海螵蛸在創(chuàng)面修復(fù)中作用機(jī)制的研究進(jìn)展

袁曉菲，夏兆芳，孫 慶

海螵蛸始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，別名烏賊魚(yú)骨。主要來(lái)源于烏賊科海洋動(dòng)物無(wú)針烏賊 ( sepiella maindroni de sochebrune) 或金烏賊( sepia esculenta hoyle) 的干燥內(nèi)殼?！侗静菥V目》有載：“背骨名海螵蛸，形似樗蒲子而長(zhǎng)，兩頭尖，色白，脆如通草，重重有紋，以指甲可刮為末”，“研末外敷，治療小兒疳瘡、痘疹臭爛、水火燙傷及外傷出血。燒存性，和雞蛋黃一同研成末外涂，治療小兒鵝口瘡；同蒲黃末外涂治療舌體腫脹及出血；同槐花末一同吹入鼻，止鼻血”；《世醫(yī)得效方》：“治鼻血不止:烏賊魚(yú)骨（海螵蛸）、槐花等分。半生半炒，為末吹鼻”。其性咸、澀、溫，歸脾、腎經(jīng)，有制酸止痛、收斂止血、澀精止帶、收濕斂瘡等功效。內(nèi)服治療吐血衄血、崩漏便血、遺精滑精、赤白帶下、胃痛吞酸； 外治創(chuàng)傷出血、濕疹濕瘡、潰瘍難斂等[1]。海螵蛸屬于收澀藥，兼具收斂止血藥的特性，是治療皮膚創(chuàng)傷的常用中藥?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，海螵蛸含有碳酸鈣、蛋白多肽、海螵蛸多糖、甲殼素/殼聚糖等多種活性成分，具有止血凝血、抗炎抗菌、表皮修復(fù)等多種藥理作用?，F(xiàn)就海螵蛸在創(chuàng)面修復(fù)中的作用機(jī)制進(jìn)行綜述。

1 海螵蛸對(duì)創(chuàng)面修復(fù)的直接作用

1.1 對(duì)生長(zhǎng)因子的作用

1.1.1 對(duì)表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（epidermal growth factor，EGF）、血小板衍生生長(zhǎng)因子（platelet derived growth factor，PDGF）和腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的影響 海螵蛸中的甲殼素（chitin）可經(jīng)不同程度的脫乙酰基反應(yīng)產(chǎn)生天然陽(yáng)離子高分子氨基酸多糖——?dú)ぞ厶牵╟hitosan, CS）。廖紅等[2]對(duì)大鼠Ⅲ度燒傷創(chuàng)面應(yīng)用不同濃度的殼聚糖溶液，檢測(cè)到4%殼聚糖組能明顯提高燒傷后創(chuàng)面EGF、EGFmRNA的表達(dá)以及PDGF的活性，發(fā)現(xiàn)殼聚糖有促進(jìn)EGF的表達(dá)和PDGF活性的作用。EGF能夠直接刺激表皮生長(zhǎng)和角化，能通過(guò)自分泌、旁分泌等途徑作用于細(xì)胞，激活MAPK、AKT等信號(hào)通路，促進(jìn)多種組織來(lái)源的上皮細(xì)胞的分裂和增殖，從而促進(jìn)肉芽組織形成和加快上皮細(xì)胞再生[3]。而PDGF是重要的促有絲分裂原，既能促進(jìn)成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等間葉來(lái)源的細(xì)胞分化增殖，又能誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、和血管平滑肌細(xì)胞等聚集到損傷區(qū)域并進(jìn)行局部增殖和高濃度表達(dá)。張?zhí)m芳等[4]研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)燒傷后大面積瘢痕患者應(yīng)用復(fù)合皮移植技術(shù)治療后，血清中EGF水平可明顯升高，TNF-α水平降低，創(chuàng)面的愈合進(jìn)展良好。

TNF-α是體內(nèi)重要的炎癥因子，由單核-巨噬細(xì)胞分泌，也是潰瘍炎癥程度的標(biāo)志細(xì)胞因子。傷口處局部炎癥反應(yīng)有助于創(chuàng)面?zhèn)谟?，但過(guò)度的炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致愈合遲緩性皮膚傷口，而高濃度 TNF-α對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞增殖遷移以及膠原蛋白表達(dá)有抑制作用[5]。羅江[6]研究發(fā)現(xiàn)用海螵蛸多糖CPS-1外涂治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患者時(shí)，能降低TNF-α表達(dá)，減少白細(xì)胞介素-6產(chǎn)生，減輕炎癥反應(yīng)，縮短用藥時(shí)間及疼痛持續(xù)時(shí)長(zhǎng)、減輕疼痛程度、加速潰瘍的愈合以及創(chuàng)面的修復(fù)。魏江洲等[7]采用葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)法建立小鼠潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis,UC）簡(jiǎn)模型，注射濃度不同的海螵蛸多糖CPS-1溶液，觀察臨床癥狀、體質(zhì)量改變、局部腸黏膜情況等指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)海螵蛸多糖CPS-1 能抑制UC小鼠血液中TNF-α的表達(dá)，提高EGF和PDGF的表達(dá)水平，利于炎癥緩解，加速潰瘍組織愈合修復(fù)。

