SFC-Q-TOF-MS法鑒定4種家畜乳甘油三酯及特征分析

劉宇婷，王越男，郭 軍,，郭保民，米智慧

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；3.內(nèi)蒙古迪安豐信醫(yī)療科技有限責(zé)任公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010091）

三?；视停╰riacylglycerols，TAGs）即甘油三酯，是乳中含量最高的脂類，占總脂肪的98%以上，其組成影響乳及乳制品的物理性質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[1]。對(duì)乳脂TAGs組成進(jìn)行分析是一項(xiàng)非常具有挑戰(zhàn)性的工作，乳脂是自然界中脂類成分最復(fù)雜的物質(zhì)[2]，其脂肪酸組成及含量極易受到產(chǎn)乳動(dòng)物的品種、泌乳期、季節(jié)、地域和飼料等多種因素的決定或影響[3]，且甘油骨架上存在多種脂肪酸組合形式，因此會(huì)產(chǎn)生大量的TAGs種類[4]，另外TAGs研究缺乏種類齊全的理想標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[2]，這些都對(duì)TAGs分離和鑒定帶來很大難度。近年來超臨界流體色譜等新型色譜分離技術(shù)和多維質(zhì)譜等檢測(cè)鑒定技術(shù)的迅速發(fā)展，使越來越多研究者開始關(guān)注母乳脂肪、血脂及其他油脂TAGs的構(gòu)成和特征研究[5-7]。

目前TAGs的常用分離方法有高溫氣相色譜法[8]、反相高效液相色譜法[9]、銀離子高效液相色譜法[6]和二維液相色譜法[10]，與質(zhì)譜儀聯(lián)用實(shí)現(xiàn)TAGs的鑒定和含量測(cè)定。這些色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法都有準(zhǔn)確分析TAGs的潛力，但也存在明顯的局限性，如操作繁瑣、分辨率差和分析周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)[11-12]。超臨界流體色譜（supercritical fluid chromatography，SFC）兼有液相色譜和氣相色譜的優(yōu)點(diǎn)，具有綠色、低成本、分離速度快和分辨率高等優(yōu)勢(shì)，特別適合非極性和低極性化合物的分析。SFC一般采用超臨界流體CO2作為流動(dòng)相，其溶解能力類似于液相色譜的液體流動(dòng)相，而其黏度和擴(kuò)散性則與氣相色譜載氣相似，更有利于傳質(zhì)，不需要過高的溫度即可實(shí)現(xiàn)分離[13]。CO2作為流動(dòng)相廉價(jià)且無毒，節(jié)省了廢液處理環(huán)節(jié)，極大的節(jié)省了科研成本，保護(hù)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)人員的健康[14-15]。SFC與四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（quadruple timeof-flight mass spectrometry，Q-TOF-MS）聯(lián)用則無需標(biāo)準(zhǔn)品，利用質(zhì)譜提供的準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)據(jù)和特征碎片離子即可進(jìn)行分子結(jié)構(gòu)分析，具有靈敏度高、穩(wěn)定性高和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，但目前在TAGs分析中應(yīng)用報(bào)道還較少[16-17]。

本研究旨在探明我國(guó)常見荷斯坦牛、山羊、蒙古馬和雙峰駝乳的TAGs種類和構(gòu)成特征，以期為乳品營(yíng)養(yǎng)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫提供有參考價(jià)值的數(shù)據(jù)，為家畜乳TAGs角度營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)，以及乳的物種、飼養(yǎng)方式、產(chǎn)地和加工方式真實(shí)性判別和鑒定研究做前期工作和提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

