核酸檢測與ELISA檢測在無償獻血血液標本乙型肝炎病毒（HBV）篩查中的應用效果比較

邱彤

（錦州市全民健康保障中心，遼寧 錦州 121000）

血液安全一直是獻血站永恒不變的主題，至1998 年頒布《中華人民共和國獻血法》以來，獻血站不斷完善質量管理體系。隨著醫(yī)療檢測設備的更新，相關檢測試劑不斷組合優(yōu)化，靈敏度也不斷提升[1]。近年來，無償獻血的招募策略也不斷創(chuàng)新，醫(yī)療機構中臨床用血質量要求逐步提高，輸血安全性、有效率成為提高治療的重要環(huán)節(jié)。雖然輸血引發(fā)的傳染病事件明顯減少，但仍需加強保障醫(yī)護和患者的安全。臨床中ELISA的檢測仍存在較長的“窗口期”，在慢性攜帶、變異、靜默感染等低病毒載量檢測中存在漏檢情況，因此，還需提高血液篩查的高效手段[2]。核酸檢測（nucleicacid test，NAT）是一種新型的血液篩查技術，已廣泛應用于國外臨床，可有效彌補ELISA檢測的不足，將其用在獻血志愿者血樣檢測中，對保障輸血安全、縮短血液檢測的“窗口期”發(fā)揮積極作用。但其在我國的使用尚處于起步階段?；诖耍狙芯恐荚谔接慛AT 在無償獻血中對HBV 的篩查價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取本中心2017 年1 月至2019 年12 月無償獻血者150 名作為研究對象，其中男67 名，女83 名；年齡18～48 歲，平均（30.58±10.27）歲。本研究已通過本院倫理委員會審核批準。

納入標準：均符合《獻血者健康檢查要求》[3]相關規(guī)定；年齡18～50 歲；意識清晰、溝通順利，無精神障礙者。排除標準：有遺傳病史者；經(jīng)期女性志愿者。

1.2 方法 血液樣本采集：所有血液樣本均取3份，約5 mL依次置于抗凝管（EDTA-K2）和核酸專用管中，提前做好樣管標記。4 ℃下3 000 r/min，1 600 g離心20 min，保存于2～8 ℃環(huán)境下，于48 h 內行完成檢測。如實記錄樣本采集日期、編碼等信息。

儀器設備：離心機、多功能酶標儀、STAR全自動加樣儀（瑞士，帝肯）、COBAS-201 核酸檢測儀（美國，羅氏）、BEP全自動酶免分析系統(tǒng)（瑞士，帝肯）、COBAS AmpliPrep 全自動核酸提取儀、COBASAmpliPrep 全自動PCR 分析儀（美國，羅氏）。

樣本檢測：所有操作均由專人嚴格遵守設備說明進行；①ELISA檢測：每份血液標本均開展HBsAg 檢測，同時設置空白對照、陰性對照、陽性對照和室內質控品組。判定標準如下：陽性，樣本光密度值-臨界值（S/CO）≥1；此時血樣檢測結果不合標準；S/CO為0.5～1.0為灰區(qū)，此時檢測結果不符合標準；陰性：S/CO＜0.5，檢測結果滿足標準。②NAT 檢測：混樣法，每級設置6 個混合樣本，同時設定內對照，混合測定為陰性者即為陰性，混合測定結果為陽性者再進行拆分；拆分后檢測為陰性即為NAT 陰性，反之為NAT 陽性。③追蹤隨訪：對于NAT 陽性、核酸陽性，但“兩對半”和核酸均為陰性者開展追蹤隨訪，于2 個月后進行重新采樣。

1.3 觀察指標 參考ECLIA 的檢測結果，統(tǒng)計兩種檢測方法HBV的準確度、靈敏性和特異性。敏感度=真陽性/（真陽性+假陰性）。特異度=真陰性/（真陰性+假陽性）。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以百分率（%）表示，比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

ECLIA 檢測中，血液樣本 HBV 陽性 37 份 ，陰性 113 份，陽性率為24.67%。NAT檢測準確度為97.30%（36/37），靈敏度為100.00%（10/10），特異度為96.30%（26/27），見表1；ELISA 法準確度為 75.68%（28/37），靈敏度為 60.00%（6/10），特異度為77.78%（21/27），見表2；兩種檢測方法準確度、靈敏度、特異度比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.400、5.000、4.103，P=0.007、0.025、0.043）。

