食管癌組織中BDNF、TrkB、Ki-67和p63蛋白的表達及臨床意義

趙震，胡惠軍，古彩紅

惠州市第三人民醫(yī)院病理科，廣東 惠州 516000

食管癌是臨床上常見的消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率較高，全世界每年近30萬人死于食管癌。我國是食管癌高發(fā)國家，2020年新增患者約32.4萬，約占全世界的53.7%，死亡的人數(shù)為30.1萬，占比55.3%左右，于世界范圍內(nèi)均位于第一[1]。近幾年，我國發(fā)生食管癌的發(fā)生率呈現(xiàn)上升趨勢，對人類健康產(chǎn)生嚴重威脅，因此，提高診斷、治療食管癌的水平，進而提高生存率、降低死亡率，成為我國食管癌診治工作的重中之重[2]。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）為神經(jīng)生長因子家族的一個成員，在分化、生長神經(jīng)元中發(fā)揮重要作用[3]。BDNF與酪氨酸激酶受體B（tyrosine kinase receptor B，TrkB）在諸多腫瘤中表達均不正常，它在腫瘤產(chǎn)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移期間發(fā)揮重要功能，由TrkB介導信號轉(zhuǎn)導與腫瘤產(chǎn)生息息相關(guān)，所以TrkB活性被抑制或阻斷，能夠使傳遞腫瘤細胞信號被破壞，進而實現(xiàn)抵抗腫瘤的目標[4]。增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，Ki-67）屬于增殖細胞核的敏感標志物，它能反映增殖細胞群體的活性[5]。腫瘤抑制基因p63（p63，Anti-Phospho-p63）為抑癌基因p53的一個成員，同p53一樣有高度同源性，于凋亡、調(diào)控、增殖細胞中發(fā)揮抑癌基因或類似癌基因的作用[6]?；诖?，本研究旨在觀察食管癌組織中BDNF、TrkB、Ki-67和p63蛋白的表達水平，并探討其臨床意義，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2018年7月至2021年4月惠州市第三人民醫(yī)院收治的84例食管癌患者的臨床資料。納入標準：①術(shù)后經(jīng)病理確診為食管癌；②選擇食管癌根治術(shù)開展治療，手術(shù)前未進行放、化療；③年齡小于80歲；④臨床資料完善。排除標準：①伴有其他類型的惡性腫瘤者；②合并急性炎癥、感染性疾病者；③伴有糖尿病者；④凝血功能出現(xiàn)障礙者。84例患者中男性61例，女性23例；年齡21～78歲，平均（69.15±4.64）歲；腫瘤位于中低段46例，上段26例，頸部12例；腫瘤＜5 cm 36例，＞5 cm 48例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準。

1.2 觀察指標與檢測方法（1）比較患者癌旁正常組織與癌組織中的BDNF、TrkB、Ki-67和p63陽性表達水平。免疫組織化學兩步法對BDNF、TrkB、Ki-67和p63陽性表達水平進行檢測，染色嚴格按照說明書步驟進行，染色選擇DAB，復(fù)染、分化選擇蘇木素，選擇PBS取代一抗設(shè)置為陰性對照。結(jié)果判定：BDNF、TrkB、Ki-67和p63的陽性表達都于細胞膜或細胞質(zhì)內(nèi)為黃色或棕黃色，6個視野隨機選擇，于400倍鏡下進行觀察，與陽性細胞在總細胞數(shù)中的比例、細胞著色程度結(jié)合實施判斷。陽性細胞在總細胞數(shù)中的比例為70%～100%計3分，30%～70%計2分，0～30%計1分；細胞著色程度為棕褐色計3分，棕黃色計2分，淺黃色計1分，陰性計0分。兩項分值相乘≥3分為陽性，否則為陰性。（2）分析食管癌組織中BDNF、TrkB、Ki-67、p63蛋白的陽性表達水平與臨床特征的關(guān)系。（3）分析食管癌組織中BDNF、TrkB、Ki-67、p63蛋白陽性表達的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計學方法應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間均數(shù)比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，食管癌組織中BDNF、TrkB、Ki-67、p63蛋白陽性表達水平與臨床特征的關(guān)系采用單因素分析法，采用Pearson相關(guān)性分析法分析食管癌組織中BDNF與TrkB、Ki-67和p63蛋白陽性表達的相關(guān)性，均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種組織中的BDNF、TrkB、Ki-67和p63陽性表達水平比較食管癌組織中的BDNF、TrkB、Ki-67、p63陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1和圖1。

表1 兩種組織中的BDNF、TrkB、Ki-67和p63陽性表達水平比較[例（%）]

圖1 食管癌組織中BDNF、TrkB、Ki-67和p63的陽性表達（×200）

2.2 食管癌組織中BDNF、TrkB、Ki-67和p63蛋白的陽性表達水平與臨床特征的關(guān)系低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNMⅢ～Ⅳ期、深層浸潤食管癌組織中的BDNF陽性表達率明顯高于高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNMⅠ～Ⅱ期、淺層浸潤，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNMⅢ～Ⅳ期、深層浸潤食管癌組織中的TrkB陽性表達率明顯高于高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNMⅠ～Ⅱ期、淺層浸潤，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；深層浸潤食管癌組織中的Ki-67陽性表達率明顯高于淺層浸潤，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管癌組織中的p63的陽性表達率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 食管癌組織中BDNF、TrkB、Ki-67和p63蛋白的陽性表達水平與臨床特征的關(guān)系[例（%）]