原乳樣品共采集31 份，其中荷斯坦牛乳6 份（即黑白花牛乳，采自內(nèi)蒙古巴彥淖爾市圣牧乳業(yè)6 個(gè)牧場(chǎng)），山羊乳5 份（采自內(nèi)蒙古鄂爾多斯市烏審旗2 個(gè)嘎查），馬乳10 份（采自內(nèi)蒙古錫林郭勒盟、呼倫貝爾市鄂溫克旗和鄂爾多斯市烏審旗5 家牧戶），雙峰駝10 份（采自內(nèi)蒙古呼倫貝爾草原和阿拉善左旗巴彥浩特2 家牧戶）。原乳樣品采集后現(xiàn)場(chǎng)液氮冷卻，放于－18 ℃以下冰柜中冷凍保藏，測(cè)定時(shí)在室溫環(huán)境下解凍和均質(zhì)后取樣檢測(cè)。

1.2 試劑與儀器

甲醇、乙腈（均為質(zhì)譜純），正己烷、甲酸（均為色譜純） 美國(guó)Fisher公司；高純二氧化碳（純度≥99.999%） 北京如源如泉科技有限公司。

Xevo?G2-S SFC-Q-TOF-MS聯(lián)用儀 美國(guó)Waters公司。

1.3 方法

1.3.1 TAGs的提取

準(zhǔn)確量取100 μL乳樣于10 mL塑料離心管中，再加入2 mL正己烷萃取劑，室溫條件下渦旋離心2 min，之后8 000 r/min離心10 min，靜置分層，吸取約1 mL上清液，過0.22 μm尼龍濾膜至進(jìn)樣瓶中待測(cè)。

1.3.2 色譜條件

色譜柱：Acquity UPC2BEH-2EP（100 mm×3.0 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相：A相為超臨界CO2，B相為甲醇-乙腈-甲酸溶液（50∶50∶0.2，V/V）。梯度洗脫：0～2 min，99.9% A、0.1% B；2～6 min，99.9%～99% A、0.1%～1% B；6～9 min，99%～98% A、1%～2% B；9～15 min，98% A、2% B；15～20 min，98%～93% A、2%～7% B；20～24 min，93%～80% A、7%～20% B；24～24.5 min，80%～99.9% A、20%～0.1% B；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量1 μL；柱溫50 ℃；背壓1 700 psi。

1.3.3 質(zhì)譜條件

電噴霧電離源正離子模式，在全信息串聯(lián)質(zhì)譜模式下采集m/z50～2 000范圍內(nèi)的物質(zhì)（分析截取m/z400～1 000）；毛細(xì)管電壓3.0 kV；錐孔電壓25 V；錐孔氣流量20 L/h；離子源溫度120 ℃；脫溶劑氣為氮?dú)?，流?00 L/h；碰撞氣為氬氣；低碰撞能量4 eV，高碰撞能量20～60 eV；數(shù)據(jù)采集時(shí)間共25 min；數(shù)據(jù)采集軟件為Waters UNIFI。

1.3.4 TAGs的鑒定

質(zhì)譜分析采用全信息串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，一次進(jìn)樣可獲得高低能質(zhì)譜圖，即一次性獲得樣品準(zhǔn)分子離子和對(duì)應(yīng)碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)據(jù)。根據(jù)低能模式下獲得的準(zhǔn)分子離子峰[M＋NH4]＋的精確質(zhì)量數(shù)初步推斷該分子的相對(duì)分子質(zhì)量，再結(jié)合高能模式下獲得的碎片離子[M＋H－FA]＋值識(shí)別甘油骨架上結(jié)合的3 個(gè)脂肪酸，同時(shí)依據(jù)碎片離子的相對(duì)豐度推測(cè)占據(jù)sn-2位的脂肪酸類型，最終鑒定出TAGs的種類。TAGs根據(jù)脂肪酸的簡(jiǎn)稱（表1）及其在sn-1、sn-2和sn-3位的排列順序命名，通常認(rèn)為與sn-1/sn-3位脂肪酸相比，裂解sn-2位脂肪酸需要更多的能量，因此在sn-2位丟失脂肪酸后產(chǎn)生的碎片離子比丟失sn-1/sn-3位脂肪酸產(chǎn)生的碎片離子豐度低，這有利于推斷樣品中TAGs分子的sn-2位脂肪酸，由于非手性方法無法區(qū)分sn-1和sn-3的對(duì)映異構(gòu)體，故將其視為相同，命名時(shí)按脂肪酸分子質(zhì)量從大到小排列[10,18-21]。

