生長停滯特異性蛋白6與hs-CRP、cTnI對(duì)急性心肌梗死的診斷價(jià)值

劉鐵紅，董琳琳，高阿妮，胡國玲

（大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院老年科，遼寧 大連 116001）

急性心肌梗死（AMI）是臨床常見危重癥，以急性循環(huán)功能障礙、持續(xù)胸痛、休克、心肌酶譜及心電圖異常等主要改變[1]。目前，臨床多采用心電圖、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)結(jié)合臨床表現(xiàn)對(duì)AMI進(jìn)行診斷，但仍缺乏早期判斷AMI發(fā)生的敏感指標(biāo)。生長停滯特異性蛋白6（GAS6）屬于維生素K依賴蛋白家族成員之一，與受體酪氨酸激酶家族成員結(jié)合后發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡及炎性反應(yīng)等多種生物學(xué)作用[2]。有研究表明，GAS6可通過調(diào)控Toll樣受體及其細(xì)胞因子的分泌，參與動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)過程[3]。另有研究顯示，GAS6在冠心病患者血清中表達(dá)異常升高[4]。超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、心肌肌鈣蛋白（cTnI）是臨床評(píng)估AMI的常用實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)[5]。為此，本研究以AMI、穩(wěn)定心絞痛患者及健康受試者為研究對(duì)象，分析導(dǎo)致AMI發(fā)生的危險(xiǎn)因素，重點(diǎn)探討GAS6與hs-CRP、cTnI的相關(guān)性。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象樣本含量計(jì)算公式：n=Ψ2（Σsi2）/［Σ（-xi--x）2/（k-1）］，其中k為研究組數(shù)，-xi、si分別為各組均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差估計(jì)值，-x=Σ-xi/k，確定AMI患者、穩(wěn)定心絞痛患者及健康志愿者分別為99例、94例、54例，按照退出/失訪率10%計(jì)算后，3組最終納入110例、105例、60例，以保證樣本量充足。選擇2020年1月—2021年2月大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院老年科收治的110例AMI患者和105例穩(wěn)定心絞痛患者為研究對(duì)象，分別設(shè)為AMI組、穩(wěn)定心絞痛組。AMI組男性79例，女性31例，平均年齡（59.71±6.38）歲；穩(wěn)定心絞痛組男性71例，女性34例，平均年齡（60.35±9.57）歲；選擇同期我院體檢中心健康志愿者60例對(duì)照組，男性39例，女性21例，平均年齡（61.25±10.60）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：AMI組、穩(wěn)定心絞痛組患者分別符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的《急性冠脈綜合征急診快速診療指南》[6]和《穩(wěn)定性冠心病診斷與治療指南》[7]中的相應(yīng)診斷標(biāo)準(zhǔn)；AMI患者發(fā)病2 h內(nèi)入院；所有受試者對(duì)研究知情并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：接受經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療者；溶栓治療者；罹患惡性腫瘤者；合并急慢性炎癥性疾?。唤?個(gè)月服用抗炎藥物者；合并嚴(yán)重肝腎功能不全者；伴有心臟瓣膜病、心力衰竭或其他心臟疾病者；精神病史者；哺乳期或妊娠期女性；參與其他研究者。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過。

1.2 標(biāo)本采集AMI患者入院24 h內(nèi)采集空腹血5 mL，穩(wěn)定心絞痛患者及健康志愿者采集清晨空腹血5 mL，室溫靜置30 min后，離心（3 500 r/min，離心半徑12 cm，8 min）收集上層血清，6 h內(nèi)檢測(cè)。

1.3 血清GAS6、hs-CRP、cTnI水平檢測(cè)取待測(cè)血清樣品，采用GAS6酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（雙抗體一步夾心法）、hs-CRP測(cè)定試劑盒（免疫比濁法），嚴(yán)格按照說明書步驟操作，檢測(cè)血清GAS6、hs-CRP水平，試劑盒均購自南京卡米洛生物工程有限公司。采用mini-VIDAS全自動(dòng)免疫熒光酶標(biāo)儀（法國，梅里埃）及其配套試劑盒檢測(cè)血清中cTnI含量。

