食管癌診斷、分期和預(yù)后中多腫瘤抑制基因-1、分泌素-3A1的表達(dá)研究

韓曉亮

（安陽(yáng)市第五人民醫(yī)院消化內(nèi)科，河南 安陽(yáng) 455000）

食管癌又稱為食道癌，是發(fā)生在食管粘膜上皮組織的惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的2%[1]。隨著年輕群體生活習(xí)慣的改變，近年來(lái)食管癌的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)[2]，因此，對(duì)食管癌的疾病相關(guān)的細(xì)胞分子進(jìn)行研究對(duì)提高患者診斷、治療及預(yù)后具有積極意義。多項(xiàng)臨床研究表明：細(xì)胞周期的改變是導(dǎo)致組織發(fā)生癌變的主要原因，而癌基因及抑癌基因不僅在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有決定性意義， 而且在腫瘤的早期診斷及防治中扮演著越來(lái)越重要的角色[3-5]。有食管癌相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，多腫瘤抑制基因-1（Multiple tumor suppress-1，MTS-1）及分泌素-3A1（Secretoglobin 3A1，SCGB3A1）在食管癌病程發(fā)展中發(fā)揮了重要作用[6]，但具體相關(guān)性尚未明確[7]。本研究通過(guò)對(duì)本院確診為食管癌的79例患者進(jìn)行回顧性分析，探究MTS-1、SCGB3A1的表達(dá)在患者的臨床病理診斷及預(yù)后中的作用，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析我院2014年10月至2017年10月期間收治的79例食管癌患者的臨床資料，其中男性46例，女性33例，年齡21～74歲，平均年齡 61.38±7.21歲，病程為 1～18 m，平均病程為9.06±1.14 m。根據(jù)臨床分期[8]可知，31例患者處于鼻咽癌I～Ⅱ期，48例患者處于Ⅲ～Ⅳ期。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合食管癌診斷標(biāo)準(zhǔn)且經(jīng)病理檢查結(jié)果證實(shí)[9]；術(shù)前未接受過(guò)抗癌輔助治療，臨床資料均完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病；妊娠期或哺乳期女性；合并全身其它類型惡性腫瘤。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理會(huì)審核通過(guò)，臨床資料均完整。

1.2 S-P免疫組化染色檢測(cè)MTS-1和SCGB3A1

1.2.1 組織標(biāo)本采取

79 例食管癌患者均于我院在胸腔鏡下行微創(chuàng)手術(shù)治療，于術(shù)中留取79份食管腫瘤組織及79份癌旁 5 cm處正常食管黏膜組織標(biāo)本作為研究對(duì)象。

1.2.2 檢測(cè)方法

采用S-P免疫組化染色法測(cè)定腫瘤組織以及癌旁組織MTS-1和SCGB3A1的表達(dá)情況。具體方法：組織切片經(jīng)常規(guī)脫蠟和水化后，用3%過(guò)氧化氫去除內(nèi)源性酶，經(jīng)微波抗原修復(fù)，加入兔抗人MTS-1單克隆抗體和SCGB3A1單克隆抗體，行DAB顯色，蘇木精復(fù)染，光鏡下觀察結(jié)果。分別用已知的陽(yáng)性食管癌組織切片作陽(yáng)性對(duì)照，正常小鼠和兔血清及 PBS代替一抗作陰性對(duì)照。MTS-1、SCGB3A1蛋白免疫組織學(xué)結(jié)果判定[10]：由兩位病理科醫(yī)生在400倍光鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野對(duì)染色細(xì)胞數(shù)量和染色程度進(jìn)行評(píng)分，其中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量＜1%為 0分，1%～10%為 1分，11%～50%為2分，50%以上為3分；染色無(wú)染色為0分，弱陽(yáng)性顯黃色為1分，中等陽(yáng)性顯淺棕色為2分，強(qiáng)陽(yáng)性顯棕褐色為3分。將兩者所得分?jǐn)?shù)合計(jì)：無(wú)表達(dá)或低表達(dá)：0～3分，高表達(dá)：4～6分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，采用t檢驗(yàn)；各項(xiàng)計(jì)數(shù)資料以百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。若P＜0.05，代表兩組比較存在明顯差異。

2 結(jié)果

2.1 MTS-1及 SCGB3A1蛋白在食管癌癌組織和癌旁組織的表達(dá)水平分析

MTS-1、SCGB3A1在癌組織中的高表達(dá)率分別為27.85%、77.22%，對(duì)應(yīng)的癌旁組織中高表達(dá)率分別為79.75%和22.52%，癌組織中MTS-1的表達(dá)低于癌旁組織，SCGB3A1表達(dá)水平低于癌旁組織 (P＜0.05)，見(jiàn)表1、表2。

表1 食管癌癌組織中MTS-1的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系（n（%））

表2 食管癌癌組織中SCGB3A1的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系（n（%））

2.2 食管癌患者M(jìn)TS-1、SCGB3A1蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析