表1 常見脂肪酸的名稱、簡(jiǎn)稱、分子式及相對(duì)分子質(zhì)量信息Table 1 Abbreviations, formulas and relative molecular masses of common fatty acids

1.4 數(shù)據(jù)整理分析

用儀器自帶Masslynx V4.1軟件采集、形成和分析質(zhì)譜圖。參數(shù)設(shè)置：質(zhì)量窗口：20 mDa；保留時(shí)間窗口：0.5 min；強(qiáng)度閾值：10 000 counts；5%峰高的峰寬：1.00 s；除燥程度：6.00。

利用乳脂肪基峰離子色譜（base-peak ion chromatogram，BPI）圖和每個(gè)離子色譜峰的低能和高能質(zhì)譜圖鑒定TAGs分子結(jié)構(gòu)，用BPI圖面積歸一化法計(jì)算每一種TAGs的相對(duì)含量。所有乳樣鑒定出的TAGs種類和相對(duì)含量數(shù)據(jù)表導(dǎo)入化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件Pirouette 4.5（美國(guó)Infometrix公司）進(jìn)行主成分分析（principal component analysis，PCA），觀察4種家畜乳以TAGs聚類的特征，并觀察每一種家畜乳特有的TAGs，快速找到物種共有和特異TAGs，可提升統(tǒng)計(jì)比較的效率。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜圖

牛、山羊、馬和駱駝乳全部樣品TAGs的BPI見圖1。同物種不同樣品BPI圖形狀一致性較高，且有明顯的物種特異形態(tài)。牛乳的色譜峰呈雙駝峰狀分布，出峰時(shí)間集中在5～12 min，其他3種動(dòng)物乳TAGs BPI圖呈單駝峰狀分布。山羊乳的色譜峰數(shù)量多且密集，出峰時(shí)間集中在4.5～12 min；馬乳的色譜峰豐度逐漸升高，出峰時(shí)間集中在6～14 min；駱駝乳的色譜峰數(shù)量最少，出峰時(shí)間集中在8～12 min。BPI圖提示牛、山羊、馬和駱駝4種家畜乳TAGs分子構(gòu)成有顯著區(qū)別，因此營(yíng)養(yǎng)生理作用也有所不同，提示家畜乳TAGs指紋的物種鑒別潛力很大。QC樣品的總離子色譜圖保留時(shí)間和峰面積重疊情況見圖2，重復(fù)性較好。

圖1 牛（a）、山羊（b）、馬（c）和駱駝（d）乳脂肪TAGs基峰離子色譜圖Fig.1 Base-peak ion chromatograms of TAGs in cow (a), goat (b),horse (c) and camel (d) milk fat