1.1.2 對(duì)β-轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（transforming growth factorβ,TGF-β）、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor ,VEGF）的影響 俞立新等[8]對(duì)脛骨骨折小鼠采用海螵蛸配伍雞內(nèi)金提取液治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)治療組中小鼠血清的VEGF、TGF-β1水平均明顯高于對(duì)照組（P<0.05），且愈合效果顯著。TGF-β 是具有多種功能的蛋白多肽，能促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化、細(xì)胞外基質(zhì)的合成、血管的形成、膠原的沉積以及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，在創(chuàng)面愈合過(guò)程中起重要調(diào)控作用，影響創(chuàng)面愈合的速度和質(zhì)量[9-10]。VEGF是一種能特異性地促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的糖蛋白，使新生血管能及時(shí)恢復(fù)養(yǎng)料的運(yùn)輸及廢物的代謝，從而利于創(chuàng)面的修復(fù)。骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bone morphogenetic protein, BMP）為骨折愈合的啟動(dòng)因子，能促進(jìn)成骨細(xì)胞分化增殖并刺激膠原合成。董福慧等[11]研究發(fā)現(xiàn)，海螵蛸能促進(jìn)Ⅰ、Ⅲ型前膠原m RNA、VEGF mRNA 以及BMP-2 mRNA 在骨折早期時(shí)的表達(dá)，抑制后期的Ⅱ、Ⅲ型前膠原mRNA 產(chǎn)生，但VEGF mRNA、TGF-β1 mRNA仍維持較高水平，加速血管的生成、膠原的沉積，從而促進(jìn)創(chuàng)面的愈合。另外，TGF-β1在BMP誘導(dǎo)成骨過(guò)程中有促進(jìn)骨膠原生成的作用，TGF-β1能促進(jìn)成骨細(xì)胞生成，從而激活Ⅰ型膠原的分泌，同時(shí)抑制Ⅱ型膠原縮短軟骨期，提前損傷修復(fù)[12]。

2 海螵蛸對(duì)創(chuàng)面修復(fù)的間接作用

創(chuàng)面修復(fù)包括止血、炎癥反應(yīng)、組織的增殖與重構(gòu)四個(gè)過(guò)程。止血與炎癥反應(yīng)是機(jī)體進(jìn)行止血、清除壞死組織的時(shí)期。其順利進(jìn)行能夠促進(jìn)創(chuàng)面血管新生，改善創(chuàng)面氧氣與養(yǎng)分的供給情況，進(jìn)而利于細(xì)胞的增殖分化以及創(chuàng)面的愈合。

2.1 止血與凝血作用 創(chuàng)面損傷后，血管中活性物質(zhì)及血液成分滲出并浸入周?chē)M織內(nèi)，進(jìn)而激活凝血系統(tǒng)產(chǎn)生級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致凝血發(fā)生，即創(chuàng)面止血階段。止血與凝血機(jī)制的正常進(jìn)行，取決于血管壁、血液成分、纖溶系統(tǒng)、血流等。海螵蛸中的碳酸鈣、甲殼素、殼聚糖成分均有止血的功效[13]。海螵蛸的主要化學(xué)成分為碳酸鈣，而鈣離子一方面作為凝血過(guò)程中的凝血因子Ⅳ，能夠激活其他凝血因子，影響血液有效成分，將其覆蓋于創(chuàng)面出血的部位，能激活凝血酶原，促使纖維蛋白的加速析出，發(fā)揮止血作用；另一方面鈣離子能激活并加速血小板聚集，進(jìn)而凝血[14]。有資料顯示[15]，檸檬酸鹽可減少血漿中的鈣離子，防止血液凝固，是臨床上廣泛應(yīng)用的抗凝血成分，間接說(shuō)明鈣離子的止血作用。陳全等[16]對(duì)肝臟損傷的大鼠應(yīng)用甲殼素溫敏水凝膠止血，并設(shè)立對(duì)照組和空白組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用甲殼素溫敏水凝膠大鼠肝臟止血迅速，炎癥反應(yīng)較輕。殼聚糖能與帶陰離子的紅細(xì)胞吸附聚集一起，促進(jìn)血液凝固，又具有較強(qiáng)的促血小板粘附聚集以及通過(guò)活化補(bǔ)體系統(tǒng)促凝止血的作用[17]。譚云友等[18]發(fā)現(xiàn)在宮頸活檢術(shù)后創(chuàng)面應(yīng)用殼聚糖宮頸貼，可安全有效地縮短術(shù)后創(chuàng)面流血及陰道排液持續(xù)時(shí)間。Logun等[19]實(shí)驗(yàn)研究顯示，不使用其他止血藥物時(shí)，殼聚糖能縮短接受部分肝臟切除術(shù)后大鼠的止血時(shí)間，并且處理后的親水性殼聚糖止血效果會(huì)更加顯著。