經(jīng) Spearman相關(guān)進(jìn)行分析，食管癌患者M(jìn)TS-1、SCGB3A1的表達(dá)水平與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度呈負(fù)相關(guān)，與瘤分化程度呈正相關(guān)(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3 食管癌患者M(jìn)TS-1、SCGB3A1的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析

2.3 預(yù)后情況

隨訪2年后，79例結(jié)食管癌患者2年總生存率73.42%（58/79）。MTS-1高表達(dá)和低表達(dá)的2年總生存率分別為 95.45%（21/22）、64.91%（37/57），具有明顯差異（χ2=7.587，P=0.006）；SCGB3A1高表達(dá)和低表達(dá)的 2年總生存率分別為 94.12%（16/17）、67.74%（42/62），具有明顯差異（χ2=4.756，P=0.029）。

3 討論

我國(guó)是食管癌的高發(fā)地區(qū)，也是食管癌病死率最高的國(guó)家之一，由于食管癌早期的臨床癥狀不明顯，患者未引起重視，一旦確診，往往都已處于疾病的中晚期，對(duì)患者造成了不可逆轉(zhuǎn)的損傷[11]。

由于缺少對(duì)于危重疾病治療的輔助診斷和實(shí)時(shí)監(jiān)控的有效方法，腫瘤治療一直是臨床上的熱點(diǎn)和難點(diǎn)[12]。目前臨床上核磁共振、超聲等影像學(xué)技術(shù)仍舊是檢測(cè)腫瘤發(fā)生的主要手段，而其費(fèi)用較高、靈敏性較低，監(jiān)測(cè)機(jī)體腫瘤病變情況有限[13]。近年來(lái)，隨著生物學(xué)研究的不斷深入，有不少研究發(fā)現(xiàn)[14-15]：腫瘤的發(fā)生與多種基因、蛋白及因子的水平表達(dá)有密切聯(lián)系，故近年來(lái)臨床上對(duì)相關(guān)基因、蛋白及因子的檢測(cè)逐漸成為對(duì)腫瘤診斷、病情及預(yù)后的評(píng)估的有效手段。

MTS-1是一種具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用的抑癌基因，已被證實(shí)與人體組織細(xì)胞發(fā)生癌病有著密切聯(lián)系[16]。對(duì)食管癌前病變的不同時(shí)期、不同類型的癌變組織以及正常食管組織運(yùn)用免疫組化法檢測(cè) MTS-1表達(dá)顯示，癌前病變組織中MTS-1的表達(dá)明顯低于正常組織，且隨病情的變化及加重，MTS-1的表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)；而在不同類型的癌變組織中無(wú)明顯差異[17]。而本研究結(jié)果顯示，MTS-1存在于癌旁組織及癌組織中，但在癌組織中的表達(dá)率顯著低于癌旁組織，結(jié)合上述研究可有效的說(shuō)明，MTS-1基因的異常表達(dá)在食管癌發(fā)生早期即已經(jīng)存在，且隨著病變的不斷加重其表達(dá)不斷下降，提示：該基因因子的缺失可能導(dǎo)致食管癌的發(fā)生，且在癌變病變過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。

SCGB3A1也是抑癌基因的一種，而國(guó)內(nèi)外有相關(guān)研究對(duì)其在組織中檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：在正常食管上皮組織、胃、乳腺組織中均呈高表達(dá)狀態(tài)，而在食管癌、胃癌、乳腺癌中其表達(dá)水平較低，甚至檢測(cè)不到[18-19]，SCGB3A1的表達(dá)在上述腫瘤組織中呈抑制狀態(tài)，可有效阻止細(xì)胞發(fā)生浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移[20]。而在本研究中發(fā)現(xiàn)，SCGB3A1在癌旁組織中表達(dá)率顯著高于癌組織，這有效的驗(yàn)證了上述研究的論點(diǎn)，且在腫瘤分期處于Ⅲ～Ⅳ期、伴隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化為低分化的患者中SCGB3A1的

表達(dá)明顯低于腫瘤分期處于I～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤高分化的患者，其表達(dá)與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度呈負(fù)相關(guān)，與瘤分化程度呈正相關(guān)，由此也進(jìn)一步說(shuō)明了SCGB3A1基因因子的表達(dá)率下降可能是引起食管癌惡化的重要原因之一。

此外，本研究對(duì)79例食管癌患者2年預(yù)后隨訪發(fā)現(xiàn)：MTS-1、SCGB3A1表達(dá)的差異與食管癌患者生存率有著一定聯(lián)系，其中MTS-1低表達(dá)與SCGB3A1低表達(dá)患者預(yù)后 2年生存率顯著低于MTS-1高表達(dá)和SCGB3A1高表達(dá)患者，由此提示，及時(shí)監(jiān)測(cè)MTS-1與SCGB3A1的表達(dá)水平對(duì)評(píng)估食管癌預(yù)后生存具有一定臨床價(jià)值。

綜上所述，MTS-1、SCGB3A1在食管癌中呈低表達(dá)，且與其病理組織特征存在相關(guān)性，檢測(cè)兩者表達(dá)情況對(duì)臨床上食管癌診斷、治療以及病情評(píng)估具有一定指導(dǎo)意義。