圖2 QC樣品的總離子色譜圖Fig.2 Total ion chromatograms of quality control samples

2.2 TAGs的鑒定

根據(jù)1.3.4節(jié)方法對(duì)BPI圖每個(gè)峰的高低能質(zhì)譜圖進(jìn)行分析，鑒定其分子結(jié)構(gòu)。例如由圖3a可知該準(zhǔn)分子離子[M＋NH4]＋的m/z766.907 8，由圖3b可知，豐度高的碎片離子[M＋H－FA]＋的m/z467.537 8、577.683 7和493.560 2；[M＋NH4]＋的質(zhì)量減去1 個(gè)NH4＋的相對(duì)分子質(zhì)量（18），加上1 個(gè)H＋的質(zhì)量，再減去1 個(gè)碎片離子的質(zhì)量即可得到丟失脂肪酸的質(zhì)量，從而推算出該TAGs分子由油酸（O）、癸酸（C）和棕櫚酸（P）組成，對(duì)應(yīng)的碎片離子為[P－C]＋、[O－P]＋和[O－C]＋。[O－C]＋豐度最低所以棕櫚酸占據(jù)sn-2位，油酸質(zhì)量數(shù)大于癸酸，故推測(cè)該TAGs分子為O-P-C，分子式為C47H88O6。由于乳中的TAGs成分十分復(fù)雜，會(huì)有一些共流出物質(zhì)和同分異構(gòu)體，導(dǎo)致碎片離子數(shù)不止3 個(gè)，這給確定TAGs分子構(gòu)成帶來復(fù)雜性和難度。對(duì)共流出物質(zhì)的識(shí)別是通過將準(zhǔn)分子離子與碎片離子一一對(duì)應(yīng)，將不符合脂肪酸相對(duì)分子質(zhì)量的碎片離子剔除。推算出該分子的脂肪酸構(gòu)成后會(huì)進(jìn)行反推驗(yàn)證，甘油的相對(duì)分子質(zhì)量（92）加上推測(cè)出的3 個(gè)脂肪酸的質(zhì)量，減去酯化反應(yīng)脫去3 個(gè)H2O分子的質(zhì)量，再加上1 個(gè)NH4＋的質(zhì)量后需與準(zhǔn)分子離子[M＋NH4]＋的質(zhì)量數(shù)一致才能認(rèn)定為TAGs分子。BPI圖中的1 個(gè)峰，也可能有幾種分子質(zhì)量一樣的TAGs，例如圖4a馬乳樣品中6.95 min流出的物質(zhì)其準(zhǔn)分子離子峰m/z為656.743 7，在圖4b高碰撞能量下準(zhǔn)分子離子碎裂形成幾個(gè)碎片離子，包括m/z439.488 1、467.524 5、411.446 6、383.407 5、495.557 5，對(duì)應(yīng)的5 個(gè)脂肪酸的相對(duì)分子質(zhì)量為200、172、228、256和144，即月桂酸（La）、癸酸（C）、肉豆蔻酸（M）、棕櫚酸（P）和辛酸（Cy），它們能構(gòu)成La-La-La、P-Cy-La、La-M-C、M-M-Cy和P-C-C 5種TAGs分子。該實(shí)驗(yàn)還分離識(shí)別出一部分不同出峰時(shí)間的同分異構(gòu)體對(duì)，比如圖5a低能質(zhì)譜圖在牛乳樣品中7.57 min流出的物質(zhì)其準(zhǔn)分子離子峰m/z為684.819 3，在圖5b高能質(zhì)譜圖中碎片離子m/z為411.471 5和551.666 9，而在圖5c 7.68 min流出的物質(zhì)其準(zhǔn)分子離子峰m/z684.819 3，在圖5d高能質(zhì)譜圖中碎片離子m/z383.427 6、411.471 5和579.706 4，經(jīng)計(jì)算這兩個(gè)色譜峰為同分異構(gòu)體P-P-Co和S-Bu-P分子。

圖3 O-P-C TAGs的低能質(zhì)譜圖（a）和高能質(zhì)譜圖（b）Fig.3 Mass spectra of TAGs O-P-C under low collision energy (a) and high collision energy (b)

圖4 La-La-La、P-Cy-La、La-M-C、M-M-Cy和P-C-C 5種TAGs低能質(zhì)譜圖（a）和高能質(zhì)譜圖（b）Fig.4 Mass spectra of TAGs La-La-La, P-Cy-La, La-M-C, M-M-Cy and P-C-C under low collision energy (a) and high collision energy (b)

圖5 同分異構(gòu)體P-P-Co和S-Bu-P的質(zhì)譜圖Fig.5 Mass spectra of isomers of P-P-Co and S-Bu-P

2.3 4種家畜乳TAGs鑒定結(jié)果

4種家畜乳鑒定出的TAGs種類和參數(shù)匯總結(jié)果見表2，具體種類和相對(duì)含量（各物種樣品的平均值）結(jié)果見表3。共鑒定出145種TAGs，牛、山羊、馬和駱駝乳分別鑒定出60、66、74種和44種TAGs。