2.2 抗菌消炎作用 細(xì)菌的大量增殖不僅可以導(dǎo)致創(chuàng)面的污染，甚至?xí)咕植考?xì)胞組織壞死，延長(zhǎng)并阻礙創(chuàng)面的修復(fù)過(guò)程。帶陽(yáng)離子的殼聚糖在電荷引力的作用下能覆蓋于陰離子細(xì)菌表面成膜，阻礙傳輸養(yǎng)分與代謝的通道，從而抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。Davydova等[20]發(fā)現(xiàn)，高分子殼聚糖在體外能抑制抗炎細(xì)胞因子、TNF-α的合成；體內(nèi)能提高小鼠血清中抗炎細(xì)胞因子IL-10的合成。聶帥等[21]研究發(fā)現(xiàn)慢性牙齦炎患者在使用含有殼聚糖的牙膏四周后，牙齦溝出血情況顯著改善，牙齦炎癥有效降低。Harkins等[22]研究表明將殼聚糖-纖維復(fù)合材料作為傷口敷料，能夠抑制切口革蘭氏陽(yáng)性和陰性微生物的增長(zhǎng)。王茜等[23]發(fā)現(xiàn)對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎修復(fù)過(guò)程中的小鼠聯(lián)合應(yīng)用鴨油甘油二酯與殼聚糖治療，腸道炎癥癥狀得到有效緩解。

2.3 減輕脂質(zhì)過(guò)氧化作用 在創(chuàng)面的修復(fù)過(guò)程中，細(xì)胞產(chǎn)生適量活性氧有助于抗炎殺菌，但當(dāng)氧化應(yīng)激打破促氧化劑和抗氧化劑的平衡時(shí)，過(guò)多的氧自由基產(chǎn)生的活性氧反而會(huì)損害細(xì)胞和組織，因此，抗氧化劑的合理應(yīng)用可以加速創(chuàng)面的愈合。林芳花等[24]通過(guò)測(cè)定氧化時(shí)間、超氧陰離子清除率和總還原力，對(duì)比海螵蛸等8種常用海洋中藥體外抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)海螵蛸等6種中藥抗氧化活性較高。郭一峰等[25]通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用不同劑量的海螵蛸多糖進(jìn)行預(yù)處理，5天后,小鼠胃黏膜的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活性均有明顯提高且超過(guò)正常組，能有效清除氧自由基、減輕脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)及黏膜細(xì)胞的損傷，參與并調(diào)節(jié)黏膜炎癥反應(yīng)。另外殼聚糖及其通過(guò)羧甲基化反應(yīng)、?；磻?yīng)、季銨化反應(yīng)、接枝共聚反應(yīng)改性得到的衍生物均有清除自由基的作用，且改性后衍生物的抗氧化活性都高于殼聚糖本身[26]。

2.4 免疫調(diào)節(jié)作用 機(jī)體免疫系統(tǒng)與創(chuàng)面愈合密切相關(guān)，中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞具有抗感染，清除壞死組織、釋放炎性因子的作用，促進(jìn)創(chuàng)面的愈合。劉睿等[27]從海螵蛸中共鑒定出16個(gè)蛋白質(zhì)類成分，168個(gè)多肽類成分，328個(gè)多肽類成分。其中蛋白質(zhì)類成分主要為血藍(lán)蛋白、烯醇化酶、肌球蛋白、肌動(dòng)蛋白、鈣調(diào)蛋白等。血藍(lán)蛋白是軟體動(dòng)物和節(jié)肢動(dòng)物的含銅呼吸蛋白，具有抗病毒、抑菌、凝血以及抗腫瘤等多種免疫活性，可通過(guò)多種路徑調(diào)節(jié)免疫防御系統(tǒng)，是蝦蟹等水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物中的一種重要的多功能免疫因子[28]。陶夢(mèng)圓等[29]發(fā)現(xiàn)將源于凡納濱對(duì)蝦血藍(lán)蛋白的肽段B1刺激對(duì)蝦24h后，五個(gè)免疫相關(guān)基因的表達(dá)水平顯著性上升，并對(duì)相應(yīng)的免疫蛋白表達(dá)調(diào)控一致。郭睿等[30]發(fā)現(xiàn)鑰孔戚血藍(lán)蛋白免疫原性較高，作為抗原可以誘導(dǎo)金魚(yú)血清中特異性抗體的產(chǎn)生，具有增強(qiáng)免疫功能的作用。

綜上，海螵蛸作為外科創(chuàng)面修復(fù)的常用止血斂創(chuàng)藥，能調(diào)節(jié)多種生長(zhǎng)因子、促進(jìn)膠原合成,并具有止血凝血、抗炎抗菌、增強(qiáng)免疫功能、抗脂質(zhì)過(guò)氧化的作用。目前臨床上對(duì)外用海螵蛸治療創(chuàng)面修復(fù)病例研究較少，大多運(yùn)用復(fù)方內(nèi)服結(jié)合治療內(nèi)科疾病，并且大多數(shù)研究主要集中在觀察海螵蛸的臨床止血作用，因此還需要對(duì)海螵蛸在創(chuàng)面修復(fù)中的多種作用成分進(jìn)行進(jìn)一步的深入分離和研究。為臨床合理有效地在修復(fù)創(chuàng)面中應(yīng)用海螵蛸提供更多參考依據(jù)。