表1 NAT中HBV檢測情況

表2 ELISA中HBV檢測情況

3 討論

乙型病毒性肝炎（viral hepatitis type B）簡稱“乙肝”，是因乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）所引起的慢性肝炎疾病，具有傳染性，主要通過性接觸、血液、母嬰進行傳播，目前尚無治愈的可能性。AIDS 臨床主要表現(xiàn)為乏力、惡心、虛弱、厭油等癥狀，且癥狀不典型，一旦被HBV感染，通常會經(jīng)1～6 個月的潛伏期而發(fā)展為乙肝，期間病毒傳播的可能性最大[4]。HBV 由禽嗜肝和正嗜肝DNA 病毒組成，其中后者是誘發(fā)乙肝的主要菌屬。乙肝患者的血清學檢查一直是肝炎病毒的檢查金標準，主要通過檢測病毒表面抗原發(fā)現(xiàn)病毒的存在。HBV常用檢測指標有HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe 和抗-HBc，即俗稱的“乙肝五項”。其中前三項為陽性者即為“大三陽”，后三項為陽性者即“小三陽”[5]。

截至2011年，全球HBV攜帶者近3億，我國占30%。近年來，隨著世界衛(wèi)生組織、聯(lián)合國所部署的乙肝育齡婦女預防開展，母嬰傳播途徑已明顯被阻斷。最近的一項調查[6]發(fā)現(xiàn)，發(fā)展中國家的血液采集樣本中，5%～20%存在HBV、丙型肝炎、HIV 3 種病毒，且因輸血或非安全性注射所造成的HBV感染人數(shù)年均高達1 600萬人，嚴重威脅我國人民的健康和社會的發(fā)展。為阻斷HBV的血液傳播，其最重要、最主要的途徑即提高獻血群體的血液篩查質量。安全輸血的重要環(huán)節(jié)在于受篩查病毒的“窗口期”，即從被感染到能檢測出體內對應抗體的時間間隔，因無法檢測到抗體，窗口期中臨床不能及時確診，如患者的血液中已帶有病毒，并有傳染性，僅通過血液檢測無法檢出。

ECLIA 主要通過三聯(lián)吡啶釕與蛋白質、半抗原激素、核酸等化合物進行結合，檢查乙肝五項指標，其免疫檢驗期間無外來光源干擾，消除了光散射、噪音干擾，是HBV 標志物的檢驗金標準[7]。ELISA作為臨床常用的HBV診斷方法，主要檢測HBsAg 指標，憑借操作方便、快捷、費用低等優(yōu)點在血液篩查中廣泛應用。但由于HBV隱匿性、窗口期等問題，該技術的漏檢系數(shù)較高。作為一種新型的分子生物學檢測技術，NAT 能補充血清學診斷中的缺陷。NAT 通過逆轉錄擴增后，經(jīng)PCR法進行體外自然狀態(tài)下DNA分子復制，模擬形成核酸擴增，快速定量樣本中HBV-DNA 的水平，直接反映HBV 的感染情況，該檢測方法本身較敏感，特異性、靈敏度均較高[8]。據(jù)統(tǒng)計，NAT可將40%～75%HBV、丙型肝炎、HIV 病毒的“窗口期”縮短為25～60 d、7～15 d 和9～36 d內，從而彌補ELISA法的缺陷，避免被漏檢的病毒感染者在血液輸送治療中出現(xiàn)病毒傳播、感染風險，明顯降低病毒經(jīng)輸血而造成的傳播風險，保障輸血治療安全性。本研究結果顯示，NAT檢測準確率為97.30%、靈敏度為100.00%、特異性為96.30%，均高于對照組的75.68%、60.00%、77.78%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。表明NAT 檢測顯著優(yōu)于ELISA 檢測；研究中的150 份樣本，共10 份HBV-DNA 陽性標本，無HCV-RNA及HIV-RNA陽性情況，其原因可能是由于樣本在收集至檢測期間受溫度影響，病毒RNA 被降解所致；此外，本實驗中所檢測的核酸標本量較小，應加大檢測力度，加強樣本從采集至檢測每個環(huán)節(jié)的質量管控。

綜上所述，無償獻血血液標本HBV篩查中，NAT檢測價值高于ELISA，可提高HBV檢出率，且特異性強、靈敏度高，值得臨床推廣應用。