表2 4種家畜乳TAGs的匯總結(jié)果Table 2 Summary of TAGs in four milks

表3 4種家畜乳TAGs的種類及相對(duì)含量Table 3 Types and relative contents of TAGs in four milks

續(xù)表3

續(xù)表3

4種家畜乳TAGs相對(duì)分子質(zhì)量在470～888之間，酰基碳總鏈數(shù)為24～54；駝乳TAGs相對(duì)分子質(zhì)量整體較大，在638～888之間，?；伎傛湐?shù)也最長(zhǎng)，在36～54之間，說明主要有長(zhǎng)鏈脂肪酸構(gòu)成；而山羊乳小分子質(zhì)量TAGs較多，最低為470，?；伎傛湐?shù)為24～54，提示有較多中短鏈脂肪酸參與其分子構(gòu)成。

有14種碳數(shù)4～20，雙鍵數(shù)0～3的脂肪酸參與了4種家畜乳TAGs的構(gòu)成。本實(shí)驗(yàn)在牛乳和山羊乳中檢測(cè)到的TAGs由12種脂肪酸組成，分別是丁酸（Bu）、己酸（Co）、辛酸（Cy）、癸酸（C）、月桂酸（La）、肉豆蔻酸（M）、十五烷酸（Pe）、棕櫚酸（P）、棕櫚油酸（Po）、硬脂酸（S）、油酸（O）和亞油酸（L），除以上12種脂肪酸外，僅在馬乳和駱駝乳中檢測(cè)到由必需脂肪酸亞麻酸（Ln）組成的TAGs，并僅在馬乳中檢測(cè)到由二十烯酸（E）組成的TAGs，但未檢測(cè)到十五烷酸（Pe）。山羊乳和牛乳的TAGs最多含4 個(gè)雙鍵，駱駝乳最多含5 個(gè)雙鍵，馬乳最多可含9 個(gè)雙鍵。

2.3.1 4種家畜乳TAGs飽和度的比較

根據(jù)4種家畜乳TAGs分子的雙鍵數(shù)可分成10 組，見圖6。牛乳、山羊乳、馬乳和駱駝乳中多不飽和TAGs相對(duì)含量依次為14.12%、8.93%、67.08%和21.5%，單不飽和TAGs相對(duì)含量依次為37.55%、34.89%、15.13%和39.6%，飽和TAGs相對(duì)含量依次為48.34%、56.18%、17.79%和38.9%。

圖6 不同雙鍵數(shù)TAGs在4種家畜乳中相對(duì)含量的比較Fig.6 Comparison of relative contents of TAGs with different double bonds in four milks

2.3.2 4種家畜乳中主要的TAGs

4種家畜乳相對(duì)含量大于4%的TAGs匯總見表4。在本實(shí)驗(yàn)鑒定出的TAGs分子中發(fā)現(xiàn)駱駝乳中的每種TAGs分子至少包含肉豆蔻酸（M）、棕櫚酸（P）、硬脂酸（S）和油酸（O）中的一種，而含量高（≥4%）的幾種TAGs全部由M、P、S和O組成；馬乳中含量高的TAGs都由Ln參與構(gòu)成；山羊乳中含量高的TAGs都由飽和脂肪酸組成。

