%CI(0.427，5.292)，P=0.590]。純合子野生基因型SLCO1B1(rs4149056)多態(tài)性基因型頻率為93.63%，雜合子個(gè)體基因型頻率為6.37%，未觀察到純合突變體。肌病組和耐受組SLCO1B1等位基因分離和基因型頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[TT與TC+TC，OR=1.365，95%CI(0.425，4.376)，P=0.747]和等位基因[T與C，OR=1.349，95%CI(0.431，4.229)，P=0.751]。詳見(jiàn)表2。

表2 肌病組和耐受組CYP3A5＊3、COQ和SLCO1B1基因型和等位基因頻率分布

2.3 瑞舒伐他汀或阿托伐他汀治療的肌病組和耐受組CYP3A5＊3、COQ和SLCO1B1基因型和等位基因頻率分布 接受他汀類(lèi)藥物治療的267例病人中，50例(18.73%)患有肌病，其中28例(56.00%)接受瑞舒伐他汀治療，22例(44.00%)接受阿托伐他汀治療，對(duì)CYP3A5＊3，COQ和SLCO1B1等位基因和基因型頻率數(shù)據(jù)進(jìn)行分層以發(fā)現(xiàn)多態(tài)性對(duì)他汀類(lèi)藥物引起的肌病的影響，結(jié)果提示與瑞舒伐他汀或阿托伐他汀均無(wú)關(guān)。詳見(jiàn)表3、表4。

表3 阿托伐他汀治療的肌病組和耐受組CYP3A5＊3、COQ和SLCO1B1基因型和等位基因頻率分布

表4 瑞舒伐他汀治療的肌病組和耐受組CYP3A5＊3、COQ和SLCO1B1基因型和等位基因頻率分布

3 討 論

已有關(guān)于他汀類(lèi)藥物代謝相關(guān)基因多態(tài)性與療效和安全性關(guān)系的研究報(bào)道[7]，然而，關(guān)于遺傳學(xué)對(duì)他汀類(lèi)藥物引起肌病的影響研究報(bào)道較少。有研究表明，肌病相關(guān)癥狀包括肌肉無(wú)力、肌痛和威脅生命的橫紋肌溶解，常發(fā)生于他汀類(lèi)藥物治療數(shù)月后或數(shù)年后[2]。多項(xiàng)研究顯示，使用他汀類(lèi)藥物病人中10%～25%發(fā)生與他汀相關(guān)的肌肉癥狀，引起的嚴(yán)重肌肉癥狀較少，占0.1%～0.5%[4，8]。本研究中，他汀類(lèi)藥物引起肌病病人的病人占18.73%，發(fā)生肌病可能是由于長(zhǎng)期接受阿托伐他汀或瑞舒伐他汀治療病人所致?？梢?jiàn)，即使較低劑量阿托伐他汀或瑞舒伐他汀治療可出現(xiàn)與肌病相關(guān)的癥狀。江岳鑫等[9]分析了160例他汀類(lèi)藥物所致肌病病人的相關(guān)不良反應(yīng)，橫紋肌溶解癥占比33.75%，一般程度肌病占比66.25%。遺傳多態(tài)性認(rèn)為是影響他汀類(lèi)藥物吸收、體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)代謝的潛在原因，最終導(dǎo)致他汀類(lèi)藥物引起的肌病[10]。

有研究顯示，SLCO1B1 521C攜帶者的他汀類(lèi)藥物暴露增加，肌病風(fēng)險(xiǎn)增加[11]。通過(guò)遺傳單倍型標(biāo)志物進(jìn)行他汀類(lèi)藥物的安全性和有效性遺傳學(xué)研究表明，復(fù)合不良事件與SLCO1B1＊5基因型和女性相關(guān)[12]。有研究顯示，SLCO1B1 T>C等位基因攜帶者TC基因型患病風(fēng)險(xiǎn)是TT純合子的4.5倍，CC患病風(fēng)險(xiǎn)是TT純合子的16.9倍，C等位基因變異占肌病病例的60%以上[11]。多數(shù)研究顯示，SLCO1B1與阿托伐他汀引起肌病無(wú)關(guān)[12-13]，有研究顯示兩者呈正相關(guān)[14]，提示SLCO1B1變異在阿托伐他汀治療中可能不重要。本研究中，SLCO1B1(rs4149056)多態(tài)性的純合野生TT基因型基因型頻率為93.63%，雜合TC基因型頻率為6.37%，未觀察到純合的CC基因型。肌病組和耐受組SLCO1B1等位基因和基因型頻率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。接受阿托伐他汀治療的病人中，觀察到肌病組不存在純合CC變體，TC為18.18%，耐受組TC為4.65%，未發(fā)現(xiàn)與阿托伐他汀引起的肌病有關(guān)。

細(xì)胞色素P450 3A(CYP3A)亞家族成員是參與阿托伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀和普伐他汀代謝的重要藥物代謝酶[5]。常見(jiàn)且研究較多的CYP3A5多態(tài)性是CYP3A5＊3(rs776746)等位基因功能喪失[15]。純合子CYP3A5＊3攜帶者表現(xiàn)出較高的血清CK水平和阿托伐他汀引起的肌肉損傷程度，與辛伐他汀療效或耐受性無(wú)關(guān)[15]。本研究中，患有肌病且CYP3A5＊3陽(yáng)性病人比例為52.00%，耐受組為34.10%，提示患有肌病病人的CYP3A5＊3高于耐受病人。一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，CYP3A4＊1B和CYP3A5＊3C與辛伐他汀治療后低密度脂蛋白膽固醇水平無(wú)關(guān)[16]。本研究未發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀引起的肌病與CYP3A5、COQ和SLCO1B1遺傳變異之間存在聯(lián)系，而瑞舒伐他汀引起肌病與COQ和SLCO1B1遺傳變異之間無(wú)顯著聯(lián)系。

一項(xiàng)針對(duì)76例病人肌肉不耐受的觀察性病例對(duì)照研究表明，瑞舒伐他汀治療不耐受與COQ2基因rs4693075多態(tài)性顯著相關(guān)[17]。有研究顯示，評(píng)估了793例病人(其中377例患有肌痛，416例未患肌痛)的31個(gè)候選基因，發(fā)現(xiàn)肌痛與COQ2(rs4693570)顯著相關(guān)[18]。本研究中，隱性和顯性模型中，肌病組和耐受組之間COQ多態(tài)性差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究局限性在于樣本量有限，且僅包括接受阿托伐他汀或瑞舒伐他汀慢性治療的病人，有必要增加樣本量和接受他汀類(lèi)藥物治療的血脂異常病人進(jìn)一步研究，并定期隨訪評(píng)估他汀類(lèi)藥物引起的肌病與基因型關(guān)系。

綜上所述，CYP3A5基因純合子非表達(dá)基因型與肌病有關(guān)，未發(fā)現(xiàn)CYP3A5、COQ和SLCO1B1遺傳變異與阿托伐他汀或瑞舒伐他汀引起的肌病之間存在關(guān)聯(lián)。