1.4 基線資料收集采用查閱病歷或問卷方式收集受試者臨床資料，包括性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)（BMI）、吸煙及飲酒史、合并癥，冠脈Gensini評(píng)分[8]。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)包括高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、血肌酐（Cr）、心肌肌鈣蛋白（cTnI，參考范圍0~0.3 μg/L）、腦鈉肽（BNP）等。參照冠脈Gensini評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[8]對(duì)研究對(duì)象的冠狀動(dòng)脈病變進(jìn)行評(píng)分，Gensini評(píng)分=狹窄率評(píng)分×病變部位系數(shù)，狹窄率和病變部位系數(shù)評(píng)估見表1。

表1 冠脈Gensini評(píng)分

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用M（P25，P75）表示，并采用Mann-Whitney U非參數(shù)檢驗(yàn)；符合正態(tài)分布的計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多樣本比較采用單因素方差分析，兩組比較采用SNK-q檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，多組間比較采用整體χ2檢驗(yàn)，進(jìn)一步兩兩比較采用χ2分割檢驗(yàn)；采用Logistic回歸分析法分析影響AMI發(fā)生的危險(xiǎn)因素；采用受試者工作特征曲線（ROC）分析GAS6對(duì)AMI的診斷價(jià)值，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 3組基礎(chǔ)資料的比較對(duì)照組、穩(wěn)定心絞痛和AMI組LDL-C、WBC、cTnI、BNP、GAS6、hs-CRP水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；AMI組LDL-C、WBC、cTnI、BNP、GAS6、hs-CRP水平高于穩(wěn)定心絞痛組和對(duì)照組，Gensini評(píng)分高于穩(wěn)定心絞痛組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；穩(wěn)定心絞痛組WBC、cTnI、BNP、GAS6、hs-CRP水平高于對(duì)照組（P<0.05），而穩(wěn)定心絞痛組與對(duì)照組LDL-C水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 AMI組、穩(wěn)定心絞痛組、對(duì)照組臨床資料的比較

2.2 AMI的危險(xiǎn)因素分析根據(jù)單因素分析結(jié)果，以 可能導(dǎo)致AMI發(fā)生的因素為自變量進(jìn)行賦值，包括Gensini評(píng) 分、LDL-C、WBC、cTnI、BNP、GAS6、hs-CRP，均賦值為連續(xù)變量，以是否發(fā)生AMI為因變量（發(fā)生=1，未發(fā)生=0），進(jìn)行Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，Gensini評(píng) 分[OR=2.119(1.186~3.785)]、cTnI[OR=2.264(1.267~4.043)]、BNP[OR=2.248(1.137~5.463)]、GAS6[OR=2.351(1.316~4.200)]、hs-CRP[OR=4.465(2.380~6.401)]均是導(dǎo)致AMI發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見表3。

表3 AMI的危險(xiǎn)因素分析

2.3 GAS6、hs-CRP、cTnI對(duì)AMI的診斷價(jià)值分析ROC分析結(jié)果顯示，GAS6、hs-CRP、cTnI診斷AMI最佳截?cái)帱c(diǎn)分別為15.75 μg/L、13.74 mg/L、1.29 μg/L，ROC曲線下面積（AUC）分別為0.878(0.827~0.919)、0.863(0.810~0.906)、0.931(0.889~0.961)，GAS6與cTnI、hs-CRP比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=1.675，P=0.094；Z=0.551，P=0.582）；hs-CRP與cTnI比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=2.732，P=0.006）。見表4和圖1。