表4 4種家畜乳主要的TAGs及其相對(duì)含量Table 4 Major TAGs and relative contents in four milks

2.4 PCA

4種家畜乳樣品TAGs的PCA結(jié)果見圖7。4種家畜乳在二維空間以物種聚類，距離遠(yuǎn)近符合物種分類遠(yuǎn)近（圖7a）。同屬?？频呐：蜕窖蛉闃悠肪垲惞餐植加赑C2軸上方，且聚類簇距離最近；馬乳和駱駝乳分別聚類在另兩個(gè)區(qū)域且相距較遠(yuǎn)。由圖7b可知，牛乳的特征TAGs分子為O-Bu-P、P-M-Bu、P-P-Co和P-M-Co；山羊乳的特征TAGs分子為P-P-Bu、P-Co-C、P-Cy-M/P-C-La/M-La-La和O-C-Bu；馬乳的特征TAGs分子為O-C-L、Ln-P-Cy、Ln-P-C、O-P-Ln和Ln-P-Ln；駱駝乳的特征TAGs分子為P-P-M、O-M-P、O-P-P、M-P-S/P-P-P和S-P-P，與表3直接分析統(tǒng)計(jì)結(jié)果一致，即對(duì)TAGs鑒定結(jié)果的PCA，有助于快速找到每個(gè)物種的特征TAGs，從而提高對(duì)比分析效率。PCA結(jié)果也能看出，每個(gè)物種聚類簇樣品散點(diǎn)比較集中，說明每個(gè)物種乳樣雖然來自不同地區(qū)或牧場(chǎng)、不同個(gè)體，但TAGs種類和構(gòu)成一致性較高。

圖7 4種家畜乳TAGs特征PCA圖Fig.7 PCA score and root plots of TAGs in four milks

3 討 論

本研究馬乳中不飽和TAGs相對(duì)含量高達(dá)82.2%，其中必需脂肪酸Ln和L參與構(gòu)成的TAGs相對(duì)含量分別為45.43%和21.05%，國(guó)內(nèi)外鮮見馬乳TAGs的系統(tǒng)研究報(bào)道，但馬乳和肉脂肪酸特征研究較多。馬奶原乳和干粉樣品中不飽和脂肪酸（C18:2和C18:3）含量（19%～25%）都比牛乳（2%～4%）高，尤其α-亞麻酸可以作為馬乳的標(biāo)志性特征[22-23]。人乳脂中也含有較高含量的不飽和脂肪酸（＞50%）[24]，馬乳不飽和脂肪酸比例比牛乳更接近人乳[25]。不飽和脂肪酸對(duì)膽固醇代謝有很好效果，可以通過抑制血液中膽固醇沉積和溶解膽固醇結(jié)石降低組織和血液膽固醇含量[23]。在一些國(guó)家經(jīng)常用馬乳替代牛乳，為牛乳過敏兒童提供營(yíng)養(yǎng)[26]。本研究駱駝乳脂肪中所有TAGs分子至少包含肉豆蔻酸（M）、棕櫚酸（P）、硬脂酸（S）和油酸（O）中的一種，而含量高（≥4%）的幾種TAGs全部由M、P、S和O組成，這與Haddad等[27]研究基本一致，其報(bào)道駱駝乳99%的TAGs分子至少由M、P、S和O 4種主要脂肪酸中的一種組成。Haddad[27]和Ali[28]等先前還報(bào)道C14:0-C16:0-C18:0（M-P-S）和酰基鏈總碳數(shù)與雙鍵數(shù)為48∶1的TAGs在駱駝乳中最豐富，本研究駝乳M-P-S和O-M-P兩種TAGs含量高達(dá)9.59%和8.44%。高希西[18]報(bào)道人乳中含量最高的10種TAGs分別是O-P-O、O-P-L、P-O-P、L-P-O、S-P-O、P-L-P、O-O-O、L-P-L、O-L-O和O-M-O，約占人乳TAGs總量的60%[9,18]，其中含量最高的為O-P-O占14.83%。目前提倡嬰幼兒配方乳粉強(qiáng)化O-P-O以使產(chǎn)品的油脂更接近母乳[29]，本研究發(fā)現(xiàn)駱駝乳脂肪中O-P-O含量最高，為5.04%，而山羊乳脂肪含量?jī)H為1.8%；而母乳中最豐富的10種TAGs在駱駝乳中同樣最豐富，高達(dá)26.07%；郭軍等[30]綜述駝乳脂肪酸的組成與其他反芻動(dòng)物存在較大差異，而與人乳有很大的相似性，可見駝乳脂肪TAGs更適合在嬰幼兒乳粉中添加。Ali等[28]研究發(fā)現(xiàn)山羊奶中己酸（Co）、辛酸（Cy）和癸酸（C）含量較高，由它們參與構(gòu)成的TAGs也是山羊乳脂中含量最高的組分。本研究中山羊乳含量最高的幾種TAGs均有這3種脂肪酸參與構(gòu)成，與長(zhǎng)鏈脂肪酸相比，中短鏈脂肪酸會(huì)優(yōu)先被腸道吸收[31]。馬乳和駱駝乳營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高，倍受消費(fèi)者青睞，需求量遠(yuǎn)大于產(chǎn)量，因而價(jià)格也遠(yuǎn)高于牛乳和山羊乳。如何提高產(chǎn)奶量并保障產(chǎn)品品質(zhì)和真實(shí)性是當(dāng)前值得關(guān)注和研究的問題。