2.3 食管癌組織中BDNF與TrkB、Ki-67和p63蛋白陽性表達的相關(guān)性Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，BDNF陽性表達與TrkB、Ki-67、p63陽性表達均呈正相關(guān)（r=0.415、0.397、0.496，P=0.001、0.001、0.001），見表3。

表3 食管癌組織中BDNF與TrkB、Ki-67和p63蛋白的陽性表達的相關(guān)性（例）

3 討論

食管癌是一種常見于消化道的惡性腫瘤，全世界范圍內(nèi)發(fā)生食管癌的概率于惡性腫瘤中居第八位，東亞、南非為食管癌的高發(fā)地，其中主要的高發(fā)地區(qū)就包含我國，食管癌中90%為食管鱗狀上皮癌[7]。該病在臨床中的主要癥狀表現(xiàn)為進行性吞咽困難，同時合并咽下困難、食物反流等，早期食管癌通常不具特異性，極易被忽視，就診時大部分已經(jīng)處于中晚期。食管癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的方式主要是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，于早、中期直接擴散至附近器官，于晚期能夠經(jīng)由血管到腦、肺、腎、肝等器官?，F(xiàn)在，治療食管癌的方式取得了快速發(fā)展，像盡早診斷、放化療、微創(chuàng)手術(shù)等，然而大部分研究表明食管癌5年生存率小于20%，故防止復(fù)發(fā)、使患者生存率提高是急需解決的問題[8]。

BDNF在分化、生長神經(jīng)元中作用顯著，它能結(jié)合TrkB引起磷酸化TrkB進而使細胞中的磷脂酶C、磷脂酰肌3激酶/蛋白激酶B、絲裂原活化蛋白激酶等數(shù)條信號通路被激活進而對侵襲、凋亡、增殖腫瘤細胞進行參與[9]。有文獻表明，卵巢癌、胰腺癌、肝癌等腫瘤內(nèi)TrkB與BDNF均為高表達，同時與疾病發(fā)展、預(yù)后息息相關(guān)，因此TrkB與BDNF能成為生物治療腫瘤的靶點[10-11]。有文獻顯示，于子宮內(nèi)膜癌及子宮內(nèi)膜增生內(nèi)，TrkB與BDNF均為高表達，但是于正常子宮內(nèi)膜中兩者陽性表達率極低，同時TrkB與BDNF的陽性表達率同子宮內(nèi)膜病變存在一定相關(guān)性[12]。本研究顯示，TrkB與BDNF的陽性表達率同腫瘤分化度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、浸潤深度具有相關(guān)性，這說明TrkB與BDNF可能對轉(zhuǎn)移、增殖食管癌進行了參與。Ki-67于有絲分裂細胞之DNA合成期廣泛存在，然而只在細胞增殖期表達，同分期、增殖腫瘤有一定相關(guān)性。相關(guān)研究顯示，膠質(zhì)瘤內(nèi)Ki-67的表達由低級向高級表現(xiàn)出上升趨勢，高表達的Ki-67使膠質(zhì)瘤具有較高的侵襲性，能夠在診斷腫瘤中發(fā)揮重要作用[13]。還有研究顯示，大腸癌中表達Ki-67的產(chǎn)物在對形成DNA復(fù)制進行參與時屬于染色體支架與細胞核基質(zhì)的一種重要物質(zhì)，組織分裂越旺盛，就有越高的Ki-67陽性表達率[14]。本研究中，食管癌組織中Ki-67陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，且Ki-67陽性表達率同浸潤深度有關(guān)。腫瘤內(nèi)Ki-67的作用可能有Ki-67在有絲分裂后期表達快速降解直至消失，抗原決定簇喪失；Ki-67對形成新鮮腫瘤毛細血管發(fā)揮誘導作用；以及Ki-67在增殖細胞周期對表皮生長因子受體、表皮生長因子受體2型等信號通路產(chǎn)生影響，對增殖腫瘤細胞實施調(diào)控。本研究中，食管癌組織中Ki-67的陽性表達率與癌旁正常組織相比明顯較高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），同時食管癌組織中Ki-67陽性表達率同浸潤深度明顯有關(guān)。p63能結(jié)合特定區(qū)域DNA對臨近的基因活性實施控制，在分化、增殖上皮細胞的調(diào)節(jié)內(nèi)作用顯著，轉(zhuǎn)錄之后出現(xiàn)△Np63產(chǎn)物，但是△Np63使同源的野生型p53的活性下調(diào)，激活下游腫瘤信號的通路，使腫瘤免疫發(fā)生逃逸，加快腫瘤細胞轉(zhuǎn)錄等[15-16]。本研究中，食管癌組織中p63的陽性表達率較癌旁正常組織明顯增高，同時食管癌組織中陽性表達率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

綜上所述，食管癌組織中BDNF、TrkB、Ki-67、p63蛋白的陽性表達水平均較高，且BDNF與TrkB同腫瘤分化度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、浸潤深度相關(guān)，Ki-67同浸潤深度相關(guān)，p63同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，它們可能參與了食管癌的產(chǎn)生、發(fā)展。