圖3 GAS6與hs-CRP、cTnI診斷AMI的ROC曲線

表4 GAS6與hs-CRP、cTnI對(duì)AMI的診斷價(jià)值

3 討論

AMI已成為危害人們生命健康的主要心血管疾病之一，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及冠狀動(dòng)脈粥樣硬化、炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激等多種機(jī)制，各機(jī)制相互作用，促進(jìn)疾病的發(fā)生和發(fā)展[9-10]。AMI表現(xiàn)為急性閉塞性血流中斷、心肌局部持續(xù)缺血，心肌細(xì)胞損傷，細(xì)胞膜通透性改變，細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)物釋放至外周循環(huán)血[11]。AMI病情危重、死亡風(fēng)險(xiǎn)高，因此，尋找外周循環(huán)血中可反映病情發(fā)生和發(fā)展的血清標(biāo)志物，對(duì)臨床AMI的診治十分重要[12]。

GAS6主要分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等細(xì)胞中，參與細(xì)胞中多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在細(xì)胞增殖、機(jī)體炎癥反應(yīng)等多種生物學(xué)過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用[13]。GAS6屬于分泌型蛋白，在細(xì)胞周期的生長停滯期高表達(dá)，G0期表達(dá)量升高約30倍[14]。有研究發(fā)現(xiàn)，GAS6可通過自分泌和旁分泌方式參與缺氧缺血性心臟病大鼠心肌細(xì)胞凋亡過程[15]。Caldentey等[16]研究發(fā)現(xiàn)，ST段抬高心肌梗死患者血清GAS6水平異常升高，且參與左心室重構(gòu)的發(fā)生發(fā)展過程。Holden等[17]對(duì)接受冠狀動(dòng)脈造影的門診患者研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病、肥胖等具有不良心血管風(fēng)險(xiǎn)特征的患者血清GAS6水平更高，且GAS6與動(dòng)脈斑塊高度和斑塊總面積相關(guān)，提示GAS6在動(dòng)脈粥樣硬化形成過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用。本研究發(fā)現(xiàn)，AMI組cTnI、BNP、GAS6、hs-CRP水平及Gensini評(píng)分均高于穩(wěn)定心絞痛組，提示GAS6在AMI患者血清中高表達(dá)。上述研究與本研究結(jié)果均提示，AMI發(fā)病導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷，心肌細(xì)胞凋亡率升高，使GAS6大量釋放進(jìn)行外周血液循環(huán)，說明GAS6可能參與心室重構(gòu)、動(dòng)脈粥樣硬化形成等過程。

為排除混雜因素的影響，本研究經(jīng)Logistic回歸分析，Gensini評(píng)分、cTnI、BNP、GAS6、hs-CRP均是導(dǎo)致AMI發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。GAS6可促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞分泌促生長因子，從而利于血管平滑肌細(xì)胞增殖，參與動(dòng)脈粥樣硬化形成及血管狹窄的發(fā)生。Chen等[18]動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，GAS6基因敲除小鼠模型較野生型小鼠細(xì)胞衰老加快，血管重塑加快，提示GAS6與血管僵硬有關(guān)。血管損傷后，血管平滑肌細(xì)胞增殖、聚集于血管結(jié)締組織是引起血管重塑的主要原因，也是導(dǎo)致AMI發(fā)生的主要原因[19]。因此，AMI患者血清GAS6表達(dá)上調(diào)，增加了AMI發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。hs-CRP屬于急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，cTnI是反應(yīng)心肌損傷的特異性指標(biāo)，AMI發(fā)病后異常升高，參與病情進(jìn)展，hs-CRP和cTnI均是評(píng)估心肌損傷的重要指標(biāo)，同時(shí)也是傳統(tǒng)診斷AMI的實(shí)驗(yàn)室血清指標(biāo)。此外，本研究提示，GAS6與cTnI對(duì)AMI的診斷效能相當(dāng)，且優(yōu)于hs-CRP。本研究中cTnI、hs-CRP對(duì)AMI的診斷效能與既往報(bào)道相近[20]。說明臨床中可結(jié)合GAS6評(píng)估患者病情，為AMI的臨床診治提供參考。

綜上所述，GAS6在AMI患者中異常高表達(dá)，且是AMI發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，與AMI患者病情發(fā)展密切相關(guān)，可為臨床AMI的診斷及治療提供參考價(jià)值。