本研究發(fā)現(xiàn)家畜乳TAGs組成有顯著的物種分類學(xué)特征，本研究對(duì)4種家畜乳，尤其蒙古馬和雙峰駝等乳脂肪中的TAGs構(gòu)成進(jìn)行了較系統(tǒng)的測(cè)定和分析，評(píng)價(jià)了4種常見家畜乳脂肪TAGs的特征，也豐富了家畜乳營(yíng)養(yǎng)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫。同時(shí)本研究結(jié)果提示TAGs指紋有望用于特種家畜乳真實(shí)性鑒別。

本研究在利用質(zhì)譜圖分析鑒定TAGs、4 個(gè)物種TAGs比較中結(jié)合或引入了聚類分析和分類分析，PCA和軟獨(dú)立模式分類效果很好，可直觀觀察物種以TAGs或質(zhì)譜數(shù)據(jù)在二維空間聚類特征，并根據(jù)根向量圖及聚類貢獻(xiàn)率分析表，可直觀快速確定物種差異TAGs，大大提高了TAGs質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析通量和鑒定的速度。乳脂肪TAGs及其質(zhì)譜指紋數(shù)據(jù)值得深入挖掘和研究，其獨(dú)特性有望用于特種家畜乳真實(shí)性判別和產(chǎn)品追溯。劉莉敏等[32]報(bào)道質(zhì)譜指紋可用于蜂膠真實(shí)性的判別，劉夢(mèng)靜等[33]報(bào)道綿羊肉的脂肪酸指紋與放牧舍飼相關(guān)，TAGs指紋應(yīng)該也能做到，因?yàn)門AGs與乳脂肪酸類似，易隨物種、飼養(yǎng)方法、地理環(huán)境及氣候條件、年齡和胎次不同而變化，而且TAGs有3 個(gè)脂肪酸組合構(gòu)成，因此TAGs組潛藏著豐富的信息，有待研究和解碼。

4 結(jié) 論

本研究采用SFC-Q-TOF-MS法結(jié)合PCA對(duì)荷斯坦牛、山羊、蒙古馬和雙峰駝乳4種家畜乳的TAGs組成進(jìn)行鑒定和分析，共鑒定出145種TAGs，其中牛、山羊、馬和駱駝乳分別鑒定出60、66、74種和44種TAGs。4種家畜乳的基峰色譜圖差異明顯。對(duì)TAGs進(jìn)行PCA 4種家畜乳樣品以物種聚類明顯分離，距離遠(yuǎn)近符合物種分類遠(yuǎn)近。本研究為更全面地認(rèn)識(shí)我國(guó)荷斯坦牛、山羊、蒙古馬和雙峰駝乳的TAGs組成特征提供參考，豐富乳營(yíng)養(yǎng)成分?jǐn)?shù)據(jù)，為家畜乳TAGs角度營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)提供參考，本研究也提示TAGs可用于建模判別家畜乳物種真實(shí)性，或可建立模型判別飼養(yǎng)模式和環(huán)境。